三氧化二砷对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji凋亡的诱导作用及C-myc表达的影响

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对Burkitt淋巴瘤细胞袜Raji凋亡的诱导作用及C-myc表这的影响.方法 通过噻唑蓝比色法检测观察As2 O3对Raji细胞增殖的影响,流式细胞仪观察As2O3对Raji细胞凋亡的诱导作用,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测As2O3对C-myc mRNA表达的影响.结果 As2O3对Raji细胞生长有抑制作用,呈剂量和时间依赖关系(P＜0.01);As2O3对Raji细胞有诱导凋亡作用,呈剂量和时间依赖关系(P＜0.01);随着As2O3浓度升高,C-myc的表达水平明显下降(P＜0.01).结论 As2O3对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能与C-myc表达水平明显下降有关.     

三氧化二砷对K562细胞血管内皮生长因子及受体和MMP-2、9的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对K562细胞的血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR）表达水平和基质金属蛋白酶2、9（MMP-2、9）活性的影响。方法用MTT法测定As2O3对K562细胞的毒性，酶联免疫吸附试验测定细胞上清中VEGF含量，流式细胞术检测细胞的VEGFR表达率，明胶酶谱法半定量测定细胞上清中MMP-2、9的活性。结果①Mar法检测K562细胞的，IC50为（2．12±0．11）μmol／L，0．4～6．4μmol／LAs2O3可显著抑制K562细胞的增殖（P＜0．05）。②0．05μmol／L As2O3对VEGF无明显影响（P＞0．05）；0．4和3．2μmol／LAs2O3可明显下调VEGF表达（P＜0．05）；As2O3对VEGFR的表达无明显影响（P＞0．05）。③MMP-2、9经0．05μmol／L As2O3处理72h、0．4和3．2μmol／L As2O3处理24、48和72h均可显著抑制K562细胞MMP-2、9的活性（P＜0．05），这种抑制作用随As2O3浓度增加和作用时间延长而逐渐增强。结论As2O3可下调K562细胞VEGF的表达和抑制MMP-2、9的活性。     

Raji细胞Id4基因甲基化检测及As2O3对其甲基化影响的研究

目的 研究淋巴瘤细胞DNA结合抑制因子4(inhibitor of DNA binding,Id4)基因甲基化及As2O3去甲基化效应.方法 体外培养人Burkitt's淋巴瘤细胞系Raji细胞,设对照组和用不同浓度As2O3处理Raji细胞不同时间的实验组.用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测各组Raji细胞Id4基因甲基化程度;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同浓度As2O3处理前后Raji细胞Id4mRNA的表达情况.应用MTT比色法检测细胞增殖情况;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡并分析As2O3对细胞周期的影响.结果 ①Raji细胞Id4基因呈完全甲基化状态,Raji细胞Id4基因高甲基化状态可被As2O3逆转,且与As2O3的剂量有关.②不同浓度As2O3处理Raji细胞48 h后,随着药物浓度增加,Raji细胞中Id4基因mRNA的相对表达量逐渐增加,呈一定剂量依赖关系.③不同浓度As2O3处理Raji细胞24、48、72 h后细胞增殖抑制率为12.15%～92.17%,且作用呈时间剂量依赖性(P＜0.05);④FCM检测细胞凋亡结果显示,As2O3处理Raji细胞48 h后均出现明显的凋亡峰,对照组未见凋亡峰或仅有低平的凋亡峰;⑤FCM细胞周期分析结果显示,不同浓度As2O3处理Raji细胞48 h后,细胞阻滞于G0/G1期,且随着As2O3浓度的增加,阻滞作用增强,呈一定剂量依赖关系.结论 ①人Burkitt's淋巴瘤细胞系Raji细胞中Id4基因呈完全甲基化状态.②As2O3可以逆转Raji细胞Id4基因的高甲基化状态,使Id4 mRNA重新表达.③Raji细胞Id4基因呈高甲基化状态是其恶性增殖的原因之一.     

