三唑类抗真菌药联合多柔比星逆转白血病细胞株耐药性研究

目的探讨三唑类抗真菌药伊曲康唑、氟康唑联合多柔比星逆转白血病细胞株耐药的作用。方法伊曲康唑、氟康唑或PSC833（阳性对照）分别联合多柔比星与人类慢性粒细胞白血病红白血病耐多柔比星细胞株K562／ADR共同培养,采用CCK-8法检测K562／ADR细胞增殖,流式细胞术检测K562／ADR细胞内多柔比星平均荧光强度,蛋白印迹法检测K562／ADR细胞7H2AX的表达。结果1μg／ml伊曲康唑及0．5μg／mlPSC833可将K562／ADR对多柔比星的J岛从38．30μg／ml降至8．59μg／ml和24．64μg／ml,且呈剂量依赖性。1Ng／ml伊曲康唑或0．5μg／mlPSC833联合多柔比星作用K562／ADR细胞3h和6h后,细胞内多柔比星平均荧光强度相对单加多柔比星组增加了1．54倍（3h）、1．50倍（6h）或5．97倍（3h）、5．83倍（6h）。伊曲康唑或PSC833联合多柔比星可显著增加K562／ADR细胞7H2AX的表达。结论伊曲康唑通过提高细胞内多柔比星浓度及协同增强细胞DNA的损伤,恢复K562／ADR对多柔比星的敏感性,而氟康唑则无作用。     

紫杉醇对K562细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的　探讨紫杉醇体外抑制 K5 6 2细胞株及诱导凋亡的作用。方法　体外培养 K 5 6 2白血病细胞株 ,以不同浓度紫杉醇处理 12～ 72小时后 ,用 MTT法测定细胞生长抑制作用 ,用细胞形态学观察和 DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡 ,用流式细胞仪 (FCM)检测细胞 DNA含量及细胞周期。结果　 K5 6 2细胞经紫杉醇处理后细胞生长受抑 ,对 K5 6 2细胞的半数抑制浓度 IC50 为 0 .84μg/ ml。经药物作用后可见细胞染色质浓聚和凋亡小体形成 ,FCM显示细胞凋亡率明显增加 ,但电泳检测未见 DNA裂解。结论　紫杉醇能抑制 K5 6 2细胞的生长 ,诱导细胞凋亡可能为其抗肿瘤作用机制之一     

FasL抗体对人白血病细胞株(K562/ADM)多柔比星耐药性的逆转作用

目的：探讨FasL抗体对K562／ADM细胞的多柔比星(阿霉素)耐药性的逆转作用及其可能机制。方法：以K562／ADM细胞为研究对象，设立了对照组、VER处理组、anti-FasL处理组及anti-FasL VER处理组，进行MTT、FCM、TUNEL、S-P免疫组化及RT-PCR检测。结果：anti-FasL或VER处理能增强K562／ADM细胞对ADM的敏感性，其ID50分为200ng／ml、6μg／ml；从细胞周期分析曲线可见上述各组细胞凋亡DNA含量呈逐渐上升趋势(分为7．42％、32．10％、49．29％、56．26％)，TUNEL染色结果亦然(原位凋亡率分为4．5％、36％、45％、58％)；anti-FasL可影响各组细胞FasL及bcl-2的表达，但不影响Pgp的表达。结论：采用anti-FasL．封闭肿瘤细胞FasL表达可逆转K562／ADM细胞的耐药性，并与VER处理有协同作用，它可能为一种新型的肿瘤耐药逆转疗法。     

三氧化二砷对白血病HL-60细胞株分化影响的研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)治疗白血病的作用机制.方法:1)用流式细胞仅检测细胞膜上的CD11b的表达和细胞凋亡率.2)用RT-PCR方法检测c-myc基因在mRNA水平上的表达.结果:2.5 μmol/LAs2O3处理HL-60细胞90 h后,细胞分化的标志性细胞膜抗原CD11b表达明显升高,由(14.5±2.1)%升高到(35.4±5.7)%,P<0.05;NBT阳性细胞由(10.0±2.1)%升高到(31.25±3.4)%(P<0.05),同时c-myc基因在mRNA水平也明显降低.结论:As2O3通过降低c-myc基因表达及上调细胞分化抗原CD11b表达,从而促进HL-60细胞分化.     

