原癌基因HER2／neu在乳腺癌中的表达及研究进展

乳腺癌是一种临床异质性疾病,其临床病理因素的多样性导致发生不同的临床结局。乳腺癌的发生涉及细胞凋亡与增殖失衡、细胞的分化紊乱、癌基因与抑癌基因的功能失调以及相关信号传导系统等多种生命活动的异常。HER2（human epidermal growth factor receptor 2）是与乳腺癌的预后有密切关系的癌基因,约在20％-30％的乳腺癌中可以检测到该基因的扩增和过表达。其靶向治疗药物Herecptin（赫赛汀）自问世至今,用于治疗HER2基因过表达的进展期乳腺癌患者取得了令人鼓舞的疗效。现就近年来有关原癌基因HER2／neu在乳腺癌中的研究进展简要综述如下。     

抗HER2/neu单克隆抗体的制备及其对乳腺癌细胞生长的抑制性

目的 制备抗HER2／neu的特异性单克隆抗体，筛选出能够分泌抑制p185 HER2／neu蛋白过表达的肿瘤细胞生长的单抗杂交瘤细胞株。方法 原核表达含全长neu蛋白的融合蛋白，免疫Balb／c雌性小鼠后取效价高的小鼠尾静脉加强后行脾细胞与SP2／0细胞进行细胞融合。以ELISA、免疫细胞化学、免疫组织化学、细胞免疫荧光和MTT法进行筛选。结果 共获得8株稳定分泌HER2／neu单抗的杂交瘤细胞株，其中5株细胞产生的抗体体外实验能够抑制乳腺癌细胞HBT133的生长。结论 能够抑制HBT133细胞生长的5株杂交瘤细胞株可以用作人源化，具有较高的临床应用价值。     

HER2/neu介导的信号转导及其受体抑制剂的研究进展

HER2是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白,它的过表达与肿瘤形成、恶性程度及预后密切相关.根据HER2的结构及其介导的信号转导途径,已研制开发出一系列HER2受体抑制剂.抗HER2抗体通过加速受体内化,阻止HER2与其他表皮生长因子受体(EGFR)家族成员形成异二聚体来阻断HER2的功能;一系列喹唑啉类小分子化合物能共价结合EGFR和HER2的ATP结合位点,阻断受体酪氨酸激酶活性;多瘤病毒增强子激活因子3(PEA3)和人腺病毒5型早期区1A(E1A)蛋白在转录或翻译水平下调HER2的表达;细胞内表达的68和100ku HER2-胞外区结构域能干扰HER2异二聚体的形成及其信号转导.     

HER2/neu癌基因及其产物测定在乳腺癌的临床应用

乳腺癌是女性常见的肿瘤之一,约占全身恶性肿瘤的7%~10%,我国乳腺癌近20年来发病率有增高趋势,已成为严重危害人类健康的常见肿瘤。25%~30%的乳腺癌患者存在原癌基因HER2/neu的扩增和过表达,与患者预后不良密切相关。抗HER2/neu单克隆抗体?Herceptin用于HER2/neu扩增和过表达乳     

针对HER2／neu受体的抗肿瘤新药Herceptin的研究进展

ＨＥＲ2 /ｎｅｕ受体是ＥＧＦＲ受体家族成员中的第2号 ,在许多上皮肿瘤中过度表达 ,尤其是乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、非小细胞肺癌和鼻咽癌等[1～ 5] 。已知ＨＥＲ2 /ｎｅｕ中介的癌形成作用和在肿瘤组织中高水平表达及它的细胞表面定位使得这个癌蛋白成为一个理想的抗肿瘤治疗靶点。Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ公司开发出针对ＨＥＲ2的抗体Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ ,已被ＦＤＡ批准在临床应用 ,本文对此作一综述。1　ＨＥＲ2 /ｎｅｕ的功能ＨＥＲ2 /ｎｅｕ基因编码一个 185ＫＤ的膜蛋白 ,由细胞外、跨膜和胞内三个部分组成[6] 。研究表明[7]约 30 %的…     

