EB病毒BHRF1基因抗辐射作用的研究

为了解EB病毒编码基因BHRF1的表达对鼻咽癌细胞抵抗放射线损伤能力的改变，构建携有BHRF1的高表达载体，并转染鼻咽癌细胞株CNE2细胞，观察转染前后的癌细胞在放射线照射后于裸鼠体内成瘤能力改变的情况。结果发现，在放射线照射前，BHRF1表达细胞在裸鼠体内形成肿瘤时间较晚，肿瘤重量较轻（P＜0．01）；而经放射线照射后，BHRF1表达细胞在裸鼠体内的成瘤能力强于对照组（P＜0．01），经原位末端标记检查发现其凋亡指数小于对照组（P＜0．01）。提示BHRF1的表达能通过阻止细胞的凋亡，增强鼻咽癌细胞抵抗放射线对其DNA的损伤作用。     

EB病毒BHRF1基因表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响

为了解ＥＢ病毒编码基因ＢＨＲＦ１的表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响，通过构建携有ＢＨＲＦ１的高表达载体，并转染低分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２细胞，观察转染后的癌细胞在缺乏营养条件下增殖能力的改变。结果发现：ＢＨＲＦ１的表达能抑制增殖核抗原的表达，并促进其在缺乏营养条件下生存能力。提示ＥＢ病毒编码的ＢＨＲＦ１基因可能与鼻咽癌的发生和发展过程有关。     

EB病毒BHRF1基因表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响

为了解ＥＢ病毒编码基因ＢＨＲＦ１的表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响，通过构建携有ＢＨＲＦ１的高表达载体，并转染低分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２细胞，观察转染后的癌细胞在缺乏营养条件下增殖能力的改变。结果发现：ＢＨＲＦ１的表达能抑制增殖核抗原的表达，并促进其在缺乏营养条件下生存能力。提示ＥＢ病毒编码的ＢＨＲＦ１基因可能与鼻咽癌的发生和发展过程有关。     

EB病毒BHRF1基因表达对鼻咽癌细胞增殖周期影响的研究

目的：了解ＥＢ病毒编码ＢＨＲＦ１基因表达对鼻咽癌细胞增殖周期的影响。方法：本研究通过构建ＢＨＲＦ１高表达载体并将其转入鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２细胞中，检测转染后稳定表达ＢＨＲＦ１癌细胞的增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）表达和喜树碱作用前后细胞周期分布的改变。结果：ＢＨＲＦ１的表达可促使癌细胞的ＰＣＮＡ表达下降，Ｇ１期细胞增多，Ｓ期细胞减少；而在喜树碱作用后，ＢＨＲＦ１－ＣＮＥ２细胞的凋亡率明显小于对照组，其Ｇ１期细胞数下降，Ｓ期细胞数升高。结论：ＢＨＲＦ１基因的表达可通过调节细胞周期分布、抑制细胞凋亡的发生以增强细胞的生存能力，而可能与鼻咽癌的发生有关     

EB病毒的BHRF1蛋白对鼻咽癌细胞凋亡抑制作用的研究

由于ＥＢ病毒基因组可在多数鼻咽癌癌组织中被发现，而且许多鼻咽癌患者的血清中ＥＢ病毒的抗体（ＩｇＡ）呈阳性，因此目前认为ＥＢ病毒感染与鼻咽癌的发病有一定的关系。ＢＨＲＦ１为一种早期表达蛋白，在所有野生型ＥＢ病毒的裂解液中均可被检测到。其序列高度保守，因而猜测其在ＥＢ病毒的生长周期中起着重要的作用。ＢＨＲＦ１与癌基因ｂｃｌ－２的表达产物具有高度的同源性，也因此考虑二者在功能及作用机理上有相似之处。为了确定ＢＨＲＦ１在鼻咽癌细胞中的功能，作者构建了ＢＨＲＦ１的高表达载体ｐｃＤＮＡ３，并将其转入鼻咽癌细…     

鼻咽癌与前列环素及血栓素关系初探

用放射免疫法分别测定了３４例鼻咽癌、１６例良性瘤、１２例炎症和１６例正常周血浆中前列环素（ＰＧＩ２）和血栓素Ａ２（ＴＸＡ２）的稳定代谢产物６－酮－前列腺素Ｆ１ａ（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ）和血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）的含量。结果显示鼻咽癌患者血浆ＴＸＢ２含量显著升高（Ｐ＜０．０１），ＰＧＩ２含量所增加；ＴＸＢ２／６ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ比值显著增加（Ｐ＜０．０１）。鼻咽癌晚期患 者血浆ＴＸＢ２含量显著高     