Apollon siRNA对慢性髓系白血病K562细胞株阿糖胞苷敏感性影响研究

目的：研究小干扰RNA（RNAi）技术沉默凋亡抑制蛋白Apollon基因联合小剂量阿糖胞苷（Ara-C）对K562细胞化疗敏感性的影响。方法：构建pGPHI-GFP-Neo-Apollon真核表达载体,经阳离子脂质体转染K562细胞,实验分为RNAi组、阴性质粒组、细胞对照组、Ara-C组和RNAi＋Ara-C组5组,采用RT-PCR和细胞免疫荧光检测干扰效果。RNAi与小剂量Ara-C单独和联合应用后,采用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：RT-PCR结果显示,实验组Apollon mRNA的相对表达量为（27.622±0.057）%,与细胞对照组（89.770±0.028）%和阴性对照组（84.868±0.057）%相比明显降低,差异有统计学意义,F=57.573,P=0.012。细胞免疫荧光检测结果显示,实验组细胞Apollon蛋白的荧光强度为（15.96±1.71）%,明显低于细胞对照组（35.36±2.90）%和阴性对照组（34.97±2.65）%,差异有统计学意义,F=71.063,P=0.013。重组载体和（或）10μg/mL Ara-C作用于K562细胞24、48和72h后,RNAi组和RNAi＋Ara-C组K562细胞增殖抑制率（IR%）明显增高,随着作用时间的延长,抑制效果越明显。流式细胞术结果显示,RNAi＋Ara-C组细胞凋亡率为（30.816±1.06）%,明显高于细胞对照组（4.803±0.112）%、阴性对照组（4.566±0.205）%和Ara-C组（11.61±0.604）%及RNAi组（20.226±0.986）%,差异有统计学意义,F=138.57,P〈0.001。结论：靶向Apollon RNAi联合小剂量Ara-C能有效抑制K562细胞增殖并促进其凋亡,显著减少Ara-C使用剂量,明显提高了K562细胞对Ara-C的敏感性。     

重组人核心蛋白聚糖基因增强多柔比星对白血病 K562细胞抑制作用的实验研究

 目的　探讨重组人核心蛋白聚糖（rhDCN）基因增强多柔比星（ADM）对人类白血病 K562细胞的作用。方法　取对数生长期的K562细胞分为0.9 % NaCl溶液组、pcDNA3.1(+)-DCN／K562组、ADM／K562组、pcDNA3.1(+)-DCN加ADM／K562组。瑞特染色观察细胞形态改变,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡,RT-PCR分析各组TGF-β1 mRNA含量。结果　pcDNA3.1(+)-DCN加ADM／K562组细胞比单独DCN和ADM组细胞,染色呈现更显著的凋亡形态学改变;MTT法结果显示联合组细胞增殖抑制率为（61±1.32）%,明显高于单独干预组[DCN组（20±1.90）%;ADM组（47±1.04）%]（P＜0.05）;FCM检测结果显示联合组细胞凋亡指数为（61.30±0.9）%,较单独干预组[DCN组（28.25±1.3）%及ADM组（31.85±1.5）%]明显增加（P＜0.05）;RT-PCR结果显示,联合组细胞TGF-β1 mRNA的转录减少。结论　rhDCN可以明显增强ADM对K562细胞的杀伤作用,提高肿瘤细胞的凋亡率。rhDCN可能通过下调TGF-β1 mRNA的转录发挥其作用,其具体机制有待进一步研究。     

槲皮素逆转白血病细胞株HL-60/ADM多药耐药的研究

目的探讨槲皮素(Que)逆转白血病细胞多药耐药在膜转运蛋白方面的机制。方法通过四唑蓝体外药敏法,检测Que对柔红霉素(DNR)的增敏作用,并以不同浓度作用于HL-60／ADM耐药株及相应敏感株HL-60;运用逆转录多聚酶链式反应和流式细胞术,检测HL-60／ADM和HL-60细胞株多药耐药相关基因1(MRP1)及其膜蛋白产物MRP1蛋白的表达情况;借助激光共聚焦显微镜,观察DNR在亚细胞水平的分布变化。结果20～40μmol／L终浓度的Que在体外能明显提高DNR对HL-60／ADM耐药株的敏感性,并能下凋MRP1基因及其膜蛋白产物MRP1的表达,使DNR回归于细胞核内,从而逆转多药耐药,而且对细胞本身无明显毒性作用。结论Que有可能成为蒽环类药物治疗白血病的有效且低毒的化疗增敏剂。     

