抵抗素对内皮细胞NO生成的影响及Akt信号机制

目的探讨抵抗素对内皮细胞NO生成的影响及其可能的信号机制。方法分离、培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,以不同浓度抵抗素（15、50、100ng／ml）干预。荧光显微镜检测各组细胞中N0的生成,RT-PCR检测eNOS mRNA表达水平,Western blot检测Akt和eNOS磷酸化水平。结果15、50、100ng／ml抵抗素干预HUVECs 24h后,胰岛素刺激的内皮NO生成显著降低（三组分别为4．01±0．69、3．764±0．71、3．73±0．45,vs对照组P均〈0．05）,同时伴有内皮Akt和eNOS磷酸化水平的降低（us对照组P均〈0．05）,而eNOS mRNA表达无显著改变。结论抵抗素可通过P13K／Akt途径影响HuVECs eNOS磷酸化水平,进而调节内皮细胞NO生成,但该影响并非Akt依赖性。     

抵抗素对内皮细胞活性氧生成及AMPK磷酸化水平的影响

目的探讨抵抗素对内皮细胞功能影响的作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,50、100ng/ml抵抗素干预24h,分别检测活性氧（ROS）生成和腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）磷酸化水平,并应用AICAR激活AMPK观察其对内皮ROS生成的影响。结果50、100ng/ml抵抗素作用组与对照组相比,内皮细胞AMPK磷酸化水平明显下降,而ROS生成无明显改变;50ng/ml抵抗素作用组加用AICAR干预后,AMPK磷酸化水平显著增高,同时伴ROS生成显著降低。结论抵抗素可影响内皮细胞功能,其机制可能通过抑制内皮细胞AMPK的磷酸化水平,参与内皮细胞炎症过程的调节,激活内皮AMPK,减少ROS生成,对内皮损伤起保护性作用。     

雌激素对血管内皮细胞一氧化氮合酶活性调控的受体机制研究

目的　观察 17β 雌二醇对大鼠肺血管内皮细胞一氧化氮合酶 (NOS)活性的影响及雌激素受体在其中的作用。方法　用贴壁法和无酚红 16 40培养基培养大鼠肺血管内皮细胞 ,在不同浓度的 17β 雌二醇 (伴或不伴有雌激素受体拮抗剂代莫昔芬 )作用下 ,观察一定时间内内皮细胞的NOS活性及一氧化氮 (NO)的产量。放射配体结合分析技术检测内皮中的雌激素受体。结果　 (1) 1～ 10nmol的 17β 雌二醇作用 8～ 2 4h ,内皮细胞的NO产量显著增加 (vs对照 P<0 .0 5 ) ,10nmol的 17β 雌二醇作用 8～ 2 4hNOS活性显著增强 (与对照比 ,8h ,P<0 .0 5 ;16h ,2 4h ,P<0 .0 1)。 (2 )大鼠肺血管内皮细胞中存在雌激素受体。 (3)雌激素受体拮抗剂他莫昔芬能显著抑制雌激素的上述作用 (P <0 .0 1)。结论　 17β 雌二醇能增强大鼠血管内皮细胞的NOS活性和NO产量 ,该作用由雌激素受体介导 ,可能是雌激素降低血管阻力、抑制动脉粥样硬化作用的重要机理之一。     

内皮细胞型一氧化氮合酶基因多态性与高血压病的相关性研究

目的　探讨内皮细胞型一氧化氮合酶 (endothelialnitricoxidesynthase ,eNOS)基因第 4内含子数目可变性串联重复序列 (variablenumberoftandemrepeatspolymorphism ,VNTR)多态性与高血压病(essentialhypertension,EH)的相关性。方法　依据VNTR位点侧翼序列设计引物 ,PCR方法分别自血压正常 (normotension ,NT)和EH人群基因组DNA扩增VNTR片段 ,琼脂糖凝胶电泳分析VNTR基因型 ,对两组VNTR的基因型与等位基因频率进行统计对比。结果　NT和EH人群eNOS基因VNTR均存在重复 4次、5次和 6次 3种等位基因 ,以及 4/4纯合、4/5杂合、5/5纯合和 5/6杂合 4种VNTR基因型 ,但等位基因与基因型的分布频率存在差异。EH人群重复 4次的等位基因频率 (χ2 =30 80 ,P <0 0 0 0 1 ) ,4/5杂合 (χ2 =2 1 45 ,P <0 0 0 0 1 )和 4/4纯合 (χ2 =4 0 6 ,P <0 0 5)的基因型频率明显高于NT人群。结论　eNOS基因VNTR重复 4次的等位基因与EH相关 ,携带重复 4次等位基因的人具有罹患EH的一定危险性 (χ2 =33 96 ,P <0 0 0 0 1 ,OR =3 2 ,95 %可信区间为 2 0 97～ 4 495)。     

