多重巢式聚合酶链反应在疟疾混合感染检测与分型中的应用

目的:应用能够同时检测恶性疟(P.falciparum)、间日疟(P.vivax)、卵形疟(P.ovale)、三日疟(P.malarie)及其混合感染的多重巢式PCR方法,对疑似疟疾混合感染样本进行检测,评价其在疟原虫混合感染及分型中的应用价值,旨在为疟疾流行病学调查、疟疾混合感染的确诊提供一种快速高效、特异性强、灵敏度高的实验室诊断方法,为传统的镜检法提供有效的补充。方法:根据恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫和三日疟原虫的18SSU rRNA基因序列设计5对引物(1对通用引物、4对特异性引物),以等比例混合的4种疟原虫核酸为模板,建立疟疾多重巢式PCR检测方法,并应用该法对28份疑似疟疾混合感染样本进行检测及测序验证,将其结果与镜检法比较。结果:28份疑似混合感染样本中混合感染样品数为6例,其中恶性疟和间日疟混合感染样品5例,恶性疟和卵形疟混合感染样品1例。结论:本研究建立的多重巢式PCR检测方法能够同时用于恶性疟、间日疟、卵形疟、三日疟及其混合感染样本的检测,在疟疾混合感染的确诊与分型上较镜检法有明显的优势和更高的应用价值。     

疟疾的临床观察及护理

疟疾是由疟原虫寄生于人体引起的寄生虫病,主要经按蚊叮咬传播,临床特点为周期性发作的寒战、高热、继之大汗,反复发作者可伴贫血和脾大.近两年我科收治疟疾病例10余例,均有疟疾流行区居住或旅行史,经治疗治愈出院,现报告如下: 1分类和流行病学 1.1寄生于人体的疟原虫有4种,即:间日疟,三日疟,卵形疟,恶性疟. 1.2传染源 病人和无症状的血中有配子体的人是疟疾的主要传染源.     

武汉市两种输入性卵形疟巢式PCR检测

目的 了解巢式PCR鉴别卵形疟curtisi及变种wallikeri效果。方法 收集武汉市2008—2015年疟疾患者血样和流行病学资料。提取患者血样中的疟原虫DNA,进行巢式 PCR 检测。结果 采用巢式PCR检测疟疾患者282例,其中恶性疟原虫206例、间日疟原虫62例、三日疟原虫6例、卵形疟原虫19例。巢式PCR结果显示,卵形疟原虫经典型curtisi 和变种型wallikeri 分别扩增出800 bp和780 bp目的 条带。2012—2015年卵形疟占当年疟疾患者分别为4.1%（2/49）、12.2%（9/74）、8.2%（4/49）、11.4%（4/35）,卵形疟总数占全部病例的6.74%,其中,经典型curtisi 14例,变种型wallikeri 3例,混合感染2例,变种型wallikeri检出率占卵形疟26.3%。19例卵形疟病例全部为男性,感染输入地主要分布在撒哈拉沙漠以南地区,2例卵形疟混合感染分别来自安哥拉和尼日利亚。其中有2例卵形疟原虫curtisi型镜检 结果分别为间日疟和恶性疟,1例血片重新复核后为卵形疟,另1例巢式PCR检测为间日疟和卵形疟混合感染型。结论 分子生物学技术可以减少卵形疟误诊的情况;加强卵形疟curtisi及变种wallikeri的巢式PCR 检测,避免误诊。     

