独活寄生汤对硝普钠诱导软骨细胞凋亡模型增殖的影响

目的探讨独活寄生汤含药血清对硝普钠诱导的膝软骨细胞凋亡模型增殖的影响。方法不同浓度硝普钠(SNP)诱导软骨细胞凋亡,MTT法检测软骨细胞半数致死量(LD50)的硝普钠浓度,以确定硝普钠最佳诱导浓度;10%独活寄生汤含药血清干预72 h后,光学显微镜观察细胞形态变化;Hoechst 33258染色,荧光倒置显微镜观察细胞凋亡情况。qPCR法检测各组转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达。结果 1 mM硝普钠为最佳诱导浓度;含药血清干预后,软骨细胞的凋亡率降低,干预组低于模型组,空白组软骨细胞中TGF-β1 mRNA的表达最高,模型组最低,干预组介于两组之间,各组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论独活寄生汤含药血清能抑制硝普钠诱导体外培养的膝软骨细胞凋亡模型的凋亡。     

新止骨增生丸对膝骨关节炎软骨细胞JAK-STAT信号通路下JAK2、P-JAK2表达及SOCS1负反馈影响

目的观察新止骨增生丸含药血清对软骨细胞JAK-STAT信号通路相关调节因子的影响,探讨新止骨增生丸对骨关节炎的作用机制。方法 C28/I2细胞系建立体外软骨细胞退变模型,分别采用空白血清、新止骨增生丸含药血清、抑制剂血清、抑制剂+含药血清干预24 h后,收集软骨细胞,采用ELISA检测软骨细胞分泌肿瘤细胞坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL-6)能力的影响,Westernblot法检测JAK2、SOCS1蛋白表达水平变化,Westernblot法检测各组软骨细胞中JAK2的磷酸化水平。结果与模型组相比,ELISA结果表明新止骨增生丸含药血清可有效降低炎性因子TNF-α和IL-6含量(P0.05);Westernblot结果与ELISA结果趋势一致,即新止骨增生丸含药血清能抑制JAK2蛋白表达(P0.05)。SOCS1负反馈调节蛋白表达升高。结论新止骨增生丸可通过调控JAK-STAT信号通路,抑制骨关节炎炎症反应,从而起到治疗骨关节炎作用。     

痹痿同治法对脂多糖诱导大鼠退变软骨细胞炎症和凋亡的影响

目的 探讨痹痿同治法方药化湿定痛汤合龟鹿二仙胶对骨关节炎的可能作用机制。方法 制备化湿定痛汤合龟鹿二仙胶含药血清及空白血清。采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立稳定的软骨细胞体外培养体系,采用免疫组化染色法对F2代软骨细胞进行鉴定。鉴定成功后分别用4个体积分数的含药血清(5%、10%、15%、20%)和空白血清处理软骨细胞(5×10³个/孔),培养24、48、72 h后,CCK-8法检测软骨细胞活性,选择提升软骨细胞活性的最佳含药血清体积分数进行后续实验。用10 mg/L脂多糖诱导F2代软骨细胞,复制退变软骨细胞模型,将细胞分为空白组、模型组、化湿定痛汤合龟鹿二仙胶含药血清组(简称“含药血清组”)。干预24 h后,采用CCK-8法检测各组软骨细胞活性,ELISA法检测各组细胞培养液上清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,qRT-PCR法检测各组软骨细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的表达,Western blotting检测...     

透骨消痛胶囊含药血清对退变关节软骨细胞表达TNF-α、IL-1β的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng.mL-1IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24、48、72 h后用TaqMan real-time PCR法检测各组mRNA表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞TNF-α、IL-1β的表达。     