低密度脂蛋白和高密度脂蛋白对动脉内皮细胞一氧化氮生成的影响

为研究高密度脂蛋白和低密度脂蛋白对动脉内皮细胞一氧化氮合成的影响,以豚鼠动脉内皮细胞为实验对象,用低密度脂蛋白、高密度脂蛋白及两者以不同剂量混合加入培养基中,每组设置三种剂量,分别于２ｈ、６ｈ、１２ｈ和２４ｈ测定一氧化氮含量。结果发现,高密度脂蛋白促进内皮细胞一氧化氮的合成（Ｐ〉０．０５）,与剂量大小无关;低密度脂蛋白显著抑制一氧化氮的合成（Ｐ〈０．００１）,与剂量相关;混合组同样明显抑制其合成,     

恒磁场对糖基化终产物作用下内皮细胞一氧化氮生成和一氧化氮合酶活性的影响

目的观察不同强度恒磁场对糖基化终产物作用下人脐静脉内皮细胞一氧化氮生成及一氧化氮合酶活性的影响。方法采用体外培养第3代人脐静脉内皮细胞,糖孵育法制备糖基化终产物修饰牛血清白蛋白。实验分为6组,即对照组、糖基化终产物修饰牛血清白蛋白(100μg/L)组及糖基化终产物修饰牛血清白蛋白+不同强度(1×10-4T、5×10-4T、10×10-4T2、0×10-4T)磁场组。各组细胞于培养及磁场作用24 h后收集标本,用Griess法检测培养上清中一氧化氮水平,并测定人脐静脉内皮细胞的一氧化氮合酶活性。结果糖基化终产物修饰牛血清白蛋白组一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性较对照组明显降低(P<0.05)。1×10-4T、5×10-4T、10×10-4T和20×10-4T恒磁场组一氧化氮生成、一氧化氮合酶活性显著高于糖基化终产物修饰牛血清白蛋白组(P<0.05)。结论糖基化终产物修饰牛血清白蛋白可抑制人脐静脉内皮细胞的一氧化氮合酶活性和一氧化氮产生;1×10-4T~20×10-4T的恒磁场可呈强度依赖性拮抗糖基化终产物修饰牛血清白蛋白对一氧化氮生成的抑制效应。     

高压培养对血管内皮细胞P-选择素和一氧化氮合酶的影响

高血压时血管壁侧压 (静水压 )对血管内皮细胞 (ＥＣ)的影响了解甚少。我们曾发现 180ｍｍＨｇ (1ｍｍＨｇ =0 .133ｋＰａ)压力培养对猪主动脉ＥＣ的生长具有双向性的影响 ,本研究观察高压培养对ＥＣ的一氧化氮合酶 (ＮＯＳ)及Ｐ 选择素分泌的影响。一、材料与方法4～ 6代的人脐静脉内皮细胞 (5× 10 5/ｍｌ的单细胞悬液3ｍｌ)用于实验。培养压力分为常压 (大气压 )、12 0ｍｍＨｇ和180ｍｍＨｇ三组。每一压力又分为对照组、左旋精氨酸干预组 (Ｌ ａｒｇ组 ,终浓度 1× 10 -5ｍｏｌ/Ｌ)及卡托普利 (ＣＡＰ ,终浓度 1× 10 -5ｍｏｌ/Ｌ)干预…     

