产OXA-23型碳青霉烯水解酶鲍曼不动杆菌基因研究

目的了解临床分离12株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的耐药情况、耐药株来源以及产碳青霉烯酶的类型。方法收集本院对碳青霉烯类药中介或耐药的鲍曼不动杆菌12株，用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)，脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析其同源性，并用聚合酶链反应(PCR)检测分析其耐药基因。结果12株细菌均为多重耐药株，有9株对亚胺培南耐药，6株对美罗培南耐药。对青霉素类、头孢菌素类、复方磺胺甲噁唑均耐药，对氟喹诺酮类和酶抑制剂复合物耐药率最低。12株PFGE图谱分为A、B(B1、B2)2型，以A型为主要流行株(9株)，主要集中在重症监护病房(ICU)。PCR检出12株菌株均携带OXA-23基因，未能检出OXA-24基因。结论本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致，该流行株呈多重耐药，12株菌株均产OXA-23型碳青霉烯酶。     

一株同时产OXA-23型碳青霉烯水解酶和PER-1型超广谱β-内酰胺酶的鲍曼不动杆菌

目的　分析多重耐药鲍曼不动杆菌对 β 内酰胺耐药的原因及其耐药基因的转移方式。 方法　用等电聚焦电泳试验和三维试验分析多重耐药鲍曼不动杆菌临床菌株所产 β 内酰胺酶 ,并进行初步分类 ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增和产物测序方法确认 β 内酰胺酶基因 ,用PCR扩增整合子全可变区和质粒接合实验来判定其耐药基因的转移方式。结果　该临床菌株产超广谱 β 内酰胺酶 ,经分子生物学方法证实有blaPER 1基因 ,同时还有blaOXA 2 3 基因和aacA4基因。结论　发现一株产OXA 2 3型碳青霉烯酶和可转移的PER 1型超广谱 β 内酰胺酶的鲍曼不动杆菌 ,blaPER 1基因位于质粒上     

一株同时产OXA-23型碳青霉烯水解酶和PER-1型超广谱β-内酰胺酶的鲍曼不动杆菌

目的分析多重耐药鲍曼不动杆菌对β-内酰胺耐药的原因及其耐药基因的转移方式.方法用等电聚焦电泳试验和三维试验分析多重耐药鲍曼不动杆菌临床菌株所产β-内酰胺酶,并进行初步分类,用聚合酶链反应(PCR)扩增和产物测序方法确认β-内酰胺酶基因,用PCR扩增整合子全可变区和质粒接合实验来判定其耐药基因的转移方式.结果该临床菌株产超广谱β-内酰胺酶,经分子生物学方法证实有blaPER-1基因,同时还有blaOXA-23基因和aacA4基因.结论发现一株产OXA-23型碳青霉烯酶和可转移的PER-1型超广谱β-内酰胺酶的鲍曼不动杆菌,blaPER-1基因位于质粒上.     

耐碳青霉烯的多重耐药鲍曼不动杆菌分子流行病学研究

目的调查沈阳地区多重耐药鲍曼不动杆菌（Multi—drug Resistant Acinetobacter Baumannii,MDR—Aba）的同源性,了解是否存在该类耐药株的克隆流行。方法收集2007年10月-2008年12月沈阳军区总医院住院患者临床分离出的MDR—Aba40株。用K—B纸片扩散法检测其对临床常用抗生素的敏感性,用脉冲场凝胶电泳（Pulsed—field gel electrophoresis,PFGE）对所选菌株进行分子分型。结果脉冲场凝胶电泳结果显示,40株MDR—Aba茵株分为A,B,C三个型,其中A型包括A1（28株主要分布于呼吸、神经外、急诊、心外等8个病区）,A2（2株,分布于呼吸、急诊病区）,A3（6株,分布于神经外、呼吸等病区）三个亚型;B型、C型各2株,主要分布于急诊病区。结论调查期间该院部分科室有A型MDR—Aba菌株克隆流行,主要为A1型,同时有少量的A2,A3亚型;偶见B型、C型。可见及早采取有力的院内感染防控措施,是防控耐碳青霉烯MDR—Aba暴发流行的当务之急。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌分子流行病学研究

目的探讨北京大学某三甲医院2007年3月-2008年3月显著增多的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌之间的同源性,了解是否有该耐药株暴发流行。方法用脉冲场凝胶电泳对49株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌进行分型,明确其是否为同一菌株的克隆。结果49株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌分为Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ,Ⅶ七型,其中Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ型为主要的流行型别。结论该院耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌存在克隆播散。     