As2O3影响慢性粒细胞白血病细胞VEGF,MMP-2 mRNA表达的实验研究

目的研究As2O3对慢性粒细胞白血病（CML）骨髓单个核细胞，血管内皮生长因子（VEGF），基质金属蛋白酶2（MMP-2）mRNA及培养上清VEGF蛋白表达的影响作用，从而对白血病的发病机制及As2O3的作用机制进行探讨。方法用RT—PCR技术检测20例CML患者与5例正常人骨髓细胞MMP-2，VEGFmRNA的表达。用ELISA方法检测20例CML患者骨髓单个核细胞经As2O3作用前、后培养上清液VEGF水平的变化，用RT—PCR法检测VEGF，MMP-2mRNA表达阳性患者骨髓单个核细胞mRNA含量的变化。结果CML患者VEGF，MMP-2mRNA水平明显高于正常对照者，5×10^-6mol／L As2O3可明显下调CML患者骨髓单个核细胞培养上清VEGF蛋白的表达（P〈0．05）；As2O3对骨髓单个核细胞VEGF，MMP-2mRNA的表达有下调作用，并为剂量依赖性。结论CML中VEGF与MMP-2mRNA表达异常增高。As2O3下调白血病细胞VEGF，MMP-2的表达可能是其抗白血病作用的机制之一。     

Notch信号和血管内皮生长因子基因对大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化后内皮细胞功能的影响

目的 探讨Notch信号和血管内皮生长因子(VEGF165)基因对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)诱导分化后内皮细胞功能的影响.方法 分离、培养大鼠MSCs,用含VEGF165和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的细胞培养液培养大鼠MSCs 2周诱导其向内皮细胞分化;用脂质体将携带有VEGF165基因的质粒转染诱导内皮细胞并对转染效果进行鉴定,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染前后细胞上Notch信号受体Notch 1和配体Jagged 1的表达变化;用γ-内分泌酶抑制剂L-685458阻断细胞Notch信号通路的转导,划痕实验检测细胞迁移能力;将细胞接种在半固体培养基上,观察其形成毛细血管样结构的能力.结果 转染VEGF165基因的内皮细胞上表达有VEGF165 mRNA,说明实验成功地将VEGF165基因导入诱导后内皮细胞中.转染VEGF165基因后,细胞上Notch信号配体Jagged1 mRNA表达增强(1.08±0.01比1.01±0.02,P＜0.01),Notch1 mRNA表达无明显变化(0.60±0.02比0.59±0.01,P＞0.05);细胞的迁移能力增强(划痕空白处细胞个数:46.45±4.46比41.61±1.42,P＜0.05),形成毛细血管样结构能力无明显变化(细胞分级:3.00±0.89比2.00±0.89,P＞0.05).内皮细胞转染VEGF165基因后,以γ-内分泌酶抑制剂L-685458阻断细胞Notch信号通路的转导,则细胞迁移能力(划痕空白处细胞个数:51.72±3.47比46.45±4.46)和形成毛细血管样结构能力(细胞分级:4.17±0.75比3.00±0.89)均进一步增强(均P＜0.05).结论 转染VEGF165基因可增强大鼠MSCs诱导分化内皮细胞的功能,在此基础上阻断Notch信号通路转导可进一步增强细胞功能.     

高压氧和三氧化二砷对K562细胞增殖抑制及相关机制研究

本研究旨在探讨高压氧联合三氧化二砷(As2O3)对K562细胞增殖、凋亡及低氧诱导因子-1a(HIF-1a)、血管内皮生长因子(VEGF)及caspase-3 mRNA表达的影响。用MTT法检测各组K562细胞在药物作用各时间点(24、48、72 h)的增殖率;AnnexinⅤ/PI荧光标记法检测K562细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR检测K562细胞HIF-1a、VEGF、caspase-3 mRNA的表达。结果表明:与单用As2O3比较,As2O3联合高压氧可使K562细胞的增殖抑制率增加,凋亡作用明显加强,并可明显下调HIF-1a、VEGF的表达,上调caspase-3的表达,两者联用具有协同作用,效果明显优于单用As2O3(P<0.05)。结论:高压氧联合As2O3对K562细胞抑制增殖及加速凋亡的作用优于单独应用As2O3;二者联合后HIF-1a、VEGF mRNA的表达减弱,而Caspase-3 mRNA的表达增强。HIF-1a、VEGF、caspase-3mRNA表达的变化可能是As2O3与高压氧联合产生抗白血病细胞协同作用的分子机制之一。     