左旋精氨酸对离体培养SHR大鼠主动脉内皮细胞一氧化氮合成酶活性的影响

目的：探讨左旋精氨酸对离体培养SHR大鼠主动脉内皮细胞一氧化氮合成酶（nitric oxidative synthase,NOS)活性的影响。方法：6周龄雄性SHR大鼠，取其主动脉，采用贴块法进行体外内皮细胞培养，传达6－8代，将细胞分成实验组和对照组，实验组在生长液中加入1mol/L左旋精氨酸，对照组不施干预措施，分别在加入左旋精氨酸后1／2，1、2、4小时取二组细胞，反复冻融三次使细胞破裂，用分光光度法测定细胞内NOS活性。结果：内皮细胞对左旋精氨酸较敏感，实验组加入左旋精氨酸1／2小时后，NOS活性即上升，1小时达最高，随后下降，至4小时恢复正常。结论：左旋精氨酸可增强离体SHR大鼠主动脉内皮细胞NOS活性。     

西格列汀对人主动脉内皮细胞内皮素1及一氧化氮合酶的影响及其机制

目的探讨在高糖培养环境下西格列汀对人主动脉内皮细胞(HAEC)内皮素1及一氧化氮合酶的影响及其可能机制。方法高糖环境下(25 mmol/L葡萄糖)培养人主动脉内皮细胞,并分别给予0、5、10及20μmol/L西格列汀干预,检测HAEC内皮型一氧化氮合酶(e NOS)、内皮素1(ET-1)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)以及核因子κB p65(NF-κB p65)的mRNA和蛋白表达水平;应用肿瘤坏死因子α(TNF-α)处理西格列汀干预后的HAEC,观察e NOS、ET-1、i NOS、NF-κB p65的mRNA和蛋白表达水平的变化。结果与普通培养环境(7 mmol/L葡萄糖)相比,高糖环境下HAEC的e NOS mRNA和蛋白表达降低,ET-1、i NOS mRNA和蛋白表达及p-NF-κB p65蛋白表达增高(P0.05)。与0μmol/L组相比,20μmol/L西格列汀组HAEC的e NOS mRNA、蛋白表达上调,ET-1、i NOS mRNA和蛋白表达以及p-NF-κB p65蛋白表达下调(P0.05)。与单独使用西格列汀组相比,TNF-α联合西格列汀组HAEC的e NOS mRNA和蛋白表达下调,ET-1、i NOS mRNA和蛋白表达及p-NF-κB p65蛋白表达上调(P0.05)。结论西格列汀在转录和翻译水平上增加e NOS表达、降低ET-1、i NOS的表达,该作用通过其抑制p-NF-κB p65表达而实现。提示西格列汀可能改善内皮功能,从而预防糖尿病动脉粥样硬化的形成。     

抵抗素参与血管内皮细胞功能障碍的研究进展

抵抗素是脂肪细胞分泌的一种多肽类激素,早有研究证明抵抗素通过影响胰岛素信号转导参与了胰岛素抵抗,与2型糖尿病的发生发展密切相关.越来越多研究表明抵抗素可以促进肿瘤坏死因子α、白细胞介素6等炎症标志物的表达,诱导血管炎症反应的发生,从而损伤血管内皮细胞并影响其功能.内皮细胞功能异常又是动脉粥样硬化及糖尿病血管并发症病理过程的始动环节,提示抵抗素可能在心血管疾病的发生发展中起重要作用.本文就有关抵抗素参与血管内皮细胞功能障碍的研究进展作一综述.     

血清抵抗素与代谢综合征患者内皮功能障碍的关系研究

目的：探讨抵抗素与代谢综合征（MS）患者内皮功能障碍的相关性。方法：人选2006年3月～2008年9月于我院门诊或住院的MS初诊患者48例为MS组,以门诊健康体检者48例为对照组。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测两组的血清抵抗素水平,同时应用高频超声探头分别测量两组的肱动脉基础内径、反应性充血内径、含服硝酸甘油（NTG）后内径,计算血流介导的肱动脉舒张反应（FMD）,并运用多普勒技术测定血流速度峰值。应用第95百分位数法确定MS组的血清抵抗素水平界值点（65μg／L）,根据该值将患者再分为两亚组：较高组和较低组。比较组间及组内上述参数的差别。结果：MS组的血清抵抗素水平较对照组明显升高[（83±6）μg／L：（16±5）μg／L,P〈0．001],并且其FMD显著恶化[（4．80±0．60）％：（6．00±0．50）％,P=0．006];在MS组中,与抵抗素水平较低组比较,较高组患者的肱动脉FMD显著恶化[（5．63±0．12）％：（3．68±0．20）%。P〈0．001],然而,两组间NTG介导的肱动脉舒张反应及反应性充血时峰值血流速度没有显著差别（P均〉0．05）。偏相关分析显示,控制混杂因素以后,MS患者的血清抵抗素水平与内皮功能障碍仍存在负相关性（rs=-0．373,P〈0．001）。结论：代谢综合征患者的血清抵抗素水平明显升高,与其内皮功能障碍有一定相关性,可作为代谢综合征患者的内皮功能障碍的预测指标。     

