8-羟基脱氧鸟苷检测方法研究进展

8-羟基脱氧鸟苷(8-Hydroxy-2′-deoxyguan ine,8-OHdG)是活性氧自由基(ROS)引起DNA氧化损伤修饰产物之一,其生成原因很多,主要是电离辐射、化学致癌物代谢活化及细胞正常新陈代谢过程产生大量ROS直接攻击DNA中的鸟嘌呤(dG),使脱氧鸟苷氧化为8-OHdG。8-OHdG可被机体特异性DNA修复酶剪切清除并经肾脏随尿排泄,其含量反映机体氧化损伤程度,既是个体接触标志物,又是效应标志物[1]。它一旦逃避了机体自身修复,就可能成为致突变、致畸、致癌的启动因子[2]。8-OHdG在体内稳定存在,为代谢终产物,且只能通过DNA氧化损伤途径形成,并可通…     

复杂电磁环境工作人员尿中8-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷水平及其影响因素分析

目的 对复杂电磁环境(complex electromagnetic environment, CEE)工作人员的DNA和RNA氧化损伤情况以及其影响因素进行分析,为预防和控制职业病危害提供科学依据。方法 采用方便抽样法选择武汉某芯片厂CEE工作人员(n=133)为暴露组和办公室人员(n=56)为对照组,用稀释法和液相色谱-三重四级杆质谱仪测量氧化应激标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和8-羟基鸟苷(8-OHG)在其尿液样本中的浓度。根据问卷调查结果,用logistic回归法分析影响8-OHdG的相关因素。结果 暴露组人员尿中的8-OHdG和8-OHG,经尿比重调整后浓度中位数分别为9.34 ng/ml和17.08 ng/ml。与对照组相比,暴露组8-OHdG浓度高于对照组,且差异有统计学意义(Z=-2.194,P=0.028)。CEE(OR=3.07,95%CI:1.35～7.00)、吸烟(OR=2.62,95%CI:1.13～6.08)和运动(OR=2.5,95%CI:1.04～6.00)为危险因素;女性(OR=0.09,95%CI:0.03～0.28)为保护因素。结论 长期暴...     

青石棉诱发8—羟基脱氧鸟苷生成

石棉纤尘可导致石棉肺及各种癌症。体外试验表明石棉致癌的分子机制可能是通过活性氧类或氮类致ＤＮＡ损伤。本研究通过ｌａｃＩ转基因大鼠的整体实验 ,探讨石棉纤维的诱变作用及其分子机制。选择 8周龄的经λｌａｃＩ穿梭载体多重复制的Ｆ3 4 4转基因大鼠作为研究对象 ,匹配年龄、性别后随机分成 4组 ,每组 1 5只。阴性对照组腹腔注射 2ｍｌＮａＣｌ溶液 ;阳性对照组经腹腔注射戊巴比妥钠 3 7 5ｍｇ ｋｇ麻醉大鼠 ,将 5ｍｇＢ(ａ)Ｐ溶解于 50℃载体物质中腹腔注射 ;染毒组分别将含 2ｍｇ、5ｍｇＵＩＣＣ石棉的 2ｍｌＮａＣｌ悬溶液经腹腔…     

电子废弃物拆解对女性8-羟基脱氧鸟苷水平的影响

[目的]研究电子废弃物拆解对人体8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2′-deoxyguanosine,8-OH-DG)水平的影响,分析相关影响因素。[方法]对浙江台州某电子废弃物拆解地区进行卫生行为学调查,采集280名拆解区女性(暴露区209名,对照区71名)的生物样本(尿液,血液)并测定了尿中8-OH-DG的含量,采用多元回归分析血中Cu、Fe等与8-OH-DG的相关性。[结果]从事酸洗工艺的拆解者体内8-OH-DG的水平相比正常对照区人群升高,职业拆解人群的8-OH-DG水平与其血清中铜、钾、锌的含量、手工拆解和焚烧工艺呈现负相关,与血清中铁的含量、年龄、酸洗工艺呈现正相关。[结论]电子废弃物拆解中从事酸洗工艺的人群受影响较大,其尿液中8-OH-DG水平升高。     

