全耐铜绿假单胞菌40种耐药相关基因的研究

目的 研究全耐铜绿假单胞菌40种耐药相关基因.方法 采用法国生物梅里埃公司的API鉴定条/PSE5.0药敏条和美国BD公司的Phoenix NMIC/ID-109鉴定/药敏板鉴定和细菌药敏试验,应用PCR法检测 1株全耐铜绿假单胞菌临床分离株29种β-内酰胺酶相关基因、外膜蛋白D_2基因(oprD_2)、6种氨基糖苷类修饰酶基因(AMEs)、消毒剂/磺胺耐药基因(qacE△1-sull)、3种整合子基因(intⅠ 1、2、3)等40种耐药相关基因,分析其分布情况.结果 在该株菌,6种耐药相关基因阳性,两种β-内酰胺酶基因(blaTEM、bla()XA10)、两种氨基糖苷类修饰酶基因[(aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅱ)]、(qacE△1-sull和Ⅰ类整合子基因(int Ⅰ 1)],同时oprD_2缺失;其他27种β-内酰胺酶基因、4种氨基糖糖类修饰酶幕因[(aac(6')-Ⅰ b、aac(3)-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ)]和两种整合子基因(int Ⅰ 2、int Ⅰ 3)均为阴性.结论 该株全耐菌耐药机制为多重机制,主要与7种耐药相关基因(blaTEM、blaOXA10、oprD_2缺失、aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅱ、qacE△1-sull和Ⅰ类整合子)有关.     

泛耐药鲍氏不动杆菌39种耐药相关基因的研究

目的 研究痰泛耐药鲍氏不动杆菌(PRBAB) 39种耐药相关基因.方法 应用法国生物梅里埃公司的API鉴定条/PSE5.0药敏条和美国BD公司的Phoenix NMIC/ID-109鉴定/药敏板进行细菌鉴定和药敏试验,应用PCR法检测1株分离于合格痰标本PRBAB临床分离株29种β-内酰胺酶相关基因(bla)、6种氨基糖苷类修饰酶基因(AMEs)、消毒剂/磺胺耐药基因(qacE△1-sul1)、3种整合子基因(intⅠ 1、2、3)等39种耐药相关基因,分析其分布情况.结果 该菌7种耐药相关基因阳性:bla基因(bla TEM、blaADC),AMEs基因[aac(6')-Ⅰb、aac(3)-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ、qacE△1-sul1和Ⅰ类整合子基因(intⅠ1)];其他32种基因AMEs基因[aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅱ)、ant(2")-Ⅰ)等]均阴性.结论 泛耐药ABA耐药机制为多重机制,主要与7种耐药相关基因(bla TEM、blaADC、aac(6')-Ⅰb、aac(3)-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ、qacE△1-sul1和Ⅰ类整合子)有关.     

泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药基因与可移动遗传元件指标的聚类分析

目的 调查泛耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药相关基因和可移动遗传元件携带状况,并分析两者的相关性.方法 收集医院2008年1-12月住院患者送检痰液标本中分离的泛耐药鲍氏不动杆菌共20株,采用聚合酶链反应的方法分析54种β-内酰胺类、喹诺酮炎、氨基糖苷类获得性耐药相关基因及12种可移动遗传元件遗传标记,并对检测结果作指标聚类分析.结果 20株泛耐药鲍氏不动杆菌共检出获得性β-内酰胺类耐药基因TEM-1、ADC-3和OXA-30,三者阳性率均为100.0％;检出的5种获得性氨基糖苷类耐药基因中,aac(6′)-Ⅰ b、ant(3″)-Ⅰ和aph(3’)-Ⅰ基因阳性率为100.0％,aac(3)-Ⅰ基因阳性率为75.0％,armA基因为5.0％;外排泵基因qacE△1、adeB和可移动遗传元件遗传标记基因int Ⅰ 1、tnp513、tnpU、ISaba1、IS26的阳性率均为100.0％;其余51种基因未检出.结论 从该组泛耐药鲍氏不动杆菌指标聚类分析中可见,β-内酰胺酶基因 TEM-1、ADC-30、OXA-23,氨基糖苷炎修饰酶基因aac(6’)-Ⅰ b、ant(3")-Ⅰ,抗菌制剂外排泵基因qacE△1和abeB与可移动遗传元件intⅠ 1、tnpU、tnp513、IS26、ISaba1基因遗传标记高度相关.     

耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药基因与可移动遗传元件检测及指标聚类分析

目的 调查一组耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药相关基因和可移动遗传元件的关系.方法 收集2010年1月-2010年12月医院ICU患者痰液标本中分离的耐药鲍氏不动杆菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR)方法检测获得性耐药基因和可移动遗传元件遗传标记,插入序列与β-内酰胺酶基因(ISaba1与ADC、ISaba1与OXA-23),再对检测结果作指标聚类分析(UPGMA法).结果 20株耐药鲍氏不动杆菌各种基因检测,其中β-内酰胺酶基因TEM和ADC,氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ,16S rRNA甲基化酶armA基因,抗菌制剂外排泵adeB、qacE△1基因,可移动遗传元件int Ⅰ 1、tnpU、tnp513、IS26、ISaba1及连锁检测ISaba1-ADC基因20株均为阳性;β-内酰胺酶基因OXA-23群,氨基糖苷类修饰酶基因aac(6')-Ⅰ b、aph(3')-Ⅰ及连锁检测ISaba1-OXA-23基因各有10株阳性,阳性率均为50.0％;亚胺培南、美罗培南耐药与敏感菌株各10株,耐药率和敏感率均为50.0％,对其他抗菌药物均耐药;指标聚类分析提示,获得性耐药基因TEM、qacE△1、armA、adeB、aac(3)-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ、ADC与可移动遗传元件IS26、ISaba1、tnpU、tnp513、intⅠ 1高度相关,获得性耐药基因aac(6')-Ⅰb、ant(3")-Ⅰ、OXA-23与之也相关联,插入序列与β-内酰胺酶基因(ISaba1与ADC、ISaba1与OXA-23)连锁检测均呈阳性.结论 该组耐药鲍氏不动杆菌获得性耐药基因与可移动遗传元件一定的关联度,菌株携带的获得性耐药基因可能由可移动遗传元件介导,指标聚类分析显示的ISaba1与ADC-60,ISaba1与OXA-23相关联得到了测序验证.     

22株多药耐药铜绿假单胞菌菌株亲缘性分析及耐药机制研究

目的 研究22株多药耐药铜绿假单胞菌(PAE)菌株的亲缘性.方法 采用聚合酶链反应(PCR)法检测22株多药耐药铜绿假单胞菌的β-内酰胺类耐药基因、氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因、喹诺酮类耐药基因、耐消毒剂基因(qacE△1-sul1)和整合酶基因,并以耐药基因为分子标志作聚类分析.结果 22株菌中aac(6')-Ⅰ b、blaCARB、gyrA、oprD2、ant(2')-Ⅰ和qacE△1-sul1基因的阳性率为100%,aac(3)-Ⅰ、aac(6')-Ⅱ、blaGES、blaGIM、blaOXA-10群、blaPER、blaSPM、blaSHV和blaDHA基因均阴性,blalMP-Ⅰ、blaTEM、blaVEB、aac(3)-Ⅱ、ant(3')-Ⅰ、int Ⅰ 1和blaVIM基因的阳性率分别为95.5%、77.3%、13.6%、4.5%、4.5%、4.5%和4.5%;经样本聚类分析显示存在严重的克隆传播.结论 22株铜绿假单胞菌β-内酰胺类、氨基糖苷类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶密切相关.医院感染铜绿假单胞菌可导致克隆传播医院感染,并引起暴发性流行.     

产ESBLs大肠埃希菌获得性耐药元件指标聚类分析

目的探讨分析产ESBLs大肠埃希菌其水平获得性耐药基因和可移动遗传元件(MGEs)的携带状况,并分析各种水平获得性耐药基因与各种MGEs的相关性,为临床提供参考依据。方法收集医院2013年分离到的20株产ESBLs大肠埃希菌,检测了25种β-内酰胺类药物耐药相关的酶基因、12种氨基糖苷类药物耐药相关的酶基因、1种消毒剂与磺胺耐药重叠基因以及9种可移动遗传元件(MGEs)遗传标记,并用指标聚类分析法探讨水平获得性耐药基因和MGEs遗传标记的相关性。结果 20株产ESBLs大肠埃希菌共检出6种β-内酰胺酶基因、4种氨基糖苷类修饰酶基因、1种消毒剂与磺胺耐药重叠基因以及7种可移动遗传元件遗传标记;指标聚类分析(UPGMA法)提示β-内酰胺酶基因blaTEM、blaCTX-M-9 cluster,氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aadA5,消毒剂与磺胺耐药重叠基因qacE△1-sul1与可移动遗传元件intⅠ1、ISEcp1、IS26、IS903、traA、trbC可能存在关联,其中消毒剂与磺胺耐药重叠基因qacE△1-sul1与Ⅰ类整合子的整合酶基因intⅠ1存在高度关联。结论产ESBLs大肠埃希菌携带获得性耐药基因可导致对相关抗菌药物耐药,且可移动遗传元件的水平转移使细菌耐药性在同种细菌之间甚至不同种细菌菌株之间得以快速传播;指标聚类分析提示β-内酰胺酶基因blaTEM、blaCTX-M-9 cluster,氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aadA5,消毒剂与磺胺耐药重叠基因qacE△1-sul1为可移动遗传元件介导。     

