星形细胞瘤中PTEN蛋白表达的意义及其与微血管密度的相关性研究

目的研究星形细胞瘤中PTEN蛋白表达的意义及其与微血管密度(MVD)之间的相关性.方法应用免疫组化SP法检测星形细胞瘤组(n=60)和对照组非肿瘤组织(n=20)中PTEN蛋白的表达并记数相应的MVD.结果 PTEN蛋白阳性染色定位于胞浆,在对照组中均呈阳性表达,在肿瘤组的阳性表达率明显低于对照组(P＜0.05),其中Ⅲ～Ⅳ级肿瘤的阳性表达率明显低于Ⅱ级肿瘤(P＜0.05).Ⅲ～Ⅳ级的MVD平均值明显高于Ⅱ级(P＜0.05).PTEN蛋白阳性表达组的MVD平均值显著低于PTEN蛋白阴性表达组(P＜0.05).结论 PTEN基因的缺失与突变在星形细胞瘤的发生发展中可能起重要作用.PTEN可能通过某些途径抑制星形细胞瘤的血管生成.     

PTEN蛋白和核增殖相关抗原Ki-67在星形细胞瘤中的表达

目的　检测PTEN蛋白和Ki-67(MIB-1)在星形细胞瘤中的表达及相互关系。方法　应用免疫组化结合计算机图像分析方法检测62例星形细胞瘤中PTEN蛋白和Ki-67表达情况。结果　低分化(Ⅲ一Ⅳ级)星形细胞瘤中PTEN蛋白表达显著低于高分化(Ⅰ-Ⅱ级)星形细胞瘤(P<0.001);Ki-67蛋白在不同病理分级的星形细胞瘤中表达差异显著(P<0.01),且星形细胞瘤增殖指数(PI)与PTEN蛋白表达呈负相关(r=-0.778,P<0.001)。结论 PTEN蛋白表达可能在星形细胞瘤细胞增殖中发挥重要作用。     

脑胶质瘤组织中胸腺嘧啶核苷激酶1的表达和意义及其与细胞增殖抗原Ki67表达的关系

目的 研究脑胶质瘤组织中胸腺嘧啶核苷激酶1(TK1)的表达和意义,以及其与细胞增殖抗原Ki67表达的关系.方法 202例脑胶质瘤患者,经病理检查进行脑胶质瘤病理分级及组织类型分型.采用免疫组化染色法检测脑胶质瘤组织中TK1和Ki67的表达.比较不同级别及类型患者脑胶质瘤组织中TK1表达的阳性率;分析TK1与Ki67表达的关系.结果 本组患者脑胶质瘤按WHO分级:Ⅰ级12例,Ⅱ级85例,Ⅲ级60例,Ⅳ级45例;组织类型分型:少突胶质细胞瘤28例,星形胶质细胞瘤174例.本组患者TK1阳性119例(58.9％);其中良性组(WHO Ⅰ级)患者无TK1阳性,低度恶性组(WHO Ⅱ级)阳性31例(36.5％),高度恶性组(WHO Ⅲ、Ⅳ级)阳性88例(83.8％);三组间TK1阳性率比较差异均有统计学意义(P ＜0.05 ～0.001).星形胶质细胞瘤及复发患者的TK1阳性率分别显著高于少突胶质细胞瘤和初发的患者(均P＜0.05).TK1与Ki67的表达水平呈正相关(r=0.711,P＜0.01).结论 恶性程度高、星形胶质细胞瘤及复发的脑胶质瘤患者瘤组织中TK1的表达增高;提示TK1表达可作为脑胶质瘤病理分级、分型及复发的重要参考指标.TK1与Ki67正相关,提示TK1亦可反映脑胶质瘤细胞的增殖情况.     

PTEN／MMAC1基因表达与星形细胞瘤细胞增殖的相关性研究

目的研究人脑星形细胞瘤中PTEN/MMAC1基因编码蛋白的表达和星形细胞瘤增殖的关系,探讨PTEN/MMAC1基因突变在人脑星形细胞瘤增殖中的作用。方法应用PCR-SSCP、SP免疫组织化学法检测了52例星形细胞瘤中PTEN/MMAC1基因突变及表达情况,和肿瘤细胞核增殖抗原(PCNA)增殖程度;并用SPSS10.0统计软件分析PTEN/MMAC1基因表达与PCNA的关系。结果52例人脑星形细胞瘤中,PTEN/MMAC1蛋白表达缺失率约40.4%(21/52)。PTEN/MMAC1表达与肿瘤病理分级有显著关系,其中Ⅰ-Ⅱ级阳性率约80.0%,Ⅲ级约55.0%、Ⅳ级为33.3%,各级别组PTEN/MMAC1表达的差异有显著性(P<0.01);PTEN/MMAC1表达程度与星形细胞瘤的增殖呈显著负相关(r=-0.846,P<0.01)。结论PTEN/MMAC1表达与星形细胞瘤的恶性程度有关系,恶性程度越高,病人预后越差,该蛋白水平越低,肿瘤细胞的恶性增殖越明显。     

