巨噬细胞在结肠癌CT-26细胞获得性5-FU耐药中的作用

目的 探讨巨噬细胞在结肠癌CT26细胞对5-FU产生获得性耐药过程中的作用及其机制.方法 分别用正常培养基(NM)、巨噬细胞培养上清(CM)及预先用低剂量5-FU处理过的巨噬细胞培养上清[CM(5-FU)]处理CT-26细胞,并给予10μmol/L 5-FU处理,用CCK-8检测各组细胞增殖情况,PI/Annexin-V流式细胞术检测各组细胞凋亡情况及Western blot检测各组细胞凋亡信号通路.建立CT26小鼠皮下移植瘤模型,应用上述条件培养基处理联合5-FU化疗,动态观察移植瘤生长情况.结果 检测细胞凋亡情况发现,5-FU处理组CT26细胞的凋亡细胞百分比显著高于对照组(P＜0.05);Western blot检测结果显示5-FU处理组凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及P-JNK的表达较对照组显著上调(P＜0.05);Western blot检测结果及结肠癌CT26细胞小鼠移植瘤模型发现P-JNK抑制剂可显著抑制由5-FU诱导的CT26细胞Caspase-3凋亡信号通路的激活;CCK-8检测结果及小鼠移植瘤模型中均发现CM(5-FU)能够显著降低CT26细胞对5-FU的化疗敏感性;细胞凋亡检测及Western blot检测结果发现CM(5-FU)可抑制由5-FU诱导的P-JNK/Caspase-3凋亡信号通路的激活.结论 5-FU可激活结肠癌CT-26细胞的P-JNK依赖的Caspase-3凋亡信号通路以发挥抗癌作用;5-FU诱导的巨噬细胞可导致结肠癌CT26细胞产生5-FU获得性耐药,其机制可能是5-FU诱导的巨噬细胞上清可拮抗CT-26细胞中5-FU激活的P-JNK/Caspase-3凋亡信号.     

5-FU化疗诱导大肠癌细胞凋亡的疗效评价

评价5-FU对大肠癌化疗的疗效。方法通过流式细胞术测定化疗组和对照组患者癌细胞的凋亡指数(AI),S期细胞比率(SPF)以及抗凋亡基因bcl-2的表达。结果化疗组SPF、AI、bcl-2较对照组均有显著性提高,经单因素直线相关分析,AI和SPF、bcl-2呈正相关。结论5-FU是通过细胞凋亡而发挥作用的,化疗后AI、SPF和bcl-2均升高,它们可作为化疗疗效及预测预后的指标。     

不同剂量电离辐射对大肠癌HCT-8细胞凋亡的影响

目的:本研究通过检测不同剂量电离辐射对大肠癌细胞凋亡的影响,探讨逆转肿瘤多药耐药的方法.方法:采用流式细胞术检测大肠癌多药耐药HCT-8细胞凋亡的变化.结果:与假照射组相比,2Gy大剂量照射后HCT-8细胞凋亡小体百分率明显增加(P<0.01),先给予低剂量照射(50mGy,100mGy,200mGy)后,再给予大剂量照射,HCT-8细胞凋亡小体百分率进一步增加(P<0.01),其中以100mGy 2Gy组增加明显,与单纯2Gy大剂量照射组比较,无统计学意义.结论:结果表明大剂量辐射可以明显诱导大肠癌多药耐药HCT-8细胞凋亡.     

半枝莲氯仿极性部位逆转人结肠癌HCT-8/5-FU耐药性研究

目的探讨半枝莲逆转人结肠癌细胞株HCT-8/5-FU耐药性的最有效部位。方法用5-FU干预HCT-8及HCT-8/5-FU细胞株,检测耐药性;用半枝莲4个极性部位分别干预HCT-8和HCT-8/5-FU细胞株,筛选最有效的抑癌部位;并用其联合5-FU干预HCT-8/5FU细胞株,观察该最有效部位对其逆转5-FU耐药性的影响。结果两株细胞比较,HCT-8/5-FU对5-FU耐药性强,其耐药指数为183.99;半枝莲的氯仿提取物（ECSB）对两株细胞的活力具有最显著的抑制作用;ECSB联合5-FU用药显示ECSB可增强HCT-8/5-FU细胞对5-FU的敏感性。结论 ECSB是逆转人结肠癌5-FU耐药细胞株的最有效部位,提示半枝莲逆转人结肠癌细胞的耐药性是其治疗结肠癌的重要机制之一。     