EB病毒反义LMP1基因对人低分化鼻咽癌CNE－3细胞株生长的抑制作用

为研究鼻咽癌基因治疗的可能性，应用ＥＢ病毒反义ＬＭＰ１基因的重组逆转录病毒载体，用ＰＡ３１７细胞包装成假型逆转录病毒，免疫荧光检查该病毒能明显抑制Ｂ９５－８细胞内ＥＢ病毒的激活，抑制率达７１％。用此病毒成功地感染了人低分化鼻咽癌ＣＮＥ－３细胞株，使ＣＮＥ－３细胞生长速率下降约７０％，软琼脂集落形成和裸鼠致瘤能力均明显下降。用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实转染的肿瘤组织细胞中有较高水平的ｐＺＩＰ载体ｎｅｏ基因存在，证实了ＥＢ病毒反义ＬＭＰ基因能有效地抑制人低分化鼻咽癌ＣＮＥ－３细胞的生长和裸鼠致瘤能力，为鼻咽癌的基因治疗提供了实验依据。     

ＭｉＲ-１５０调控 Ｎａｎｏｇ对鼻咽癌侧群细胞增殖、侵袭的影响

目的　检测 ＭｉＲ-１５０在鼻咽癌侧群（ＳＰ）细胞中的表达,并探讨其是否通过调控靶基因 Ｎａｎｏｇ促进鼻咽癌侧群细胞的增殖与侵袭。方法　采用 ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ实时定量荧光聚合酶链式反应（ｑＲＴ ＰＣＲ）法检测 ＭｉＲ-１５０及Ｎａｎｏｇ在鼻咽癌侧群细胞和非侧群（ＮＳＰ）细胞中的表达情况;并通过瞬时转染 ｍｉＲ-１５０ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ至 ＳＰ细胞、ｍｉＲ-１５０ｍｉｍｉｃ至 ＮＳＰ细胞中,ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测 Ｎａｎｏｇ的表达情况;进一步通过 ＣＣＫ-８实验、Ｔｒａｎｓｗａｌｌ实验检测鼻咽癌侧群细胞增殖、侵袭能力的变化,数据处理采用两独立样本 ｔ检验。结果　ｑＲＴ ＰＣＲ检测结果表明,ＭｉＲ-１５０在 ＳＰ细胞（０．９９±０．０５）较 ＮＳＰ细胞（０．５９±０．０２）中表达水平升高（ｔ＝８．０６,Ｐ＜０．０００１）,Ｎａｎｏｇ在鼻咽癌ＳＰ细胞（０．９９±０．４７）较 ＮＳＰ细胞（０．４９±０．０５）表达升高（ｔ＝７．５,Ｐ＜０．０００１）;ＳＰ细胞转染 ＭｉＲ-１５０ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（０．４６±０．０３）较对照组（１．０１±０．０７）Ｎａｎｏｇ表达下调（ｔ＝６．８５,Ｐ＝０．０００５）、ＣＣＫ ８实验示增殖受抑制、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ侵袭实验示侵袭能力减弱（１１４．４０±５．１４ｖｓ５７．３０±４．２９,ｔ＝８．５,Ｐ＜０．０００１）;ＮＳＰ细胞转染 ＭｉＲ-１５０ｍｉｍｉｃ（１．０１±０．０６）组较对照组（０．４８±０．０４）Ｎａｎｏｇ表达上调（ｔ＝６．１６,Ｐ＝０．０００８）,增殖及侵袭能力增强。结论　鼻咽癌 ＳＰ细胞中ＭｉＲ-１５０与 Ｎａｎｏｇ呈高表达,ＭｉＲ-１５０可通过调控靶基因 Ｎａｎｏｇ促进鼻咽癌侧群细胞的增殖与侵袭。     

