纤溶酶原激活物抑制剂1反义RNA对猪主动脉内皮细胞中成纤维细胞生长因子的影响

许多研究表明纤溶酶原激活物抑制剂 1(ＰＡＩ 1)在动脉粥样硬化病变处的表达增加。ＰＡＩ 1可以通过促进细胞外基质积聚、促进血栓形成和调节平滑肌细胞迁移和增殖而促进动脉粥样硬化的发展[1] ,因此 ,降低动脉壁ＰＡＩ 1表达有可能延缓动脉粥样硬化的发展。我们观察了构建的ＰＡＩ 1反义ＲＮＡ重组质粒转导入离体培养的猪主动脉内皮细胞 (ＥＣ)后 ,表达的ＰＡＩ 1反义ＲＮＡ对细胞中ＰＡＩ 1表达的作用及对成纤维细胞生长因子 (ＦＧＦ)的影响。一、材料与方法1.细胞培养及鉴定 :体外培养猪主动脉内皮细胞 ,细胞在光镜下呈扁平、多角形或瓦…     

表达人膜辅助因子蛋白基因的猪内皮细胞可抑制人血清补体的细胞毒作用

目的研究转染人膜辅助因子蛋白基因的猪内皮细胞抗补体的细胞毒作用。方法从人胎盘组织提取总ＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增得到人膜辅助因子蛋白（ｈＭＣＰ）基因全长ｃＤＮＡ,将其克隆到带有巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＩＥ启动子的ｐＣＩ－ｎｅｏ哺乳动物表达载体和以ｐＣＩ－ｎｅｏ为基础构建成的带有人ＥＦ－１α启动子的ｐＥＦ－ｎｅｏ哺乳动物表达载体上,得到质粒ｐＣＩＭ和ｐＥＦＭ。利用电穿孔基因转移方法分别转染猪内皮细胞（ＰＥＣ）,以Ｇ４１８筛选稳定表达克隆。用正常人血清处理此转基因细胞来检测其抗补体作用。结果Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明,在ＥＦ－１α启动子引导下的ｈＭＣＰ基因得到了高效表达。死细胞计数和ＬＤＨ释放实验结果表明,表达ｈＭＣＰ基因的ＰＥＣ可有效抑制人血清补体对其的裂解作用（Ｐ＜０．０１）。结论克隆的ｈＭＣＰ基因在ＥＦ－１α启动子引导下于ＰＥＣ可高效表达,且使ＰＥＣ能够抗人补体的细胞毒作用。     

单核细胞趋化蛋白－1在大肠杆菌中的表达

将人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ插入融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１中，构建成质粒ｐＧＥＸ／ＭＣＰ转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经ＩＰＴＧ诱导后合成ＧＳＴ－ＭＣＰ－１融合蛋白。用１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测在３０ｋＤ左右有新生蛋白条带出现，表达量约占菌体总蛋白的３１．７％。趋化实验证明，该产物具备明确的单核细胞趋化活性。     

PDGF-B链基因上游序列中与HMGI结合 A-T丰富区的初步分离和鉴定

一些动脉粥样硬化相关致病因素可诱导内皮细胞和单核细胞中血小板源生长因子 -Ｂ链 (ＰＤＧＦ -Ｂ)基因表达 ,这一过程涉及众多反式作用因子和基因上游调控序列之间的相互作用。染色体结合蛋白———高迁移率蛋白Ⅰ (ＨＭＧＩ)可通过与ＤＮＡ上的Ａ -Ｔ丰富区结合 ,影响多种基因的转录。目的 :分离和鉴定ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游序列中与ＨＭＧＩ结合的Ａ -Ｔ丰富区 ,并初步分析其功能。方法 :ＤＮＡ重组技术和凝胶迁移率改变法 (ＥＭＳＡ)。结果 :重组人ＨＭＧＩ蛋白 (ｒＨＭＧＩ)可与ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游序列结合。在 - 1 758/ 4 3ｂ…     

单核细胞趋化蛋白—1在大肠杆菌中的表达

将人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ插入融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１中，构建成质粒ｐＧＥＸ／ＭＣＰ转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经ＩＰＴＧ诱导后合成ＧＳＴ－ＭＣＰ－１融合蛋白。用１２％ＳＣＳ－ＰＡＧＥ检测在３０ｋＤ左右有新生蛋白条带出现，表达量约占菌体总蛋白的３１．７％，趋化实验证明，该产物具备明确的单核细胞趋化活性。     

