中药地龙研究进展

地龙作为药用在我国有着悠久的历史。近年来,药理研究与临床应用越来越广泛深入,并取得了可喜的成果和进展。1来源地龙(又名蚯蚓)为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima     

地龙的纤溶、抗凝、溶栓和血流变作用研究

地龙又名蚯蚓 ,属寡毛纲动物 ,具清热、定惊、通络等功效 ,在我国中医药应用已有数千年历史。国内外自 1983年 ,日本学者Mihara等人发现人口服蚯蚓水提物后外周血纤溶酶活性明显增高〔1〕,对此动物药研究极为关注 ,尤以对血凝系统的药理作用研究最多 ,现就近十余年来这方面的研究文献予以综述如下。1　纤溶、抗凝、溶栓作用1 1　提取液的作用1 1 1　体外试验 :郭丰涛等报道 ,直径 3mm长2 0 0mm的家兔静脉血栓浸于约 1∶1的 37℃地龙液中 ,6 5h后按体外溶解纤维蛋白凝胶活性测定法 ,血栓可全部溶解 ,提示 1∶1的地龙液有明显的纤溶溶栓作用…     

中药地龙的活性成分及药理作用研究进展

地龙含多种活性成分,高度不饱和脂肪酸如油酸、亚油酸、花生四烯酸、亚麻酸的含量较高,具有较高的药理活性,是地龙活血化瘀、防治心脑血管疾病的有效成分之一。研究发现,地龙具有降压、抗血栓、抗心律失常、抗癌、增强免疫、抗溃疡、解热镇痛、抗肝纤维化、保护肝脏等作用。     

地龙药理作用研究进展

地龙为钜蚓科动物参环毛蚓或缟蚯蚓的干燥体 ,具有平肝熄风、清热止痉、平喘、通经活络功效 ,其主要药理作用为抗心律失常、溶栓、解热、抗癌、增强免疫、杀精子及阴道毛滴虫、促进伤口愈合等。现综述如下。1　抗心律失常地龙注射液 (地龙经水煮醇提 ,调等渗及 p H,制成注射液 )对大白鼠氯仿 -肾上腺素模型的异位心律有明显的抑制作用 ,P=0 .0 1 ;对大白鼠乌头碱模型、家兔氯化钡模型、家兔喹巴因模型 ,用地龙注射液后 ,心律失常时间明显缩短 ,P<0 .0 5[1] ;地龙复合制剂对由脑垂体后叶素引起的急性心肌缺血 (心电图显示 ) ,给药后可明显…     

斑点免疫印迹法快速测定地龙炮制品中蚓激酶及其水解产物

目的测定参环毛蚓、秉氏环毛蚓、日本杜拉蚓和天锡杜拉蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物,建立斑点免疫印迹法评价相应生药材药效成分明确的中药炮制品质量新方法。方法以兔抗蚓激酶单抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对地龙炮制品中蚓激酶及其水解产物作定性检测,杂交信号应用Quantity One软件作定量分析。结果现行中药材参环毛蚓与山东产地方品种:秉氏环毛蚓、日本杜拉蚓、天锡杜拉蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物的质量分数分别为125.23、118.34、81.05、72.13μg/g。结论秉氏环毛蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物与现行地龙炮制品参环毛蚓无显著差异,理论上可作为广地龙的替代品。斑点免疫印迹法简便快捷,结果准确,无需大型设备,可用于地龙与类似中药材炮制品的品质评价。     

广地龙化学成分和药理作用的研究进展及其质量标志物(Q-Marker)的预测分析

广地龙Pheretima aspergillum为我国常用传统中药材,主要分布于广西、广东,为岭南地区道地药材。广地龙中化学成分包括蛋白质及多肽类、酶类、氨基酸及二肽类、核苷类、脂肪酸类、甾体化合物、溶血磷脂、无机元素等。传统认为广地龙蚓激酶、次黄嘌呤和琥珀酸为其主要药效成分。对广地龙化学成分、药理作用的研究进展进行总结,并在此基础上,分析酶类、核苷类、脂肪酸类等成分与药效的关联,基于传统功效与现代药理作用预测其质量标志物(quality marker,Q-Marker),初步确定纤溶活性蛋白、蚓激酶、蚯蚓纤溶酶、次黄嘌呤、肌苷、琥珀酸、多不饱和脂肪酸、氨基酸及二肽类成分为其可能的Q-Marker。建议聚焦其有效成分,结合成分化学物质组入血后的协同作用以及化学成分可测性,建立专属性的测定方法,为明确广地龙Q-Marker和制定科学的质量评价体系提供基础。     

地龙中脂肪酸成分研究

目的 对地龙的脂肪酸成分进行研究.方法 采用皂化法提取地龙中脂肪酸,并采用气相色谱法对其进行分析.结果 皂化法提取地龙中肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈烯酸和次亚油酸相对含量较高.二十碳五烯酸(EPA)/花生四烯酸(AA)的相对含量比值为1.78,地龙中多不饱和脂肪酸(PUFA)相对含量为20.07%.结论 该研究为地龙的药用价值发展提供科学依据.     

