四唑盐比色法评价聚乳酸、聚乙醇酸及其共聚物的细胞毒性

目的 评价聚乳酸、聚乙醇酸及其共聚物的细胞毒性。方法 采用能快速评定细胞增殖率和细胞毒性的比色分析方法-MIT比色法，分别检测对聚乳酸、聚乙醇酸细颗粒对小鼠胚胎成纤维细胞相对增殖率的影响，评价其细胞毒性。结果 参照美国药典的评价标准，两类医用高分子材料均呈现较高的细胞相对增殖率，其细胞毒性为1级，即无细胞毒性。结论 聚乳酸、聚乙醇酸无细胞毒性。     

含锶磷酸钙骨水泥的细胞毒性

目的利用MTT法评价含锶磷酸钙骨水泥的细胞毒性。方法将制备好的含锶量分别为0％、1％、5％和10％的4种磷酸钙骨水泥材料的浸提液培养L929细胞，1、3和5d后采用MTT比色法和细胞形态直接观察法测定细胞与材料浸提液作用后的生长情况。结果细胞在不同含锶量的磷酸钙骨水泥材料浸提液培养条件下，其细胞相对增殖率在92.6％-103.1％之间，含锶磷酸钙骨水泥材料的细胞毒性评级为0级或1级；随着材料中掺锶量的增加其细胞毒性有略微增大的趋势。结论含锶量不同磷酸钙骨水泥材料具有较好的细胞亲和性，没有明显的细胞毒性。     

新型医用钛合金Ti-25Nb-10Ta-1Zr-0.2Fe的细胞毒性研究

目的:比较传统医用钛合金Ti-6Al-4VELI(TC4ELI)和Ti-6Al-4V(TC4)、纯钛(Ti)以及新型低模量无Al,V钛合金Ti-25Nb-10Ta-1Zr-0.2Fe(TNTZ)4种金属材料的细胞毒性。方法:采用4种合金的浸提液培养L929细胞,另设空白对照组和阳性对照组。倒置相差显微镜下观察细胞形态及数量,MTT法测定各组细胞培养1,3,5 d的吸光度值,并计算细胞的相对增殖率,判断细胞毒性的级别。流式细胞仪测定不同浸提液处理的L929细胞不同增殖周期时相的DNA百分含量,计算S期细胞比率。结果:TNTZ处理组细胞3个时间点的相对增殖率分别为(93.7±0.8)%,(100.6±0.4)%,(106.4±0.3)%;培养1 d时细胞毒性分级为1级,培养3,5 d细胞毒性均为0级;与TC4ELI,TC4,Ti的细胞毒性分级相同。流式结果显示4种材料处理细胞后细胞S期细胞比率大小为Ti>TNTZ>TC4>空白对照>TC4ELI,但差异无统计学意义(P>0.05),均不抑制细胞增殖。结论:TNTZ合金不影响L929细胞的形态和增殖,与其他3种金属的细胞毒性级别相同,均为0级,符合临床应用标准,人体应用具有安全性。     

SIM法羟基磷灰石涂层钛种植材料的细胞毒性试验

[目的]检测表面诱导矿化(SIM)法羟基磷灰石涂层钛种植材料的细胞毒性,以评价材料的生物学性能.[方法]本实验将商业纯钛及SIM法羟基磷灰石涂层钛种植材料的浸提液按浓度各分成100%、50%、25%3组,通过MTT比色法,计算人口腔成纤维细胞与各组材料浸提液共培养24 h、72 h或120 h后的相对增殖率,从而判定材料的细胞毒性级别.[结果]各组受试材料浸提液的细胞相对增殖率分别为97.0%～100.7%,它和商业纯钛的细胞毒性都为0级,而阳性对照组细胞毒性分别为3级(24 h)或4级(72、120 h).[结论]SIM法羟基磷灰石涂层钛种植材料无体外细胞毒性,可能具有良好的生物安全性和生物相容性.     

颜面赝复体粘接剂的体外细胞毒性

目的:利用体外细胞培养技术,对有机硅改性聚丙烯酸酯类颜面赝复体粘接剂-1(FPSA-1)的细胞毒性进行评价.方法: 采用MTT法评价FPSA-1的细胞毒性.利用体外培养的小鼠肺成纤维细胞(L-929),在培养液中分别添加500,750 mL/L FPSA-1浸提液,于加样后2,4,7 d用MTT法显色,用多道扫描酶标仪测A490nm值,计算相对增殖率,对FPSA-1的细胞毒性进行评价.结果: 随着时间推移,不同浓度的FPSA-1浸提液对L-929细胞增殖均无明显作用(P>0.05),各浓度FPSA-1浸提液加样后2,4,7 d之间差异无统计学意义(P>0.05),提示L-929细胞增殖与浸提液浓度无明显相关性,FPSA-1的细胞毒性分级为1级.结论: FPSA-1无明显细胞毒性,具有良好细胞相容性,是一种有发展前景的颜面赝复体粘接材料.     