人LAK细胞在体外和裸鼠体内抗头颈部肿瘤细胞的研究

报道人ＬＡＫ细胞对头颈疗肿瘤细胞的影响。结果发现：①ＬＡＫ细胞，在体外对人喉鳞癌细胞系ＨＥＰ－２、人鼻鳞癌细胞系ＣＮＥ－２和人口腔鳞癌细胞系ＫＢ均表现出明显的杀伤活性，与对照组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。②ＬＡＫ细胞在移植瘤裸鼠体内同样具有很强的抑瘤作用。本实验结果提示临床上运用ＬＡＫ细胞治疗头颈部肿瘤可能是一种较新的有效方法。     

鼻咽癌患者单个核细胞mIL-2R表达和血清sIL-2R水平的检测及意义

目的：探讨ＩＬ－２Ｒ与鼻咽癌发生、发展的关系。方法：应用间接免疫荧光法和ＥＬＩＳＡ法对６２例鼻咽癌、２１例鼻咽良性病变和２６例健康对照者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）经植物血凝素（ＰＨＡ）刺激后的ｍＩＬ－２Ｒ和血清ｓＩＬ－２Ｒ水平进行检测。结果：１）鼻咽癌患者ｍＩＬ－２Ｒ表达显著低于鼻咽良性病变和健康对照组（Ｐ＜０．０５）;２）鼻咽癌患者血清ｓＩＬ－２Ｒ水平显著高于鼻咽良性病变和健康对照组（Ｐ＜０．０１）;３）与无远处转移的鼻咽癌患者相比,有远处转移的鼻咽癌患者血清ｓＩＬ－２Ｒ显著升高（Ｐ＜０．０１）;４）鼻咽良性病变与健康对照组之间ｍＩＬ－２Ｒ表达和ｓＩＬ－２Ｒ水平无显著差异。结论：结果提示ｍＩＬ－２Ｒ表达低下和ｓＩＬ－２Ｒ异常升高在鼻咽癌患者机体免疫抑制中可能起重要作用。     

Flow cytometric analysis of BHRF1 expression prohibiting apoptosis induced by radiation.

The Epstein-Barr virus gene BHRFI has homology with proto-oncogene bcl-2, which can protect cells from apoptosis. In order to investigate the effect of BHRF1 expression on the anti-apoptotic ability of nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells after irradiation, a high-BHRF1 expression vector was constructed and transfected into the NPC cell line CNE2. Then, the alteration of proliferation and apoptosis in the cells was tested by flow cytometry after cobalt 60 irradiation. The results showed that BHRF1 expression could increase G1 delay and decrease the cell percentage in S phase before irradiation, and reduce the apoptotic rate of CNE2 cells and increase the cell percentage in S phase after irradiation. The results suggest that BHRF1 expression is able to alter the cell cycle and protect CNE2 cells from apoptosis induced by radiation.     

血管内皮生长因子在鼻咽癌组织中的表达及其与淋巴转移的关系

目的 检测鼻咽癌中血管内皮生成因子C(VEGF-C)的表达及微淋巴管密度(microlymphatic vessel density,MLVD),探讨鼻咽癌淋巴管生成及淋巴转移之间的关系.方法 采用免疫组化SP法检测58例鼻咽癌和20例鼻咽部炎性反应组织中VEGF-C的表达情况,并用淋巴管内皮细胞特异性抗体LYVE-1行免疫组化染色,计数肿瘤内MLVD,并结合临床病理特征进行分析.结果 鼻咽癌组和炎性反应对照组VEGF-C的阳性表达率分别为84.5%(49/58)和15.0%(3/20),差异有统计学意义(X2=32.309,P＜0.01).鼻咽癌组织MLVD为(28.6±6.2)个/视野,鼻咽炎性反应组为(10.5 4±3.0)个/视野,两组差异有统计学意义(t=12.491,P＜0.01).鼻咽癌组织中,有淋巴转移组VEGF-C阳性表达率(87.8%)明显高于无淋巴转移组(76.5%);有淋巴转移组MLVD(30.2 4±6.4)个/视野高于无淋巴转移组(24.8±3.6)个/视野,经统计学分析,差异均有统计学意义(t=3.259,P＜0.01).VEGF-C的表达与MLVD(t=3.512,P＜0.01)、淋巴转移(X2=7.715,P＜0.01)、临床分期(X2=4.250,P＜0.05),与病理分化程度无关(X2=0.000,P＞0.05).VEGF-C的表达与MLVD(t=3.512,P＜0.01)、淋巴转移(X2=7.715,P＜0.01,r=0.712)、临床分期(X2=4.250,P＜0.05,r=0.481)相关,与病理分化程度无关(X2=0.000,P＞0.05).结论 在鼻咽癌组织中VEGF-C呈高表达,VEGF-C表达与鼻咽癌组织MLVD、淋巴转移、临床分期密切相关.VEGF-C可能参与了鼻咽癌发生、浸润和转移的过程.VEGF-C与肿瘤组织微淋巴管密切相关,在鼻咽癌发展过程中起重要作用,可能成为抗肿瘤治疗的潜在靶点.     

