创面愈合过程中创缘表皮干细胞的再分布

目的研究皮肤干细胞在全层皮肤创面愈合过程中的分布与增殖分化特征,以及该特征在创面愈合过程中的作用.方法10只Wistar大鼠背部各制备4个面积为2.54cm2的全层皮肤创面,将刨面随机分为2组,即银锌霜治疗组(20个创面),空白对照组(20个创面).分别于伤后3d、1周、2周和3周以组织学检查动态观察各组治疗效果,并以β1整合素、角蛋白19(K19)免疫组化法检测表皮干细胞在创面愈合过程中的表达情况.结果两组创面愈合率为银锌霜组80%(16/20),对照组60%(12/20).两组创面肉芽组织于各时相点均未见β1整合素、K19阳性细胞出现,但于创缘表皮的棘层或颗粒层出现了散在的β1整合素和K19同时染色阳性细胞.且越接近创面这些阳性细胞越密集,组织学上与基底层的阳性细胞无直接联系,其数量随着创面的缩小渐渐增加,直到创面愈合.上皮化后,这些阳性细胞逐渐减少,并随着愈合创面表皮脚的出现而消失,而感染创面的阳性细胞数量明显少于未感染创面的阳性细胞数.结论表皮干细胞能动地参与创面的修复,创缘表皮干细胞再分布的主要功能可能促进创面再上皮化.     

正常皮肤和瘢痕组织表皮干细胞定位与增殖分化特征的比较性研究

目的采用特殊染色法研究少儿与成年人大面积重度烧伤后瘢痕组织表皮干细胞分布与表达β1整合素和角蛋白19、14、10(K19,K14,K10)的特征与规律,在此基础上确定表皮干细胞及短暂扩充细胞分布、数量的差异以及这些改变与瘢痕愈合关系.方法分别取4～12岁少儿及35～53岁成年人2组健康皮肤及大面积深度烧伤后瘢痕组织.采用免疫组织化学SP法检测表皮干细胞、短暂扩充细胞特异表达的β1整合素和K19以及分化表皮细胞表达的K14和K10.结果瘢痕组织表皮基底层表达β1整合素与K19的阳性细胞数较健康皮肤明显减少,阳性强度降低.瘢痕组织表皮中表达K14的阳性细胞仅位于表皮底部2～3层,明显少于健康皮肤,而K10表达阳性细胞则较健康皮肤分布广泛.结论瘢痕组织表皮基底层具有增殖能力的表皮干细胞和短暂扩充细胞明显少于健康皮肤,且瘢痕组织表皮干细胞的分化过程与健康皮肤不同,处于有丝分裂后分化阶段的细胞比例降低,而终末分化细胞的比例明显增高.提示瘢痕组织表皮的增殖能力下降,细胞的分化行为紊乱,这可能是瘢痕组织表皮结构与功能改变、愈合能力下降的原因之一.     

成人正常皮肤和瘢痕组织表皮干细胞定位与表达特征的比较研究

目的采用免疫组织化学染色方法研究成人正常皮肤和瘢痕组织表皮干细胞定位与表达β1整合素和角蛋白19,14,10(K19,K14,K10)的特征与规律,探讨两种组织表皮干细胞表达特征的差异与烧伤后瘢痕愈合的关系.方法分别取成年人健康皮肤6例和大面积深度烧伤后瘢痕组织6例.采用免疫组织化学Elivision两步法检测表皮干细胞、短暂扩充细胞特异表达的β1整合素和K19以及分化表皮细胞表达的K14和K10.结果瘢痕组织表皮基底层表达β1整合素与K19的阳性细胞数较健康皮肤明显减少,阳性强度降低.瘢痕组织表皮中表达K14的阳性细胞仅位于表皮底部2～3层,明显少于健康皮肤,而K10表达阳性细胞则较健康皮肤分布广泛.结论瘢痕组织表皮基底层干细胞和短暂扩充细胞明显少于健康皮肤,且瘢痕组织表皮干细胞的分化过程与健康皮肤不同,处于有丝分裂后分化阶段的细胞比例降低,而终末分化细胞的比例明显增高.提示瘢痕组织表皮的修复能力下降,细胞的分化行为紊乱,这可能是瘢痕组织表皮结构与功能改变、愈合能力下降的原因之一.     