奥沙利铂联合5-FU/LV治疗晚期大肠癌的临床观察

目的 :观察奥沙利铂 (L -OHP)联合 5 -FU/LV方案应用于晚期大肠癌治疗的初步疗效及主要毒副反应。方法 :回顾性分析本所 2 0 0 1年 10月～ 2 0 0 4年 2月用奥沙利铂联合 5 -FU/LV方案治疗的 5 6例晚期大肠癌患者的临床资料。结果 :本组患者总有效率为 2 6 8% (15 / 5 6 ) ,均为部分缓解 ;主要毒副反应为外周感觉神经毒性 5 7 1% (32 / 5 6 ) ,均为I～II度 ;其次为消化道反应、骨髓抑制。结论 :奥沙利铂联合与 -FU/LV治疗晚期大肠癌近期疗效肯定 ,病人耐受性好 ,毒副反应较低 ,有临床应用价值     

华蟾素调控HIF-1α/VEGF通路逆转结肠癌HCT15/5-FU细胞耐药的体外研究

目的 探讨华蟾素(CINO)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人源结肠癌(CRC)耐药细胞株HCT15/5-FU的逆转作用,明确缺氧诱导因子(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)通路在逆转结肠癌化疗耐药中的调控作用。方法 MTT法检测细胞耐药性及耐药指数的变化,流式细胞术评价细胞凋亡的情况,划痕实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力的变化。Western blot检测上皮间充质转化(EMT)相关蛋白及HIF-1α/VEGF通路相关蛋白的表达。结果 与HCT15细胞相比,HCT15/5-FU的耐药指数约为8.720。CINO联合5-FU作用后,能够明显提升HCT15/5-FU细胞的药物敏感性,降低耐药指数,剂量依赖性地上调细胞凋亡水平、抑制细胞迁移和侵袭能力;Western blot结果显示CINO联合5-FU作用后能够抑制EMT及HIF-1α/VEGF通路的活性。结论 体外研究显示,华蟾素具有逆转结肠癌5-FU耐药的作用,其机制可能与调节HIF-1α/VEGF通路抑制EMT、血管生成有关。     

影响5-FU代谢及其耐药机制的研究进展

介绍了经典抗肿瘤药物5-FU体内代谢途径，临床上不同5-FU使用方法产生的各种耐药性表现，后者发生机制、影响因素和预测指标等。     

奥沙利铂联合CF和5-FU治疗晚期大肠癌32例疗效观察

目的：观察奥沙利铂联合CF和5-FU治疗晚期大肠癌的疗效和毒副反应。方法：经病理组织学诊断的晚期大肠癌32例，奥沙利铂130mg／m^2，静滴3h，第1天；亚叶酸钙200mg/d，静滴2h，第1～5天；5-FU500mg／m^2，静滴8-10h，第1-5天；21天为一个周期，所有患者都按受3个周期的治疗后间隔1个月评价疗效。结果：32例总有效率为43．8％。完全缓解0例，部分缓解14例。主要毒副作用为消化道毒性，末梢神经炎，骨髓抑制等。无治疗相关死亡者。结论：奥沙利铂为主联合化疗治疗晚期大肠癌疗效较好，毒副作用相对较小，可在临床推广使用。     

L-OHP联合5-FU／CF方案不同给药方法治疗晚期大肠癌的疗效观察

目的比较奥沙利铂（L-OHP）联合氟尿嘧啶（5-Fu）／甲酰四氢叶酸（CF）方案的不同给药方法治疗晚期大肠癌的疗效和不良反应。方法32例晚期大肠癌患者均可参加疗效评价,A组（15例）：L-OHP 130mg／m^2、静滴、第1d,CF 200mg／m^2、静滴2h、第1-5d,5-FU 375-400mg／m^2、静滴、第1-5d、4-6h,每3周重复,3周为1个周期。B组（17例）：L-OHP 85mg／m^2、静滴、第1d,CF 200mg／m^2、静滴2h、第1-2d,5-FU 500mg／m^2、静推,再以600mg／m^2持续泵入22h、第1-2d,每2周重复,4周为1个周期。结果A组CR1例,PR6例,总有效率为46.6％。B组CR 1例,PR7例,总有效率41.1％。结论L-OHP联合5-FU／CF不同的给药方法治疗晚期大肠癌疗效相近,毒副作用少。     