不同糖耐量人群血清抵抗素水平及其相关因素分析

酶免法测定50例2型糖尿病（DM组）、50例糖耐量减低（IGT组）及40例糖耐量正常（NGT组）个体的空腹血清抵抗素水平，结果显示IGT组和DM组显著高于NGT组（P〈0．05，P〈0．01）；回归分析显示FPG和FIns与抵抗素的关系较为密切。     

罗格列酮对2型糖尿病大鼠抵抗素基因表达的调节作用

高脂饮食和STZ联合制备的糖尿病大鼠，用罗格列酮治疗者空腹血糖、胰岛素和胆固醇比不治疗者降低，而胰岛素敏感指数升高，抵抗素基因表达明显下降。     

抵抗素与炎症、动脉粥样硬化研究进展

抵抗素最初被认为是联系肥胖与胰岛素抵抗、2型糖尿病的脂肪细胞因子。然而近年来研究发现其在人体主要与炎症有关,抵抗素不仅促进炎症的发生,而且炎症因子也可影响抵抗素的表达。动脉粥样硬化是一种慢性亚临床性炎症,大量的研究表明抵抗素与动脉粥样硬化相关。抵抗素通过局部和全身炎症作用诱导内皮功能失调、巨噬细胞的脂质沉积以及平滑肌增殖迁移,从而促进动脉粥样硬化的发生发展。     

血糖波动对抵抗素的影响

目的 探讨血糖波动对抵抗素的影响.方法 比较间歇性高糖和持续性高糖对人U937单核/巨噬细胞抵抗素分泌的影响;比较糖耐量正常组(NGT组,30例)、糖耐量受损组(IGT组,31例)和新诊断2型糖尿病组(T2DM组,31例)间口服葡萄糖耐量试验1 h血糖增幅(△Glu1-0)和血清抵抗索增幅(△lnRes1-0)的差异.结果 对照组、持续性高糖组和间歇性高糖组的抵抗素分泌水平分别为(73.62±5.07)ng/L、(97.78±7.00)ng/L、(212.49±28.81)ng/L,间歇性高糖组显著高于其余两组(P<0.05).NGT、IGT和T2DM组的△Glu1-0依次增大(P<0.05),分别为(2.31±2.30)mmol/L、(5.70±2.08)mmol/L、(8.41±2.63)mmol/L;其△InRea1-0分别为(0.05±0.05)μg/L、(0.25±0.04)μg/L、(0.37±0.03)μg/L,T2DM组显著大于NGT组(P<0.05).△lnRes1-0与△Glu1-0呈正相关(r=0.23,P=0.02).结论 血糖波动促进单核/巨噬细胞分泌抵抗素,血糖波动幅度越大,血清抵抗素升高幅度越大,因此,对糖尿病控糖治疗,应注意减少血糖波动.     

血浆抵抗素与冠心病的相关性研究

目的:观察不同类型心绞痛患者血浆抵抗素水平的变化,以及血浆抵抗素水平与代谢指标、炎症指标等之间的相关性。方法:根据造影结果及临床表现,将114例研究对象分为不稳定型心绞痛(UAP)组(46例)、稳定型心绞痛(SAP)组(37例)和对照组(31例)。收集患者一般临床资料及生化指标;免疫比浊法检测高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平;放免法检测血清胰岛素水平;ELISA法检测血浆抵抗素水平。结果:UAP组血浆抵抗素水平[12.09(8.40,18.08)ng/ml]显著高于SAP组[9.04(7.09,11.44]ng/ml,P<0.05],及对照组[8.71(6.58,11.56)μg/L,P<0.01]。抵抗素水平分别与年龄(R2=0.06,P<0.01)、白细胞计数(R2=0.05,P<0.05)以及hs-CRP(R2=0.05,P<0.05)独立正相关。结论:抵抗素可能通过影响系统的炎症反应参与冠心病的发生发展。