云南省昭通市疟疾的实验室诊断研究

目的通过多种实验室方法综合诊断昭通市疟原虫疑似病例,为疟疾防治提供参考。方法用疟原虫检测试纸条(immune colloidal gold technique,ICGT)先做快速检测,然后按照镜检标准制作厚、薄血涂片,经常规吉氏染色后在油镜下(×1 000)的薄血膜观察疟原虫形态,鉴定虫种。最后针对间日疟原虫(Plasmodium vivax)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、三日疟原虫(Plasmodium malariae)和卵形疟原虫(Plasmodium ovale)4种疟原虫的18s rRNA基因进行巢式PCR扩增。结果 10份县区采集的疑似病例,快速试纸条1532未做,3份可诊断为恶性疟,其它6例皆不能明确诊断;显微镜下4份可明确诊断为恶性疟,其中1201为高密度恶性疟,3份可明确诊断为间日疟,1649县级初次镜检误诊为间日疟,省级镜检确诊为卵形疟,1532县级初次镜检误诊为恶性疟,省级镜检未发现疟原虫;所有病例皆经省级采用巢式PCR扩增,4份确诊为恶性疟,3份确诊为间日疟,1649确诊为卵形疟,1532和A无条带。经快速检测、镜检、巢式PCR,证实昭通市2013年9月以来报告的10例疟疾病例分别为3例间日疟、4例恶性疟、1例卵形疟、2例阴性。结论基层镜检技术不稳定;胶体金法诊断结果不能作为确诊依据,镜检准确性依赖于镜检人员技术水平,剿式PCR法诊断最为准确;疟疾确诊需逐级复核和多种实验室方法综合判断。     

骨髓像中检出疟原虫影响因素的探讨

骨髓像中检出疟原虫影响因素的探讨丁颖张曼（白求恩医科大学第一临床学院检验科１３００２１）陈颖（松源市宁江区结核防治所１３１２００）疟原虫为疟疾的病原体。人体感染有间日疟、恶性疟、三日疟，在疟疾发病率上以间日疟为多，恶性疟为次，而各种疟原虫可分为滋养体...     

疟疾

疟疾,是疟原虫通过蚊子传播的一种传染病。当蚊子叮咬疟疾病人或带虫者(指无症状的疟原虫感染者)时,疟原虫随病人血液进入蚊子体内,最后发育成孢子体。这些蚊子再叮咬健康人时,孢子体即进入人体内引起感染。本病具有流行范围广、发病率高、易复发等特点。发病时一般先冷后烧,再出一身汗即退热。由于反复发作,病人常贫血,脾肿大等。本病多在夏秋季流行,常见有间日疟、三日疟和恶性疟三种。     

中国疟疾的流行及预防措施

<正> 疟疾是经按蚊传播,由疟原虫引起的一种寄生虫病。临床以周期性发冷、发热、出汗、定时发作,伴有贫血、脾肿大为主要特征。分为间日疟、三日疟、恶性疟、卵形疟。它广泛分布在北纬60℃至南纬40℃之间的147个国家和地区,40%以上的世界人口不同程度地受到疟疾的威胁。     

山东省输人性疟疾住院病例流行病学调查

摘要：目的了解山东省输入性疟疾病例流行病学特征。方法对山东省2007年1月～2012年12月的126例输入性疟疾住院病例进行描述性流行病学调查分析。结果山东省近几年输入性疟疾住院病例逐年增加;126例疟疾病例中118例来自非洲国家,占93．65％,其中恶性疟116例,占92．06％,;间日疟8例,占6．35％,卵形疟2例,占1．59％;恶性疟主要来自非洲,2例来自大洋洲巴布亚新几内亚。8例间日疟6例来自东南亚,1例来自大洋洲巴布亚新几内亚,1例来自非洲苏丹。2例卵形疟均来自赤道几内亚;男性124例,占98．41％;年龄分布以青壮年为主,占98．41％;职业农民工及技术工人、司机从事野外工作的119例,占94．44％;地区分布以鲁西南地区最多。发病至就诊平均时间（10±7）a;住院前误诊率34．9％。结论山东省输入性恶性疟发病人数逐年增多,且感染疟原虫虫种呈多样性,主要是恶性疟和间日疟,第一次发现卵形疟2例;误诊率高于其他疾病。为如期实现山东省消除疟疾目标,仍需加强对基层医疗机构、疾病预防控制机构相关人员及出入境管理部门疟疾防治知识培训,加强对劳务输出人员健康教育和回国人员的检测管理。     