独活寄生汤对膝关节骨性关节炎模型大鼠NF-κB信号通路的影响

目的观察独活寄生汤对膝关节骨性关节炎模型大鼠NF-κB信号通路的作用,探讨其缓解膝关节骨性关节炎的可能机制。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、纳曲酮组和独活寄生汤组,采用寒冷刺激法建立膝关节骨性关节炎模型。各组给予相应的药液灌胃。观察大鼠膝关节关节软骨病理形态变化;ELISA检测大鼠血清中IL-1、TNF-α的表达;Real time-PCR和Western bolt检测软骨中IκBα、NF-κBp65的基因和蛋白表达水平。结果纳曲酮组和独活寄生汤组大鼠的膝关节肿胀程度、活动度、饮食和精神都要优于模型组。纳曲酮组和独活寄生汤组大鼠膝关节软骨表面较粗糙,稍有不平整,软骨细胞排列较规则,炎性细胞浸润明显好转。与空白组比较,模型组大鼠血清中IL-1、TNF-α表达水平升高(P0.01);与模型组比较,纳曲酮组和独活寄生汤组大鼠血清中IL-1、TNF-α表达下降(P0.01,P0.05)。与空白组比较,模型组大鼠软骨中IκBα、NF-κBp65的基因和蛋白表达水平升高(P0.01);与模型组比较,纳曲酮组和独活寄生汤组大鼠软骨中IκBα、NF-κBp65的基因和蛋白表达水平降低(P0.01,P0.05)。结论独活寄生汤能缓解膝关节骨性关节炎模型大鼠的症状,其机制可能与其调节大鼠软骨中NF-κB信号通路的表达有关。     

透骨消痛胶囊含药血清对退变软骨细胞表达caveolin-1、p38MAPK的影响

目的观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养大鼠退变软骨细胞表达caveolin-1、p38MAPK的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制。方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定。用10 ng/mL IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型。模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24 h、48 h、72 h后用TaqMan real-time PCR和Western Blot法检测各组mRNA和蛋白的表达。结果透骨消痛胶囊含药血清组caveolin-1和p38MAPK基因、蛋白相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,统计均有显著性差异(P0.05)。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞caveolin-1、p38MAPK的表达。     

七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响

目的:观察七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响。方法:将10只SD大鼠随机分为中药组和空白组,每组5只。中药组大鼠灌胃给予18 g/kg七叶灵方药液,每日2次,连续给药3 d。空白组大鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液。分别制备含药血清和空白血清。采用浓度梯度诱导法构建紫杉醇耐药肺癌细胞株A549/Taxol。①将细胞分为空白组及不同浓度(5%、10%、20%)含药血清组,各组分别给予空白血清和相应浓度含药血清干预。药物干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况,筛选含药血清干预的最佳浓度。②将细胞分为空白组(常规培养基)、含药血清组(筛选的最佳浓度含药血清)、紫杉醇组(2 mg/L紫杉醇)、含药血清+紫杉醇组(最佳浓度含药血清+2 mg/L紫杉醇),各组予以相应干预。干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况。细胞培养48 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、剪切型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、剪切型PARP (cleaved PARP)的蛋白表达。结果:①与干预前相比,各浓度含药血清作用24、48 h后,A549/Taxol细胞的增殖抑制率显著升高(P0.05,P0.01),具有浓度/时间依赖性。选取20%含药血清进行后续实验。②细胞培养48 h后,紫杉醇组的细胞增殖抑制率明显高于含药血清组(P0.05),含药血清+紫杉醇组对耐药细胞的生长抑制作用明显强于紫杉醇组(P0.01);与空白组相比,含药血清组、紫杉醇组及含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率均明显升高(P0.01),且含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率高于紫杉醇组(P0.01)。③与空白组相比,紫杉醇组、含药血清组和含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量显著降低(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著上调(P0.01)。与紫杉醇组相比,含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量明显下降(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著增加(P0.05,P0.01)。结论:七叶灵方含药血清可抑制紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol的增殖,诱导细胞凋亡,且与紫杉醇联合应用具有一定的协同效应,其机制可能与调控Bcl-2/Caspase-3/PARP通路有关。     