成人正常皮肤和瘢痕组织表皮干细胞定位与表达特征的研究

目的：观察成人正常皮肤和瘢痕组织中表皮干细胞定位与β1整合素和角蛋白19、14、10（K19、K14、K10）的表达，探讨两种组织表皮干细胞表达特征的差异。方法：取6例大面积深度烧伤患伤后1年的增生性瘢痕组织，另取6例健康志愿对应部位的全层皮肤。采用免疫组织化学Eivision两步法，检测表皮干细胞、短暂扩充细胞特异表达的β1整合素和K19以及分化表皮细胞表达的K14和K10。结果：瘢痕组织表皮基底层表达β1整合素与K19的阳性细胞数较正常皮肤明显减少，阳性强度降低，其表皮中表达K14的阳性细胞仅位于表皮底部2－3层，而K10表达阳性细胞则较正常皮肤分布广泛；瘢痕组织皮肤的分化过程亦不相同，处于有丝分裂后分化阶段的细胞比例降低，而终末分化细胞的比例明显增高。结论：瘢痕组织表皮的修复能力下降。细胞的分化行为紊乱，可能是导致瘢痕组织表皮结构与功能改变、愈合能力下降的原因之一。     

烫伤大鼠不同深度创面组织中表皮干细胞分布的初步研究

目的初步观察烫伤大鼠不同深度创面组织中表皮干细胞的分布情况。方法将32只SD大鼠分别造成Ⅰ、浅Ⅱ、深Ⅱ和Ⅲ度烫伤，伤后24h取创面组织标本，制作切片。采用细菌蛋白一生物素标记法(LSAB)进行免疫组织化学染色，以α2、β1整合素及角蛋白10(K10)作为一抗，观察不同创面组织中表皮干细胞的表达和分布情况。结果Ⅰ度烧伤创面组织中，K10阳性细胞分布于表皮的棘细胞层、颗粒层、透明层，α2、β1整合素阳性细胞分布于表皮基底层，数量多。浅Ⅱ度创面中，α2、β1整合素阳性细胞位于残留的基底层和皮肤附属器(主要是毛囊)中，数量较少。深Ⅱ度创面中，α2、β1整合素阳性细胞仅存在于真皮深层健存的皮肤附属器中，数量很少。Ⅲ度创面中，罕见α2、β1整合素阳性细胞。结论表皮干细胞在烧伤创面中的分布与烧伤深度有关，残存的表皮干细胞可能是创伤修复过程中再上皮化的细胞来源。     

离体冻伤模型创面愈合过程中基质细胞衍生因子1促表皮干细胞迁移的研究

目的 了解离体皮肤冻伤模型创面愈合过程中,基质细胞衍生因子1(SDF-1)对创缘表皮干细胞(ESC)的运动趋化作用.方法 体外构建三维皮肤等价物全层冻伤模型(创面呈孔形),免疫组织化学染色观察冻伤后3、7 d创缘间质内SDF-1的表达情况.另将冻伤模型分为对照组(创面区添加PBS 50 μL/孔)、SDF-1组(创面区添加100 ng/mL SDF-1,50μL/孔)和AMD3100组[创面区用100 ng/mL AMD3100(50μL/孔)处理30 min后,添加SDF-1 50μL/孔],观察各组创缘中ESC的分布变化.结果 免疫组织化学染色显示,冻伤后3、7 d创缘间质内SDF-1的表达逐渐增加.与对照组及AMD3100组相比,SDF-1组创缘基底层整合素β1阳性细胞数量增多,且部分阳性细胞向上层表皮迁移聚集,创缘ESC数量更多,表皮细胞层数增加.结论 SDF-1促进ESC向创缘迁移聚集参与创面修复,这可能是ESC参与创面修复过程的机制之一.     