有机膜分离法比较酶解对地龙纤溶、降压活性的影响

目的:研究模拟胃肠道系统酶解对地龙膜分离后活性部位纤溶、降压作用的影响。方法:对酶解前后新鲜红地龙的匀浆液采用不同孔径的聚偏氟乙烯膜进行超滤,对超滤液进行纤溶和血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性的测定。结果:酶解后匀浆液的纤溶活性总体基本没有改变,但分子量大的部位纤溶活性下降,而分子量小的部位则上升;ACE抑制活性随着酶解得到提高,以4千膜的滤过液为最。结论:消化道酶解不会降低地龙的纤溶活性,地龙匀浆后以分子量为1万的膜进行截留,可得到纤溶活性更强的部位;地龙的降压作用经过胃肠道的酶解会得到增强,先行酶解会有益于降压作用的提高。     

地龙抑菌作用初步观察

目的：对地龙抑菌作用进行研究。方法：打孔法及试管稀释法。结果：鲜地龙提取物对绿脓杆菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、伤寒杆菌、白色葡萄球菌、乙型链球菌有一定抑制作用。结论：地龙具有一定的抑菌作用，其有效成分可能为酶类、蛋白等生物活性物质。     

液氮快速冷冻对地龙中水溶性蛋白组成和活性的影响

目的探讨低温炮制工艺对地龙水溶性蛋白质组成以及溶栓与抗肿瘤活性的影响。方法地龙的炮制采用传统与低温两种工艺,低温炮制采用液氮快速冷冻与冷冻干燥技术;采用SDS-PAGE与ImageTool软件,对两种炮制工艺的地龙蛋白质组成的差异进行定性与定量分析;应用纤维蛋白平板法与体外溶栓试验,定性与定量分析两种炮制工艺的纤溶活性的差异;应用显微观察与MTT法,对两种炮制工艺体外抑制人肝癌细胞增殖活性进行定性与定量比较分析。结果低温炮制工艺地龙的水溶性蛋白组成比传统炮制工艺丰富,SDS-PAGE的蛋白条带数与浓度明显高于传统工艺;两种炮制工艺的地龙蛋白液均具有显著的抗人肝癌细胞与纤溶活性,但低温炮制工艺的两种活性显著高于传统工艺。结论不同炮制工艺对地龙水溶性蛋白组成及其抗肿瘤与溶栓活性有显著影响;在保全地龙的蛋白质类药效成分的生物活性方面,低温炮制工艺优于传统炮制工艺。     

蚯蚓纤溶酶研究概述

对具有纤溶活性的物质研究已有多年的发展,但是血栓性疾病仍然是致人死亡或身体机能障碍的主要原因之一。从具有特殊生理功能的生物体中获取活性物质近来受到广泛关注,在蚯蚓消化腺的分泌物中纯化得到一组同工酶,表现出良好的溶栓效果,并被命名为蚯蚓纤溶酶（earthworm fibrinolytic enzyme,EFE）。本文在多层次上对蚯蚓纤溶酶作一综述,内容包括：蚯蚓纤溶酶的纯化、克隆表达,并详细介绍该酶结构与功能之间的关系以及临床应用等。     