地塞米松对三氧化二砷诱导淋巴瘤细胞凋亡与NF-κB活化及相关基因表达的影响

目的　研究三氧化二砷(As2O3 )诱导淋巴瘤细胞凋亡与核因子κB(NF κB)活化以及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP9)表达的关系,并观察地塞米松(Dex)抑制NF κB活化对As2O3诱导淋巴瘤细胞凋亡及VEGF、MMP9表达的影响。方法　采用流式细胞仪AnnexinⅤFITC法检测Raji细胞凋亡;采用免疫组织化学方法半定量分析Raji细胞NF κB、VEGF、MMP9表达的动态变化。结果　As2O3同时具有诱导Raji细胞凋亡[凋亡率为(39. 2±1. 3)% ]和NF κB活化的作用; 1. 0μmol/LDex能显著增加1 . 0μmol/LAs2O3诱导Raji细胞凋亡(增加率为77. 5%,P<0. 05)和抑制As2O3诱导Raji细胞NF κB活化(抑制率为28. 0%,P<0. 05)的作用,VEGF、MMP9变化与NF κB一致。结论　As2O3诱导Raji细胞凋亡的同时活化NF κB,VEGF、MMP9表达亦随之增强;Dex在抑制As2O3诱导Raji细胞NF κB活化的同时增强其诱导细胞凋亡的作用,VEGF、MMP9的表达也相应下降。     

丙戊酸钠联合三氧化二砷对NB4细胞株血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的 探讨丙戊酸钠(VPA)联合三氧化二砷(As2O3)对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)NB4细胞株血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1表达的影响.方法 实验分空白对照组、As2O3组、As2O3+VPA组,采用反转录聚合酶链反应方法检测VEGF、Flt-1 mRNA的表达,应用蛋白印迹法(Western-blot)检测VEGF、Flt-1蛋白的表达.结果 NB4细胞在As2O3作用下VEGF mRNA、VEGF蛋白、Flt-1 mRNA和 Flt-1蛋白表达水平明显增高,分别为VEGF mRNA 0.426±0.026 vs 0.268±0.023,VEGF蛋白0.648±0.027 vs 0.588±0.031,Flt-1 mRNA 0.922±0.032 vs 0.766±0.030,Flt-1蛋白0.520±0.032 vs 0.320±0.036(P<0.05或<0.01).As2O3+VPA组VEGF mRNA、VEGF蛋白、Flt-1 mRNA和 Flt-1蛋白比对照组和As2O3组均明显降低(均P<0.01).VEGF mRNA表达水平降至0.129±0.028,VEGF蛋白表达水平降至0.328±0.029,Flt-1 mRNA表达水平降至0.522±0.025,Flt-1蛋白表达水平降至0.124±0.024.结论 As2O3诱导NB4细胞VEGF、Flt-1表达增高,VPA可下调As2O3引起的VEGF、Flt-1表达增高.     

血管内皮生长因子对人慢性髓性白血病细胞系 K562细胞的抗凋亡作用

为了探讨血管内皮生长因子（VEGF）对人白血病细胞增殖的影响,用形态学、DNA断裂琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪（FCM）DNA倍体分析观察VEGF对As2O3诱导的K562细胞凋亡的影响;采用蛋白印迹法检测不同浓度的VEGF对K562细胞bcl-XL、Bax和caspase-3蛋白表达的影响;用RT-PCR方法检测上述条件下bcl-XL、Bax的mRNA变化.结果表明：VEGF能阻止K562细胞发生凋亡,与细胞周期分布改变无相关性（P＞0.05）;随着VEGF浓度的增加K562细胞bcl-XL的mRNA与蛋白表达上调,Bax的蛋白表达降低;激活pro-caspase-3→caspase-3被阻止或减少.结论：通过影响bcl-XL/Bax表达比率可能是VEGF抑制K562细胞凋亡的机制之一.     