不同发育阶段人皮肤β1整和素及细胞角蛋白K19表达特征及其与创面修复结局关系的研究

严重烧创伤等所致皮肤损伤后的愈合能力随着人年龄的增大而逐渐降低,其原因涉及多方面,其中表皮细胞增殖分化潜能的改变可能是其重要原因之一.由于皮肤中β1整和素及细胞角蛋白K19仅在具有增殖与分化潜能的表皮干细胞和短暂扩充细胞上表达,本研究利用β1整和素和细胞角蛋白K19单抗,观察人胚胎期、幼儿期、成人期皮肤中表皮干细胞和短暂扩充细胞分布、数量的差异,并探讨这种差异特征与创面表皮再生能力随年龄降低的关系.分别取23～24周龄胎儿、4～10周岁幼儿、35～51岁三组全层皮肤.取材后即刻10％甲醛固定,常规石蜡包埋,切片5μm待用.采用免疫组织化学SP法,β1整和素和细胞角蛋白K19单抗分别购自Neo Markers和Maxim Biotech公司.β1整合素细胞膜染成棕黄色为阳性细胞,角蛋白细胞浆染成棕黄色为阳性细胞,同时设不加一抗的阴性对照.结果显示在胎儿期皮肤表皮基底层细胞β1整和素及角蛋白K19染色均为阳性,毛囊隆突部细胞β1整和素及角蛋白K19表达也均为阳性.幼儿期表皮基底层细胞中有部分细胞表达β1整和素及角蛋白K19,阳性细胞并非散在均匀分布,而是数个阳性细胞相对集中呈片状分布,β1整和素与角蛋白K19的表达规律相似.成年人表皮基底层中表达β1整和素及角蛋白K19的细胞也呈片状分布,阳性细胞率较幼儿组低,且染色强度较弱.本实验结果提示,胎儿期表皮基底层均为表皮干细胞和短暂扩充细胞,毛囊隆突部也含有大量的表皮干细胞和短暂扩充细胞,而幼儿期表皮基底层中仅有部分细胞为干细胞和短暂扩充细胞,成人期干细胞及短暂扩充细胞所占的比例则进一步降低.这可能与胎儿期皮肤的损伤在结构上能够完全修复,包括皮肤附件如毛囊、汗腺等也能完全再生,以及临床中幼儿皮肤损伤后再上皮化能力较成人强的现象有关.     

表皮细胞生长因子通过诱导皮肤干细胞分化加速受创表皮再生的研究

目的：从皮肤干细胞增殖分化角度研究表皮细胞生长因子（EGF）加速受创皮肤再生的机制。方法：8例经EGF治疗创面于治疗后8天及14天对创面边缘部进行活检取材。用常规病理与SP免疫组织化学法研究β1整合素、角蛋白19（K19）、角蛋白14（K14）以及角蛋白10（K10）在不同修复阶段修复表皮的表达特征。另选研究β1整合素、角蛋白19（K19）、角蛋白14（K14）以及角蛋白10（K10）在不同修复阶段修复表皮的表达特征。另选7例同期未经EGF治疗创面为对照。结果：常规病理学检查与对照创面相比，EGF治疗创面后8天可见表皮层增厚，表皮脚增粗，治疗后14天以上特征更为明显。SP免疫组织化学对β1整合素与K19染色表明，EGF治疗8天的创面表皮干细胞与短暂扩充细胞不仅数量多，而且体积增大，治疗后14天创面面生表皮的棘细胞层中有干细胞岛出现。对照治疗后8天与14天创面除有一定数量的β1整合素与K19阳性染色细胞外，未见干细胞岛出现，在EGF治疗和对照治疗创面，治疗后8天及14天，K16、K10表达均见于再生上皮的表层，即那些已失去增殖能力与终末分化细胞。结论：EGF促进损伤皮肤再生的主要机制之一可能与它能诱导皮肤干细胞快速定向分化有关。     