独活寄生汤对胶原性关节炎大鼠膝关节软骨细胞退变的干预作用

目的:观察独活寄生汤对胶原性关节炎(CIA)大鼠膝关节软骨细胞的影响。方法:用牛Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,分为模型组、独活寄生汤组和布洛芬组3组,另设正常组。分别予独活寄生汤、布洛芬及生理盐水灌胃,持续30 d后取材。关节软骨组织切片采用番红-快绿染色,进行关节软骨组织学评分;透射电镜观察软骨细胞微结构变化。结果:独活寄生汤组软骨组织学评分提示软骨退变减轻,与模型组、布洛芬组比较,差异有统计学意义(P0.05)。独活寄生汤组透射电镜下软骨细胞线粒体和高尔基体数目均较模型组增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论:独活寄生汤可缓解胶原性关节炎大鼠软骨细胞退变。     

益气除痰方调控内质网应激反应抑制H1650肺癌生长的研究

【目的】探讨益气除痰方对肺腺癌H1650细胞的抑瘤作用及机制。【方法】细胞实验采用流式细胞术测定益气除痰方含药血清对H1650细胞凋亡的影响,Western blot法检测益气除痰方含药血清对H1650细胞生长阻滞和DNA损害诱导基因153(CHOP/GADD153)、生长阻滞和DNA损害诱导基因34(GADD34)表达的影响。动物实验通过复制BALB/C裸鼠H1650肺癌种植瘤模型,随机分为模型组、中药低剂量组(剂量为9.1 g·kg-1·d-1)、中药高剂量组(剂量为27.3 g·kg-1·d-1),测定各组瘤体体积与质量,Western blot法检测各组肺癌组织CHOP/GADD153、GADD34蛋白的表达。【结果】体积分数15%、30%含药血清组H1650细胞的凋亡率分别为(8.14±1.10)%、(18.21±3.07)%(P0.05),30%含药血清组CHOP/GADD153、GADD34蛋白表达依次为空白对照组的1.46倍、1.53倍。中药低、高剂量组均可显著抑制BALB/C裸鼠H1650肺癌种植瘤瘤体生长(P0.05),抑瘤率分别为19.54%、47.03%。中药高、低剂量组CHOP/GADD153蛋白表达分别为模型组的1.59倍、1.44倍(P0.05),GADD34蛋白表达量分别为模型组的1.98倍、1.49倍(P0.05)。【结论】益气除痰方可抑制肺腺癌H1650种植瘤瘤体增长,促进H1650肺腺癌细胞凋亡,其机制可能与其能调控CHOP/GADD153、GADD34在内的内质网应激反应相关。     

独活寄生汤对膝骨关节炎模型大鼠Wnt/-catenin信号通路的作用研究

目的通过观察独活寄生汤对膝骨关节炎模型大鼠Wnt/-catenin信号通路的作用,探讨独活寄生汤治疗膝骨关节炎的作用机制。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、双醋瑞因组和独活寄生汤组,除空白组外,其他各组通过关节腔注射木瓜蛋白制作骨性关节炎模型。造模成功后,双醋瑞因组给予双醋瑞因胶囊,独活寄生汤组给予独活寄生汤,空白组和模型组给予等体积的生理盐水。观察造模后及给药后各组大鼠膝关节直径变化。ELISA检测血清中BMP-2、MMP-9及MMP-9的表达水平;Real time-PCR和Western blot检测各组大鼠软骨中Wnt1、Wnt10b、-catenin的基因和蛋白表达水平。结果造模后,与空白组比较,模型组、双醋瑞因组和独活寄生汤组大鼠膝关节直径显著增加(P0.01)。给药后,与空白组比较,模型组大鼠膝关节直径明显增加(P0.01);与模型组比较,双醋瑞因组和独活寄生汤组大鼠膝关节直径显著减小(P0.01)。与空白组比较,模型组大鼠血清中BMP-2、MMP-3、MMP-9表达水平明显升高(P0.01);与模型组比较,双醋瑞因组和独活寄生汤组大鼠血清中BMP-2、MMP-3、MMP-9表达水平下降(P0.01,P0.05)。与空白组比较,模型组大鼠软骨中Wnt1、Wnt10b、-catenin的基因和蛋白表达水平明显升高(P0.01);与模型组比较,双醋瑞因组和独活寄生汤组大鼠软骨中Wnt1、Wnt10b、-catenin的基因和蛋表达水平下降(P0.01,P0.05)。结论独活寄生汤可通过下调大鼠Wnt/-catenin信号通路缓解膝骨关节炎模型大鼠的症状。     