HER2/neu动物模型的建立和免疫学鉴定

目的 建立表达人HER2／neu原癌基因的动物肿瘤模型并用免疫学方法加以鉴定。方法 将重组HER2／neu原癌基因真核表达载体转染P815细胞，有限稀释法筛选出稳定表达HER2／neu基因的P815肿瘤细胞株：用Western blot方法鉴定HER2／neu基因在P815细胞中的表达。在DBA／2小鼠体内建立表达HER2抗原的肿瘤动物模型，再通过表达HER2／neu基因的重组质粒免疫小鼠，诱导小鼠产生特异性HER2／neu基因特异的CTL应答，从免疫学方面鉴定HER2／neu动物肿瘤模型建立成功。结果 在体外获得了稳定表达HER2／neu基因的P815细胞株；免疫小鼠脾细胞中诱导出特异性CTL。结论 本研究成功建立了HER2／neu动物肿瘤模型，HER2／neu原癌基因DNA疫苗免疫可在体诱导特异性细胞免疫应答。     

HER2/neu和Akt2在胃癌中的表达及意义

 目的检测HER2/neu和Akt2蛋白在胃癌及正常胃组织中的表达,分析二者与胃癌临床病理指标间的关系。方法应用免疫组化方法检测HER2/neu和Akt2蛋白在80例胃癌及40例正常胃组织中的表达。结果HER2/neu和Akt2蛋白阳性表达率胃癌中分别为17.50%和67.50%,正常胃组织中分别为0和5.00%,胃癌组织与正常胃组织比较HER2/neu和Akt2蛋白阳性表达率的差异均有统计学意义（P <0.05）;胃癌中,HER2/neu的表达与胃癌Lauren分型、组织学分化程度有关（P <0.05）,与临床分期、淋巴结转移及浆膜浸润无关（P >0.05）;而Akt2的表达与胃癌Lauren分型、组织学分化程度、临床分期及淋巴结转移有关（P <0.05）,与浆膜浸润无关（P >0.05）。HER2/neu及Akt2在胃癌中的表达有一定的一致性（χ² =4.97,P <0.05）。结论HER2/neu和Akt2蛋白在胃癌中有表达,二者的表达可能与胃癌的不良预后有密切关系,HER2/neu及Akt2在胃癌中的表达具有一定的一致性。     

RNA干扰HER2/neu对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响

目的研究靶向HER2/neu基因的siRNA对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响。方法化学合成的靶向HER2/neu基因siRNA在脂质体的介导下转染BIU-87细胞,实验分为HER2/neu siRNA组、空脂质体组、阴性siRNA序列组,以未转染BIU-87细胞为空白对照组。利用CCK-8法评价HER2/neu基因siRNA对BIU-87细胞体外生长的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测转染前后细胞中HER2/neu mRNA和蛋白表达水平的变化。结果转染HER2/neu siRNA后BIU-87细胞的存活率显著下降,从(82.37±0.90)%降低到(56.76±1.70)%,差异有统计学意义(P<0.05);同时能诱导细胞凋亡,HER2/neu siRNA组凋亡率达(45.60±0.70)%,与空白对照组、空脂质体组、阴性siRNA序列组比较差异有统计学意义(P<0.05);靶向HER2/neu基因siRNA能显著降低BIU-87细胞中HER2/neu mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论化学合成的靶向HER2/neu基因siRNA能有效抑制HER2/neu基因在BIU-87细胞中的表达,进而能有效抑制BIU-87细胞的增殖和诱导凋亡的作用。     