鼻咽癌中VEGF的表达与树突状细胞含量的相关分析及临床意义

目的 探讨鼻咽癌组织中VEGF表达与树突状细胞含量的相关性。方法 选取鼻咽癌组织和鼻咽部淋巴组织各25例,采用ELISA方法检测组织中VEGF的表达,采用流式细胞仪检测组织中树突状细胞和调节性T细胞的含量并分析其相关性。结果 鼻咽癌组织中VEGF含量高于鼻咽部淋巴组织,组间差异具有统计学意义(t=12.324,P<0.01);鼻咽癌组织中CD4+淋巴细胞含量低于鼻咽部淋巴组织,组间差异具有统计学意义(t=14.304,P<0.01);而鼻咽癌组织中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞含量高于鼻咽部淋巴组织,组间差异具有统计学意义(t=5.910,P<0.01);鼻咽癌组织中CD123+树突状细胞含量低于鼻咽部淋巴组织,组间差异具有统计学意义(t=7.866,P<0.01),鼻咽癌组织中CD11c+树突状细胞含量低于鼻咽部淋巴组织,组间差异具有统计学意义(t=3.411,P<0.01),鼻咽癌组织VEGF表达与CD4+CD25+淋巴细胞含量呈正相关(r=0.966 ,P<0.01),与CD123+树突状细胞含量呈负相关(r= -0.946,P<0.01),与CD11c+树突状细胞含量呈负相关(r= -0.954,P<0.01)。结论 鼻咽癌组织中VEGF表达与鼻咽癌组织中CD4+、CD25+调节性T细胞和树突状细胞的含量有关,可能参与鼻咽癌的免疫逃逸。     

Skp2与P27kip1在鼻咽癌组织中的表达及意义

目的：F-box蛋白家族中的一员Skp2参与细胞周期抑制蛋白P27kip1泛素化降解,研究发现Skp2在乳腺癌、胃癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中表达增加。本研究旨在探讨Skp2与P27kip1在鼻咽癌组织中的表达及与鼻咽癌多项临床病理特征的关系,并探讨两者的相关性。方法：鼻咽癌组39例,慢性鼻咽炎组24例。标本均经石蜡包埋,HE染色确诊。Skp2和P27kip1蛋白的检测采用免疫组化染色（PV-9000二步法）。结果：(1) Skp2在鼻咽癌组织中的阳性表达率为71.79%,明显高于其在慢性鼻咽炎组织中的阳性表达率(41.67%),差异有统计学意义（P＜0.05）;P27kip1在鼻咽癌组织中的阳性表达率为35.90%,明显低于其在慢性鼻咽炎组织中的阳性表达率(79.17%),差异有统计学意义（P＜0.01）;(2) Skp2、P27kip1的蛋白表达与鼻咽癌的临床分期、颅神经侵犯有关（P＜0.05）,与年龄、性别、分化程度、颈淋巴结转移无关（P＞0.05）;(3) Skp2、P27kip1在鼻咽癌组织中的表达呈负相关（rs=-0.373,P=0.019）。结论：鼻咽癌中Skp2蛋白表达与靶蛋白P27kip1蛋白降解有关,Skp2、P27kip1可能与鼻咽癌的发生发展有关,联合检测Skp2、P27kip1蛋白表达可作为判断鼻咽癌生物学行为的指标之一。     

Clinical significance of elevated serum sICAM-1 in patients with nasopharyngeal carcinoma]