P53蛋白在脑胶质细胞瘤中的表达

用SP免疫组化方法检测79例脑胶质细胞瘤中P53蛋白的表达,总阳性率为21.52%.其中星形细胞瘤及室管膜瘤阳性率分别为26%及25%,且Ⅲ、Ⅳ级肿瘤阳性率及表达量均显著高于Ⅰ、Ⅱ级肿瘤.表明P53蛋白的表达与这两型肿瘤的恶性程度密切相关.但临床上恶性程度很高的髓母细胞瘤反而未见表达.     

90K/Mac-2 BP在人脑星形细胞瘤中的表达

目的 分析90K/ Mac-2 BP(Mac-2 binding protein)在人脑星形细胞瘤中的表达.方法 RT-PCR和WB(Western blot)检测90K蛋白在人脑星形细胞瘤以及正常脑组织中的表达.结果 RT-PCR发现90K mRNA在正常脑组织中微量表达,相对表达量为0.116±0.017;而在人脑星形细胞瘤中高表达,相对表达量为0.407±0.151,两组相比有显著差异(t=6.065,P＜0.05).低级别组(WHOⅠ-Ⅱ级)与高级别组(WHO Ⅲ-Ⅳ级)相对表达量分别为0.295±0.067和0.516±0.128,两组相比有显著差异(=8.138,P＜0.05).WB发现90K蛋白在正常脑组织中微量表达,相对表达量为0.291±0.064,星形细胞瘤中90K蛋白相对表达量为1.163±0.391,两组相比有显著差异(t=15.68,P＜0.05).低级别组与高级别组90K蛋白相对表达量分别为0.902±0.272和1.415±0.318,两组相比有显著差异(t=6.539,P＜0.05).WB结果表明90K蛋白在星形细胞瘤中的表达情况与RT-PCR结果表明90K mRNA在星形细胞瘤中的表达情况一致.结论 90K在星形细胞瘤中的表达显著升高,高级别星形细胞瘤中的表达较低级别更高,提示90K可能在星形细胞瘤的发生发展过程中发挥了重要作用,90K蛋白可能是星形细胞瘤相关抗原,在今后的免疫治疗中可能作为一种目标抗原.     

脑胶质瘤P^53蛋白表达的初步研究

作者随机选取２２例星形细胞瘤的新鲜标本作冰冻切片，然后采用抗Ｐ＾５３单克隆抗体ｐＡｂ２４０，按ＡＢＣ法作免疫组化检测。结果发现星形细胞瘤Ｉ级Ｐ＾５３蛋白表达阳性率为０，Ⅱ级阳性率为２５％，Ⅲ－Ⅳ级阳性率为５０％，三组间的阳性率有极显著差异。本文还讨论了Ｐ＾５３基因的生物学特性及其与临床的关系。     

PSMB4亚基蛋白在脑胶质瘤中表达的相关研究

目的 探讨26S蛋白酶体的PSMB4亚基(PSMB4)在正常脑组织与胶质瘤组织中表达的差异性及其与脑胶质瘤恶性程度的相关性. 方法 选取厦门大学附属第一医院神经外科自2008年1月至2012年2月间手术切除并经病理证实的人脑胶质瘤液氮冻存标本75例,其中星形细胞瘤Ⅰ级21例,星形细胞瘤Ⅱ级21例,星形细胞瘤Ⅲ级27例,胶质母细胞瘤Ⅳ级6例.另取5例因脑创伤行内减压术患者的正常脑组织液氮冻存标本,免疫组织化学染色检测标本中PSMB4的表达. 结果 PSMB4在正常脑组织中呈阴性表达,而在胶质瘤组织中呈阳性或强阳性表达.统计分析显示胶质瘤组PSMB4蛋白的表达明显高于正常脑组织组,差异有统计学意义(P＜0.05),不同级别胶质瘤PSMB4表达的分布差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 脑胶质瘤组织PSMB4蛋白的表达高于正常脑组织,但与脑胶质瘤的恶性程度无明显相关性.     