蚯蚓纤溶酶抗肝癌转移作用的实验研究

目的 探讨蚯蚓纤溶酶(earthworm fibrinolytic enzyme,EFE)对人肝癌细胞转移的影响.方法 建立裸鼠人肝癌高转移原位移植瘤模型,造模后7 d将裸鼠随机分为模型对照组和EFE高、低剂量组,共3组,每组7只,每天分别给予生理盐水和1600,800 uku/kg EFE灌胃,连续30 d.实验结束时完整剥除种植瘤并称重;肉眼直接观察种植瘤的肝内播散及腹腔种植情况,计算肝内播散率及腹腔种植率;通过病理切片观察肺转移肿瘤灶的数目;采用RT-PCR及Western blot方法检测移植瘤中FAK(focus adhesion kinase)及β1-整合素蛋白的表达.结果 与模型对照组相比,EFE低、高剂量组原位种植瘤瘤重减轻(P＜0.05或P＜0.01);种植瘤肝内播散率和腹腔种植率降低,其中,EFE高剂量组与模型对照组比较,具有显著性差异(P＜0.05);肺转移灶数目明显减少,与模型对照组相比,具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).在原位种植瘤和移植瘤中FAK及β1-整合素在mRNA及蛋白水平的表达方面,EFE高、低剂量组的表达均明显下降,与模型对照组比较具有非常显著性差异(P＜0.01).结论 EFE具有抗肝癌转移的作用,其机理可能与EFE能够抑制FAK及β1-整合素的表达有关.     

蚯蚓溶栓酶对大鼠凝血及纤溶指标的影响

低剂量的溶栓酶用于大鼠能引起纤维蛋白原（Ｆｂｇ）平均下降４５％，凝血酶时间（ＴＴ）由１１．１３秒延长到２２．６３秒（Ｐ＜０．０１），而凝血酶原时间（ＰＴ）及白陶土部分凝血活酶时间（ＫＰＴＴ）无显著性变化（Ｐ＞０．０５）。但高剂量的溶栓酶除能明显降低Ｆｂｇ和延长ＴＴ外，而且可使ＰＴ由１６．８２秒延长到７３．４４秒及ＫＰＴＴ由４６．６３秒延长到１２４．１３秒，并能使Ⅱ、Ⅷ因子降解，起到强的抗凝效果     

地龙的鲜品和干品可溶性蛋白及纤溶酶活性的对比研究

目的:对比研究地龙的鲜品和干品的可溶性蛋白及纤溶酶活性.方法:采用Bradfold方法测定蛋白含量,SDS-PAGE进行蛋白谱带的分析,并采用琼脂糖-纤维蛋白平板法进行纤溶酶活性的测定.结果:以干燥品计,鲜品的蛋白提取率为( 13.89±0.86)％,蛋白含量为(63.14±0.38)％,体外纤溶酶活性为(8 743 ±17) IU·g-1;干品蛋白提取率为(9.82±0.75)％,蛋白含量为(45.16 ±0.12)％,体外纤溶酶活性为(206±14) IU·g-1;SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,鲜品共显示12条蛋白谱带,干品的谱带较少,且不清晰.结论:鲜地龙的可溶性蛋白提取率、含量及体外纤溶酶活性均明显高于干品,且蛋白组分有较大的差异.     

地龙抗血栓有效部位的提取方法初探

目的:考察地龙中抗血栓有效部位的提取方法。方法:分别用水和50%、70%、80%乙醇,渗漉,水提取、50%醇沉以及稀HCl和磷酸缓冲液提取物进行体外对兔血凝血酶原时间的影响和抗凝血酶作用试验。结果:从抗凝血试验看,地龙的乙醇渗漉液优于地龙的水提液。结论:以70%乙醇对地龙进行渗漉提取方法简便,适于工业化生产。     

影响胃蛋白酶和胰蛋白酶纤溶活性因素初探及其纤溶活性失活研究

目的通过探讨影响胃蛋白酶和胰蛋白酶纤溶活性的因素及其纤溶活性失活方法,排除胃蛋白酶和胰蛋白酶对中药鼠妇Armadillidium vulgare活性粗蛋白纤溶活性检测的干扰,以在鼠妇活性粗蛋白酶解过程,获取相对分子质量更小、效价更高的蛋白质或多肽。方法采用纤溶蛋白平板法分别研究pH值、温度、金属离子、酶抑制剂和表面活性剂对胃蛋白酶和胰蛋白酶纤溶活性的影响,以获取较佳的酶失活工艺,并研究较佳酶失活工艺对尿激酶、蚓激酶、鼠妇纤溶酶纤溶活性的影响。结果 pH值、温度、金属离子、酶抑制剂和表面活性剂均可对胃蛋白酶和胰蛋白酶纤溶活性产生影响,其中胃蛋白酶的最优失活方案为pH 6.0~8.0;胰蛋白酶的最优失活方案为质量浓度25 mg/mL TLCK和浓度1 mmol/L EDTA的混合制剂。结论研究所获取的较佳酶失活工艺,可用于以纤维蛋白平板法检测胃蛋白酶、胰蛋白酶降解产物的纤溶活性,操作简单,重复性好,稳定性好。     