抗人C1q轻链可变区基因在E.coli中的表达

应用基因工程技术，将抗人Ｃ１ｑ轻链可变区基因的重组质粒ｐＧＥＭ－Ｃ１ｑＶＬ中分离，克隆进表达载体ｐＪＬＡ５０２。该表达截体含ＣＩＴｓ８５７抑制子基因，通过开温诱导法，重组表达子在宿主菌ＨＢ１０１中表达，获得抗人Ｃ１ｑ轻链可变区片段，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明其分子量范围为１２－１３ＫＤ。这为进一步抗人Ｃ１ｑ小抗体的表达积累了经验，有利于用于抗原－抗体结构功能的研究。     

6种真核表达质粒作为HBV-DNA疫苗免疫小鼠的研究

将编码ＨＢＶ表面抗原的Ｓ基因分别克隆到 6种不同的真核表达质粒上 ,包括两种真核质粒载体 (ｐｃＤＮＡ3.1,ｐＣＩ ｎｅｏ) ,两种逆转录病毒载体 (ｐＸＴ1,ｐＬＸＳＮ)和两种ＥＢ病毒载体 (ｐＣＥＰ4,ｐＭＥＰ4) ,构建不同的真核表达重组体 ,经酶切鉴定符合要求。将重组体用电转染法导入人肝癌细胞系ＨｅｐＧ2获得稳定分泌ＨＢｓＡｇ的抗性细胞系。不同重组体表达ＨＢｓＡｇ的滴度 ,以逆转录病毒重组基金项目 :国家自然科学基金资助项目(36930 2 80 ,3957660 )作者单位 :重庆医科大学肝病研究所通信作者 :叶珈 30 0 0 70天津医科大学免疫教…     

HIV-1核心蛋白p24在大肠杆菌中的表达与纯化

探索进一步提高ＨＩＶ－１Ｐ２４ｇａｇ蛋白在大肠杆菌中的表达效率,增加产物的纯化手段。方法：通过改造原核表达载体ＰＢＶ２２０和ｐＥＴ２８,构建了一种通用型温控原核表达载体ｐＶＶ５,将ＨＩＶ－１ｇａｇ基因的１１４８－１８５７编码序列,插入到ｐＶＶ５ｂ和ｐＥＴ２８ｂ的相应位点中,构建了重组表达质粒,ｐＥＧ１ｂ和ｐＥＧ７ｂ,转化到大肠杆菌中进行表达,产物利用ＩＭＡＣ金属螯合层析柱进行纯经,纯化的表达产物用     

MANDARIN T ONE RECOGNITION IN SPE E CH DISORDER THERAPY SYSTEM

ＭＡＮＤＡＲＩＮＴＯＮＥＲＥＣＯＧＮＩＴＩＯＮＩＮＳＰＥＥＣＨＤＩＳＯＲＤＥＲＴＨＥＲＡＰＹＳＹＳＴＥＭＭ　ＡＮＤＡＲＩＮＴＯＮＥＲＥＣＯＧＮＩＴＩＯＮＩＮＳＰＥＥＣＨＤＩＳＯＲＤＥＲＴＨＥＲＡＰＹＳＹＳＴＥＭＺｏｕＹａｎｇ；ＤｉｎｇＨｏｎｇＬｉｎ；...     

HMGI高表达促进单核细胞PDGF-B链基因转录

血管内皮细胞与循环血细胞 ,如单核细胞之间的相互作用 ,在动脉粥样硬化等重要心血管疾病发生和发展过程中具有极其重要的意义。众多的动脉粥样硬化相关因素也同时作用于这些细胞。我们曾发现高迁移率蛋白Ⅰ (ＨＭＧⅠ )能促进ＥＣＶ30 4细胞核转录因子ＮＦ -κＢ与ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游切应力反应元件 (ＳＳＲＥ)的结合。目的 :观察在整体细胞水平 ,ＨＭＧＩ对单核细胞系Ｕ937细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因转录的影响及蛋白激酶Ｃ磷酸化的调节作用。方法 :( 1 )利用ＰＣＲ技术和ＤＮＡ重组技术构建正义和反义ＨＭＧＩ表达载体 ;( 2 )脂质体法将…     

CLINICAL REPORT OF MODIFIED MAZE PROCEDURE

ＣＬＩＮＩＣＡＬＲＥＰＯＲＴＯＦＭＯＤＩＦＩＥＤＭＡＺＥＰＲＯＣＥＤＵＲＥＣＬＩＮＩＣＡＬＲＥＰＯＲＴＯＦＭＯＤＩＦＩＥＤＭＡＺＥＰＲＯＣＥＤＵＲＥＺｈｕＪｉａＧｕａｎｇ；ＨｅＺｈｏｎｇＬｉａｎｇ；ＬｕｏＷｅｉ；ＤｏｎｇＡｉＱｉａｎｇ；ＸｕＳｈｉＷｅ...     