大鼠微粒皮移植创面中角蛋白19及整合素β1的异位表达

目的了解大鼠微粒皮移植后创面角蛋白19、整合素β1表达特征的变化，初步探讨微粒皮移植创面的愈合机制。方法取20只大鼠制成全层皮肤缺损创面模型，分为自体皮组：创面移植占缺损皮肤表皮质量10％的自体微粒皮；混合皮组：创面混合移植自、异体微粒皮，其用量分别为缺损皮肤表皮质量的10％、40％。比较移植后2、3、4周2组大鼠创面的愈合率、收缩率，观察2、4周时角蛋白19、整合素β1的表达与分布特征。结果移植后2、3周，混合皮组大鼠创面愈合率分别为（85±5）％、（84±8）％，明显高于自体皮组的（53±10）％、（65±9）％（P〈0．01）。2组创面收缩率在移植后各时相点差异无统计学意义（P〉0．05）。移植后2、4周，2组大鼠创面新生表皮的颗粒层和棘层均可见角蛋白19、整合素β1阳性细胞；此期间未见角蛋白19在基底层有所表达。移植后2周，2组创面基底层未见整合素β1阳性细胞；4周时，部分创面标本中有整合素β1阳性细胞在基底层间断出现。结论自、异体微粒皮混合移植有助于创面愈合。自体微粒皮和自、异体微粒皮混合移植创面中，均存在角蛋白19和整合素β1阳性细胞的异位表达。     

不同发育阶段人皮肤表皮干细胞增殖分化特征及其与创面修复结局关系的研究

目的从细胞分化角度研究人胎儿期、少儿期、成年人期皮肤中表皮干细胞增殖分化特征,以及这些特征与创面修复结局的关系.方法分别取因创伤等原因致流产的22～24周龄胎儿和4～12周岁少儿、35～53岁成年人3组全层皮肤.采用免疫组化方法检测表皮干细胞特异表达的β1整合素和细胞角蛋白19(K19).结果胎儿期皮肤表皮基底层细胞β1整合素和K19染色均为强阳性.少儿期表皮基底层细胞中60%～80%的细胞表达β1整合素和K19.成年人表皮基底层中表达β1整合素和K19的细胞较少儿组进一步减少,且染色强度较弱.结论本实验结果提示,胎儿期表皮基底层增殖细胞均为表皮干细胞和短暂扩充细胞,而少儿期表皮基底层中部分细胞为于细胞和短暂扩充细胞,成年人期干细胞与短暂扩充细胞所占的比例则进一步降低.这种干细胞增殖分化的差异可能与三种不同发育阶段皮肤损伤的完全与不完全修复有关.     

骨髓间充质干细胞分化为皮肤附属器细胞的初步实验研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)分化为创面皮肤附属器细胞的可能性,及其参与创面修复的可能机制。方法无菌条件下取Wistar大鼠股骨骨髓细胞,密度梯度离心分离、纯化MSCs,体外培养扩增后,用BrdU标记细胞。另于同种雄性Wistar大鼠背部正中,制备1cm×1cm全厚皮肤缺损创面模型,将BrdU标记的1×106/mlMSCs从阴茎静脉输注,术后第3天与第7天切取创面组织,行BrdU免疫组织化学单染色,以及BrdU和广谱角蛋白免疫组织化学双染色。结果BrdU阳性细胞出现在创面皮下组织、皮脂腺、毛囊和骨髓腔中。免疫组织化学双染色结果显示,皮脂腺和毛囊有BrdU阳性细胞,同时表达广谱角蛋白。结论创面愈合过程中,MSCs归巢并参与创面修复;在实验性全身皮肤缺损创面微环境下,MSCs可分化为皮肤附属器细胞。     

Epithelial stem cell islands in the regenerated epidermis

Objective: The effects of growth factors on wound healing have been studied extensively, however,their molecular and genetic mechanisms that regulate epidermal regeneration are not fully understood. In this study,we explore the cell reversion characteristics and epithelial stem cell distribution in human regenerated epidermis treated with recombinant human epidermal growth factor (rhEGF). Methods:Tissue biospies from 8 regenerated skins treated with rhEGF were used to evaluate the cell reversion and stem cell distribution in epidermis . The expression of β1 integrin, keratin 19 (K19), keratin 14 (K14) and keratin 10 (K10) in skins was detected with SP immunohistochemical methods. Another 8 biopsies from the regenerated epidermis treated without rhEGF, fetus, children and adults were used as the controls. Results:Immunohistochemical stain for β1 integrin and keratin 19 showed that there were some new stem cell islands in the epidermis treated with rhEGF. These cells were small, containing low RNA content and exhibiting positive expression with β1 integrin and K19 stain. They were isolated, bearing no anatomic relation with the epithelial stem cells in the basal layer. The serial identification experiments indicated that there treated without rhEGF. All of these results supported that these β1 integrin and K19 positive stain cells were the stem cells. Conclusions: The results indicated that these stem cell islands were the specific and individual cell structures in rhEGF treated wounds and rhEGF is the main factor in inducing the stem cell island formation. These results offer a direct evidence for epidermal cell reversion from the differentiated cells to undifferentiated stem cells in vivo and may be useful in the rational use of this growth factor to promote wound healing in clinic.     