重组人核心蛋白聚糖基因增强多柔比星对白血病K562细胞抑制作用的实验研究

 目的　探讨慢性淋巴细胞白血病（CLL）的分子遗传学异常情况及其临床意义。方法　对17例初诊CLL患者进行常规细胞遗传学（CC）检测及应用着丝粒探针CSP12（12p11.1～12q11.1）和序列特异性探针D13s25（13q14.3）、ATM（11q22.3）、RB1（13q14）、p53（17p13.1）进行间期荧光原位杂交（I-FISH）检测。结果　CC检测18.75 %患者有核型异常,1例未见核分裂象;I-FISH检测70.6 %患者有分子遗传学异常,13q-异常47.1 %（RB1缺失23.5 %、D13S25缺失29.4 %）、+12异常29.4 %、p53基因缺失11.8 %、ATM缺失5.6 %、复杂基因组异常11.8 %。分子遗传学异常与性别、年龄、乳酸脱氢酶（LDH）、β2 -微球蛋白（β2-MG）及 Binet 分期无明显相关性。结论　I-FISH是检测CLL患者基因组异常的有效手段,与CC方法相比可明显提高CLL分子遗传学异常的检出率,分子遗传学异常与临床分期及其他临床指标无明显相关性,对患者预后的意义有待进一步研究。     

α干扰素联合阿糖胞苷对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的:研究α干扰素联合阿糖胞苷对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法:以浓度2 000 U/ml的α干扰素与不同浓度的阿糖胞苷作用于体外培养的K562细胞,观察细胞生长状态的变化,检测细胞生长抑制率及细胞凋亡率的变化,并对细胞端粒酶活性及P53蛋白的表达水平进行检测。结果:α干扰素与阿糖胞苷联合应用可显著抑制K562细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。并降低K562细胞端粒酶活性,升高P53蛋白的表达水平,其作用呈现出明显的量效与时效关系。结论:α干扰素与阿糖胞苷联合应用对白血病K562细胞具有明显的生长抑制及诱导凋亡作用,降低细胞端粒酶活性及升高P53蛋白的表达水平是其重要作用机制之一。     

槲皮素恢复柔红霉素在白血病耐药细胞K562/ADM和HL-60/ADM中的分布

背景与目的：槲皮素是一种天然黄酮类中药成分,儿有多种生理活性,最近发现其有逆转白血病细胞耐药的作用,本研究旨在探讨槲皮素恢复柔红霉素在白血病耐药细胞的分布从而达到逆转耐药的机制：方法：通过MTT体外药敏法检测槲皮素对柔红霉素的增敏作用并确定逆转的浓度范围,作用于K562／ADM、HL-60／ADM细胞及相应敏感株K562和HL-60,借助激光共聚焦显微镜观察槲皮素怍用前后柔红霉素在亚细胞水平的分布变化：结果：20～40μmol／L槲皮素在体外能日月显提高柔红霉素对K562／ADM和HL-60／ADM的敏感性,恢复柔红霉素在亚细胞水平的分布,使其回归细胞核内,从而逆转多药耐药。结论：黄酬类中药槲皮素能够成为蒽环类药物治疗白血病中有效的化疗增敏剂。     

Biochemical effects of piceatannol in human HL-60 promyelocytic leukemia cells--synergism with Ara-C

Piceatannol (3,3',4,5'-tetrahydroxy-trans-stilbene; PCA) is a naturally occurring metabolite of resveratrol (3,4',5-trihydroxy-trans-stilbene; RV). In this study, we identified additional biochemical targets of PCA in human HL-60 promyelocytic leukemia cells. Incubation with PCA led to a significant proportion of apoptotic cells and caused an arrest in the G2-M phase of the cell cycle. PCA depleted intracellular dCTP and dGTP pools, and inhibited the incorporation of 14C-labeled cytidine into DNA. PCA significantly abolished all NTP pools, and sequential treatment with PCA and Ara-C yielded synergistic growth inhibitory effects because of remarkably increased Ara-CTP formation after PCA preincubation. Due to these promising results, PCA may support conventional chemotherapy of human malignancies and therefore, deserves further preclinical and in vivo testing.     