地龙提取液治疗糖尿病足的疗效观察

目的:观察地龙提取液治疗糖尿病足的临床疗效。方法:将符合标准的92例患者按随机数字表法分为治疗组(40例)和对照组(52例)。两组均采用常规西医处理,治疗组加用地龙提取液治疗。观察患者创面愈合情况、临床症状和C反应蛋白(CRP)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)变化情况,以及不良反应发生情况。结果:治疗组和对照组总有效率分别为90.00%、82.69%,组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。两组患者治疗后组间比较,溃疡面积、脓性分泌物和创面肉芽组织的差异均有统计学意义(P0.05)。治疗组创面愈合时间快于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。治疗后治疗组CRP低于对照组,IGF-1高于对照组,组间比较,差异均有统计学意义(P0.05)。治疗第7 d起,治疗组患者血清VEGF高于对照组,各时间点组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。两组患者治疗过程中均未见明显不良反应。结论:地龙提取液联合常规西医对糖尿病足的临床疗效安全可靠,在改善患者溃疡面积、脓性分泌物和创面肉芽组织、加速创面愈合等方面均优于单纯西医治疗,其机制可能与降低CRP、提升IGF-1和VEGF水平有关。     

从地龙研究看如何破解中药资源与品质困局

中药是我国瑰宝之一,为中华民族的繁衍生息做出了巨大贡献。中药品质则是保证中药安全、有效、质量可控的基础。随着社会发展,市场需求持续增长与中药资源数量、质量不断下降之间的矛盾,已严重阻碍了中医药现代化、国际化的前行脚步。本文以上海道地药材“沪地龙”研究为例,针对中药资源和品质普遍存在的品种混乱、资源短缺、加工粗糙、质量低下、缺乏质量标准等问题,提出了科学合理且相对可行的解决方案,为突破中药资源与品质困局提供思路,对实现中药现代化具有重要的现实意义。     

地龙汤对实验性哮喘豚鼠气道炎症的影响

目的：观察地龙汤对实验性支气管哮喘豚鼠气道炎症的作用,并探讨其作用机制。方法：豚鼠48只随机分为正常组,模型组,地塞米松组,小青龙汤组,地龙汤高(12 g·kg^-1)、低(6 g·kg^-1) 剂量组。除正常组外,其他各组动物经10%卵白蛋白(ovalbumin,OVA)腹腔注射致敏和1%气道吸入激发建立哮喘模型。正常组给予等量生理盐水致敏和治疗。各组分别给予药物治疗后,观察动物肺泡灌洗液(bronchoaveolar lavage fluid,BALF)和外周血中总细胞数、嗜酸性粒细胞(eosinophil,Eos)、淋巴细胞(lymphocyte,Ly)、嗜中性粒细胞(neutrophil,Neu)比率。肺组织病理学主要观察Eos数目及其凋亡情况。结果：模型组动物血中及BALF中Eos,Ly,Neu和总细胞数显著增高,与正常组比较,差异十分显著(P＜0.01)。地龙汤高剂量组对外周血及BALF中Eos,Ly,Neu及总细胞数均较模型组有非常显著的差异(P＜0.01),显示出与地塞米松组相似的结果；地龙汤低剂量组亦显示出一定的差异性(P＜0.05)。模型组支气管黏膜水肿明显,部分支气管内皱褶减少伴部分上皮脱落,支气管壁、管周及肺泡区见炎性细胞浸润,其中较多Eos浸润,支气管壁增厚。电镜下可见模型组细支气管破坏,肺泡Ⅱ型细胞变性,肺泡内Eos浸润。地龙汤高剂量组以上改变显著较轻,并见BALF中Eos凋亡；地龙汤低剂量组改变程度低于高剂量组,并见部分Eos凋亡。结论：地龙汤可减轻哮喘豚鼠气道炎症,其作用与抑制Eos浸润,并促进Eos凋亡有关。作用强弱与剂量呈正比例关系。     

蚯蚓生物工程技术研究进展

从蚯蚓中已经提取出的活性成分包括：纤溶酶、纤溶酶原激活剂、钙调素和钙调素结合蛋白、胆碱酯酶、过氧化氢酶、促髓系细胞增殖组分、抗微生物蛋白、收缩血管蛋白、溶血蛋白、免疫球蛋白梓粘连物和抗肿瘤瘤成分等。综述近几年来国内外对上述成分的研究进展。