鲍曼不动杆菌基因同源性分析

目的探讨我院2001年8月至2002年3月临床分离到鲍曼不动杆菌是否存在基因同源性。方法用脉冲场凝胶电泳分析对这一时期的鲍曼不动杆菌进行分型，明确其是否为同一菌株的克隆。结果25株鲍曼不动杆菌有7株对碳青霉烯类等多种抗生素耐药，脉冲场凝胶电泳将其分为：A型2株，A1型2株，A2型1株。A1型与A2型之间的相似系数达94．6％，它们与A型的相似系数达84．9％，其余2株各有独特的脉冲场凝胶电泳分型；18株对碳青霉烯类敏感的鲍曼不动杆菌之间无同源性依据。结论5株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌有高度同源性，菌株1767极可能是此次医院感染的源头。     

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌同源性及碳青霉烯酶研究

目的 明确我院临床分离亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌的耐药性、同源性及碳青霉烯酶基因型。方法 收集我院2003年8月-2004年12月分离的95株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌。琼脂稀释法和E试验法测定15种抗菌药物的MIC值；脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株的同源性；PCR扩增及克隆测序分析碳青霉烯酶基因型；接合试验、质粒抽提及Southern杂交完成亚胺培南耐药基因定位。结果 95株鲍曼不动杆菌对氨苄西林-舒巴坦、头孢哌酮-舒巴坦两个含舒巴坦制剂耐药率分别为67．9％、30．2％，对多黏菌素E耐药率最低，为17％，对其他抗菌药物的耐药率均在90％以上。95株鲍曼不动杆菌分离自10个临床科室，均产OXA-23碳青霉烯酶，PFGE分型共分为6型，以A、B型为主。碱裂解法反复抽提均未得到质粒，多次接合试验未成功。Southern杂交证实A、B克隆的oxa-23耐药基因位于细菌染色体约220kb、200kb大小的ApaI酶切片段上。结论 产OXA-23型碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌已成为我院医院感染的重要病原菌，在我院多个科室播散，且以A、B克隆为主。oxa-23耐药基因位于染色体上。     

LAMP法检测耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌OXA-23基因的研究

目的建立一种简便、快速、特异、灵敏的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)OXA-23基因分子检测方法,并用于临床标本检测,以便了解产OXA-23酶CRAB的耐药分布状况。方法运用环介导等温扩增技术(LAMP),利用PrimerExplorer 4.0软件设计一套特异引物检测CRAB的OXA-23基因。通过优化LAMP检测方法的实验条件,应用SYBR Green I作为LAMP反应荧光显色物质,然后通过肉眼目测或电泳检测比较结果。同时,应用LAMP检测该院自2013年12月至2014年3月收集分离的41株多重耐药鲍曼不动杆菌。结果 CRAB的OXA-23基因菌株LAMP反应电泳产生了阶梯状条带,而其他不同菌株和阴性对照没有条带;向扩增产物中加入1μL SYBR GreenⅠ,CRAB的OXA-23基因菌株LAMP扩增产物的颜色由橙色变为绿色,而其他不同菌株和阴性对照仍为橙色;并检测出CRAB的OXA-23基因菌株纯培养物的灵敏度达到了5cfu/μL。对41株我院分离的多重耐药鲍曼不动杆菌进行LAMP检测,检出OXA-23基因32株,检出率为78.04%。结论该院分离的CRAB OXA-23基因的携带率较高,对常用抗菌药物有非常高的耐药率;本研究建立的LAMP技术检测CRAB OXA-23基因是一种简便、快速、特异、灵敏的耐药鲍曼不动杆菌检测方法,适于基层单位推广使用,对临床医生合理选择抗生素具有重要意义。     

多重耐药鲍曼不动杆菌携带碳青霉烯类水解酶基因情况的研究

目的 研究浙江省瑞安市人民医院多重耐药鲍曼不动杆菌中金属-内酰胺酶(IMP、VIM)、 KPC酶、 OXA-23型水解酶基因的携带情况,探讨各种碳青霉烯类水解酶在多重耐药鲍曼不动杆菌中的作用。 方法 采用Whonet 5.4 软件分析多重耐药鲍曼不动杆菌的标本类型和病区分布,以及药敏资料;设计特异性引物,用PCR方法扩增IMP、VIM、KPC和OXA-23特异基因,并用琼脂糖电泳分析其产物。 结果 70株多重耐药鲍曼不动杆菌均未检测到IMP、VIM及KPC基因,其中58株亚胺培南耐药菌株均携带OXA-23基因,阳性率为82.86%。 结论 OXA-23型水解酶是造成瑞安市人民医院鲍曼不动杆菌对临床常用碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药机制研究

