支气管哮喘小鼠模型肺组织和肺泡灌洗液高迁移率族蛋白B1的表达及地塞米松的干预作用

目的 探讨支气管哮喘小鼠模型肺组织和肺泡灌洗液的高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达变化及地塞米松的干预作用.方法 18只雌性Balb/C小鼠,随机分成3组,分别为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,鸡卵白蛋白(OVA)组,OVA/地塞米松治疗组;制作支气管哮喘模型;全身体积描记法检测小鼠气道反应性,支气管肺泡灌洗液(BALD作细胞分类计数,酶联免疫吸附试验(EUSA)测定BALF上清中HMGB1含量,左肺行苏木精-伊红(HE)染色,蛋白免疫印迹方法检测右肺组织HMGB1表达.结果 1、成功制作支气管哮喘模型.2、BALF中HMGB1含量变化:OVA组肺泡灌洗液中HMGB1含量(6.31±4.05ng/ml)显著高于对照组(2.59±0.73ng/ml)(P=0.017);与OVA组比较,OVA/地塞米松组(3.39±0.50ng/ml)小鼠支气管肺泡灌洗液HMGB1含量无显著降低(P=0.052).3、肺组织HMGB1的表达情况:OVA组小鼠肺组织HMGB1相对表达量(HMGB1/TUBULIN)(2.08±0.87)显著高于对照组(0.93±0.18)(P<0.05);与OVA组比较,OVA/地塞米松组小鼠肺脏HMGB1表达量(1.15±0.48)无显著减低(P=0.133).结论 HMGB1在支气管哮喘小鼠的肺组织和支气管肺泡灌洗液中表达明显增加,但地塞米松无明显拮抗效果.提示HMGB1可能是哮喘防治的新靶点.     

高迁移率族蛋白B1对血管内皮细胞ECV-304活化作用的研究

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGBI)诱导血管内皮细胞活化的信号转导机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)株ECV304,并将其分为对照组、HMCBl刺激组、丙酮酸乙酯(EP)处理组,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清TNF-α水平变化、免疫荧光显微镜观察血管内皮细胞NF-KB活性的变化、凝胶迁移率实验(EMSA)检测细胞内NF-K B DNA结合活性的变化.结果 HMGBl可诱导人脐静脉内皮细胞NF-KB在短时间内活化,促进TNF-α表达;EP处理后可显著降低NF-KB活性,抑制TNF-α表达.结论 HMGBl可能通过活化血管内皮细胞NF-K B进而诱导TNF-α分泌,参与脓毒症的病理生理过程.EP可通过拮抗HMGBl刺激血管内皮细胞NF-KB活化从而发挥保护作用.     

高迁移率族蛋白B1在肝癌细胞中的表达及其临床意义

目的比较不同转移能力人肝癌细胞和人正常肝细胞中高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein box1,HMGB1)mRNA和蛋白表达的差异,以探索HMGB1在原发性肝癌生长和转移中的临床意义。方法应用PCR法检测高转移人肝癌细胞LM3、低转移人肝癌细胞HEPG2和人正常肝细胞LO2 HMGB1mRNA的表达,Western blot法检测高转移人肝癌细胞LM3、低转移人肝癌细胞HEPG2和人正常肝细胞LO2 HMGB1蛋白的表达。结果高转移人肝癌细胞LM3、低转移人肝癌细胞HEPG2的HMGB1mRNA和蛋白均较正常肝细胞LO2的表达明显升高(P<0.05);而且,高转移人肝癌细胞LM3较低转移人肝癌细胞HEPG2 HMGB1mRNA和蛋白的表达也明显升高(P<0.05)。结论 HMGB1在高转移人肝癌细胞LM3中较在低转移人肝癌细胞HEPG2和正常肝细胞LO2中高表达,提示HMGB1可能与原发性肝癌的生长和转移有关。     

高迁移率族蛋白B1在免疫应答中作用的研究进展

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种DNA结合蛋白,在细胞外有细胞因子功能,能启动免疫反应,引起细胞炎性效应。生理状态下,HMGB1有核结合蛋白的作用,释放进入细胞间隙后,则表现出晚期炎性因子作用。HMGB1的识别及跨膜信号转导需要一系列分子的参与,其受体主要是晚期糖基化终产物、Toll样受体等。HMGB1作为一个内源性分子,促进免疫反应和组织内稳态。     