ELISA方法测定尿8-羟基脱氧鸟苷(8-OH-dG)含量及其临床意义

〔目的〕介绍测定尿8-羟基脱氧鸟苷（8-OH-dG）含量的ELISA方法。〔方法〕利用8-OH-dG特异性单克隆抗体试剂盒,结合酶标仪进行定量测定。〔结果〕尿样测定值的批间和批间相对标准偏差分别为5.8l％～9 35％和6.42％～10.11％;同一个体一天中不同时点尿样的8-OH～dG含量之间没有显著性差异;80例健康志愿者的尿8-OH-dG含量为14,15±9.00ng/mgCr。其中男性为11.85±5.72ng/mgCr,女性为16.24±10.83ng/mgCr,女性的尿8-OH-dG含量明显高于男性;健康男性和女性尿8-OH-dG含量的95％参考值范围分别为0～25.77ng/mgCr和0～44.89ng/mgCr。〔结论〕应用ELISA试剂盒法可以简单灵敏、准确地测定尿8-OH-dG含量。     

姜黄素对线粒体DNA和核DNA 8-羟基脱氧鸟苷形成的影响

[目的]探讨姜黄素对人结肠癌HT-29细胞线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)的氧化损伤作用.[方法]人结肠癌HT-29细胞暴露于不同浓度姜黄素(0、5、10、20μg/ml)2 h后,细胞免疫组化分析nDNA和mtDNA的8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平;2',7'-二氢二氯荧光比色法测定细胞内活性氧(ROS)水平;硫代巴比妥酸法测定细胞内脂质过氧化产物.[结果]随着姜黄素剂量的增高,mtDNA和nDNA的8-OHdG染色密度均增大,20μg/ml姜黄素组,胞浆的染色密度增长了15倍,核染色密度增长了6倍,表明胞浆中mtDNA的8-OHdG水平的增长明显高于nDNA,差异有统计学意义(P＜0.05);5μg/ml以上剂量姜黄素能引起细胞的ROS水平升高和脂质过氧化产物增加(P＜0.05或P＜0.01).[结论]姜黄素能引起HT-29细胞的ROS增加,并造成脂质和DNA的氧化性损伤,并且mtDNA的损伤明显大干nDNA的损伤.     

高效液相色谱-紫外法检测尿中8-羟基脱氧鸟苷

目的:观察利用高效液相色谱-紫外法检测尿液8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的效果.方法:尿液经前处理后,利用美国Agilent高效液相色谱仪检测8-OH-dG水平.结果:8-OHdG峰与杂质峰分离良好,8-OHdG浓度在0.5～20μg/ml之间旱良好线性,流动相最佳的pH为3.5,回收率在98.6%～100.1%之间,批内差异(CV)均低于8%.结论:高效液相色谱-紫外法是一种灵敏度较高、重复性好、易推广的尿液8-OHdG简便检测方法,值得推广.     

精索静脉曲张不育患者8-羟基脱氧鸟苷水平的检测分析

目的:检测人血清及精浆中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平,探讨男性精索静脉曲张(VC)患者体内氧化损伤情况。方法:对41例VC不育患者、33例正常生育者进行精液分析,用8-OHdG酶联免疫试剂盒检测两组对象血清及精浆中8-OHdG水平,采用Wilcoxon两样本比较法对数据进行统计分析。结果:正常生育组的精子浓度、前向活动率、存活率均高于VC不育组(P<0.05),血清8-OHdG水平(中位数34.83ng/ml)低于VC组(中位数76.87ng/ml,P<0.05),精浆8-OHdG水平(中位数18.51ng/ml)低于VC组(中位数22.19ng/ml,P<0.05)。血清中8-OHdG水平高于精浆(P<0.05)。血清8-OHdG水平与精子存活率、前向活动率呈负相关(γ=-0.293,P<0.05;γ=-0.243,P<0.05);精浆8-OHdG水平与精子存活率、前向活动率呈负相关(γ=-0.327,P<0.05;γ=-0.275,P<0.05);血清及精浆中8-OHdG水平与精子浓度、正常形态率不相关。结论:VC患者血清和精浆中8-OHdG水平高于正常生育组,表明VC患者可能存在DNA氧化损伤,导致精子活力下降。     