阿斯匹林抑制白血病细胞增殖的实验研究

目的以人急性髓细胞性白血病细胞系HL-60为模型,研究非甾体类抗炎药阿斯匹林(ASA)对HL-60细胞生长的影响.方法利用MTT法测定ASA对HL-60细胞的抑制率,并分析剂量反应曲线;通过流式细胞仪(FCM)了解其对细胞周期的影响.结果(1)ASA在浓度为(2.5～10.0)mmol/L作用72h后,HL-60细胞增殖抑制随浓度增加而增加,其IC 50值为8.97mmol/L;并且2.5mmol/L ASA与100μg/ml Ara-c有协同作用;(2)ASA处理后HL-60细胞G0/G1期细胞减少,S期细胞增多.结论结果提示一定浓度ASA在体外能抑制HL-60细胞增殖,抑制率与ASA剂量相关;ASA抑制HL-60细胞增殖可能与其干扰细胞周期有关.     

柚皮素对人类白血病K562细胞生长的作用及其机制探讨

 目的 研究柚皮素（naringenin）对人类慢性髓系白血病K562细胞株的作用及其机制。方法 体外培养K562细胞,MTT法检测柚皮素在不同浓度、不同时间点对K562细胞生长的影响;用免疫组织化学的方法检测细胞增殖核抗原（PCNA）的表达,并计算PCNA标记指数（LI）;显微镜和透射电镜下观察细胞形态变化;流式细胞仪分析细胞周期分布和细胞凋亡率;用RT-PCR和Western blot的方法检测K562细胞中p53、p21WAF1 mRNA和蛋白表达的变化。结果 柚皮素对K562细胞增生有明显抑制作用,作用24、48和72 h后的半数抑制浓度（IC50）分别为455 μmol／L、225 μmol／L和175 μmol／L;PCNA在柚皮素实验组的表达显著低于对照组;普通光镜以及电镜观察均见实验组细胞显著的增生抑制和典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪分析证实柚皮素能使K562细胞聚积在G0／G1期、S期细胞减少,凋亡率增加;RT-PCR和Western-blot检测表明,实验组细胞表达p21 mRNA和蛋白质呈浓度和时间依赖性升高,而p53变化不明显。结论 柚皮素对K562细胞具有明显的增生抑制作用,细胞周期阻滞和诱导凋亡可能是其重要机制,而非p53依赖性的p21上调可能是其发挥作用的重要途径。     

LY294002与化疗药物联用对白血病K562细胞多药耐药的逆转作用

背景与目的: 传统逆转白血病多药耐药的药物由于不良反应大而限制了其在临床中的应用,进一步研究白血病多药耐药产生机制和有效逆转靶点成为攻克白血病多药耐药的关键.为此,本研究探讨LY294002[磷脂酰肌醇-3-激酶(P13-K/Akt)通路抑制剂]对人类白血病K562细胞多药耐药的逆转作用.方法: 锥虫蓝拒染法测定细胞生长增殖.Western印迹榆测K562/S和K562/D细胞中P-gp及p-Akt的表达.流式细胞术检测细胞内药物积聚.结果: K562/D细胞对柔红霉素(DNR)、多柔比星(ADR)、长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP16)交叉耐药,相对其亲本细胞的耐药倍数分别为65、52、134和50.DNR诱导了K562/D细胞的P-gp、p-Akt过度表达.LY294002使K562/D细胞内药物积聚增加,部分逆转了K562/D细胞对DNR、ADR、VCR、VP16的耐药性(相对耐药倍数降至23、21、63和29),而对敏感细胞K562/S的耐药性无影响. 结论:LY294002部分逆转K562/D细胞的多药耐药,可能于DNR诱导K562/D细胞的P-gp、p-Akt过度表达而LY294002抑SUP13-K/Akt信号转导通路有关.     