独活寄生汤水提物对退变大鼠椎间盘软骨细胞功能的影响

目的探究独活寄生汤水提物对经IL-1β诱导退变的大鼠椎间盘软骨细胞中Wnt4、GSK-3β、β-catenin、DKK-1的影响。方法采用机械-酶消化法分离大鼠椎间盘软骨组织,进行软骨细胞体外培养、镜下观察与鉴定,分为正常组、模型组（经10 ng/m L浓度IL-1β造模）、实验1组（独活寄生汤水提物组200μg/m L干预24 h）、实验2组（独活寄生汤水提物组200μg/m L干预48 h）。观察4组大鼠椎间盘软骨细胞中Wnt4、GSK-3β、β-catenin、DKK-1 m RNA与蛋白的表达及上清液中Sox 9表达。结果 （1）第2代大鼠椎间盘软骨细胞增殖速度快,呈现多边形,胞核清晰,且含有12个核仁,融合后出现"铺路石"状,经Ⅱ型胶原法染色后,阳性对照组胞浆区域浸染为棕黄色;（2）与正常组比较,模型组中软骨细胞Wnt 4、GSK-3β、β-catenin m RNA与蛋白表达及上清液Sox 9含量明显提高（P<0.05）,DKK-1 m RNA与蛋白表达明显降低（P<0.05）;与模型组比较,实验1组、实验2组中软骨细胞Wnt 4、GSK-... 更多     

基于实验及网络药理学探讨芍药甘草汤治疗子宫腺肌病的机制

目的 研究芍药甘草汤对子宫腺肌病（adenomyosis, AM）间质细胞的影响,并基于网络药理学探讨芍药甘草汤治疗AM的分子机制。方法 原代培养AM原代间质细胞,制备芍药甘草汤SD大鼠含药血清,采用随机数字法将其分为空白组、正常血清组、芍药甘草汤含药血清低、中、高剂量组。采用MTT法检测芍药甘草汤含药血清对AM间质细胞增殖的影响;采用划痕实验检测AM间质细胞的迁移情况;采用流式细胞术检测AM间质细胞的凋亡情况;采用网络药理学方法研究芍药甘草汤治疗AM的主要活性成分、关键靶点和通路。结果 与干预24 h后比较,干预48 h后芍药甘草汤含药血清低、中、高剂量各组AM间质细胞增殖率均降低（P<0.05）,筛选出48 h干预时间的细胞进行后续实验;与空白组、正常血清组比较,干预24 h后芍药甘草汤含药血清中、高剂量组AM间质细胞增殖率降低（P<0.05）,干预48 h后芍药甘草汤含药血清低、中、高剂量组AM间质细胞增值率降低、迁移距离缩短、凋亡率升高（P<0.05）。与芍药甘草汤含药血清低剂量组比较,干预48 h后芍药甘草汤含药血清中、高剂量组AM间质细胞增殖率降低、迁移距...     

参苓白术散调控TLR4/NF-κB通路抑制LPS诱导心肌细胞炎性损伤的机制

目的 基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)/核因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)信号通路探讨参苓白术散含药血清对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导H9C2心肌细胞炎性损伤的调控机制。方法 将分化完全的H9C2心肌细胞分为空白血清组、模型组、参苓白术散含药血清组、TLR4抑制剂（TAK-242）组,每组6个复孔。除空白血清组外,其余各组以10μg·m L-1 LPS处理细胞,构建心肌细胞炎症损伤体外模型。空白血清组、模型组及TAK-242组以10%空白血清进行培养,参苓白术散含药血清组用10%含药血清培养,均培养24 h。采用CCK-8法测定各组细胞增殖情况;采用ELISA法及免疫荧光法检测细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)含量及蛋白表达水平;采用Western blot法检测TLR4、NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(degradation of proteinκB-α, IκBα)...     