谷氨酰胺对缺氧复氧损伤人小肠上皮细胞谷胱甘肽的影响

目的：探讨谷氨酰胺（ＧＬＮ）对缺氧复氧损伤人小肠上皮细胞（ＩＥＣ）内还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）和丙二醛（ＭＤＡ）的影响。方法：采用原代培养人ＩＥＣ作为实验模型,用荧光法测定体外培养ＩＥＣ内ＧＳＨ和ＭＤＡ含量。结果：正常对照组ＧＳＨ含量最高,在对照组加入ＧＬＮ并不影响ＧＳＨ含量（Ｐ〉０．０５）。缺氧６０ｍｉｎ或９０ｍｉｎ复氧３０ｍｉｎ损伤ＩＥＣ细胞内ＧＳＨ含量均显著低于正常对照组（Ｐ〈０．０５）,预先     

血小板源生长因子对培养内皮细胞移行的影响及其与血管内皮细 …

一、材料与方法1 材料与试剂 :人脐静脉内皮细胞 (ＨＵＶＥＣ)株(ＥＣＶ30 4)由武汉大学菌种保存中心提供。ＰＤＧＦ ＢＢ、ＤＭＥＭ/Ｆ12 、胎牛血清 (ＦＢＳ)及青霉素 链霉素均为美国Ｇｉｂｃｏ公司产品。血管内皮细胞生长因子 (ＶＥＧＦ)抗血清为ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司产品。ＰＤＧＦ ＢＢ、ＳＡＢＣ试剂盒抗血清及二氨基联苯胺(ＤＡＢ)由博士德公司提供。2 血小板源生长因子 (ＰＤＧＦ)对培养ＨＵＶＥＣ移行的影响 :参照Ｇａｊｄｕｓｅｋ等[1] 介绍的方法 ,并加以改进。选用生长良好的ＨＵＶＥＣ悬液 ,调整细胞密度为 2× 10 4 个 /…     

人细胞间粘附分子1基因功能区Ⅰ,Ⅱ的克隆及高效表达

用ＰＣＲ聚合酶链反应技术从人细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ－１）ｃＤＮＡ中获取了其编码细胞外氨基端功能区Ⅰ、Ⅱ１８５个氨基酸的ＤＮＡ序列，构建了重组质粒ｐＥＴ／ｒｓＩＣＡＭ－１。经转化宿主菌，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，薄层扫描和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ，证明目的基因在大肠杆菌中获得了高效表达。     

AN ALGORITHM OF EDGE DETECTION IN ULTRASONEC MEDICINE IMAGING BASED ON ENTROPY OPERATOR

ＡＮＡＬＧＯＲＩＴＨＭＯＦＥＤＧＥＤＥＴＥＣＴＩＯＮＩＮＵＬＴＲＡＳＯＮＥＣＭＥＤＩＣＩＮＥＩＭＡＧＩＮＧＢＡＳＥＤＯＮＥＮＴＲＯＰＹＯＰＥＲＡＴＯＲＡＮＡＬＧＯＲＩＴＨＭＯＦＥＤＧＥＤＥＴＥＣＴＩＯＮＩＮＵＬＴＲＡＳＯＮＥＣＭＥＤＩＣＩＮＥＩＭＡＧ...     