亚急性与慢性砷暴露人群尿砷和8-羟基脱氧鸟苷含量的比较

目的比较亚急性与慢性砷暴露人群尿砷水平、砷形态分布和DNA氧化损伤的情况。方法选择2004年12月阜新市亚急性砷中毒事件发生时阜新市中心医院收治的65名男性患者(年龄为20～62岁,水砷含量达48.5 mg/L,连续暴露4～7 d)为亚急性砷暴露组,慢性高砷(男性72人,年龄为18～73岁,水砷浓度为0.24 mg/L,暴露6 a)、低砷暴露人群(男性40人,年龄为18～60岁,水砷浓度为0.02 mg/L,暴露10 a,无砷中毒相关临床症状)均选自内蒙古呼和浩特市周边砷暴露区。采集亚急性砷暴露人群确诊入院且未采取治疗措施时的尿样,采集慢性砷暴露人群即时尿样。采用超低温捕集-氢化物发生-原子吸收分光光度法测定尿中不同形态砷含量,用酶联免疫法分析尿8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平。结果3种不同砷暴露人群尿中总砷水平和不同形态砷水平均随着砷暴露剂量的升高呈升高趋势:亚急性砷暴露组>慢性高砷暴露组>慢性低砷暴露组,且差异均有统计学意义(P<0.05)。各组尿中无机砷、一甲基砷和二甲基砷含量占总砷含量的构成比(iAs%,MMA%和DMA%)间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。iAs%和MMA%在亚急性砷暴...     

介入放射工作人员血清8-羟基脱氧鸟苷水平分析

对50名介入放射工作人员(介入组)、50名非介入放射人员(普放组)和48名非放射人员(对照组)进行血清8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平检测。结果显示,介入组血清8-OHdG水平高于普放组和对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05),且随着年有效放射剂量及工龄的增加,血清8-OHdG水平呈上升趋势(均P<0.05)。提示长期低剂量电离辐射会引起介入放射工作人员血清8-OHdG水平升高,导致DNA氧化损伤。     

氟化物对大鼠颅骨成骨细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响

目的 :研究氟化物对大鼠颅骨成骨细胞生长、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 :应用酶消化法分离培养大鼠颅骨的成骨细胞 ;AlamarBlue摄入法检测细胞活性 ;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果 :氟化钠 (NaF)浓度为 0～ 2mmol L、2 4h对细胞活性无影响 ;浓度为 2mmol L时 ,S期细胞数增多 ,G0 G1 期和G2 M期细胞无明显改变。NaF浓度为 4mmol L时 ,细胞活性受抑制 ,S期细胞数明显增多 ,G2 M期细胞明显减少。NaF浓度为 2mmol L和 4mmol L时 ,凋亡百分率明显增加。结论 :过量氟化物可影响大鼠颅骨成骨细胞活性及细胞周期的分布 ,使细胞停滞于S期 ,并可诱导细胞凋亡     

PCB153对PBDE-47致SH-SY5Y细胞氧化应激和8-羟基脱氧鸟苷含量的影响

目的探讨PCB153和PBDE-47单独及联合染毒对SH-SY5Y细胞氧化应激及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量的影响。方法设DMSO溶剂对照组,1、5、10μmol/LPBDE-47(低、中、高)单独染毒组和与5μmol/LPCB153联合染毒组及相应的抗氧化剂组(N-乙酰-L-半胱氨酸NAC100μmol/L),分别对SH-SY5Y细胞染毒24h。用荧光染料DCFH-DA标记法和高效液相色谱-电化学技术(HPLC-ECD)分别检测细胞内活性氧(ROS)水平和8-OHdG的含量。结果随着染毒剂量的增加,PBDE-47单独染毒组ROS水平有逐渐增高的趋势,但与对照组及其相应的PCB153联合组相比,ROS水平无明显差异(P>0.05)。中、高联合染毒组ROS水平与对照组相比显著增加(P<0.05),并显著高于相应的单独剂量染毒组(P<0.05),加入抗氧化剂后细胞内ROS水平明显下降(P<0.05),细胞内ROS水平与PBDE-47染毒剂量呈现剂量-效应关系;高剂量PBDE-47单独染毒组和中、高剂量联合染毒组8-OHdG的含量与对照组相比均有明显的增加(P<0.05),高剂量联合染毒组8-OHdG含量明显高于相应的单独染毒组(P<0.05),加入抗氧化剂后其细胞内8-OHdG含量明显下降(P<0.05)。细胞内ROS水平与8-OHdG含量呈正相关关系(r=0.895)。结论一定剂量的PBDE-47可致DNA氧化损伤,PCB153可增加PBDE-47对SH-SY5Y细胞DNA的氧化损伤作用,提示活性氧在PBDE-47致DNA损伤方面发挥了重要作用。     