六味地黄汤含药血清对HK-2细胞PHD2/HIF-1α信号途径的影响

目的以缺氧诱导的HK-2细胞为研究对象,探讨脯氨酸羟化酶2/缺氧诱导因子1α(PHD2/HIF-1α)信号途径对肾间质纤维化的影响,以及六味地黄汤含药血清干预作用。方法 40只SPF级雄性SD大鼠分为空白组和给药组,每组20只,空白组以10 m L/(kg·d)生理盐水,给药组以67.5 g/(kg·d)六味地黄汤灌胃连续1周,腹主动脉取血,离心后分离血清。体外培养HK-2细胞,将实验分为空白对照组(10%胎牛血清)、正常血清组(10%正常大鼠血清)、氯化钴(Co Cl2)处理组(150μmol/LCo Cl2+10%正常大鼠血清)和含药血清组(150μmol/LCo Cl2+10%六味地黄汤含药血清)。体外培养HK-2,分组处理24 h后,用Western Blot法和RT-PCR法分别检测六味地黄汤含药血清对缺氧诱导的HK-2细胞中PHD2、HIF-1α、结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白水平和mRNA表达的影响。结果与正常血清组比较,Co Cl2处理组HK-2细胞中PHD2的蛋白水平和mRNA表达均降低(P0.05),而HIF-1α、CTGF的蛋白水平和mRNA表达均升高(P0.05);与Co Cl2处理组比较,含药血清组HK-2细胞中PHD2的蛋白水平和mRNA表达均升高(P0.05),而HIF-1α、CTGF的蛋白水平和mRNA表达均降低(P0.05)。结论 PHD2/HIF-1α信号途径参与肾间质纤维化,六味地黄汤可能通过上调PHD2的表达,促进HIF-1α的降解,后者下调CTGF的表达,从而抑制肾间质纤维化。     

蛇黄肝炎汤含药血清对人肝癌细胞HepG-2增殖的抑制作用

目的探讨蛇黄肝炎汤含药血清对人肝癌细胞HepG-2增殖的影响。方法 25只大鼠随机分为1倍、2倍、4倍浓度含药血清组,复方环磷酰胺含药血清组(阳性药物血清组),空白血清组5个实验药物组,分别将不同浓度的蛇黄肝炎汤含药血清、阳性药物含药血清、空白血清与HepG-2细胞共同培养,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及细胞集落形成实验观察蛇黄肝炎汤含药血清体外对HepG-2细胞增殖、克隆形成能力的影响。结果与空白血清组相比较,2、4倍的蛇黄肝炎汤含药血清组吸光度值(OD值)均降低,差异均有统计学意义(P0.05)。4倍含药血清随作用时间的延长,对HepG-2细胞的抑制率逐渐增加(P0.05),当4倍浓度含药血清抑制时间为72 h时,抑制率达76.82%,与阳性药物血清组作用相当(抑制率达77.71%)。不同浓度的含药血清均能有效降低肿瘤细胞集落形成,与空白血清组相比差异均有统计学意义(P0.05),且随着含药血清浓度增大细胞集落形成数逐渐降低,集落形成抑制率随含药血清浓度的增加呈逐渐升高的趋势。结论蛇黄肝炎汤含药血清具有抑制人肝癌细胞HepG-2体外增殖、降低其克隆形成能力作用。     