结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的制备

ＣＦＰ10和ＥＳＡＴ6都是结核分枝杆菌(Ｍ .ｔｂ)特有的、有良好抗原性的分泌性蛋白 ,将其编码基因 1ｈｐ和ｅｓａｔ6用ＧｅｎｅＳＯＥｉｎｇ法通过Ｌｉｎｋｅｒ (Ｇｌｙ4 Ｓｅｒ) 3构建成融合基因 ,并克隆入ｐＱＥ30质粒 ,表达、纯化、鉴定ｒＣＦＰ10 ＥＳＡＴ6 ,为其应用于Ｍ .ｔｂ感染的诊断和预防奠定基础。1 1ｈｐ ｅｓａｔ6基因的构建 :以已构建的ｐＱＥ30 ＣＦＰ10质粒为模板 ,用引物(Ｐ1) 5′ ＣＣＧＧＡＴＣＣＡＴＧＧＣＡＧＡＧＡＴＧＡＡＧＡＣ 3′和 (Ｐ2 ) 5′ ＧＣＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＧＣＣＧＣＴＴＣＣＧＣＣＡＣＣＧＣ…     

中国版纳猪MHCI类P1分子全长的原核表达与纯化

目的：获得原核表达的中国版纳猪ＳＬＡＩ类Ｐ１蛋白质分子。方法：ＰＣＲ扩增去信号肽的ＳＬＡＩ类Ｐ１ｃＤＮＡ序列，亚克隆至ｐＧＥＭＴ载体，测序。将亚克隆的Ｐ１　ｃＤＮＡ片段插入表达载体ｐＥＴ４２ｂ（＋），构建重组表达质粒ｐＥＴ－４２ｂ（＋）／ｓｌａ－ｐｌ，转化Ｅ·ｃｏｌｉ表达菌 ＢＬ２１－ＣｏｄｏｎＰｌｕｓ（ＤＥ３）－ＲＩＬ，ＩＰＴＧ诱导 Ｐ１－８ ｘ ｈｉｓ融合蛋白表达，经包涵体洗涤，８ ｍｏｌ／Ｌ尿素变性溶解，Ｎｉ２＋亲和层析，梯度透析后，定量保存。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定目的蛋白的表达与纯化。结果：目的蛋白（分子量３９．５ ｋＤ）表达量占细菌总蛋白 １５％，每升表达菌获得纯度９５％的目的蛋白 ４０ ｍｇ～６０ｍｇ。结论：成功建立猪 ＳＬＡ分子全长原核表达、纯化体系，为建立间接识别猪移植抗原ＳＬＡＩ类分子的人Ｔ细胞系及表位分析打下基础。     

ELECTRON MICROSCOPE ANALYSIS OF MITOCHONDRIA ON RENAL TUBULE CELL SUFFERED WARM ISCHEMIC AND REPER FUSIVE DAMAGE IN RABBITS

ＥＬＥＣＴＲＯＮＭＩＣＲＯＳＣＯＰＥＡＮＡＬＹＳＩＳＯＦＭＩＴＯＣＨＯＮＤＲＩＡＯＮＲＥＮＡＬＴＵＢＵＬＥＣＥＬＬＳＵＦＦＥＲＥＤＷＡＲＭＩＳＣＨＥＭＩＣＡＮＤＲＥＰＥＲＦＵＳＩＶＥＤＡＭＡＧＥＩＮＲＡＢＢＩＴＳＥＬＥＣＴＲＯＮＭＩＣＲＯＳＣＯＰＥＡ...     

NON-INVASIVE CARDIAC FUNCTION EVALUATING AND CARDIAC DISEASES DIAGNOSING EXPERT SYSTEM

ＮＯＮ－ＩＮＶＡＳＩＶＥＣＡＲＤＩＡＣＦＵＮＣＴＩＯＮＥＶＡＬＵＡＴＩＮＧＡＮＤＣＡＲＤＩＡＣＤＩＳＥＡＳＥＳＤＩＡＧＮＯＳＩＮＧＥＸＰＥＲＴＳＹＳＴＥＭＮＯＮ－ＩＮＶＡＳＩＶＥＣＡＲＤＩＡＣＦＵＮＣＴＩＯＮＥＶＡＬＵＡＴＩＮＧＡＮＤＣＡＲＤＩＡＣＤ...     

内皮细胞高密度种植于人工血管的实验研究

内皮细胞高密度种植于人工血管的实验研究何红兵，潘玉先，马素珍，王哲生（第一军医大学附属珠江医院，广州５１０２８２）ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＳＴＵＤＩＥＳＯＮＨＩＧＨ－ＤＥＮＳＩＴＹＥＮＤＯＴＨＥＬＩＡＬＣＵＬＴＵＲＥＩＮＡＲＴＩＦＩＣＩＡＬＢＬＯＯＤ...