高迁移率族蛋白B1 在类风湿关节炎中的 表达水平研究

目的 探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在类风湿关节炎中的表达。方法 选取2017 年5 月- 2018 年5 月在吉林大学第一医院行关节置换术或滑膜清理术的类风湿关节炎患者49 例作为研究组;另选取 该院同期行手术治疗的骨关节炎患者30 例作为对照组。所有研究对象入院后第3 天清晨空腹采集外周静脉 血,分离血清,采用酶联免疫吸附法测定HMGB1 含量;取保存的所有研究对象的病损关节滑膜组织石蜡病 理切片标本,采用链霉菌抗生物素蛋白- 过氧化物酶连结（SP）法检测HMGB1 的表达。结果 研究组血清 HMGB1 水平高于对照组（P <0.05）。研究组HMGB1 阳性表达率高于对照组（P <0.05）。研究组SP 法染色 评分高于对照组（P <0.05）。结论 HMGB1 在类风湿关节炎中高表达,其可能在类风湿关节炎组织损伤发生、 发展中发挥重要作用,可作为类风湿关节炎辅助诊断指标之一。     

原发性高血压高迁移率族蛋白1与血管内皮功能的关系

目的 探讨原发性高血压(EH)患者血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)与血管内皮功能的关系.方法 连续收集高血压患者30例,正常对照组30例.分别采用酶联免疫吸附法、高效液相色谱法、硝酸还原酶法测定血清HMGB1、血浆非对称性二甲基精氨酸(ADMA)、血清一氧化氮(NO)水平,同时采用高分辨超声检测肱动脉血流介导的内皮依赖性血管舒张功能(FMD).结果 高血压组血清HMGB1、血浆ADMA显著高于对照组(P＜0.01),血清NO、FMD显著低于对照组(P＜0.01).Spearman秩相关分析显示,在所有研究对象中,HMGB1与ADMA呈正相关(r=0.757,P＜0.01),与NO、FMD呈负相关(r=-0.743,P＜0.01;r =-0.707,P ＜0.01).以FMD为应变量进行多元线性逐步回归分析,HMGB1是FMD的独立影响因子之一.结论 血清炎症因子HMGB1可能参与了高血压血管内皮功能损伤过程.     

高迁移率族蛋白B1细胞外释放及信号转导机制

高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)为主要存在于细胞核中与DNA结合的一种非组蛋白,具有多种核内功能。近年诸多研究发现,细胞外HMGB1作为一种重要的晚期炎性递质参与炎症免疫反应和肿瘤的生长、浸润、转移。HMGB1通过活化细胞的主动分泌和坏死损伤细胞的被动释放而进入细胞外,细胞外HMGB1可诱导单核/巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞等表达分泌多种炎性递质。细胞外HMGB1与晚期糖基化终末产物受体、Toll样受体2、Toll样受体4等胞膜受体结合,激活丝裂原活化蛋白激酶、Janus激酶/信号转导和转录激活子、核转录因子-κB等信号转导通路而发挥其生物学效应。HMGB1靶向治疗将可能为炎症、癌症、氧化应激、无菌损伤等疾病开辟一个新的治疗途径。文中就HMGB1的结构和功能、细胞外分泌和释放、信号传导机制的研究进展作一综述。     

高迁移率族蛋白B1、基质金属蛋白酶-9和血管内皮生长因子-C在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的研究甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）中高迁移率族蛋白B1（high mobility group box1,HMGB1）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）和血管内皮生长因子-C（vascular endothelial growth factor-C,VEGF—C）的表达及与PTC临床病理特征的关系。方法应用免疫组化SP法和原位杂交技术联合检测58例PTC、20例甲状腺腺瘤、25例结节性甲状腺肿和10例正常甲状腺组织HMGB1、MMP-9、VEGF—C蛋白和HMGB1 mRNA的表达。结果HMGB1、MMP-9、VEGF-C蛋白和HMGB1 mRNA在PTC中的表达显著高于3种非癌组织（P〈0．05）。HMGB1、MMP-9蛋白和HMGB1 mRNA表达的阳性率与肿瘤的直径及淋巴结转移密切相关（P〈0．05）。VEGF-C蛋白表达的阳性率与淋巴结转移密切相关（P〈0．05）。HMGB1、MMP-9、VEGF—C蛋白和HMGB1 mRNA表达的阳性率与患者的性别、年龄无关（P〉0．05）。HMGB1、MMP-9和VEGF—C蛋白的表达均呈两两正相关（P〈0．05）,HMGB1蛋白与HMGB1 mRNA的表达也呈正相关（P〈0．05）。结论HMGB1、MMP-9、VEGF—C蛋白和HMGB1 mRNA的表达与PTC的发生发展及浸润、转移有关,检测其表达对判断临床进展及推测预后有一定参考价值。     