MiR-195对BEL-7402/5-FU细胞5-氟尿嘧啶耐药性的影响

目的 探讨miR-195对BEL-7402/5-FU细胞5-氟尿嘧啶药物敏感性的影响。方法采用qRT-PCR检测BEL-7402细胞与BEL-7402/5-FU细胞中miR-195的表达水平。将miR-195质粒载体瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞;MTT检测细胞药物敏感性的改变。结果相比于BEL-7402细胞,miR-195在BEL-7402/5-FU细胞中表达水平下调;miR-195转染组的细胞增殖抑制率较miRNA阴性对照组及未转染组明显增高。结论MiR-195能够增加BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶的药物敏感性,抑制细胞增殖。     

shRNA沉默DNA-PKcs表达对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU耐药性的影响

目的观察shDNA-PKcs沉默DNA-PKcs基因对肝癌耐药细胞Bel7402/5-FU耐药性的影响。方法采用双酶切、测序分析鉴定shDNA-PKcs干扰质粒;用阳离子脂质体法将shDNA-PKcs质粒转染BEL7402/5-FU细胞,根据荧光细胞数计算转染率,Real-time PCR及Western blot检测沉默效率;MTT法检测细胞药物敏感性;Real-time PCR和Western blot检测P-gp mRNA和蛋白表达。结果双酶切鉴定结果显示质粒约为6300bp,测序结果显示插入序列为shDNA-PKcs序列。荧光细胞计数显示质粒的转染率为62.2%。Real time PCR及Western blot检测结果显示DNA-PKcs mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为82.6%、71.8%;MTT检测结果显示shDNA-PKcs实验组的ADM和5-FU的IC50值比对照组ADM、5-FU低（P〈0.05）,DDP和MMC的IC50值与对照组比无统计学意义（P〉0.05）。Real time PCR和Western blot检测结果显示实验组P-gp mRNA、蛋白表达水平均比对照组低（P〈0.01）。结论 shDNA-PKcs干扰质粒能够有效抑制BEL7402/5-FU细胞中DNA-PKcs表达,增加细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与P-gp蛋白的下调有关。     

两种5-FU化疗方案毒副作用的比较

5-氟尿嘧啶(5-FU)是大肠癌化疗最常用的药物,其单药间歇静脉滴注的有效率为20%左右,持续输注的有效率较高,约30%.作为生物调节剂的甲酰四氢叶酸(LV),可使苷酸合成酶与5-氟-2'-脱氧尿苷-磷酸所形成的共价复合物更加稳定,从而增强5-FU的细胞毒作用,所以加用LV可使5-FU的有效率升至47%.但关于两种化疗方案的毒副作用比较,目前尚无统一的看法.笔者就5-FU间歇静脉注射的4周方案与5-FU持续输注46h的2周方案的毒副反应进行了比较,报道如下.     

奥沙利铂、亚叶酸钙联合5-FU联合治疗晚期大肠癌的疗效观察

目的:探讨奥沙利铂、亚叶酸钙联合5-FU治疗晚期大肠癌近期疗效及不良反应。方法:奥沙利铂100mg/m2,ivgtt 2h,d1,必须单独输注,在5-FU之前用药。亚叶酸钙200mg/m2,ivgtt 2h,d1-2。5-FU 400mg/m2,iv,然后600mg/m2持续ivgtt 22h,d1-2。1周期为21d,治疗3周期后间隔4周进行疗效评定。结果:本组完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、微效(MR)、稳定(SD)、进展(PD)及有效率分别为2例(3.6%)、22例(39.3%)、16例(28.6%)、5例(8.9%)、11例(19.6%)、42.9%,不良反应主要表现为白细胞减少,依次为恶心呕吐、神经毒性、腹泻及外周神经炎,多发生在Ⅱ度以下,Ⅲ度较少,无Ⅳ度,无治疗相关性死亡。结论:奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶、亚叶酸钙联合治疗晚期大肠癌,具有疗效确切、不良反应轻、耐受性高的特点,可作为理想化疗方案在临床上推广并应用。     