目的了解碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的耐药性、同源性及其耐药机制。方法收集碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌20株,用E试验行药敏测定;脉冲场凝胶电泳(PFGE)行同源性分析;通过等电点聚热电泳(IEF)、三维试验及抑制试验、PCR、克隆测序、十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)等方法分析碳青霉烯酶型及外膜蛋白(OMP)。结果20株碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌对多黏菌素B仍保持良好的敏感性(90%),莫西沙星对约40%菌株的MIC在0.125mg/L以下;根据PFGE图谱将其分为5型,A1型是主要流行株(9株),主要集中在我校附属二院ICU和附属一院呼吸科;所有菌株均产等电点6.7的碳青霉烯酶,PCR方法及测序证实为OXA-23型碳青霉烯酶,未发现金属酶,且都含有Ⅰ类整合子,但未发现质粒;OMP分析发现部分克隆有31ku的条带丢失。结论亚胺培南耐药不动杆菌存在医院间克隆传播,值得关注;我校鲍曼不动杆菌主要产生OXA-23型碳青霉烯酶;OMP31ku的条带丢失是耐药机制之一;我校耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌耐药机制可能是产酶和OMP丢失共同作用。     

Multicity outbreak of carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii isolates producing the carbapenemase OXA-40

During 2005 we detected a multicity outbreak of infections or colonization due to high-level imipenem-resistant Acinetobacter baumannii (MIC, 64 microg/ml). One hundred isolates from diverse sources were obtained from seven acute-care hospitals and two extended-care facilities; 97% of the isolates belonged to one clone. Susceptibility testing of the first 42 isolates (January to April 2005) revealed broad resistance profiles. Half of the isolates were susceptible to ceftazidime, with many isolates susceptible only to colistin. The level of AmpC beta-lactamase expression was stronger in isolates resistant to ceftazidime. PCR and subsequent nucleotide sequencing analysis identified bla(OXA-40). The presence of an OXA-40 beta-lactamase in these isolates correlated with the carbapenem resistance. By Southern blot analysis, a bla(OXA-40)-specific probe revealed that the gene was both plasmid and chromosomally located. This is the first time in the United States that such carbapenem resistance in A. baumannii has been attributable to a carbapenemase.     

OXA-51样D类碳青霉烯酶在鲍曼不动杆菌中广泛分布

目的 研究全国7家教学医院临床分离的美罗培南敏感与非敏感鲍曼不动杆菌中碳青霉烯酶类型及其分布特点。方法 收集2005年北京协和医院、北京朝阳医院、解放军第三0四医院和大连、浙江、南京医院临床分离存活的非重复的美罗培南非敏感不动杆菌126株，并分别从北京协和医院、北京医院、浙江、大连、南京5家医院选取美罗培南敏感的19株菌作为对照，采用琼脂稀释法测定这些菌株对美罗培南、亚胺培南等抗菌药物的MIC；用多重PCR、测序等方法分析鲍曼不动杆菌中OXA-23-like、OXA-24-like和OXA-58-like及OXA-51-like 4个亚组的碳青霉烯酶分布特点。结果 收集145株临床非重复的鲍曼不动杆菌，采用多重PCR方法检测出blaOXA-like基因127株（87．6％），美罗培南非敏感126株菌中，blaOXA-23-like基因8株，blaoOXA-23-like与blaOXA-51-like基因同时存在的65株（51．6％）blaOXA-24-like基因1株、blaoOXA-58-like基因3株。以不同医院为单位，依据药敏谱型挑选4种酶型阳性代表株，分别进行全长引物测定，序列分析blaOXA-24-like确定为OXA-72；3株blaOXA-58-like确定为OXA-58；15株blaOXA-23-like确定为OXA-23；13株blaOXA-51-like测序结果12株为OXA-51等位基因OXA-66，1株为OXA-68。结论 研究结果表明OXAM6／OXA-51样碳青霉烯酶以最普遍存在的方式广泛分布于鲍曼不动杆菌中。     

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行病学及碳青霉烯酶类型的研究

目的 了解碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的耐药性、同源性及碳青霉烯酶类型。方法 收集本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌45株，浓度梯度法(Etest)测定最低抑菌浓度(MIC)；采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析同源性；通过等电点聚焦电泳(IEF)、三维试验、2-巯基丙酸抑制试验、聚合酶链反应(PCR)、克隆测序等方法分析碳青霉烯酶类型。结果 45株细菌均为多重耐药株，仅对头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦耐药率较低分别为2．2％和6．5％，敏感率分别为63．0％和43．5％。45株菌株PFGE图谱分为A、B两型，A型是主要流行株(44株)，主要集中在重症监护病房(ICU)。B型1株来自血液科病房。45株菌中有43株产碳青霉烯酶，其中16号株(PFGE为B型)等电点有6．6、7．2两个条带，pI6．6为OXA-23，其余42株(A1～A4亚型)pIs均有6．4、7．0两个条带，均不被克拉维酸、氯唑西林及2-巯基丙酸抑制，PCR方法也未能检出OXA-23、OXA-24系列的基因。结论 本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致，该流行株呈多重耐药，未发现金属酶，仅1株产OXA型碳青霉烯酶，为OXA-23。     