尼莫地平对惊厥持续状态幼年大鼠海马GRP78、CHOP表达及细胞凋亡的影响

目的观察尼莫地平对惊厥持续状态（statusconvulsion,SC）幼年大鼠海马葡萄糖调节蛋白78／免疫球蛋白重链结合蛋白Bip（GRP78／Bip）、前凋亡因子（CHOP／GADD153）表达及神经元凋亡的影响。方法雄性幼年SD大鼠117只,随机分为正常对照组（NC组）、惊厥持续状态组（SC组）、尼莫地平预处理组（NM组）三大组;分别予生理盐水、氯化锂-匹罗卡品、尼莫地平和氯化锂-匹罗卡品进行处理,各组又均随机分为3个亚组,分别于4、24、48h处死。采用氯化锂-匹罗卡品法制作SC模型;RT—PCR技术检测海马GRP78／Bip和CHOP／GADD153mRNA表达的动态变化。原位末端标记（TUNEL）检测海马CA1区中神经细胞的凋亡。结果SC组各时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞表达均明显高于NC组（均P〈005或001oNM组各时间点TUNEL阳性细胞较SC组低,但高于NC组（P〈0．05或0．01）。与NC组相比,SC组各时间点海马GRP78／BipmRNA和CHoP／GADD153mRNA表达均升高。NM组GRP78／BipmRNA、CHOP／GADD153mRNA表达情况与SC组表达规律类似,但表达水平有差别。结论NM预处理可以影响CHOP／GADD153和GRP78／Bip的表达,缓解内质网应激,减轻惊厥后海马神经元细胞凋亡程度。     

白脉软膏含药血浆对大鼠退变滑膜细胞和软骨细胞共培养体系的作用及机制研究

【目的】观察白脉软膏含药血浆对大鼠退变滑膜细胞和软骨细胞共培养体系的干预作用,并从"滑膜—软骨"轴角度探讨骨关节炎(OA)的发病机制。【方法】取新生SD大鼠膝关节滑膜,经消化酶消化后获得原代滑膜细胞,取第1代(P1)细胞进行实验。实验设空白组、模型组、西药组、白脉组。模型组加入脂多糖(LPS)进行诱导,西药组与白脉组在模型组LPS诱导的基础上分别加入扶他林软膏、白脉软膏含药血浆干预。LPS诱导24 h后观察滑膜细胞形态变化,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测滑膜细胞上清中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。此后,各组皆与正常软骨细胞进行共培养。共培养24 h后观察软骨细胞形态,实时定量PCR(qPCR)检测软骨细胞基质金属蛋白酶3(MMP3)、带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶4(ADAMTS4)、TNF-α、性别决定区Y框蛋白9(Sox9)mRNA表达情况,Westernblot法检测Ⅱ型胶原蛋白(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、磷酸化核因子κBp65(p-NF-κBp65)表达情况。【结果】LPS诱导后滑膜细胞形态由原来的多角形变成长梭形。ELISA结果显示,模型组滑膜细胞上清中IL-1β、TNF-α含量较空白组升高(P 0.05),而白脉组IL-1β、TNF-α含量较模型组下降。软骨细胞与退变滑膜细胞培养24 h后由原来的多角形变为长梭形。qPCR结果显示:与空白组比较,模型组软骨细胞MMP3、ADAMTS4、TNF-αmRNA表达升高(P 0.05),Sox9mRNA表达降低(P 0.05);与模型组比较,白脉组软骨细胞MMP3、TNF-α、ADAMTS4 mRNA表达明显降低(P 0.05),Sox9 mRNA表达水平升高(P 0.05)。Western blot结果显示:与空白组比较,模型组软骨细胞MMP13、p-NF-κBp65表达升高(P 0.05),COL2A1表达明显降低(P 0.05);与模型组比较,白脉组软骨细胞MMP13、p-NF-κBp65表达降低(P 0.05),COL2A1表达升高(P 0.05)。【结论】退变滑膜细胞可导致软骨细胞退变并促进骨关节炎发展,白脉软膏对此病理过程有明显的抑制作用。     