纳米羟基磷灰石/聚酰胺66与人胚胎成纤维细胞的生物相容性研究

目的:研究新型骨修复重建复合材料纳米羟基磷灰石/聚酰胺66(n-HA/PA66)对人胚胎成纤维细胞可能存在的细胞毒性,为该材料应用于临床提供实验依据.方法:采用人胚胎成纤维细胞,经材料及材料浸提液分别与细胞共培养等方式对n-HA/PA66进行细胞毒性测试,细胞形态观察法观察各组细胞在24h、48h、72h、5天各时相点的细胞形态学变化,细胞生长抑制法(MTT比色法),测定各组1,2,4,7天细胞的相对增殖率.结果:材料表面的细胞黏附生长良好,各浸提液组和直接接触组分别与阴性对照组进行两两比较,各组对细胞的增殖均无显著影响(P＞0.05),各浸提液组和直接接触组分别与阳性对照组进行两两比较显示有显著差异(P＜0.05),材料的细胞毒性为0～1级.结论:体外试验结果显示,n-HA/PA66与人胚胎成纤维细胞相容性好,符合GB/T16886.5-1997-ISO 10993-5:1992规定的医用材料相应标准[1].     

聚乳酸-甲壳素接骨板的体外细胞毒性研究

目的 利用体外细胞培养技术,对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行研究,为临床应用作前期准备.方法 分别采用间接接触法(MTT法)和直接接触法评价聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性.MTT法:采用体外培养的小鼠成纤维细胞(L929),在培养液中分别添加不同浓度的聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液(0、50%和100%),于接种后第2、4、7天通过MTT法显色,在酶标仪450 nm波长处测定吸光度值,计算相对增殖率,对聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性进行评价;直接接触法:将体外培养的L929细胞分为两组,空白对照组为常规培养的L929细胞,实验组为L929细胞与聚乳酸-甲壳素接骨板共培养,逐日用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞形态学发生的变化,评价聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性.结果 随道时间推移,不同浓度的聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液对L929细胞增殖均有促进作用(P＜0.01),在第2、4、7天各浓度之间无明显差异性(P＞0.05),提示L929细胞增殖与聚乳酸-甲壳素接骨板浸提液的浓度无明显相关;L929细胞在聚乳酸-甲壳素接骨板表面粘附生长,随时间推移,粘附细胞数量增加,细胞数量及形态与空白对照组比较无明显差异,评分聚乳酸-甲壳素接骨板的细胞毒性为0级.结论 聚乳酸-甲壳素接骨板无明显细胞毒性,具有良好细胞相容性,是一种具有发展前景的可吸收骨折内固定材料.     

壳聚糖温敏凝胶对人牙龈成纤维细胞的毒性研究

目的 了解壳聚糖温敏凝胶对人牙龈成纤维细胞的毒性作用,为其治疗牙周病提供依据.方法 人牙龈成纤维细胞在不同浓度的壳聚糖温敏凝胶中体外培养24h、48h、72h、96h.用MTT法测定细胞相对增殖率(RGR),判断细胞毒性的级别.结果 各组细胞不同时间点相对增殖率均在96%～144%之间,各浓度的壳聚糖水凝胶材料浸提液的细胞毒性均为0级或1级,完全符合生物材料的安全评价标准.结论 壳聚糖温敏凝胶对人牙龈成纤维细胞无毒性,用于牙周病局部治疗具有进一步的研究价值.     

正畸不锈钢种植体的细胞毒性评价

目的 评价正畸不锈钢种植体的细胞毒性.方法 选择人成骨样细胞系MG-63作为细胞毒性的实验对象,用倒置相差显微镜观察细胞在不锈钢种植体和钛合金种植体浸提液中的生长情况,通过MTT试验检测细胞在培养24 h和48 h的光密度值和细胞相对增殖率,评价不锈钢种植体的细胞毒性.结果 钛合金种植体组的光密度值高于不锈钢种植体组,但两者之间无统计学差异.细胞在两种种植体浸提液中均生长旺盛,形态正常,钛合金种植体组细胞相对增殖率高于不锈钢种植体组,两组细胞毒性分级均为0级.结论 不锈钢种植体与钛合金种植体的细胞毒性无统计学差异,符合口腔正畸材料临床应用的要求.     