MiRNA-122对5-氟尿嘧啶诱导BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响

目的探讨微水RNA-122(miR-122)对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响。方法构建miR-122和阴性对照质粒瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测caspase-8,caspase-9和caspase-3蛋白表达水平。结果仅用miR-122处理BEL-7402/5-FU细胞时,与未转染组和转染对照组比较,miRNA-122转染组细胞凋亡率增加,用10μmol/m L 5-FU作用BEL-7402/5-FU细胞24 h后,与未转染组和转染对照组比较,miR-122转染组细胞凋亡率明显增加;与未转染组和转染对照组比较,转染了miRNA-122的BEL-7402/5-FU细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3前体蛋白表达降低,活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达升高。结论 miR-122能够下调BEL-7402/5-FU细胞中caspase-8、caspase-9和caspase-3前体蛋白表达,上调活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达,miR-122能促进5-FU诱导的BEL-7402/5-FU细胞凋亡。     

奥沙利铂联合5-FU、FA治疗大肠癌31例疗效分析

目的 :评价国产奥沙利铂联合 5 -FU、FA治疗大肠癌的临床疗效和不良反应。方法 :患者 3 1例 ,奥沙利铂13 0mg/m2 静脉滴注 2小时d1 ,5 -FU 3 0 0mg/m2 静脉持续注射 2 4小时d1 ～d5 ,FA 10 0mg静脉滴注 2小时d1 ～d5 ,2 1d为 1周期 ,治疗 2周期后评价疗效。结果 :在 3 1例中 ,部分缓解 12例 ,有效率 3 8.7% ,主要不良反应为感觉神经毒性及贫血 ,胃肠道反应轻可耐受。结论 :该方案是治疗大肠癌的有效方法 ,毒副反应轻。     

ONECUT2高表达介导胃癌复发患者5-FU化疗耐药

目的:探究One cut结构域家族成员2(ONECUT2)是否可以作为对5-FU耐药的胃癌复发患者的治疗靶点。方法:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析ONECUT2基因在胃癌患者及胃癌复发患者的表达情况。利用基因集富集分析(GSEA)评估TCGA数据库中ONECUT2表达量与药物代谢相关生物学过程的相关性。利用CCK-8细胞毒性实验评估胃癌细胞敲低或过表达ONECUT2对5-FU的耐药情况。分析30例胃癌术后复发患者ONECUT2表达量与5-FU治疗效果的相关性。结果:TCGA数据库分析显示,在经受过化疗且复发的胃癌患者中,ONECUT2高表达的患者无病间隔期(disease-free interval, DFI)更短。GSEA分析结果表明,ONECUT2高表达与异生药物代谢通路呈正相关,这提示可能与胃癌患者的耐药相关。体外实验中,敲低ONECUT2降低胃癌细胞对5-FU的半数抑制浓度(IC₅₀)值;反之,过表达ONECUT2增加细胞对5-FU的IC₅₀值。30例胃癌复发患者对5-FU的药物敏感性与ONECUT2表达量相关。结论:胃癌复...     

人胰腺癌细胞中对5-氟尿嘧啶耐药相关基因的检测分析

目的:利用基因芯片技术,对体外筛选获得的耐不同浓度5-氟尿嘧啶(5-FU)的胰腺癌细胞株基因表型进行对比,找出不同耐药表型细胞株的基因表达改变情况,以此发现一些与胰腺癌细胞5-FU耐药相关的重要基因或通路?方法:用不断增加浓度的5-FU反复刺激细胞,直到细胞能完全耐受不同浓度5-FU,获得耐不同浓度5-FU的MIAPaCa-2细胞株?由基因芯片筛选出明显改变的基因后再用实时定量PCR方法验证?结果:本研究成功地获得两种对5-FU耐药的胰腺癌细胞株,低耐药表型MIA-FU-2.4和高耐药表型MIA-FU-10.0?基因分析结果提示耐药可能与广泛的基因表达改变相关?在MIA-FU-2.4和MIA-FU-10.0两种表型中分别有1 075及1 628个基因出现了表达改变,涉及细胞周期?细胞黏附?信号转导?DNA修复和凋亡等多种生物学功能?结论:胰腺癌MIAPaCa-2细胞株5-FU耐药的发生涉及多种细胞生物学功能改变,特别与凋亡?DNA修复?细胞周期等基因和一些信号转导途径相关?     