44株阴沟肠杆菌耐药基因分析

目的了解解放军第98医院临床分离的阴沟肠杆菌耐药基因存在状况。方法采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析44株阴沟肠杆菌中15种耐药相关基因。结果44株中,12种基因blaTEM、blaOXA-1群、blaMIR、blaDHA、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、intⅠ1、qacE△1-sul1、dfrA1、dfrA17、qnr的阳性株数分别为24株(54.50%)、3株(6.82%)、35株(79.50%)、5株(11.40%)、11株(25.00%)、31株(70.50%)、15株(34.10%)、38株(86.40%)、36株(81.80%)、1株(2.27%)、20株(45.05%)、3株(6.82%),bla0XA-1群基因PCR产物经序列分析确认为blaOXA-1型广谱β-内酰胺酶基因,其他3种基因blaSHV、blaCTX-M-1群、blaOXA-10群均阴性。结论临床分离的阴沟肠杆菌至少存在12种耐药相关基因;在阴沟肠杆菌中检出blaOXA-1、dfrA1、dfrA17和qnr基因均为国内首次报道。     

鲍氏不动杆菌泛耐药株的耐药机制研究

目的了解临床分离的鲍氏不动杆菌泛耐药株(PDRABA)β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、氯霉素、四环素、利福平和磺胺类等7类抗菌药物耐药基因及多种药物外排泵基因和质粒、转座子、整合子遗传标记存在状况。方法采用K-B纸片扩散法测定22种抗菌药物的敏感性,并用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法检测β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类耐药基因(包括氨基糖苷类修饰酶基因、16S rRNA甲基化酶基因)、gyrA突变喹诺酮耐药基因、利福平耐药相关基因、四环素耐药相关基因、氯霉素耐药相关基因、磺胺耐药相关基因、多种药物外排泵基因、质粒遗传标记、转座子遗传标记和整合子遗传标记等73种耐药基因及遗传标记。结果该PDRABA除对头孢哌酮/舒巴坦敏感以外,其余21种抗菌药物均为耐药,共检出TEM、OXA-23、ADC、aac(3)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ、tetB、mdf A、qacE△1-sul1、intⅠ1、tnpU、tnp513、ISaba1、gyrA突变等15种耐药基因及遗传标记,其余58种基因均阴性。结论携带多种耐药基因和多种药物外排泵基因mdf A是该菌株泛耐药的成因,同时该PDRABA株携带多种可移动遗传元件,极易造成耐药基因的水平转移,对PDRABA感染者应实行严格的隔离措施,同时携带TEM、OXA-23、ADC、aac(3)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅰ、tetB、mdf A、qacE△1-sul1、intⅠ1、tnpU、tnp513、ISaba1基因伴喹诺酮作用靶位gyrA基因突变为国内首次报道。     

全耐药菌10种耐药基因的研究

目的 研究全耐药菌氨基糖苷类修饰酶基因(AMEs)、消毒剂/磺胺耐药基因(qacE△1-sul1)、整合子(int)1、2、3等10种耐药基因的分布.方法 应用法国生物梅里埃公司的API鉴定条/PSE5.0药敏条和美国BD公司的Phoenix NMIC/ID-109鉴定/药敏板鉴定和细菌药敏试验,应用PCR法检测9株全耐药菌临床分离株6种A-MEs、qacE△1-sul、整合子(int)1、2、3等10种耐药基因,并分析其分布.结果 9株全耐药菌共检出8种耐药基因,其分布为aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅰ均1株,aac(3)-Ⅱ2株,ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ均3株,主要阳性耐药基因为aac(6')-Ⅰ b-Cr 4株,qacE△1-sul1、int Ⅰ 15株;int Ⅰ 2、int Ⅰ 3均为阴性;各有1株菌分别为2、3、5、6种基因阳性,2株菌为4种基因阳性;3株菌均为阴性.结论 全耐药菌菌种分布广;耐药机制多为多重机制,主要与A-MEs和Ⅰ类整合子有关,各种耐药基因的分布无特异性,部分菌需进一步研究.     

铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子遗传标记及耐药基因研究

目的 了解分离自重症监护病房（ICU）铜绿假单胞菌（PAE）中,Ⅰ类整合子及抗菌药物耐药相关基因存在状况。方法 对ICU分离33株PAE,采用PCR方法检测Ⅰ类整合子遗传标记（intⅠ1和qacE△1-sul1基因）及22种抗菌药物耐药相关基因。结果33株PAE中,oprD基因均存在缺失突变,其他23种基因intⅠ1、qacE△1-sul1、blaIMP、blaVIM、blaTEM、blaSHV、blaOXA-10群、blaCARB、blaPER、blaVEB、blaGES、blaDHA、blaOXA-1群、blaOXA-2群、blaBEL-1、blaCTX-M-1群、aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ、catB和cml1均阴性。结论 临床分离的PAE中不存在Ⅰ类整合子、oprD基因缺失突变率很高,oprD基因缺失突变是其对亚胺培南耐药的主要原因。