Exendin-4干预对糖尿病肾病大鼠肾脏TGF-β1mRNA和蛋白表达的影响

目的 通过Exendin-4对糖尿病肾病(DN)大鼠进行干预治疗,观察其对肾组织转化生长因子1 (TGF-β1)mRNA和蛋白表达的影响.方法 用高糖高脂饲料结合小剂量的链尿佐菌素建立糖尿病肾病模型,随机分为糖尿病肾病模型组、Exendin-4低剂量治疗组[4 μg/(kg·d)]和Exendin-4高剂量治疗组[20 μg/(kg·d)],治疗6周后测定各组大鼠24 h蛋白尿、血糖、血脂,HE染色光镜下观察肾组织的病理变化,用免疫组化法及RT-PCR两种方法检测TGF-β1的表达.结果 与糖尿病肾病模型组相比,Exendin-4治疗组的血糖、血脂、24 h尿蛋白定量均下降(P＜0.05),高剂量治疗组改善更明显(P＜0.05).与糖尿病肾病模型组相比,Exendin-4治疗组大鼠肾组织的TGF-β1表达明显下降(P＜0.05),高剂量治疗组大鼠肾组织的TGF-β1表达下降更明显(P＜0.05).结论 Exendin-4对糖尿病肾病大鼠具有一定的肾脏保护作用,且有剂量依赖性,其机制可能与降低TGF-β1mRNA和蛋白的表达进而抑制细胞外基质的堆积有关.     

Exendin-4通过上调pdx-1mRNA表达促进STZ造模小鼠β细胞增生

目的观察腹腔内注射exendin-4对链脲佐菌素(STZ)造模小鼠的血糖、胰岛数目和pdx-1表达的影响。方法C57BL/6小鼠30只被分成3组注射用水组、STZ50mg/kg 注射用水组和STZ50mg/kg exendin-40.1μg/g体重组。实验第1~10d每日腹腔内注射注射用水或exendin-4,实验第3~7d注射STZ。检测exendin-4注射期间和停药后血糖水平,停药后进行腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)、胰腺胰岛计数和RT-PCR检测转录因子pdx-1的表达。结果STZ造模小鼠连续exendin-4注射期间平均血糖和注射用水组差异无统计学意义[(6.12±0.37vs6.21±0.41)mmol/L,P>0.05];而与未注射exendin-4的STZ小鼠组比较血糖明显降低[(6.12±0.37vs9.59±1.08)nmol/L,P<0.05];exendin-4停药后2周内的STZ exendin-4组的平均血糖仍较STZ 注射用水组明显降低[(13.02±1.96vs18.55±3.14)mmol/L,P<0.05]。IPGTT显示STZ exendin-4组的糖耐量较STZ 注射用水组明显改善,胰腺胰岛计数STZ exendin-4组较STZ 注射用水组增加了近1倍,转录因子pdx-1的表达也明显上调(P<0.05)。结论Exendin-4对STZ造模小鼠的血糖不仅具有短期控制作用,而且停药后仍有一定的维持作用。Exendin-4改善了STZ造模小鼠的糖耐量,上调了pdx-1的表达,促进了胰岛的增生。     

Exendin-4对高脂饮食载脂蛋白E基因敲除小鼠脂代谢及炎症因子的影响

目的观察Exendin-4对高脂饮食载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠脂代谢、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响。方法将40只雄性ApoE^-/-小鼠随机分为普通饮食组(10只)和高脂饮食组(30只),喂养8周后再将高脂饮食组分为非药物干预组、Exendin-4低剂量组、Exendin-4高剂量组,每组10只。Exendin-4低剂量组、Exendin-4高剂量组ApoE^-/-小鼠分别给予20μg/(kg·d)、100μg/(kg·d)Exendin-4腹腔内注射;普通饮食组、非药物干预组ApoE^-/-小鼠给予0.1 mL生理盐水腹腔内注射。第12周末处死小鼠,进行相关检测,采用全自动生化分析仪检测小鼠总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;RT-PCR及Western Blot法分别检测主动脉IL-6、MCP-1及VCAM-1 mRNA和蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中IL-6、MCP-1及VCAM-1水平。结果与普通饮食组相比,非药物干预组ApoE^-/-小鼠TC、LDL-C水平明显升高(P<0.01),应用Exendin-4干预后,Exendin-4高剂量组TC、LDL-C水平明显降低(P<0.05或P<0.01);各组小鼠血清中TG、HDL-C含量虽有变化,但差异无统计学意义(P>0.05)。与非药物干预组相比,Exendin-4处理可以降低主动脉IL-6、MCP-1及VCAM-1 mRNA及蛋白表达,同时下调血浆中IL-6、MCP-1及VCAM-1蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论Exendin-4可以改善高脂饮食ApoE^-/-小鼠脂代谢并降低主动脉IL-6、MCP-1及VCAM-1的表达。     