砷剂和维甲酸对 NB4细胞组织因子和凝血酶调节蛋白mRNA及促凝活性的影响

为了研究三氧化二砷(As203)和全反式维甲酸(ATRA)对NB4细胞组织因子(TF)和凝血酶调节蛋白(TM)mRNA及其表达的影响,本研究采用体外细胞培养方法,以As2O3、ATRA处理NB4细胞,用ELISA动态测定其TF、TM抗原表达及促凝活性(PCA)变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TF和TM的mRNA转录.结果表明1 μmol/L的As2O3和1 μmol/L ATRA均可使NB4细胞TF抗原及mRNA表达呈时间依赖性渐进性下调;在24、48、72、96和120小时时间点,As2O3组TF抗原的表达水平分别为13.3±1.8,8.6±1.9,10.8±1.5,2.0±0.6和2.6±0.9 ng/107;ATRA组TF抗原的表达水平分别为12.4±1.1,11.3±1.8,5.7±1.7,2.8±0.8和2.0±0.6 ng/107,与对照组比较具有显著性(P＜0.05);在不同的时间点As2O3和ATRA,均可使其PCA下降,As2O3组血凝时间分别为123.5±10.5,156.3±11.6,179.3±15.3,248.9±20.1,312.0±29.8(秒);ATRA组血凝时间分别为76.4±5.6,146.8±10.9,198.2±15.6,265.8±20.6和363.8±31.9(秒);ATRA使NB4细胞TM抗原表达及其mRNA转录上调.结论As2O3、ATRA可降低TF mRNA转录,下调TF蛋白表达,降低NB4细胞PCA;ATRA增高TM转录及表达,缓解APL患者凝血功能异常.     

肿瘤坏死因子α和雷公藤内酯醇调节Raji细胞内VEGF的表达及基质胶中ECV304细胞血管形成作用的研究

为了探讨肿瘤坏死因子（TNF—α）和雷公藤内酯醇作用Raji细胞VEGF（血管内皮细胞生长因子）的表达及VEGF与ECV血管形成的关系，采用MTT法检测雷公藤内酯醇抑制Raji细胞增殖的影响；用ELISA法对Raji细胞上清的VEGF定量；用基质胶上的内皮细胞网络形成检测ECV30d（人类脐静脉内皮细胞起源的细胞系）血管生成；用RT-PCR检测VEGF mRNA含量。结果表明：雷公藤内酯醇对Raji细胞增殖抑制作用呈时间和剂量依赖方式，最适合作用时间为24小时，24小时半数抑制浓度IC50为25nmol／L；Raji细胞上清VEGF的含量在TNF-α组明显高于空白对照组，雷公藤内酯醇处理组则明显低于空白对照组，两者比较有极显著差异（P〈0．01）；Raji细胞内VEGF mRNA主要为VEGF165和VEGF121，其含量在TNF—α处理组与空白对照组比较有增加，而雷公藤内酯醇抑制VEGF mRNA表达，并呈剂量依赖方式；Raji细胞上清、VEGF（10ng／ml）和TNF—α（10ng／ml）处理的Raji细胞上清在基质胶中作用ECV30d细胞后可促进血管形成，而雷公藤内酯醇（25nmol／L）处理的Raji细胞上清和1640培养基作为的对照组加入基质胶中ECV304细胞未见血管形成。结论：在TNF-α、雷公藤内酯醇作用Raji细胞过程中，TNF-α促进VEGF的表达而雷公藤内酯醇则抑制其表达；TNF-α处理的Raji细胞上清在基质胶中促进血管形成，而雷公藤内酯醇则抑制血管形成。     