高迁移率族蛋白 B1 对急性自发性脑出血患者预后的影响

目的 探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对急性自发性脑出血（ASICH）患者预后的影响。方法 回顾性分析2010年1月1日～2012年12月31日安康市中心医院神经外科117例ASICH患者的临床资料,ELISA法测定血浆中HMGB1浓度。采用格拉斯哥预后评分（GOS）评价患者出院时的预后评分,分为预后良好组（GOS4～5分）65例和预后不良组（GOS1～3分）52例,采用相关分析法对数据进行分析。结果 117例患者中65例患者预后良好,占总人数的55．6％,52例预后不良,占44．4％。预后不良组初始血浆HMGB1浓度[（14．7±2．6）ng／mL]明显高于预后良好组[（6．7±1．4）ng／mL],差异有高度统计学意义（P〈0．01）。结论 入院时高浓度HMGB1是ASICH患者预后不良的预测因素。     

高迁移率族蛋白B1在妇科恶性肿瘤中的研究进展

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种广泛存在于人体各种细胞中的核蛋白,它参与基因的转录、DNA修复、细胞的增殖、侵袭、凋亡及分化等生物学行为。本文就近年来HMGB1在妇科恶性肿瘤发生、发展、早期诊断、治疗和预后中的研究进展进行综述。     

高迁移率族蛋白B1对人气道平滑肌细胞增殖和迁移及Akt磷酸化的影响

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(high morbility group protein box 1,HMGB1)刺激对人气道平滑肌细胞(human airway smooth muscle cells,HASMC)增殖和迁移的影响及其机制?方法:体外培养HASMC,将纯化的第3~8代细胞随机分为对照组?HMGB1组(125?250?500和1 000 ng/mL)?TGF-β阳性对照组(1 ng/mL),CCK-8法测定HASMC增殖能力,Transwell小室观察HMGB1对 HASMC迁移的影响,Western blot检测HASMC的Akt磷酸化?结果:与对照组相比,HMGB1呈浓度依赖性刺激HASMC增殖(P < 0.05);HMGB1(500 ng/mL)刺激HASMC后,细胞迁移能力显著高于对照组(P < 0.01);HMGB1(500 ng/mL)组HASMC的Akt磷酸化水平较对照组显著增高(P < 0.05)?结论:HMGB1促进HASMC增殖和迁移,可能是通过调节PI3K/Akt通路参与气道重塑,为今后治疗哮喘提供了新思路?     

右美托咪定对脓毒症大鼠高迁移率族蛋白 B1 的作用

目的：探讨右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对脓毒症大鼠血液和脾组织中高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1 protein,HMGB1)的作用及其可能的机制。方法：将100只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、DEX组、α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin-tetramethylrhodamine,α-BGT)+DEX组和α-BGT组,每组20只。对照组静脉注射等量的生理盐水,其余各组均通过静注内毒素(lipopolysaccharide,LPS)构建脓毒症模型,并给予不同的处理,48h后处死大鼠,留取血液及脾组织标本。应用ELISA分别检测血液中TNF-α和晚期炎症介质HMGB1的水平,Western印迹检测脾组织中HMGB1的含量。结果：5组大鼠间病死率、血清TNF-α水平、HMGB1的血清水平和脾组织含量差异均有统计学意义(均P<0.05),且HMGB1的血清水平和脾组织含量存在显著相关性(r=0.863,P<0.05)。结论：DEX可明显降低脓毒症大鼠血液及脾组织中晚期炎症介质HMGB1的含量,这种作用可能是通过激活胆碱能抗炎通路而实现的。     

牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1表达的影响

目的：观察牛珀至宝微丸对内毒素休克大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1（high-mobility group box-1 protein,HMGB1）表达的影响。 方法：30只SPF级Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组、内毒素组和牛珀至宝微丸组。牛珀至宝微丸组大鼠每天以含生药量3mg的牛珀至宝微丸生理盐水悬液3mL灌胃,连续7d,正常组予生理盐水。模型组和牛珀至宝微丸组大鼠用静脉注射内毒素（1.5mg/kg）联合腹腔注射D-氨基半乳糖（100mg/kg）方法建立内毒素休克模型。采用二氨基联苯胺（diaminobenzidine,DAB）显色和异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）荧光标记的免疫组织化学染色以及蛋白印迹等方法检测大鼠肺组织内HMGB1的表达。 结果：正常组HMGB1表达较弱,仅有少量细胞呈阳性,阳性部位多在细胞核;内毒素组HMGB1表达增加,阳性部位主要在细胞质;牛珀至宝微丸组HMGB1表达更高,阳性部位主要在细胞核。 结论：牛珀至宝微丸能使HMGB1定位于细胞核内,从而可能避免被分泌出胞,产生毒性,这可能是其治疗感染性休克的作用机制之一。     

中波紫外线致16HBE细胞损伤及其机制

目的探讨中波紫外线(UVB)照射对人支气管上皮细胞(16HBE)的生物学效应及其机制。方法细胞分为不同照射剂量同一观察时间组(剂量分别为0、10、30、50、70、100 J/m2,观察时间为照后12 h)和同一剂量不同观察时间组(剂量为50 J/m2,观察时间为照后2、4、8、12、24 h)以观察UVB对16HBE细胞的存活率的影响;琼脂糖凝胶电泳观察细胞接受50 J/m2照射后其DNA的断裂情况、流式细胞术检查细胞周期、Western blot检查NF-kB的表达情况。结果 UVB照射后,可使16HBE细胞的存活率下降;DNA出现明显的"梯状条带";细胞发生S期阻滞以及NF-kB蛋白的表达增强。结论 UVB照射能引起16HBE细胞生长抑制和凋亡;其作用机制可能与NF-kB蛋白的表达增强有关。     

hOGG1基因在氯化镉恶性转化16HBE细胞系过程中的表达

目的探讨OGG1基因在氯化镉恶性转化16HBE细胞过程中mRNA的表达情况。方法用半定量反转录-聚合酶链反应(PT-PCR)技术检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE细胞系不同阶段(第5、15、32代细胞及成瘤细胞)hOGG1基因mRNA的表达情况。结果与16HBE细胞比较,hOGG1基因mRNA在第32代细胞及成瘤细胞的表达明显低下(P<0.01)。结论氯化镉诱发16HBE细胞系恶性转化过程中hOGG1基因表达逐渐下降,hOGG1基因水平的改变可能是氯化镉的致癌机制之一。     

NF-κB特异性抑制剂PDTC对鼠黑素瘤B16细胞增殖及VEGF表达的影响

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对鼠黑素瘤B16细胞增殖及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:不同浓度的PDTC作用于B16细胞不同时间后,MTT法测定其对B16细胞增殖的抑制率,ELISA检测PDTC作用下B16细胞VEGF的表达情况。结果:经PDTC处理的实验组,肿瘤细胞增殖活性明显受到抑制(P0.01);与对照组相比,PDTC作用后B16细胞VEGF表达降低(P0.01)。结论:PDTC具有显著抑制鼠黑素瘤B16细胞生长及VEGF表达的作用,是一种有潜力的抑制黑素瘤增殖的药物。     

Effects of shRNA Targeting VEGF on VEGF mRNA Expression in Gastric Cancer Cells

In order to investigate the inhibitory effect of plasmid-mediated short hairpin RNA tar-geting vascular endothelial growth factor (VEGF) on the expression of VEGF mRNA in human gas-tric cancer cells, a plasmid vector for transcribing specific short hairpin RNA targeting VEGF ( pU6-VEGF ) was constructed, and then transfected into human gastric cancer cells using Lipofec-tamine2000. The VEGF mRNA expression level was detected by RT-PCR. RPMI1640 was used for blank control, and pSilencer 1.0-U6 empty plasmid for the negative control. Results showed the clone and sequence analysis revealed that the recombinant plasmid vector of pU6-VEGF was successfully constructed. The VEGF mRNA expression levels in blank control group, experimental group (pU6-VEGF) and negative control group (pSilencer1.0-U6) were 100%, 49% and 94%, respectively, indicating VEGF mRNA expression in the cells transfected with pU-VEGF vector was inhibited sig-nificantly as compared with blank control group and negative control group. It was concluded that the short hairpin RNA could significantly inhibit the expression of VEGF mRNA, which provided an experimental basis for treating human cancer with anti-angiogenesis.     