螺内酯对醛固酮诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响

目的 观察螺内酯对醛固酮诱导的大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells,MCs)氧化应激的影响,探讨其肾脏保护机制.方法 体外培养大鼠MCs,设正常对照组、醛固酮(10-7 mol/L)刺激组、不同浓度螺内酯(10-7、10-8、10-9mol/L)干预组.以2',7'-二氯双氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)为细胞内H2O2的荧光探针标记细胞,采用流式细胞术检测系膜细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用比色法检测培养细胞上清液中丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性.结果 与正常对照组比较,醛固酮刺激系膜细胞48 h后,细胞内ROS水平明显增加,上清液中MDA含量增高、SOD活性下降,差异均有统计学意义(均有P＜0.05).螺内酯干预可明显抑制醛固酮刺激下的系膜细胞的上述反应,差异均有统计学意义(均有P＜0.05),且呈浓度依赖性.结论 螺内酯可呈浓度依赖性地抑制醛固酮诱导的大鼠MCs氧化应激,该作用可能是其肾脏保护机制之一.     

番茄红素对氟染毒小鼠氧化应激及行为影响

目的 探讨番茄红素对饮水性氟染毒小鼠氧化应激损伤与神经行为影响及可能机制。方法 成年雄性C57BL/6小鼠60只,随机分为对照组、染氟组、番茄红素组、番茄红素低、中、高剂量干预组,每组10只;连续处理6个月后, 氟离子选择电极法测定尿氟、血氟和脑氟含量;化学比色法检测血液和海马组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活力;水迷路实验分析小鼠神经行为学改变。结果 与对照组比较,染氟组小鼠体重下降,尿氟、血氟和脑氟含量[分别为(3.76±1.60)、(19.26±0.62)、(1.19±0.12) mg/kg]升高(P<0.05),血液和海马组织中MDA含量显著增加、SOD、GSH-Px和CAT 酶活力下降(P<0.05);与染氟组比较,番茄红素高剂量干预组尿氟、血氟和脑氟含量[分别为(2.06±0.47)、(13.40±0.35)、(0.52±0.21) mg/kg]明显下降(P<0.05),血液和海马组织中MDA含量降低、SOD、GSH-Px和CAT 酶活力升高(P<0.05);与对照组比较,染氟组小鼠平均逃逸时间和靶象限活动时间[分别为(20.84±0.72)、(16.11±0.77) s]延长(P<0.05);与染氟组比较,番茄红素高剂量干预组小鼠平均逃逸时间和靶象限活动时间[分别为(14.01±0.82)、(7.38±0.37) s]下降(P<0.05)。结论 番茄红素能有效降低饮水性氟染毒小鼠氧化应激损伤及提高小鼠学习记忆能力,对饮水性氟中毒具有一定保护作用。     

Effect of lead on apoptosis in cultured rat primary osteoblasts

To investigate the effect of lead exposure on apoptosis of cultured rat primary osteoblasts (ROBs), which were derived from newborn calvariae of Sprague Dawley rat. They were identified by the staining of alkaline phosphatase and mineralized matrix. The ROBs were received at 0, 20, 40 and 80 μM Pb2+ of lead acetate solution for 24 h, respectively, before being doubly marked by Annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide. The intracellular concentration of calcium ([Ca2+](i)) was detected under the laser scan confocal microscope. The activities of phosphatidylcholine-specific phospholipase C (PC-PLC) were measured and the effect of lead exposure on the expression of PC-PLC was observed by immunoblotting assay. The results showed that when compared with that of the control group, lead exposure induced an increase of [Ca2+](i) of lead-treated ROBs, resulting in a significant development in apoptosis. In the meantime, a significant decline in protein level and enzymatic activities of PC-PLC were observed in a dose-dependent manner. It was concluded that lead can induce apoptosis in ROBs, and one of the mechanisms of lead-induced apoptosis may be that activating intracellular calcium stores by decreasing protein levels and enzymatic activities of PC-PLC can increase the [Ca2+](i), and consequently, the apoptotic signal pathway can be induced.     