新型纳米仿生骨植入材料的生物相容性的初步研究

  【目的】 研究新型纳米仿生骨植入材料的生物相容性? 【方法】 采用骨髓基质细胞体外培养技术,通过MTT法检测细胞相对增殖度,对材料的细胞毒性进行分级评价,并采用直接接触培养法,观察细胞在材料上的黏附与散布? 【结果】 材料的细胞毒性分级在0～1之间,骨髓基质细胞可紧密附着于材料表面,黏附生长,并有突起向材料的连通微孔内伸展?【结论】 新型纳米仿生骨植入材料对骨髓基质细胞无毒性作用,符合医用生物材料的安全要求?     

几种医用材料的细胞生物相容性评价的实验研究

目的：通过2种体外细胞毒性试验研究，评价几种生物材料的细胞生物相容性。方法：依据ISO10993－1.1997及GB／T16886.1-1997，应用琼脂覆盖法和四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法对聚丙烯酰胺水凝胶、壳聚糖和类金刚石等5种生物材料的细胞毒性进行评价。通过建立MTT比色法的L929细胞生长代谢标准曲线，确定了96孔板适宜的细胞接种数。结果：5种生物材料MTT试验中毒性级均为0级，琼脂覆盖法中材料周围及脱色区内细胞溶解评价（Z／L值）均为0／0。结论：5种生物材料具有良好的细胞生物相容性。     

重组hIFN-α-2b-BCG抗肿瘤效应的体外研究

目的:了解重组hIFN-α-2b-BCG (rBCG) 体外抗肿瘤的作用效果和作用机制。方法:体外共培养后,透射电镜观察不同时间点rBCG对人膀胱肿瘤EJ细胞的影响。吖啶橙染色观察各组肿瘤细胞形态。MTT法检测rBCG对肿瘤细胞生长抑制率。ELISA检测rBCG作用后淋巴细胞分泌Th1型细胞因子水平。LDH释放试验检测rBCG激活的淋巴细胞对肿瘤细胞杀伤效应。结果:BCG和rBCG作用后的肿瘤细胞在透射电镜下和吖啶橙染色后均有显著变化。MTT显示rBCG的生长抑制率显著高于BCG和BCG+IFN组。rBCG对淋巴细胞分泌Th1型细胞因子有影响,同时rBCG激活的淋巴细胞对膀胱肿瘤细胞的杀伤作用。结论:重组BCG在体外有优于BCG的免疫调节特性、抗肿瘤作用和直接细胞毒作用。     

酶释放法用于细胞介导的细胞毒试验问题分析

目的 :检验分析酶释放法用于细胞毒试验存在的问题。方法 :用51Cr释放法和MTT比色法、NAG比色法 ,单独或相互比较 ,检验分析细胞毒试验中效靶细胞相互作用规律 ,酶在细胞代谢中分布情况 ,细胞死伤前后酶释放特点。结果 :以MTT为底物的酶在细胞代谢中主要分布在细胞膜表面 ,而以NAG为底物的酶分布在细胞内。细胞有自主释放酶的功能 ,正常细胞与受损伤细胞释放酶速度不同。细胞毒作用过程中效应细胞也有损伤 ,也有酶释放 ,与靶细胞死伤后释放的酶属于同一类 ,而且混合在一起 ,目前尚无可行的定量分离和鉴别方法。酶释放法用于细胞毒试验 ,对于不同状态的标本检验结果没有规律性 ,不能反映机体免疫功能状态。结论 :酶释放法不宜用于细胞介导的细胞毒试验。     

HA-P软腭植入材料的研制及细胞毒性检测

目的:研制一种新的治疗鼾症的软腭植入系统微创手术的生物材料并于体外检测其细胞毒性,探讨将其应用于软腭植入系统的可能性.方法:将羟基磷灰石颗粒(HA)、聚乳酸-三亚甲基碳酸酯P(LATMC)按一定比例复合,利用有机溶剂注模法,制备重组软腭植入材料;并采用MTT检测法,将不同浓度的HA-P浸提液与MH-3T3成纤维细胞接触1、3、5 d,检测细胞的增殖活性,计算细胞的相对增殖度,用6级毒性法进行评级.结果:研制不同浓度的HA-P材料浸提液在不同的时间点培养的细胞均正常增殖(P＞0.05),毒性级别为0～1级.结论:研制的HA-P材料具有良好的细胞相容性,可能是一种良好的软腭植入系统材料.     