多重荧光定量PCR测定疟原虫方法建立

目的建立可同时检测四种疟原虫的多重荧光定量PCR方法。方法 PCR扩增四种疟原虫目的片段,克隆并构建标准质粒,进行梯度稀释。体系按浓度加入五重引物探针,对临床四种疟原虫阳性血样及单一腺病毒和肺炎支原体阳性血样、人基因组进行特异性检测。将本地区优势虫种恶性疟及间日疟阳性血样混合并检测。每个反应做一式三份验证重复性。检测标准品梯度浓度,获得体系最低检测限。结果成功构建四种疟原虫标准质粒。对20份样本进行检测,其中15份恶性疟,3份间日疟,1份三日疟,1份卵形疟,与原有确证结果一致。对单一腺病毒及肺炎支原体阳性血样、人基因组检测结果均为阴性。恶性疟及间日疟阳性血样混合检测显示3条特异性扩增曲线。三个复孔的变异系数在0.17~4.96之间。恶性疟可检测到10~2copies/m L,间日疟、三日疟、卵形疟可检测到10~3copies/m L。结论建立五重荧光定量PCR检测四种疟原虫特异性及重复性均较好,灵敏度高,可用于疟原虫快速筛选及分型鉴定。     

彝良县重点疟区乡镇十年发热病人疟原虫血检调查

1996年一2005年在彝良县间日疟流行的牛街、洛旺、柳溪等重点疟区乡镇,进行发热病人疟原虫血检监测十年,监测结果血检当地无外出史发热病人12579例,检出间日疟疟原虫阳性77例,阳性率为0.61％;血检当地居民外出打工回归的发热病人610例,检出疟原虫阳性病例66例(间日疟63例,恶性疟3例),阳性率为10.82％。提示,当地居民外出感染回归发病的疟疾病例已占当地疟疾疫情总数的46.15％,流动人群疟疾管理问题不可忽视。     

疟疾的实验诊断和治疗的新进展

<正> 疟疾是由疟原虫在红细胞内裂体增殖引起的发热性传染病,以按蚊为其传播媒介。依据感染原虫种类可分为间日疟、三日疟、恶性疟和卵形疟四种,有时也出现两种以上原虫感染的混合型疟疾。 疟疾的临床主征为发热、贫血和脾肿大。通过血塗片检出原虫、鉴别虫种是确诊的可靠方法。镜检时常用的染色方法为姬氏     

疟疾

疟疾是由疟原虫所致的虫媒传染病。在20世纪30-40年代,疟疾几乎遍及全国,解放后经过多年的努力防治,发病率已大大降低。但小规模暴发不断,南方不少地区恶性疟疾病例未见明显降低。按照疟疾流行的性质、疟疾的类型、媒介(按蚊的差异)可将我国疟疾流行区分为三大区:北纬25度以南的山区为高度疟区,恶性疟多为间日疟;北纬25～32度之间为中度疟区,间日疟与恶间疟均存在;北纬32度以北为非稳定疟区。由此可见,我国大部地区均有疟疾流行。它的传染源是患者及带疟原虫者,经按蚊传播,人群普遍易感。夏秋发病多,但在热带及亚热带地区一年4季都可发病。…     

应用套式PCR技术检测我国西南部分疟区疟原虫的感染状况

目的　建立鉴别人体四种疟原虫的套式 PCR技术 ,检测我国西南部分疟区疟原虫的感染情况。方法　选用两组疟原虫引物 ,扩增 SSU r DNA特定片段 ,经琼脂糖凝胶电泳、溴化乙锭染色 ,紫外检测凝胶分析仪观察并摄像。结果　采用上述方法扩增出间日疟、恶性疟和三日疟分别为 10 4bp、10 2 bp和 115 bp特异片段。所检测的 138份疟疾患者血样中 ,四川名山县 95份均为间日疟单纯感染 ,筠连县 37份中 10份为与间日疟和 /或恶性疟呈混合感染的三日疟 ,云南金平县的 6份均为合并恶性疟的两种或两种以上疟原虫混合感染。结论　所建立的套式PCR检测系统具有敏感性高、特异性好和稳定可靠等优点 ,在疟疾诊断、虫种鉴别、混合感染的判定、大规模流行病学研究和疫情监控预测等方面具有实际应用价值。     

应用套式PCR技术检测我国西南部分疟区疟原虫的感染状况

目的 建立鉴别人体四种疟原虫的套式PCR技术，检测我国西南部分疟区疟原虫的感染情况。方法 选用两组疟原虫引物，扩增SSUrDNA特定片段，经琼脂糖凝胶电泳、溴化乙锭染色，紫外检测凝胶分析仪观察并摄像。结果 采用上述方法扩增出间日疟、恶性疟和三日疟分别为104bp、102bp和115bp特异片段。所检测的138份疟疾患者血样中，四川名山县95份均为间日疟单纯感染，筠连县37份中10份为与间日疟和/或恶性疟呈混合感染的三日疟，云南金平县的6份均为合并恶性疟的两种或两种以上疟原虫混合感染。结论 所建立的套式PCR检测系统具有敏感性高、特异性好和稳定可靠等优点，在疟疾诊断、虫种鉴别、混合感染的判定、大规模流行病学研究和疫情监控预测等方面具有实际应用价值。     