WISP-2在人脑星形细胞瘤中的表达研究

目的探讨WISP-2mRNA及蛋白在人脑星形细胞瘤中的表达及意义。方法采用半定量PCR检测WISP-2mRNA在人脑星形细胞瘤组织与正常脑组织中的表达差异;随后利用免疫组化方法验证WISP-2蛋白在星形细胞瘤组织与正常脑组织之间的表达差异。结果半定量PCR检测发现,WISP-2mRNA在正常脑组织中无表达,在星形细胞瘤中相对表达量为0.677±0.445,两者比较有统计学意义(t=4.783,P0.05),在高级别组(Ⅲ-Ⅳ)与低级别组(Ⅰ-Ⅱ)星形细胞瘤中的相对表达量分别为0.924±0.438、0.478±0.344,两者比较有统计学意义(t=3.909,P0.05)。免疫组化检测发现,正常脑组织细胞中无WISP-2蛋白阳性表达(0/10),WISP-2蛋白在星形细胞瘤组织内呈高表达,阳性率为66.0%(31/47),两者比较有统计学意义(χ2=11.92,P0.01),WISP-2蛋白在高级别组(Ⅲ-Ⅳ)与低级别组(Ⅰ-Ⅱ)星形细胞瘤中的表达阳性率分别为85.7%(18/21)、50.0%(13/26),两者比较有统计学意义(χ2=6.60,P0.05).与WISP-2mRNA在星形细胞瘤组织内表达特征相一致,两者具有正相关性(r=0.63,P0.001)。结论WISP-2mRNA和蛋白在人脑星形细胞瘤组织中明显高表达,并与其恶性程度有关,可作为判断脑星形细胞瘤恶性程度的一个辅助指标。     

Mipu1在人脑星形细胞瘤中的表达及临床意义初步探讨

目的研究心肌缺血预适应上调蛋白1(Mipu1)在人脑星形细胞瘤中mRNA及蛋白水平的表达情况,并探讨其临床意义。方法收集24例临床上病理级别分别为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级的脑星形细胞瘤组织标本,应用逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术(Western blot)分别检测Mipu1的mRNA和蛋白质表达水平。结果 RT-PCR结果显示Mipu1的mRNA的表达水平随着星形细胞瘤病理级别的升高而上调;相似,Western blot分析结果显示Mipu1蛋白表达水平也随着星形细胞瘤病理级别的升高而上调,差异有显著性(P<0.05)。结论 Mipu1在脑星形细胞瘤中表达上调,其表达水平与星形细胞瘤病理级别成正相关,可作为判别星形细胞瘤分化程度的指标之一。     

人脑星形细胞肿瘤中FHIT、PCNA蛋白表达关系的研究

目的研究人脑星形细胞肿瘤中FHIT、PCNA蛋白的差异表达，探讨它们与病理分级之间的关系。方法应用免疫组化SP法检测了50例星形细胞肿瘤中不同级别的FHIT、PCNA蛋白的表达水平，以10例非肿瘤脑组织作对照。结果非肿瘤脑组织FHIT、PCNA蛋白阳性表达率分别为100％，0％，星形细胞肿瘤中FHIT、PCNA蛋白阳性表达率分别为40％，86％；尽管在星形细胞肿瘤中FHIT、PCNA蛋白表达总体差异有统计学意义（P〈0．05），但Ⅲ级与Ⅳ级比较差异无统计学意义（P〉0．05）；经统计学分析FHIT、PCNA蛋白呈显著负相关（P〈0．01）。结论FHIT、PCNA蛋白的表达可能与星形细胞肿瘤的恶性程度有关，星形细胞肿瘤中FHIT、PCNA蛋白表达之间的显著负相关，提示FHIT蛋白可能对细胞增殖具有负性调控作用。     