昆明地区烧伤病房鲍曼不动杆菌的耐药性和分子流行病学调查

目的明确云南省烧伤中心病房鲍曼不动杆菌的分子流行病学及耐药特点,为临床预防和治疗鲍曼不动杆菌感染提供临床依据。方法采用细菌耐药监测软件WHONET5.6回顾分析云南省烧伤中心病房检出的鲍曼不动杆菌,应用脉冲场凝胶电泳对泛耐药鲍曼不动杆菌（PDR-Ab）进行同源性分析。结果烧伤中心病房鲍曼不动杆菌标本类型以创面分泌物培养最多,占71.4%;其次是血液标本占16.3%;痰液标本培养感染占10.1%;其他占2.1%。98株鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为82.2%和81.6%,除了米诺环素和头孢哌酮-舒巴坦为25%左右以外,对其他类抗菌药物的耐药率基本在90%以上。31株泛耐药鲍曼不动杆菌PFGE分型共分为A、B、C、D4型,其中A克隆16株,B克隆9株,C克隆4株,D克隆2株。结论昆明地区烧伤病房分离的鲍曼不动杆菌耐药性高,常常为多重耐药菌株或泛耐药菌株,但其对米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦耐药率相对偏低,可作为临床治疗药物选择。本地区烧伤中心有泛耐药鲍曼不动杆菌流行,以A克隆为主。加强医护人员的感染控制观念,利用灵敏、可靠且分辨率强的分型技术进行PDR-Ab感染监控,对防止泛耐药鲍曼不动杆菌在烧伤病房爆发流行至关重要。     

Carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii isolates from Tunisia producing the OXA-58-like carbapenem-hydrolyzing oxacillinase OXA-97

The basis of the beta-lactam resistance of 39 multidrug-resistant Acinetobacter baumannii isolates recovered from hospitalized patients was studied. These isolates were collected from 2001 to 2005 at the Sahloul Hospital in Sousse, Tunisia. They belonged to two distinct clones. One clone that grouped 19 isolates produced a carbapenem-hydrolyzing oxacillinase, OXA-97, that differed from OXA-58 by a single amino acid substitution and conferred the same beta-lactam resistance profile as OXA-58. The bla(OXA-97) gene was located on plasmids that varied in size in 18 isolates and was chromosomally located in a single isolate. Cloning and sequencing identified genetic structures surrounding the bla(OXA-97) gene similar to those reported to be adjacent to the bla(OXA-58) gene. In addition, the novel ISAba8 element (which is of the IS21 family) was identified. This is the first report of the nosocomial spread of carbapenemase producers in A. baumannii isolates in Africa.     

儿童鲍曼不动杆菌产IMP-4及OXA-23型碳青霉烯酶分子流行病学

目的 研究武汉地区儿童分离CRAB中获得性碳青霉烯酶分子流行病学特征.方法 收集2008年12月至2009年5月期间武汉市儿童医院急救科、新生儿内科、心胸外科、骨外科、呼吸内科及肾内科住院患儿分离的非重复CRAB 40株,使用生物梅里埃公司生产的GNS-142检测菌株的MIC值,PFGE分析耐药菌株的同源性.采用PCR扩增KPC、IMP、GIM、SPM、SIM、OXA-23、VIM 7种获得性碳青霉烯酶基因及整合酶基因,测序确定基因型,质粒接合转移试验分析细菌耐药性的转移方式,Southern blot试验定位耐药基因.结果 40株CRAB对庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星、复方磺胺甲(口恶)唑的敏感率分别为20%、5%、93%、93%、95%及23%;PFGE分型共检出11种克隆株,其中A型29株,B型2株,C～K型各1株.11株同时产IMP-4型MBL及OXA-23酶,26株只产OXA-23酶;未检出GIM、SPM、SIM、KPC和VIM型碳青霉烯酶基因.36株鲍曼不动杆菌携带Ⅰ类整合子(Int1).Southern blot表明Int1、IMP-4及OXA-23型定位于细菌染色体上.未见质粒接合转移试验阳性菌株.结论 A型克隆耐药株为本地区最常见CRAB菌株,OXA-23酶及IMP-4型是CRAB中主要的获得性碳青霉烯酶类型,其中以OXA-23型最为常见,Int1介导的OXA-23及IMP-4基因的水平传播及A型耐药克隆株的传播是本地区鲍曼不动杆菌中碳青霉烯类耐药性传播的主要方式.