采用卵巢切除+三苯氧胺治疗ER和HER2/neu均阳性的乳腺癌

在3S技术支持下，通过利用土地利用／土地覆盖信息分析参数对20世纪90年代中期和21世纪初两个时期石羊河流域土地利用变化进行的定量分析结果表明：7年间，土地利用类型发生变化比较大的地区是石羊河流域的东部和北部．整个流域湿地、冰川、耕地、裸露地、草地、盐碱地等都发生了变化．研究实践表明，利用3S技术进行国土资源调查，建立国土资源环境数据平台，每5～10年进行一次数据更新，可以很好地反映土地利用，土地覆盖的变化情况，从而为更好地研究土地利用、土地覆盖变化规律，为政府的宏观决策提供依据．     

血清HER2/neu在HER2过表达型乳腺癌新辅助化疗中的变化及意义

目的 探讨在人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor2,HER2）过表达型乳腺癌新辅助化疗中血清HER2/neu浓度的变化及其与疗效的相关性.方法 采用酶联免疫法检测78例HER2过表达型局部进展期乳腺癌患者新辅助化疗前后血清HER2/neu的浓度,分析其变化与新辅助化疗疗效的相关性.结果 HER2过表达型乳腺癌患者新辅助化疗前后血清HER2/neu的浓度分别为（18.6±10.0） ng/ml,（11.6±6.1）ng/ml,前后比较差异有统计学意义（P ＜0.001）.新辅助化疗前后血清HER2/neu浓度变化与化疗疗效相关（P =0.029）.新辅助化疗前后血清HER2/neu浓度变化与病理完全缓解相关（P＜0.05）.结论 在HER2过表达型乳腺癌患者中,新辅助化疗前后血清HER2/neu浓度变化可作为预测化疗疗效的指标.     

乳腺癌药物治疗研究进展

乳腺癌的治疗包括手术、放疗、激素疗法、化疗和免疫疗法,后三者属药物治疗。激素疗法是用药物抑制雌激素的产生或者阻断激素受体,适用于雌激素受体阳性(ER+)的乳腺癌,常用的药物包括他莫昔芬、阿那曲唑和来曲唑等。化疗主要用于雌激素受体阴性(ER-)的乳腺癌,化疗的用药通常是组合给药。免疫疗法主要指单克隆抗体靶向治疗,适用于HER2受体阳性乳腺癌。HER2是表皮生长因子受体家族的一个成员,在近30%的乳腺癌有过表达。针对HER2的单克隆抗体类药物的临床应用已经使HER2阳性乳腺癌1-3期患者的5年无病生存率提高为87%左右(总体存活率达到了95%)。     

Astrocyte elevated gene-1 induces breast cancer proliferation and invasion through upregulating HER2/neu expression

Background  Astrocyte elevated gene-1 (AEG-1), primarily identified as a late response gene induced by HIV-1 infection, plays multiple roles in the process of oncogenesis. This novel gene has been demonstrated to be involved in the several potent carcinogenic pathways, including PI3K/Akt pathway, nuclear factor (NF)-κB pathway, and Wnt/β-catenin pathway. Although the function of AEG-1 has been intensively investigated in recent years, the molecular mechanism underlying its oncogenic role is largely unknown. The aim of this research was to explore the potential function of AEG-1 in breast cancer development and progression.

Methods  AEG-1 was ectopically overexpressed in breast cancer MCF-7 cells and its biological effects on the proliferation and invasion of MCF-7 cells were studied by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and invasion assays. The expression of HER2/neu, a crucial oncogene involving in breast cancer carcinogenesis, was also determined.

Results  Overexpression of the AEG-1 promoted the proliferation and invasion ability of breast cancer cells, and upregulated the expression of HER2/neu, a crucial oncogene involving in breast cancer carcinogenesis.

Conclusion  AEG-1 might facilitate the proliferation and invasion of breast cancer cells by upregulating HER2/neu expression, which provides a potential target for breast cancer therapy.