表皮干细胞在糖尿病创面愈合过程中的动态变化

目的 观察糖尿病（diabetes mellitus，DM）大鼠创伤后不同时期表皮厚度、表皮干细胞（epidermalste mcells，ESCs）数量变化和分布特征及创面愈合率等动态变化，探讨ESCs与DM皮肤创面难愈之间的关系。方法 48只Wistar大鼠，雄性，体重180～200g。随机分为DM组和正常对照组，各24只。DM组大鼠制备DM大鼠慢性创面愈合模型。两组大鼠同时用特制打孔器在大鼠背部脊柱两侧约1．5cm制作直径1．8cm、面积2．54cm。的全层皮肤缺损（共计96个创面），分别在致伤后第3、7、14和21天拍摄创面，计算创面愈合率；取创缘及肉芽组织，行HE染色及角蛋白19（keratin19，K19）和β1整合素抗体免疫组织化学染色，显微图像分析系统测量表皮厚度、阳性部分面积及灰度值。结果 致伤后第3、7、14和21天，正常对照组大鼠创面愈合率分别为24．48％±3．37％、50．46％±1．26％、92．82％±2．12％和99．41％±0．66％，而DM组分别为2．43％±1．02％、40．59％±1．65％、80．77％±3．57％和85．40％±0．94％，两组同时期比较差异有统计学意义（P〈0．01）。致伤后第3、7、14和21天，正常对照组表皮厚度分别为26．43±3．21、33．29±3．52、31．53±3．35和26．01±3．19p．m，DM组表皮厚度分别为23．58±2．33、31．02±3．38、33．72±5．49和21．80±4．02p．m，致伤后第3、21天，二者比较差异有统计学意义（P〈0．01）。致伤后第3、7、14和21天，正常对照组K19染色的平均阳性单位（positiveunit，PU）值分别为91．68％、93．14％、72．27％和70．31％，而DM组分别为40．29％、40．79％、29．94％和10．37％；正常对照组β1整合素染色的平均PU值分别为49．60％、91．16％、77．13％和57．17％，DM组分别为38．94％、24．16％、61．36％和38．83％，与正常对照组同时期比较，DM组K19和β1整合素染色的平均PU值都降低，且差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 ESCs数量少和活性低可能是DM创面难愈的重要机制之一。     

去分化表皮干细胞的来源鉴定和分析

目的：利用染色体特异性分析方法鉴定去分化表皮干细胞的来源。方法：包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮。分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮干细胞。处理后的表皮片经免疫组化鉴定无表皮干细胞后移植到雌性BALB／c裸鼠背部全层皮肤缺损创面,5d后用免疫组化法检测皮片内角蛋白10（CK10）、CK19和β1整合素的表达,然后用Ⅳ型胶原粘贴法分离皮片内去分化来源的表皮干细胞,并采用PCR的方法检测去分化细胞内的Y染色体。结果：未经处理的表皮片基底部细胞呈CK10染色阴性,CK19和β1整合素染色阳性;Ⅳ型胶原处理后的表皮片内细胞全呈CK10染色阳性。而去基底皮片移植后5d,在皮片的基底侧重新出现CK10染色阴性、CK19和β1整合素染色阳性的细胞。Ⅳ型胶原粘贴分离去分化来源的表皮干细胞,结果表明,移植皮片组在10min内约有4．56％的贴壁细胞出现,而未移植皮片组3h内无贴壁细胞出现。PCR分析结果显示在上述贴壁细胞内能检测到Y染色体的特异序列,而宿主来源的组织检测不到。结论：去分化表皮干细胞来源于移植皮片内成熟表皮细胞的去分化,而非宿主体内的干细胞。     