Exendin-4对2型糖尿病大鼠胃组织氧化应激及胃动力的影响

目的观察Exendin-4对2型糖尿病大鼠的空腹血糖(FBG)、糖化血清蛋白(GSP)、胃组织氧化应激、胃动力的影响。方法雄性SD大鼠给予高脂高糖饲料加小剂量链脲佐菌素(STZ)(35 mg/kg)腹腔注射,制备2型糖尿病大鼠模型。随机分为正常对照组(NC组),正常干预组(NE组),糖尿病对照组(DC组),糖尿病干预组(DE组);NE及DE组给予Exendin-4(2μg/kg每日两次)皮下注射,50 d后四组进行核素胃排空检查,测定胃半排时间、排空速率。之后处死大鼠,取血清标本测定FBG、GSP;取胃组织制备组织匀浆,测定胃组织的一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)以及超氧化物歧化酶(SOD)的含量。结果 DC组与NC组相比,FBG(P<0.001)、GSP和MDA(P<0.01)水平升高,胃半排时间缩短、而排空速率加快(P<0.05),NO及SOD(P<0.05)水平下降。DE组与DC组比较,FBG(P<0.001)、GSP和MDA(P<0.05)浓度降低,NO(P<0.01)及SOD(P<0.05)水平增加,胃半排时间加长、而排空速率减慢(P<0.05)。NC组与NE组比较无差异。多因素逐步回归分析显示与胃排空速率相关的依次为NO和FBG。结论 Exendin-4可以改善糖尿病大鼠的胃组织氧化应激、内皮损伤及胃动力异常。     

Exendin-4通过抗氧化应激减轻糖尿病心肌病心肌纤维化的实验研究

目的 探讨Exendin-4对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌纤维化的作用.方法 高热量饮食加小剂量链脲佐菌素注射建立2型糖尿病大鼠模型.成模大鼠随机分为糖尿病心肌病组(DCM组)和大、小剂量Exendin-4干预组(DI组),另设正常对照组(NC组).治疗6周后测各组血脂、免疫组化法检测心肌血红素加氧酶-1(HO-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达、Masson染色测心肌胶原含量.结果 与NC组相比,DCM组HO-1的表达甚少,DCM大鼠MMP-9的表达明显升高,心肌组织胶原含量明显升高,心肌间质纤维化,Exendin-4治疗后,HO-1的表达增强,MMP-9表达减少,心肌纤维化减轻.结论 Exendin-4通过抗氧化应激在逆转DCM心肌纤维化过程中起着重要的作用.     

白三烯B4对骨髓细胞及成骨细胞骨代谢相关基因mRNA表达的影响

目的观察不同浓度白三烯B4(LTB4)干预后大鼠骨髓细胞及成骨细胞过氧化物酶体增生物激活受体γ2(PPARγ2)及骨代谢相关基因核因子-KB活化受体配体(RANKL)、碱性磷酸酶(ALP)、骨保护素(OPG)、核因子-KB活化受体(RANK)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)mRNA表达水平的变化,探讨PPARγ2内源性配体LTB4在骨代谢中的作用。方法体外培养大鼠骨髓细胞及成骨细胞,分别加入不同浓度LTB4(0、0.1、1.0、10.0μmol/L)干预24 h,采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测骨髓细胞PPARγ2、RANKL、ALP、OPG、RANK、TRAP mRNA表达水平及成骨细胞PPARγ2、RANKL、ALP、OPG mRNA表达水平,比较不同浓度LTB4对上述基因表达的影响。结果 (1)不同浓度LTB4呈剂量依赖性下调骨髓细胞RANKL、ALP、OPG mRNA的表达水平,同时呈剂量依赖性上调PPARγ2、RANK、TRAP mRNA的表达水平,组间比较差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);(2)不同浓度LTB4呈剂量依赖性下调成骨细胞RANKL、ALP、OPG mRNA的表达水平,同时呈剂量依赖性上调PPARγ2mRNA的表达水平,组间比较差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 LTB4可能通过激活PPARγ2转录活性抑制骨髓细胞及成骨细胞成骨标记物基因的表达,促进骨髓细胞破骨标记物基因的表达,从而参与与增龄相关的骨质疏松的发病过程。     