OBJECTIVE: To study the expression of serum sICAM-1(soluble intercellular adhesion molecule-1) and tissue ICAM-1 in nasopharyngeal carcinoma and its clinical significance. METHODS: Expression of ICAM-1 in frozen sections of 20 normal nasopharyngeal mucosa and 54 nasopharyngeal carcinoma samples were studied with immunohistochemical technique, and levels of serum sICAM-1 in 54 patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC group) and 32 healthy adults (normal group) by ELISA. RESULTS: Positive expression (45/54) of tissue ICAM-1 and levels (2,044.48 +/- 640.05) microgram/L of serum sICAM-1 in NPC group were significantly higher than that of 2/20 and (313.70 +/- 114.98) microgram/L in normal group (P < 0.01, respectively), and there was a positive relationship between the expression of tissue ICAM-1 and levels of serum sICAM-1 in nasopharyngeal carcinoma(P < 0.05). The levels (2,177.31 +/- 642.13) microgram/L of serum sICAM-1 in patients with III-IV stages were higher than those (1,847.25 +/- 308.15) microgram/L in I-II stages (P < 0.05), and those (1,678.89 +/- 685.01) microgram/L in patients with no lymph node metastasis lower than that (2,134.34 +/- 609.60) microgram/L in lymph node metastasis (P < 0.05). The levels of serum sICAM-1 decreased significantly from (2,211.42 +/- 717.59) microgram/L to (926.55 +/- 207.72) microgram/L in disappearance of tumor and metastatic lymph node after radiotherapy (P < 0.01). CONCLUSION: sICAM-1 might be involved in the cellular immunopathogenesis of nasopharyngeal carcinoma, and the measurement of the serum sICAM-1 may reflect ability of neoplasm cell in freedom from host immunological surveillance. Dynamic measurement of serum sICAM-1 may be a useful objective index to evaluate NPC prognosis and curative effects.     

Tiam1基因表达与鼻咽癌浸润转移的关系

目的:探讨Tiam1基因表达与鼻咽癌浸润转移的关系。方法:应用RT-PCR技术,对41例鼻咽癌组织和20例正常鼻咽部组织进行Tiam1mRNA表达水平的检测。结果:41例鼻咽癌组织的Tiam1mRNA平均表达水平(1.83±0.73)明显高于正常鼻咽部组织(0.87±0.45)(P<0.01);鼻咽癌组织中Tiam1mRNA高表达率与临床分期、T分级呈正相关;有淋巴结转移者Tiam1mRNA高表达率为59.3%(16/27),无淋巴结转移者为21.4%(3/14),二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Tiam1基因在鼻咽癌组织中的表达明显高于正常鼻咽部组织,其过表达与鼻咽癌浸润转移呈正相关。     

Association between high initial tissue levels of cyclin d1 and recurrence of nasopharyngeal carcinoma

OBJECTIVES/HYPOTHESIS: Cyclin D1 expression and the rate of apoptosis have been reported to serve as important prognostic indicators in human cancers. The purpose of the present study was to determine the prognostic significance of both initial cyclin D1 expression and the apoptotic index in nasopharyngeal carcinoma. STUDY DESIGN: Cohort study. METHODS: Cyclin D1 protein levels and apoptosis in tumors and their corresponding adjacent, histologically normal tissues were determined at the time of initial diagnosis using immunohistochemical staining, Western blot analysis, and in situ end labeling, respectively, in 64 patients with T1-T4/N0-N2, poorly differentiated squamous cell carcinoma of the nasopharynx. All cases were treated by routine radiation therapy with a total median dose of 70 Gy and followed up for 10 years. RESULTS: High levels of cyclin D1 were found in 35 of 64 tumor specimens (54.7%); no cyclin D1--positive cells were determinable in normal epithelium of the nasopharynx. Rates of early local recurrence (within 5 y) were significantly higher (P <.01) for patients with high levels of cyclin D1 before radiation therapy (24 of 35 patients [68.6%]) as compared with patients with low or no expression (3 of 29 [10.3%]). Furthermore, patients bearing high levels of cyclin D1 had a poorer prognosis concerning 10-year survival than the others (P <.001), whereas overexpression of cyclin D1 did not correlate with the initial TMN classification (P >.05). According to the rate of spontaneous apoptosis in tumors below or above the median, patients were divided into two groups. There was no statistically significant difference for the overall survival between the two groups (P >.05). CONCLUSIONS: The present study demonstrates that cyclin D1 can be used as an indicator of recurrence and subsequent prognosis in nasopharyngeal carcinoma after radiation therapy. At the same time, the apoptotic state before radiation therapy is of no value in predicting the prognosis of patients with nasopharyngeal carcinoma.