氟对体外培养大鼠成骨细胞钙调蛋白表达影响

目的 观察不同浓度的氟在不同时间段对体外培养大鼠成骨细胞的钙调蛋白(CaM)的影响。方法 采用骨组织块法分离培养新生Wistar大鼠颅骨成骨细胞,将不同浓度的氟作用于大鼠成骨细胞,分别于染氟培养24,36和48h采用免疫细胞化学法检测CaM蛋白的表达。结果 在染氟培养24h,与对照组比较,0.5mg/L氟组成骨细胞CaM蛋白的表达明显增加,2mg/L氟组CaM蛋白的表达明显减少;染氟培养36h,与对照组比较,2mg/L氟组CaM蛋白表达明显增加,8mg/L氟组CaM蛋白的表达明显减少;而在染氟培养48h,各氟组CaM蛋白的表达较对照组均显著增加。结论 氟在一定浓度、时间范围内对成骨细胞的CaM蛋白表达影响的表现为先抑制后促进的作用。     

氟化钠对乳鼠成骨细胞c—fos,c—jun基因表达及细胞增殖？…

目的 探讨氟对钠（ＮａＦ）对离体成骨细胞ｃ－Ｆｏｓ、ｃ－Ｊｕｎ基因表达的调控及细胞增殖的影响。方法 采用新生大鼠头盖骨分离成骨细胞,在不同浓度ＮａＦ（１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ、１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ、１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ）中进行培养,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖,用免疫组化ＳＰ法结合计算机图像处理系统检测ＮａＦ诱导的ｃ－Ｆｏｓ、ｃ－Ｊｕｎ表达。结果 实验表明ＮａＦ可刺激成骨细胞增殖,并诱导成骨细胞     

氟对成骨细胞增殖分化的影响及维生素C的拮抗作用

目的　研究不同剂量的氟对体外培养大鼠乳鼠颅骨成骨细胞增殖分化的影响及维生素C的拮抗作用。方法　酶消化法分离成骨细胞 ;AlamarBlue摄入法检测细胞增殖 ;ELISA方法测定碱性磷酸酶 (ALP)活力。结果　氟化钠浓度 0 .10～ 1.0 0mmol L刺激细胞增殖 ,细胞活力明显增强 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;2 .0 0mmol L以上细胞活力下降 ,抑制细胞增殖 ;0 .0 1～ 0 .0 5mmol L增强细胞ALP活力 ,0 .10mmol L以上降低细胞ALP活力 ,与对照组相比 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。加入维生素C ,2mmol L氟化钠仍能促使细胞增殖分化。结论　氟对成骨细胞的增殖与分化具有双向作用 ;维生素C能拮抗较高浓度氟化钠对成骨细胞增殖分化的抑制。     

The stability of the oxidative stress marker, urinary 8-hydroxy-2'- deoxyguanosine (8-OHdG), when stored at room temperature

We examined the stabilities of urinary 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine (8-OHdG) stored at room temperature (25 degrees C) for 24 h or at -80 degrees C for 800 days. Subjects were 19 males and 17 females aged 23-58 yr for the 24-h study, and 9 males and 4 females aged 24-54 yr for the 800-day study. We obtained information on the subjects by questionnaires and interviews. The level of urinary 8-OHdG was measured by HPLC using two-step separations. There were no significant changes of amount of urinary 8-OHdG under either storage conditions. We conclude that urine samples can be stored at 25 degrees C and below for 24 h, when the research purpose includes the determination of urinary 8-OHdG. Urinary 8-OHdG was also stable for over two years when stored at -80 degrees C.     

运动和膳食干预对胰岛素抵抗大鼠氧化应激的影响

目的研究8周的运动和膳食等生活方式干预对胰岛素抵抗大鼠氧化应激的影响。方法采用高脂饲料建立肥胖诱导的胰岛素抵抗大鼠模型,以体重和脂体比作为肥胖程度的衡量标准,以口服糖耐量试验葡萄糖曲线下面积作为糖耐量衡量标准。再分别进行8周的中等强度跑台运动、相对低脂的基础饲料及两者联合干预,以铜试剂法测定血清游离脂肪酸(FFA)含量,以黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法测定肝脏、脂肪组织和比目鱼肌中超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量,以FFA含量和SOD/MDA衡量大鼠氧化应激状态。结果 8周干预后,3种干预均降低了大鼠体重(P0.01)、脂体比(P0.01)和葡萄糖曲线下面积(P0.01)。膳食和联合干预降低了血清FFA浓度(P0.01),单独的运动干预没有这种效应。3种干预提高了肝脏和脂肪组织中SOD/MDA(P0.01),运动和联合干预提高了比目鱼肌中的SOD/MDA(P0.05),而单独的膳食干预没有这种效应。结论运动和膳食干预能改善大鼠的胰岛素抵抗状态,这与氧化应激状态的缓解有关。