     

HER2/c-erbB-2蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨表皮生长因子受体2(HER2/c-erbB-2)蛋白在胃癌患者癌组织、远癌正常胃组织中的表达及其与患者临床特征参数和生存期的关系。方法选取2012年1月至2015年10月上海交通大学医学院苏州九龙医院普外科手术治疗的88例胃癌患者为研究对象,采用IHM两步方法检测88例胃癌患者癌组织及26例部分配对远癌正常胃组织中HER2/c-erbB-2的表达情况。分析胃癌患者癌组织中HER2/c-erbB-2阳性表达与患者的年龄、性别、淋巴结转移等临床病理特征的关系;比较HER2/c-erbB-2阳性胃癌患者与阴性患者生存期有无差别。结果 HER2/c-erbB-2蛋白主要在胞膜中表达,少部分表达于细胞浆;HER2/c-erbB-2在癌及远癌组织中阳性率分别为27.3%和3.8%,癌组织显著高于远癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);HER2/c-erbB-2阳性表达与肿瘤的浸润深度和区域淋巴结转移有关(P<0.05);HER2/c-erbB-2阳性和阴性患者中位生存时间分别为13.8个月与33.9个月,两组比较差异有统计学意义(HR=2.25,95%CI：1.06~4.80,P<0.05)。结论 HER2/c-erbB-2蛋白可能与胃癌的发生发展及侵袭转移有关,并可作为预后不良的分子标志物。     

针对HER2/neu的siRNA对非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用

目的:构建针对HER2/neu的RNA干涉载体,观察对HER2/neu表达抑制及抑制后对非小细胞肺癌生长的影响. 方法:设计和合成长度为64nt的脱氧寡核苷酸链,退火互补成双链,克隆至pSUPER质粒载体,转化DH5α菌株,提取质粒,转染过表达HER2/neu的肺腺癌细胞系SPC-A-1,RT-PCR检测HER2/neu的mRNA表达,Western blot和间接免疫荧光法检测HER2/neu的蛋白表达,FCM分析细胞周期变化,MTT法观察细胞生长. 结果:肺腺癌细胞系SPC-A-1存在HER2/neu过表达;成功构建了HER2/neu特异性RNA干涉载体pSUPER-siHER2;瞬时转染SPC-A-1细胞,HER2/neu的mRNA及蛋白表达均降低;G1期细胞较亲代增加9.9%;肿瘤细胞增殖速度减慢(P＜0.05). 结论:成功构建了HER2/neu RNA干涉载体,转染后可有效降低肺腺癌细胞系SPC-A-1 HER2/neu的mRNA转录及蛋白水平表达,阻滞转染细胞于G1期,造成转染细胞生长速度减慢,这有望为肺癌基因治疗提供一种选择手段.     

RNA干扰靶向沉默HER2/neu基因对卵巢癌细胞株SK-OV-3的影响

目的：观察siRNA表达质粒稳定转染靶向沉默HER2/neu基因对SK OV 3卵巢癌细胞株的影响。方法：针对HER2/neu基因序列构建短发夹状siRNA真核表达载体(pGenesil 1 HER2/neu),转染卵巢癌细胞株SK OV 3,G418筛选出稳定转染株后,采用RT PCR和Western Blot法观察HER2/neu基因的沉默效果;CCK 8比色分析检测细胞体外增殖活力;流式细胞仪检测细胞周期。结果：测序证实成功构建HER2/neu的2个短发夹状siRNA真核表达质粒;稳定转染SK OV 3细胞后,转染了特异性HER 2/neu siRNA的细胞HER 2/neu mRNA及p185蛋白水平均明显低于亲本细胞及转染无义对照序列的细胞;CCK 8比色分析显示HER 2/neu基因沉默的细胞存活分数明显低于HER 2/neu基因高表达的细胞（P=0.000）;流式细胞仪细胞周期分析也显示,HER 2/neu基因沉默的细胞处于凋亡状态及非增殖期的比例明显增加（P均<0.01）,而处于合成期的比例却显著减少（P≤0.001）。结论：靶向HER2/neu基因的短发夹状siRNA可从转录及翻译水平有效地沉默HER 2/neu基因;HER 2/neu基因沉默的SK OV 3卵巢癌细胞增殖明显受抑制。