Bcl-2和Bax蛋白在人脑星形细胞瘤中的表达及意义

目的　研究 Ｂｃｌ２ 和 Ｂａｘ 蛋白与人脑星形细胞瘤发生的关系。方法　收集人脑星形细胞瘤标本５８ 例, 行 Ｓ Ｐ 染色。结果　 Ｂｃｌ２ 在星形细胞瘤中阳性表达率为５６９ ％ , 且表达率随肿瘤恶性程度的增加而增高。 Ｂａｘ 的表达率为５５２ ％ , 显著高于对照组。 Ｂｃｌ２ 表达阳性的肿瘤中 Ｂａｘ 蛋白表达率（６６７ ％ ） 显著高于 Ｂｃｌ２ 表达阴性的肿瘤（４００ ％ ） 。结论　 Ｂｃｌ２ 和 Ｂａｘ 蛋白的表达与星形细胞瘤的发生和发展有较密切的关系, 且它们在星形细胞瘤的发生中可能存在相互作用的关系。     

Membrane binding and anticoagulant properties of protein S natural variants

Introduction

Protein S (PS) is a vitamin K-dependent plasma glycoprotein with a key role in the control of coagulation pathway on phospholipid membranes. We compared anticoagulant and membrane binding properties of PS altered by natural mutations (N217S, DelI203D204) affecting the epidermal growth factor like-domain 4 (EGF4) and causing PS deficiency.

Materials and methods

Binding of recombinant, immunopurified PS (rPS) to several conformation-specific antibodies, to C4BP and to phospholipid liposomes was investigated by ELISA. PS binding to cells was analysed by flow cytometry. PS inhibitory activities were studied in plasma and purified systems.

Results and conclusions

Conformational changes produced by mutations were revealed by mapping with calcium-dependent antibodies. The immunopurified recombinant mutants (rPS) showed at 200-800nM concentration reduced inhibition of coagulation (rPS217S, 10.2-17.3%; rPSDelI203D204, 5.8-8.9% of rPSwt) in FXa 1-stage clotting assay with APC. In thrombin generation assays the inhibition of ETP was reduced to 51.6% (rPS217S) and 24.1% (rPSDelI203D204) of rPSwt. A slightly shortened lag time (minutes) was also observed (rPS217S, 2.58; rPSDelI203D204, 2.33; rPSwt, 3.17; PS deficient plasma, 2.17).In flow cytometry analysis both mutants efficiently bound apoptotic cells in adhesion or in suspension. The affinity for phosphatidylserine-rich vesicles (apparent Kd: rPSwt 27.7 ± 1.6 nM, rPS217S 146.0 ± 16.1 nM and rPSDelI203D204 234.1 ± 28.1 nM) was substantially increased by membrane oxidation (10.9 ± 0.6, 38.2 ± 3.5 and 81.4 ± 6.0 nM), which resulted in a virtually normal binding capacity of mutants at physiological PS concentration.These properties help to define the molecular bases of PS deficiency, and provide further elements for PS-mediated bridging of coagulation and inflammation.     

大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2、Fas蛋白的表达及意义

目的　探讨 Ｂｃｌ２ 及 Ｆａｓ 蛋白在大鼠脑缺血再灌注损伤中的表达及与缺血性凋亡的关系。方法　采用免疫组化方法观察 Ｂｃｌ２ 及 Ｆａｓ 蛋白在脑缺血再灌注后随时间延长动态变化并用图像分析测定二者的免疫强度。结果　脑缺血再灌注后 Ｂｃｌ２、 Ｆａｓ 表达。 Ｂｃｌ２ 蛋白表达于再灌注 ３ｈ 达高峰,再灌注 ６ｈ 其表达呈下降趋势,再灌注 ２４ｈ 仅少数细胞阳性表达。 Ｆａｓ 蛋白表达于再灌注 ６ｈ 达高峰,对缺血较敏感的海马大锥体细胞亦有表达,再灌注 ２４ｈ 其表达减少。结论　 Ｆａｓ 蛋白表达介导了脑缺血后细胞凋亡的发生,并可能参与了迟发性神经元死亡。 Ｂｃｌ２ 表达与神经元存活密切相关,在神经元缺血敏感性方面起重要作用,对神经元起保护作用。     