改良MTT比色法检测NK细胞活性

目的 :探求更简便、实用的改良四甲基偶氮唑盐 ( MTT)比色法检测 NK细胞活性。方法 :1 2只 Wistar大鼠 ,取脾淋巴细胞 ,用 MTT比色法测定 NK细胞活性 ,效、靶细胞分别先孵育0 h和 4h,再与 MTT共同孵育 4h两种方法 ,对不同孵育时间的实验结果进行 t检验和相关性分析。结果 :两种方法差异有统计学意义 ,呈高度正相关。结论 :可以用效靶细胞不进行预先孵育的方法检测 NK细胞活性     

稳定表达Keap1的H460-N5细胞株的建立及增敏抗肿瘤药物作用的研究

目的:建立野生型Keap1过表达的H460细胞株降表达Nrf2,检测Nrf2-ARE信号通路对肿瘤细胞耐药性的影响.方法:H460细胞转染mKeap1-pEGFP后经过长期筛选得到稳定表达Keap1蛋白质的细胞株,通过Western blotting和荧光定量PCR的方法进行检测;并通过多次继代培养,细胞株H460-N5稳定表达mKeap1,Nrf2及其调控基因均显著降表达;用MTS法检测抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对细胞增殖抑制率.结果:H460细胞转染mKeap1-pEGFP后筛选建立Nrf2降表达的稳定细胞株H460-N5.MTS数据显示,与对照组相比,抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对H460-N5细胞的抗增殖作用更显著.当奥沙利铂和依托泊苷分别在93 μmol/L和100 μmol/L浓度作用于对照组细胞株H460-N0时,药物作用接近半数抑制率(IC_(50));而在H460-N5细胞株中,两种抗癌药物的IC_(50)分别为42 μmol/L和30 μmol/L.阿霉素对H460-N0细胞的IC_(50)>3 mg/L,而对H460-N5细胞的IC_(50)约为2 mg/L.结论:Keap1过表达的H460-N5细胞Nrf2及调控基因显著降低并增敏抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对肿瘤细胞的增殖抑制作用.     

医疗产品细胞毒性3种评价方法的比较

目的比较评价医疗产品细胞毒性的3种方法，即MTT法、活细胞计数法及形态观察法。方法用MTT法、活细胞计数法及形态观察法对19种医疗产品进行细胞毒性测试，并对样品毒性分级及作出合格与否的判断，比较这些方法之间的符合程度及在检测细胞毒性方面各自的优缺点。结果MTT法与活细胞计数法的毒性级别判断符合率为73．7％（14／19），判断样品合格与否，两者符合率为94．7％（18／19），15号样品MTT法毒性级别判为4级，但细胞形态观察法发现细胞形态正常，贴壁生长良好，结果与活细胞计数法一致。重复3次检测，仍出现这种现象。结论MTT法操作简便，人为误差小，更适于多种医疗产品的同时检测，但对于MTT检测不合格产品要结合活细胞计数法及形态观察法，作出综合判断。     

重组人表皮生长因子体外生物活性的测定

探讨适合本实验室用ＭＴＴ或ＭＴＳ／ＰＭＳ检测重组人表皮生长因子的一系列实验参数，包括血清肖度，细胞浓度，细胞培养时间和酶解程度。方法：利用ＭＴＴ或ＭＴＳ／ＰＭＳ结合示仪分别在多种实验条件下对重组人表皮细胞因子进行生物活性检测，同时绘制细胞生长曲线，对细胞生长状态拍照观察。     

复方珊瑚糊剂的细胞毒性评价

目的 :采用体外细胞培养法评价复方珊瑚糊剂的细胞毒性。方法 :选用L92 9小鼠成纤维细胞为靶细胞 ,同时对复方珊瑚糊剂及其各主要成分浸渍液进行细胞毒性检测 ,于 3d、7d测其OD值 ,计算细胞相对增值率 ,用 6级毒性分类法评级。并进行形态学观察。结果 :培养期各组细胞大量增殖 ,形态正常 ,毒性级为 0～ 1级。结论 :复方珊瑚糊剂是一种具有良好细胞生物相容性材料。