三氧化二砷对淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的影响及其与Mcl-1基因表达关系的研究

本研究探讨不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对人淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡诱导的作用特点及其机制,并探讨其与mcl—1基因表达的关系。应用琼脂糖凝胶电泳检测不同浓度As2O3作用于Raji细胞后的典型DNA—Ladder凋亡条带,激光共聚胶显微镜检测Raji细胞线粒体膜电位的变化,实时荧光定量PCR技术检测As2O3对mcl-1基因表达的影响。结果表明：1μmol／L As2O3作用于Raji细胞时其凋亡不明显,2—8μMol／L As2O3可以诱导Raji细胞凋亡。随着药物浓度的增加,Raji细胞线粒体的呼吸功能和跨膜电位明显减低,同时mcl-1基因表达量明显下调。结论：As2O3降低Raji细胞线粒体的呼吸功能和跨膜电位、下调mcl-1基因表达,而这些可能是导致细胞凋亡的机制。     

hVEGF165对下肢股浅静脉非体外循环下行冠状动脉旁路移植静脉术血管吻合口再狭窄的影响

目的：观察应用血管内皮细胞生长因子165（hVEGF165）基因治疗狗冠状动脉-主动脉旁路移植术吻合口再狭窄的疗效。方法构建 pcDNA3/VEGF165重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞 Kl 亚株（CHO-K1）,检测其基因、蛋白表达并转导冠状动脉架桥静脉移植术吻合口局部血管平滑肌细胞,观察其对吻合口内膜厚度、面积、狭窄率、新生内膜心肌血管内皮细胞（MEC）增殖及增殖细胞核抗原（PCNA）的影响。结果质粒构建及转染成功,pcDNA3/VEGF165能显著促进MEC增殖,并减少狗冠状动脉-主动脉旁路移植术吻合口再狭窄模型再狭窄血管的内膜厚度、面积、狭窄率。结论 VEGF165重组质粒可有效改善狗冠状动脉-主动脉旁路移植术吻合口再狭窄,为临床应用提供了前期研究基础。     

组蛋白脱乙酰化酶抑制剂对Kasumi-1细胞血管新生相关因子表达的影响

目的 研究组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸钠(VPA)及曲古菌素(TSA)对白血病细胞系Kasumi-1细胞血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF受体(KDR或FLK-1)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响,探讨其抗白血病血管新生的可能机制.方法 采用RT-PCR及Western blot方法 分析不同浓度VPA、TSA处理Kasumi-1细胞3 d后VEGF及其受体KDR mRNA及蛋白水平的变化,RT-PCR检测bFGF mRNA水平的变化.结果 VPA能够下调VEGF mRNA(3 mmol/L时处理组VEGF121 0.034±0.004、VEGF165 0.015±0.001,对照组分别为0.632±0.014、0.526±0.021)、KDRmRNA(3 mmol/L组0.038±0.000对0.258±0.034)及蛋白的表达,下调bFGF mRNA(3 mmol/L组0.086±0.015对0.228±0.017)的表达;TSA对VEGF、KDR mRNA及蛋白表达的影响与VPA相似,较高浓度的TSA能够下调bFGF mRNA的表达.结论 HDAC抑制剂可能通过调节血管新生相关因子及受体的表达,阻碍白血病患者的血管新生,从而抑制白血病的进展.     

Taspine downregulates VEGF expression and inhibits proliferation of vascular endothelial cells through PI3 kinase and MAP kinase signaling pathways

Taspine is an active component isolated from Radix et Rhizoma Leonticis with inhibiting tumor angiogenic properties. The molecular mechanism(s) of taspine on tumor angiogenic inhibition have not been well documented. The aim of this study was to elucidate in detail the effects of taspine on genetic expressions of VEGF in human umbilical vein endothelial cells, and on VEGFR2-mediated intracellular signaling of human umbilical vein endothelial cells. The genetic expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in the human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) treated with taspine in vitro was measured by the ELISA and RT-PCR methods. The effects of taspine on cell proliferation of HUVECs and HUVECs induced by VEGF165 were considered by using MTT assay. And also, a western blot was used to detect Akt and Erk1/2 expressions and their phosphorylation levels in HUVECs treated with taspine. Our results show that VEGF protein and mRNA expressions in the cells treated with taspine were significantly decreased. Taspine also significantly inhibited cell proliferation of HUVECs induced by VEGF165. HUVECs treated with taspine showed decreased Akt and Erk1/2 activities.