Skp2、P27kip1和PTEN在人脑胶质瘤中的表达及其相互关系的研究

目的探讨S期激酶相关蛋白2（skp2）、细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白P27^kip1和抑癌基因蛋白PTEN表达与人脑胶质瘤发生、发展的关系。方法用免疫组化SP法检测52例人脑胶质瘤和8例正常脑组织标本中Skp2、P27^kip1和PTEN蛋白的表达。结果Skp2在8例正常脑组织中全部表达阴性。在52例胶质瘤标本中随着肿瘤恶性程度增高而表达增强。在低、高级别胶质瘤中的阳性率分别56％和81．5％，三者之间的表达水平差异有显著性意义（P〈0．001）。P27^kip1和PTEN在正常脑组织中表达均为强阳性，随着肿瘤恶性程度增高而表达减弱，P27^kip1和PTEN各自在低、高级别人脑胶质瘤中阳性率分别96％、77．8％和80％、55．6％。三者之间的表达水平差异有显著性意义（P〈0．01）。在52例胶质瘤标本中，Skp2表达与P27^kip1（r=-0．490，P〈0．01）和肿瘤抑制蛋白PTEN（r=-0．489，P〈0．01）表达呈负相关，PTEN表达与P27^kip1表达呈正相关（r=-0．802，P〈0．01）。结论人脑胶质瘤中Skp2蛋白过表达与P27^kip1降解及PTEN蛋白低表达有关，提示Skp2蛋白过表达可能是人脑胶质瘤发生和发展的一个重要原因。     

神经胶质瘤中P63和P73基因的表达变化

目的　探讨P5 3家族新成员P6 3及P73在脑胶质瘤中的表达情况 ,以及在不同病理分级的表达变化。方法　采用免疫组化S -P方法检测 6 6例不同病理分级胶质瘤P6 3及P73蛋白的表达情况 ,与置换一抗的空白对照组比较 ,并同时进行组间对照。结果　P6 3及P73在 6 6例脑胶质瘤病人中明显表达 ,P6 3表达阳性率为 4 2 .4 2 % ,P73表达阳性率为 31.82 %。组间对照 :P6 3组II～IV级与I～II级比较P <0 .0 1;P73组III～IV级与I～II级比较P <0 .0 5 ,II～III级与I～II级比较 χ2 =2 .2 6 8,P>0 .0 5。结论　P6 3及P73作为P5 3家族的新成员可能是候选的抑癌基因     

融合蛋白PTD-XIAP的原核表达、纯化及其血脑屏障穿透功能的初步鉴定

目的:原核表达、纯化PTD-XIAP融合蛋白,鉴定其血脑屏障的通透功能。方法:反转录大鼠脑组织RNA,用PCR法扩增编码XIAP蛋白BIR1-2、BIR3-RING及BIR-2的cDNA片断,重组入pTrans Vector表达质粒并转化大肠埃希菌BL21;以IPTG诱导表达,用NTA-Ni层析柱分离纯化,Western blot鉴定。PTD-BIR3-RING经腹腔注入小鼠体内,用免疫荧光法检测脑组织中的分布。结果:PTDBIR3-RING得到表达,相对分子质量约30×10~3,与6×His单克隆抗体有特异性反应。注入小鼠体内后,脑组织中广泛分布有阳性细胞。结论:重组PTD-BIR3-RING具有良好的血脑屏障穿透功能。     

Phosphorylation events mediated by protein kinase Cα and ε participate in regulation of tau steady-state levels and generation of certain “Alzheimer-like” phospho-epitopes

Hyperactivation of protein kinase C (PKC) in intact neuroblastoma cells by several methods increases site-specific tau phosphorylation as shown by increases in paired helical filament-1 (PHF-1) and ALZ-50 but not AT-8 immunoreactivity. In the present study, the influence of PKC on tau metabolism was further examined by isoform-specific antisense oligonucleotide-mediated PKC downregulation in human SH-SY-5Y neuroblastoma cells and by generation of stably-transfected subclones expressing isoform-specific anti-PKC mRNA sequences. Downregulation of PKC by both of these methods reduced PHF-1 and ALZ-50 immunoreactivity, suggesting that this PKC isoform, perhaps via downstream kinase cascades, regulated tau phosphorylation events that normally generate these epitopes. By contrast, downregulation of either PKC or PKCα reduced immunoreactivity towards the phosphate-independent anti-tau antibodies 5E2 and JM, suggesting that both of these isoforms participated in regulation of tau steady-state levels. Downregulation of PKCβ did not affect any of the above changes. The above roles were apparently unique for PKC and PKCα, since activation of multiple PKC isoforms by phorbol ester treatment andlor other calcium-dependent kinase(s) by ionophore-mediated calcium influx could not compensate for downregulation of PKCα or PKC in maintaining tau steady-state levels or PHF-1/ALZ-50 immunoreactivity, respectively. These findings suggest that hyperactivation of signal transduction pathways, including those regulated by PKC, could evoke changes in neuronal cells reminiscent of those seen in affected neurons in Alzheimer's disease.