DIFFERENTIAL EXPRESSION OF GENES INVOLVED IN METABOLISM BETWEEN TUMORIGENITIC HUMAN LEUKEMIA CELL LINES K562 AND K562－n

Objective: To study the molecular mechanism of different tumorigenicity in nude mice of human leukemia cell lines K562-n and K562. Methods: To analyze the genes differently expressed between K562 and K562-n cells by using cDNA microarray technique. Results: Among the 12800 genes detected, some genes involved in material metabolism and material transport were differently expressed between K562-n and K562 cells. These genes include homo sapiens placenta-specific ATP-binding cassette transporter gene, dihydrodiol dehydrogenase gene,hepatic dihydrodiol dehydrogenase gene, NAD-dependent methylene tetrahydrofolate dehydrogenase cyclohydrolase,lysophosphatidic acid acyltransferase, alpha gene,argininosuccinate lyase gene, mitochondrial isocitrtated ehydrogenase, adhesion protein SQM1 gene,dimethylarginine dimethylamino-hydrolase gene, M1 subunit of ribonucleotide reductase and farnesyl pyrophosphate synthetase gene. Conclusion: The high tumorigenicity of K562-n cells is related to the different expression of some genes concerned with cell metabolism and material transpoert.     

INDEPENDENT AND SYNERGIC INHIBITION OF DIPYRIDAMOLE AND RADIATION ON K562-AND K562/ADM CELL LINES IN VITRO

It is first demonstrated that dipyridamole (DP) and radiation were capable of significantly inhibiting, independently and synerglcally, clonogenlc growth in the two kinds of K562 cell lines, adriamycin (ADM) -sensitive and ADM- resistant. DP or radiation alone Increased clonogenlc Inhibition rate (CIR) in the two kinds of cell lines in a dose- dependent fashion. DP potentiated radiosensitivity and radiation increased inhibition of DP in the two kinds of cell lines. K562/ ADM cell lines were higher sensitive to DP. radiation and combination of them than K562 cell lines (P<0. 01). There was stronger synergic inhibition of clonogenlc growth in the two kinds of cell lines when pretreated with DP than when posttreated with DP (P<0. 01).     

三氧化二砷联合丁硫氨酸亚砜胺诱导人白血病K562/ADM细胞凋亡

目的 观察三氧化二砷(As2O3)联合丁硫氨酸亚砜胺(BSO)对肿瘤多药耐药细胞K562/ADM的诱导凋亡效应,探讨谷胱甘肽(GSH)的含量变化对As2O3作用效果的影响.方法 以0.5、2.0、5.0 μmol/L As2O3单独及联合100 μmol/L BSO作用于K562/ADM细胞,应用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖活性,Annexin V/PI标记法观察细胞的凋亡效应,分光光度法检测细胞内GSH含量的变化.结果 K562/ADM细胞内GSH含量为(81.13±3.91)mg/g prot,明显高于K562细胞(P＜0.01).BSO单独或联合As2O3作用下,随作用时间的延长,K562/ADM细胞内GSH含量逐渐降低.临床剂量(0.5、2.0 μmol/L)As2O3联合BSO作用下,抑制作用逐步增强,72 h两组的细胞增殖抑制率分别为(90.63±5.95)%和(86.12±6.11)%,均分别高于单用相应剂量As2O3组(P＜0.01);凋亡效应逐步增强,72 h两组的细胞凋亡率分别为(82.15±9.28)%和(92.72±9.41)%,均分别高于单用相应剂量As2O3组(P＜0.01).结论 GSH的含量变化与As2O3的作用效果密切相关,As2O3联合BSO可有效诱导K562/ADM细胞发生凋亡.     

High production of catalase in hydrogen peroxide-resistant human leukemia HL-60 cell lines.

The catalase activities of HP50-2 and HP100-1 cells, which are H2O2-resistant cell lines derived from human leukemia HL-60 cells, were 3 and 18 times higher, respectively, than that of HL-60 cells. These catalase activities of the resistant cells were precipitated with anti-catalase serum. The glutathione peroxidase activity of HP50-2 cells was about twice that of HL-60 or HP100-1 cells. The superoxide dismutase activities of HP50-2 and HP100-1 cells were, respectively, about 4 and 2 times that of HL-60 cells. In addition, both the resistant cell lines were completely devoid of myeloperoxidase activity. Pulse-labeling experiments showed that the syntheses of catalase in HP50-2 and HP100-1 cells were, respectively, 2 and 4 times that in HL-60 cells, and that, unlike the parent cells, neither line synthesized myeloperoxidase. Thus the alteration of catalase, glutathione peroxidase, and superoxide dismutase activity could be linked to the resistance of H2O2 of human leukemia cells.