耐力训练对糖尿病糖脂代谢相关因子基因表达的影响

目的探讨糖尿病(DM)对长期耐力训练产生运动适应的分子机制。方法 2型糖尿病(T2DM)大鼠12只,随机分为安静组(GKC)、耐力训练组(GKE)。跑台训练6 w,末次训练后24⁴8 h内断颈处死,取腓肠肌,荧光定量PCR检测GLUT4、AMPKα2、PDK4和CPT-1β的基因转录。结果 GKE组AMPKα2 mRNA水平非常显著高于GKC组(P<0.01),GLUT4 mRNA转录没有显著性差异(P>0.05),PDK4 mRNA表达显著性降低(P<0.05),CPT-1βmRNA转录没有显著性差异(P>0.05)。结论 (1)6 w耐力运动干预可能通过能量敏感性通路AMPK-GLUT4葡萄糖转运机制极大地促进了GK大鼠骨骼肌糖摄取能力,在一定程度上逆转了AMPK磷酸化受损状况,对改善DM进程有一定益处。(2)耐力训练显著降低了PDK4水平,对促进DM大鼠有氧呼吸能力有利,但对CPT-1β水平影响不显著,可能此时DM大鼠仍然以葡萄糖氧化为主供能。     

沉默人胰腺癌细胞S100A4基因表达对肿瘤相关基因mRNA表达的影响

目的 观察沉默S100A4基因表达对人胰腺癌BxPC-3、AsPC-1细胞肿瘤相关基因COX-2、bcl-2 、Surviving、MMP-9 mRNA表达的影响,探讨它们之间的关系.方法 应用靶向S100A4的小干扰RNA(siRNA)转染人胰腺癌BxPC-3、AsPC-I细胞,应用无同源性的siRNA-C转染细胞作为阴性对照,以未转染细胞作为对照组.采用RT-PCR检测干扰后细胞S100A4、COX-2、Survivin、MMP-9、bcl-2 mRNA的表达.结果 人胰腺癌BxPC-3细胞的对照组、siRNA-C组、siRNA-S100A4组的S100A mRNA表达量分别为0.661 ±0.023、0.659±0.043、0.379±0.039;COX-2 mRNA表达量分别为0.760±0.026、0.830±0.017、0.443±0.006;Survivin mRNA表达量分别为0.948±0.049、0.909±0.081、0.068 ±0.006;bcl-2mRNA表达量分别为0.462±0.018、0.421±0.049、0.184±0.025;MMP-9 mRNA表达量分别为0.813±0.008、0.908±0.063、0.246±0.027.AsPC-I细胞的对照组、siRNA-C组、siRNA-S100A4组的S100A4mRNA表达量分别为0.641±0.042、0.626±0.053、0.320±0.081;COX-2 mRNA表达量分别为0.727±0.021、0.743±0.025、0.560±0.035;Survivin mRNA表达量分别为0.994±0.032、0.984±0.049、0.063±0.005;bcl-2 mRNA表达量分别为0.458±0.004、0.537±0.046、0.181±0.007;MMP-9 mRNA表达量分别为0.698±0.011、0.718±0.073、0.199±0.013.2株细胞的siRNA-S100A4组的S100A、COX-2、Survivin、bcl-2、MMP-9 mRNA表达量均较其相应的siRNA-C组及对照组显著减少(P值均＜0.01),而siRNA-C组与对照组间的表达量差异无统计学意义.结论 S100A4通过上调COX-2、Survivin、bcl-2、MMP-9基因的表达在胰腺癌发生、发展中发挥作用.     