独活寄生汤对大鼠腰椎间盘细胞活性及CaM-CaMK-CREB信号通路的影响

目的研究独活寄生汤治疗腰椎间盘突出症与CaM-CaMK-CREB信号通路的内在关联。方法用独活寄生汤中药血清、空白血清及胎牛血清对大鼠腰椎间盘纤维环细胞进行分组干预。采用MTT比色法检测独活寄生汤中药血清作用后的纤维环细胞生长曲线;应用western blotting技术检测独活寄生汤中药血清对CaM、CaMK、CREB表达及定量的影响,并对检测结果进行数据处理及统计学分析。结果中药血清干预后的第1天,5组之间两两比较无明显差异（P>0.05）;中药血清干预后的第2天至第7天各组与空白血清组比较均有明显差异（P<0.05）;与空白血清组比较,各剂量独活寄生汤中药血清均能可显著提高大鼠腰椎间盘纤维环细胞内的CaM、CaMKII、CaMKIV和CREB等蛋白的表达水平（P<0.01）,且随着中药剂量的增加CaM、CaMKII、CaMKIV和CREB等蛋白的表达水平提升能力也在增加。结论独活寄生汤中药血清可明显促进大鼠椎腰间盘纤维环细胞生长,随着中药剂量的增加中药血清促进细胞生长能力增强;临床上独活寄生汤治疗腰椎间盘突出症效应过程可能存在一条重要的信号通路“CaM-CaMK-CREB”。     

重建中气抗癌汤含药血清抑制胃癌SGC7901细胞作用及机制研究

目的探讨重建中气抗癌汤含药血清对人胃癌SGC7901细胞凋亡的影响及机制。方法 Wistar大鼠随机分为空白组,重建中气抗癌汤低、中、高剂量(1.55、3.1、6.2 g/kg)组及5-氟尿嘧啶(5-FU)组制备含药血清。含药血清作用SGC7901细胞后,采用流式细胞术观察细胞凋亡率,梯度聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL2-Associated X的蛋白质(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3) mRNA活性;蛋白质印迹法(Western Blot)检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况。结果与对照组比较,经加味重建中气抗癌汤各浓度组处理后,各实验组SGC7901细胞的凋亡率显著高于对照组;重建中气抗癌汤处理后的促凋亡基因Caspase-3、Bax mRNA及蛋白表达均升高,抗凋亡基因Bcl-2的mRNA及蛋白表达均降低(P0.05)。结论重建中气抗癌汤含药血清能够诱导胃癌SGC7901细胞凋亡,其机制可能与增强Caspase-3活性、上调Bax表达和下调Bcl-2表达有关。     

左归降糖舒心方含药血浆对ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞泡沫化和凋亡的影响

目的?探讨左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导巨噬细胞泡沫化和凋亡的影响及其作用机制。方法?将巨噬细胞J774A.1随机分为正常组、模型组、牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）组、左归降糖舒心方含药血浆组、西药联合含药血浆组,每组5个复孔。除正常组外其余各组以ox-LDL（100?mg/L）处理构建巨噬细胞泡沫化模型。正常组和模型组正常培养,其余各组分别用10%相应含药血浆培养24?h。CCK-8法比较各组J774A.1细胞增殖情况,计算细胞抑制率;油红O染色检测细胞内脂质蓄积水平;Western blot检测双链RNA样内质网激酶（PEPK）、活化转录因子4（ATF4）、真核翻译起始因子2α（eIF2α）、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（CHOP）及半胱氨酸蛋白酶蛋白-12（Caspase-12）的表达水平。结果?与正常组比较,模型组细胞抑制率增高,在ox-LDL浓度为100?mg/L时细胞抑制率为（50.06±0.09）%,有明显的脂质颗粒蓄积（P<0.01）。与模型组比较,各药物干预组细胞抑制率降低,可有效阻断ox-LDL的摄入及脂质堆积,其中左归降糖舒心方含药血浆组优于西药联合含药血浆组,与TUDCA组作用效应相当。ox-LDL可诱导细胞内质网应激相关蛋白p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP与Caspase-12表达上调。左归降糖舒心方含药血浆可显著抑制100?mg/L ox-LDL所致的p-PERK、p-eIF2α、ATF4的上调,降低内质网相关凋亡蛋白CHOP与Caspase-12的表达（P<0.01）,和TUDCA组作用相当(P＞0.05),其效果较西药联合含药血浆组明显（P<0.01）。结论?左归降糖舒心方含药血浆能有效改善ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化、细胞凋亡及内质网应激状态,其作用机制可能与调控内质网应激信号通路PERK/eIF2α/ATF4通路,降低细胞内CHOP与Caspase-12表达有关。