龙岩市防治疟疾50年回顾

龙岩市辖7个县(市、区)是以中华按蚊为媒介的间日疟中高度流行区。据1937年资料记载，龙岩市二县曾是恶性疟、三日疟、间日疟混合流行区，五县曾是恶性疟、间日疟混合流行区，五县曾捕获微小按蚊。1950年疟疾发病率达108.03/万，疟疾曾是龙岩市危害严重的寄生虫病之一。     

昭通地区彝良县三个乡镇流动人群外出感染疟疾血检调查

1996年～2000年在彝良县,间日疟流行的牛街、洛旺、柳溪三个重点乡镇,进行发热病人疟原虫血检监测五年,血检当地无外出史发热病人7781例,检出间日原虫阳性53例,阳性率为0.68％,血检当地居民外出打工回归的发热病人403例,检出疟原虫阳性病例48例(间日疟46例,恶性疟2例),阳性率为11.91％。提示,当地居民外出感染回归发病的疟疾病例已占当地疟疾疫情总数的47.52％,流动人群疟疾管理问题不可忽视。     

武汉市2009—2018年输入性非恶性疟病例血液检验指标

目的 探讨输入性非恶性疟的流行特征及血液临床检验指标特征,为诊断及预防提供科学依据。方法 收集2009—2018年武汉市境外输入性间日疟、卵形疟和三日疟的非恶性疟确诊病例的流行病学资料和生化检验结果,分析病例发病—诊断时间与血液指标的相关性。结果 共收集28例完整的流行病学和临床血液检测资料,其中间日疟9例、卵形疟15例、三日疟4例,均为境外输入性非恶性疟。间日疟主要由亚洲和东北非洲输入,卵形疟和三日疟全部由撒哈拉以南非洲输入。12例回国后超过3个月发病,潜伏期最长14个月,发病—诊断时间1~30 d,超过6 d 16例,中位数7.50 d。与血液指标正常值比较,28例非恶性疟血红蛋白、白蛋白下降,总胆红素、间接胆红素升高,肾功能正常。发病—诊断时间超过6 d组的病例红细胞、白细胞计数、血红蛋白及红细胞压积较6 d内组下降（P<0.05）及淋巴细胞比率恢复正常值水平,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 境外输入性非恶性疟感染致贫血和肾损害不明显,长潜伏期和发病-诊断时间较长者,血红蛋白、红细胞压积、血小板和总蛋白及白蛋白下降明显,三日疟贫血较明显。     

恶性疟疾合并黑尿热一例

疟疾在青海属少见病尤其合并黑尿热尚未见报道。疟疾是热带和亚热带地区的流行病,人们称疟疾为热带病之首,遍布全非洲。非洲以恶性疟为主,几乎无间日疟,三日疟较少见,卵形疟在东非偶有报道,现将我们在非洲工作中遇到恶性疟并发黑尿热一例报道如下:     

恶性疟的防治

恶性疟是人体四种疟原虫巾危害最为严重的一种疟疾。据WHO报告,1983年全世界因恶性疟死亡者为一百万人。本病流行于热带、亚热带地区,在我国则流行于南方各省。近年来,我省间日疟流行得到了有效控制,但个别县,恶性疟却呈现局部暴发流行趋势。为更好开展防治工作。现就恶性疟防治中的几个问题作一简要介绍。     

用食蟹猴原虫抗原作间接荧光抗体试验对间日疟和恶性疟的检测效果比较

间接荧光抗体试验(IFAT)是一种较广泛应用于疟疾血清学诊断的方法。目前国内均用食蟹猴疟原虫抗原作IFAT调查疟疾,为了解不同疟原虫种感染对此种抗原的敏感性,以便为不同虫种的疟疾流行区调查提供依据,我们于1988年选择部份间日疟和恶性疟患者进行比较观察。