抵抗素结合多肽对3T3-L1脂肪细胞分化、脂代谢及葡萄糖转运体4基因表达的影响

目的观察抵抗素结合多肽（RBP）对3T3-L1脂肪细胞分化、脂代谢及葡萄糖转运体4（GLUT-4）基因表达的影响。方法构建大鼠抵抗素真核表达载体并转染3T3-L1前体脂肪细胞，获得稳定表达抵抗素基因细胞株；采用台盼蓝排斥试验，确定理想的RBP干预浓度，于诱导细胞分化第0天加入培养液；采用油红O染色，观察脂肪细胞分化及脂质积聚情况；采用RT-PCR技术检测脂肪细胞分化标志基因及GluT-4基因表达变化；采用全自动生化仪比色法，检测脂肪细胞内TG和游离脂肪酸FFAs含量的变化。结果（1）RBP浓度10^-12mol／L时，脂肪细胞活细胞数比例较高，且细胞形态无明显改变。（2）RBP对正常脂肪细胞分化进程无明显影响，RBP虽未影响抵抗素稳定表达脂肪细胞内脂滴的出现时间，但细胞内脂滴的数目明显减少。（3）RBP对正常脂肪细胞分化标志基因及抵抗素稳定表达细胞分化早期标志基因Pref-1的表达无明显影响，但明显下调抵抗素稳定表达细胞分化中晚期标志基因C/EBPα和FAS的表达水平。（4）RBP对正常脂肪细胞内TG、FFAs含量无影响，但可显著降低抵抗素稳定表达脂肪细胞内的TG、FFAs含量。（5）RBP干预对正常脂肪细胞及抵抗素稳定表达脂肪细胞中GluT-4基因的表达水平均无显著影响。结论RBP对正常3T3-L1脂肪细胞的分化、脂代谢、GluT-4基因表达均无明显影响，但能有效拮抗抵抗素基因，显著促进3T3-L1脂肪细胞分化及脂代谢。     

JAZF1基因过表达对鼠肝细胞糖脂代谢相关基因表达的影响

目的探讨JAZF1过表达对鼠肝细胞IAR-20及Hepa1-6糖脂代谢相关基因的影响。方法克隆鼠JAZF1编码区并构建pIRES2-EGFP-JAZF1表达载体,利用脂质体法将目的基因转染到鼠肝细胞IAR-20及Hepa1-6中,采用实时荧光定量PCR测定各处理组JAZF1 mRNA表达情况,以及糖脂代谢相关基因SREBP1、AOC、FAS、HSL、PPARa、ATGL、G1uT-1、G1uT-4和细胞因子FGF-21mRNA的变化情况。结果JAZFl基因在鼠肝细胞中过表达导致脂代谢基因SREBP1,ACC,FAS表达降低（P〈0．01）,PPARa和HSL表达增加（P〈0．01）,对AXG-L无影响（P〉0．05）,使糖转运相关基因GluT-1表达增加（P〈0．01）,GluT-4无显著变化（P〉0．05）,对FGF-21无影响（P〉0．05）。结论JAZF1过表达可以抑制肝细胞的脂肪生成,促进脂肪分解,并可能增加基础葡萄糖转运。     

葡萄糖和胰岛素对3T3-L1脂肪细胞内脏脂肪素mRNA表达的影响

目的研究不同浓度葡萄糖和胰岛素对3T3-L1脂肪细胞中内脏脂肪素（Visfatin）mRNA表达的影响。方法通过real—time RT-PCR方法检测不同浓度葡萄糖和胰岛素培养下3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA的表达。结果葡萄糖增加了3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA的表达;胰岛素降低其表达。结论葡萄糖和胰岛素对3T3-L1脂肪细胞中Visfatin mRNA的表达有凋控作用。     

S100A16基因促进3T3-L1前脂肪细胞分化

目的 研究S100A16基因在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中的作用及机制.方法 构建过表达S100A16的慢病毒载体(PLJMI-S100A16-GFP),转染3T3-L1细胞.以Western印迹法检测S100A16正常3T3-L1细胞分化过程中S100A16的表达;采用油红O观察脂滴堆积情况;采用Western印迹和实时定量PCR方法检测前体脂肪细胞分化过程中相关基因的表达变化.免疫共沉淀方法检测S100A16是否与p53相互作用.结果 成功构建S100A16过表达3T3-L1细胞株;随着3T3-L1前脂肪细胞的分化,S100A16蛋白表达水平逐渐升高;高表达S100A16能够促进3T3-L1前脂肪细胞分化,促进甘油三酯在脂肪细胞内聚集(P＜0.01),同时上调脂肪细胞分化标志基因PPARy、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBP-α)、脂蛋白脂酶、脂肪细胞脂肪酸结合蛋白(aP2)及脂肪酸合成酶的表达(P＜0.05或P＜0.01);免疫共沉淀结果提示,S100A16蛋白与p53相互作用.结论 S100A16通过抑制p53活性进而促进3T3-L1前脂肪细胞的分化.     