布地耐德/福莫特罗对哮喘患者血管内皮生长因子及其受体1表达及气道重塑的调控作用

目的 通过检测哮喘患者气道血管内皮生长因子(VEGF)和受体(VEGFR1)的表达,探讨VEGF和哮喘患者气道重塑的关系以及布地耐德/福莫特罗对哮喘患者气道重塑的调控作用.方法 支气管组织来源于2006年4～11月四川大学华西医院经纤维支气管镜行组织活检.23例为中度哮喘患者,20例为对照组.哮喘患者给予规律吸入布地耐德/福莫特罗4.5/160μg,2次/日,持续6个月.VEGF和VEGFR1通过免疫组化进行检测.AB-PAS和Masson Trichrome染色用于评估气道重塑程度.结果 两组之间年龄、性别差异无统计学意义.而两组之间FVC%预计值,FEV1%预计值,PC20,V75%预计值,VS0%预计值和V25%预计值的差异具有统计学意义.哮喘组患者气道黏液腺增生、平滑肌增厚、上皮下纤维化以及新生血管增加.与对照组比较,VEGF和VEGFR1阳染细胞数目增多,表达增加.VEGF和VEGFR1表达增加与哮喘患者的气道重塑、气流阻塞和气道高反应性呈正相关.规律吸入布地耐德/福莫特罗6个月后,哮喘患者VEGF和VEGFR,表达减少,气道重塑减轻.结论 伴随哮喘患者气道血管生成增多和气道重塑,VEGF和VEGFR1表达增加.规律吸入布地耐德/福莫特罗可以通过减少VEGF和VEG-FR1表达而减轻哮喘患者气道重塑.阻断VEGF和VEGFR1可能是治疗哮喘的新策略.     

骨髓基质细胞源内皮细胞移植对血管性痴呆大鼠行为及VEGF蛋白表达的影响

目的 探讨骨髓基质细胞（BMSCs）向血管内皮细胞诱导分化后移植对血管性痴呆（VD）大鼠行为及血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达的影响.方法 采用2-AO法制作VD大鼠模型;经Y型电迷宫筛选健康SD大鼠随机分为假手术组（n=8）、PBS移植组（n=8）、BMSCs移植组（n=8）、BMSCs源内皮细胞移植组（VECs移植组,n=8）;移植30天后Y型电迷宫检测大鼠学习记忆能力;处死大鼠,大鼠脑切片检测VEGF蛋白表达、海马CA1区锥体细胞数.结果 VECs移植组、BMSCs移植组、PBS移植组大鼠学习记忆能力均较假手术组下降（P〈0.05）.移植后30天各组神经功能均有不同程度的恢复,VECs移植组大鼠的学习记忆能力显著优于BMSCs移植组（P〈0.05）;VECs移植组VEGF阳性细胞多于BMSCs移植组（P〈0.05）;VECs移植组海马CA1区锥体细胞数高于BMSCs移植组（P〈0.05）.结论 BMSCs源内皮细胞移植町改善VD大鼠学习记忆能力,增加VEGF蛋白表达和保护海马区神经元,显著优于BMSCs移植.     

高迁移率族蛋白B1肿瘤免疫调节作用及其机制

\[摘要\]危险信号相关模式分子(DAMPs)是指能被模式识别受体识别的危险信号分子,从细胞胞内释放到胞外的高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是经典的DAMPs,HMGB1的释放提示机体已经受到损伤。已有大量的研究证明HMGB1参与了肿瘤血管形成、凋亡抵抗、生长刺激以及侵袭转移,表明HMGB1能够促进肿瘤的发生进展。而新近有研究报道指出HMGB1具有佐剂样作用,能够增强获得性抗肿瘤免疫反应。种种研究显示HMGB1具有双向的肿瘤免疫调节作用。因此,本文主要对HMGB1的肿瘤免疫调节作用及其机制的研究进展作一综述。