蛋白激酶C对大肠癌耐药株LoVo／Adr细胞多药耐药性的影响

目的 探讨蛋白激酶C（PKC）活性对大肠癌多药耐药性的影响以及可能涉及的调控机制。方法 （1）以放射性^32P掺入法检测了在十字孢碱（SP）和佛波脂（PMA）作用下大肠癌耐药细胞LoVo/Adr中PKC活性的变化；（2）以流式细胞术检测了PKC活性对LoVo/Adr细胞摄入阿霉素的影响；（3）以RT-PCR法检测了PKC活性对LoVo/Adr细胞mdrl基因表达的影响。结果 （1）PMA可双向调节LoVo/Adr细胞的PKC活性，SP对LoVo/Adr细胞胞浆和胞膜中的PKC活性均有显著的抑制效果；（2）在PMA作用30min时，LoVo/Adr细胞中阿霉素的摄入量显著减少。作用24h时，阿霉素摄入量显著增加；（3）PMA和SP均不影响mdrl基因的表达。结论 PKC可调控细胞的多药耐药性，但并非通过调节mdrl基因的mRNA水平而实现。     

p53基因与5-FU联合作用诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的:研究通过转染野生型p53基因,并联合5-FU诱导人鼻咽癌CNE2细胞的凋亡作用.方法:将克隆有野生型p53基因的pUHD10-3-p53质粒.用脂质体(Lipofectamine)介导的方法转染人鼻咽癌CNE2细胞,同时在培养液中加入5-FU;以RT-PCR检测p53基因的表达,通过AO/EB染色和流式细胞术等方法进行细胞凋亡分析.结果:经转染wt-p53基因后,基因在细胞中的表达增加.在荧光显微镜下可观察到凋亡细胞增多.流式细胞仪检测结果示,经转染质粒pUHDl0-3-p53后,细胞的凋亡率为35.2%,单纯用5-FU组的细胞凋亡率为33.8%,而联合作用组的细胞凋亡率可达53.9%.结论:野生型p53基因与5-FU均可诱导人鼻咽癌细胞CNE2发生凋亡,野生型p53基因与5-FU联合作用,促进鼻咽癌细胞凋亡.     

用18F-FDG细胞摄取早期评价5-FU和热疗对肠癌细胞HCT-116的疗效

摘要 目的 建立稳定的检测结肠癌HCT-116细胞摄取18F-FDG的方法,探讨用18F-FDG 细胞摄取抑制率评价化疗、热疗和热化疗联合对肠癌细胞HCT-116的杀伤效应。方法：1.依次改变细胞结合实验条件中细胞浓度,反应时间,18F-FDG放射性活度,葡萄糖的浓度,测定结肠癌HCT-116细胞的18F-FDG细胞摄取率。2.在加入不同浓度5-FU后,分别采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）测定细胞生长抑制率、18F-FDG细胞摄取率和细胞摄取抑制率。3.在化疗(5-FU 浓度为100μg/ml 10μl,)、热疗（43℃,40min）和热化疗（上述两种条件联合,热疗后即加入5-FU）治疗24h后,测定细胞生长抑制率和18F-FDG细胞摄取抑制率,用流式细胞仪测早期凋亡率,透射电镜观察细胞形态变化,测定细胞培养液中葡萄糖浓度和乳酸脱氢酶浓度变化。结果：1.当细胞浓度1×106/瓶、加入18F-FDG放射性活度为3.7KBq,葡萄糖浓度为5.5mmol/L,反应时间为100min,18F-FDG细胞摄取率为44.25±2.19% 。2.加入浓度不同浓度5-FU 100μL作用24h后,18F-FDG细胞摄取率随5-FU剂量增加而下降,两者呈负相关（r=-0.879,P＜0.01）,MTT实验细胞生长抑制率与18F-FDG细胞摄取抑制率呈正相关（r=0.831,P＜0.01）。3.HCT-116细胞经热疗、化疗、热化疗治疗24h后,18F-FDG细胞摄取抑制率为（12.94±2.80）%、（28.25±4.59）%、（21.60±3.68）%,化疗组较热疗组和热化疗组都高,差异有统计学意义（P＜0.01）。4.治疗24h后,热疗组、化疗组和热化疗组的早期凋亡率分别为（9.80±0.16）%、（19.80±2.40）%、（15.70±1.80）%,电镜下可见早期凋亡细胞,细胞培养液中葡萄糖浓度和乳酸脱氢酶浓度较治疗前高。结论： 18F-FDG细胞摄取抑制率可以早期评价5-FU和热疗对结肠癌细胞的杀伤作用,温热（43℃,加热40min）对低浓度5-FU无明显协同作用。