Islet transplantation outcomes in mice are better with fresh islets and exendin-4 treatment

Aims/hypothesis Although islet transplantation in diabetes holds great promise, two or three donor pancreases are usually required to achieve normoglycaemia in human or rodent recipients. We investigated whether there were differences between fresh and cultured islets in terms of transplantation outcome. We also investigated the effects of normoglycaemia during engraftment and the effects of exendin-4, a glucagon-like peptide-1 receptor agonist, on islet transplantation.Materials and methods Seventy-five fresh islets were transplanted to the right kidney of diabetic mice and 425 fresh islets were transplanted to the left kidney. The mice were treated with exendin-4 or vehicle for 14 days, after which the large graft was removed by left nephrectomy. In a separate set of experiments, islets cultured in the presence or absence of exendin-4 for 72 h, or fresh islets, were transplanted to diabetic mice. In both sets of experiments, blood glucose levels were monitored.Results Compared with cultured islets, fresh islets were more effective at reversing hyperglycaemia in mice. The treatment of the recipient mice with exendin-4 did not have beneficial effects on glucose homeostasis. However, when islets are cultured, exendin-4 treatment increases the rate of reversal of hyperglycaemia, but not to the degree of fresh islets.Conclusions/interpretation Fresh islets are more effective than cultured islets at reversing hyperglycaemia. Exendin-4 has beneficial effects on islet transplantation.     

3T3-L1前脂肪细胞分化过程中chemerin基因表达水平的变化

目的 探讨体外培养3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中chemerin基因表达水平的变化与脂肪细胞分化、脂质积聚之间的关系.方法 应用3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、胰岛紊、地塞米松联合方案诱导其分化为成熟的脂肪细胞,采用油红0染色观察脂肪细胞分化及脂质聚集情况,并应用RT-PCR和Western印迹技术检测chemerin基因表达的变化.结果 3T3 -L1脂肪细胞分化过程中,chemerin mRNA表达水平逐渐升高,分化至第6天达到较高水平且逐渐趋于稳定.利用Western印迹可观察到,随着脂肪细胞分化成熟.chemerin基因的蛋白表达水平逐渐增高.结论 chemerin mRNA及蛋白质在脂肪细胞分化成熟过程中表达水平升高,提示其很有可能参与了脂肪细胞分化和脂质聚集.     

胰升血糖素样肽1对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响

目的探讨胰升血糖素样肽1（GLP-1）对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响。方法在3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的不同阶段添加不同浓度梯度的GLP-1（7—36）,使用XTT比色法测定细胞增殖情况,油红O脂肪染色、异丙醇萃取法评价细胞分化情况,RT-PCR法测定不同分化阶段PPAR-ymRNA表达水平。结果高浓度GLP-1（10^-9～10^-7mool／L）能够减弱3T3-L1前脂肪细胞的增殖能力;GLP-1在10^-11～10^-8mmoL／浓度梯度均存在抑制3T3-L1前脂肪细胞向脂肪细胞分化的作用,但对分化过程中PPARymRNA的表达水平均未见显著影响。结论本研究发现GLP-1能够抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化,提示脂肪细胞可能也是GLP-1减轻体重作用的潜在靶点。     

GLP-1,Exendin-4和C肽对大鼠肾血流的影响

目的 比较胰升糖素样肽1(GLP-1)、Exendin-4和C肽对血糖正常和高血糖大鼠肾血流(RBF)的影响.方法 雄性成年Wistar大鼠随机分为GLP-1组、Exendin-4组、C肽组和对照组.每组再分为基础组和糖负荷组(每组6～7只大鼠).采用微球技术测定大鼠RBF和肾上腺血流,同时测定平均动脉压和血糖.结果 高血糖时RBF显著增加(P<0.01).GLP-1显著增加基础RBF[(7.540±0.909 vs 4.775±0.638)m1·min-1·g-1肾组织,P<0.05],进一步增加糖负荷后RBF[(11.054±1.236 vs 8.952 4±1.142)m1·min-1·g-1肾组织,P>O.05].Exendin-4不影响基础和糖负荷后RBF,但阻断了高血糖诱导的RBF增加.C肽湿著增加大鼠基础RBF(P相似文献   

抵抗素在3T3-L1前脂细胞分化前后表达量的变化

目的检测3T3-L1前脂细胞诱导分化为脂肪细胞前后抵抗素基因表达量的变化情况，为阐明抵抗素在细胞分化过程中所起作用并为研究其与胰岛素抵抗（珉）及2型糖尿病的相关性奠定基础。方法用地塞米松、甲基异丁基黄嘌呤与胰岛素联合诱导法抽提诱导分化前后细胞总RNA，半定量RT-PCR检测抵抗素基因表达量。结果抵抗素在3T3-L1细胞诱导前后表达量明显上升。结论抵抗素在3T3-L1细胞分化过程中表达量的提高，提示其很有可能在鼠脂肪细胞产生珉的过程中发挥积极作用。