Delayed wound healing in Mac-1–deficient mice is associated with normal monocyte recruitment

The Mac-1 integrin is an important mediator of migration and inflammatory activation of neutrophils and monocytes. However, the role of Mac-1 in modulating macrophage emigration and activation and its subsequent impact on cutaneous wound healing have not been fully elucidated. To examine the significance of Mac-1 to murine wound healing, we measured epithelialization and granulation tissue formation in partial-thickness ear wounds and full-thickness head wounds, respectively, in Mac-1-deficient mice. Wounds were histologically analyzed at postwounding days 3, 5, and 7. The gap measured between the leading edges of inward-migrating granulation tissue was significantly increased in knockout mice compared with control animals at day 5 (3.8+/-0.3 vs. 2.6+/-0.5 mm; p<0.001) and day 7 (2.2+/-0.4 vs. 0.96+/-0.73 mm; p=0.005). Epithelial gap measurements were also increased in knockout mice vs. wild-type controls at days 3 (0.62+/-0.02 vs. 0.54+/-0.07 mm; p<0.05) and 5 (0.58+/-0.06 vs. 0.39+/-0.08 mm; p<0.001). Immunohistochemistry showed equal numbers of macrophages in knockout and control wounds. These findings show that Mac-1 is required for normal wound healing but that the attenuation in the deposition of granulation tissue and wound epithelialization in Mac-1 knockout mice is not associated with decreased monocyte migration into the wound.     

The effects of the helium neon laser on wound healing in rabbits and on human skin fibroblasts in vitro

Helium-neon laser irradiation was applied to the denuded dermis and full-thickness open wounds on rabbit skin and cell cultures of human skin fibroblasts to investigate its effects on the wound healing process. To determine the effects of He-Ne laser radiation on epithelialization rate, 3×3 cm denuded dermis areas on the flank of 16 rabbits were irradiated daily until complete epithelialization occurred. For histopathological evaluation biopsies were taken on the first day and on the day on which epithelialization was complete. As a second part of in vivo study, identical full-thickness skin wounds were created bilaterally on the middle flank area of 12 rabbits. He-Ne laser irradiation was applied daily to the wounds until complete healing occurred to determine the effects of the low-energy laser on the contraction of open wounds. The contralateral wounds were left untreated, serving as controls. In a separate in vitro study, the effect of single or multiple applications of He-Ne laser irradiation on normal human skin fibroblasts in cell cultures was evaluated using growth measurement. The mean epithelialization time was 11±0.63 days for the laser-treated wounds and 12±0.12 days for the control wounds. The difference was not significant. No significant difference was found between the contraction rates of the full-thickness wounds (e.g., on the seventh postoperative day, the average wound area was 70.2±6.75% of original wound area in the laser-treated group and 66.±8.75% in the control group). Histopathologically, epidermal thickening and an increase in dermal vascularity were observed in healed wounds of the laser-treated groups. However, in vitro, this low-energy laser promoted cell growth in human fibroblast cell cultures in 2-and 3-day treated groups (p>0.05).     

真皮生物模板对成纤维细胞生物学行为的影响

目的　研究真皮生物模板的应用对皮肤组织创伤修复过程中成纤维细胞 (fibroblast,FB)生物学行为的影响 ,探讨其在影响组织修复及减轻瘢痕形成中的作用机制。　方法　 SD大鼠 12 0只 ,在背部造成 2 .5 cm× 2 .5 cm的全层皮肤组织缺损创面 ,随机分为 4个处理组 ,即开放创面组、全厚皮移植组、刃厚皮移植组、复合移植组 (无细胞真皮基质 +刃厚皮移植 ) ,分别于术后 1、2、4、6及 12周取材。通过免疫组织化学及图像分析技术检测组织标本中肌成纤维细胞 (myofibroblast,MFB)的标志蛋白—— α平滑肌肌动蛋白 (α smooth muscle actin,α- SMA)的表达以及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、整合素 α2 、β1 及转化生长因子 β1 (transforming growth factorβ1 ,TGF- β1 ) )的表达量。　结果　复合移植组 α- SMA在术后 1～ 12周低于开放创面组 ,术后 1、4、6周低于刃厚皮移植组 ,术后 2、12周高于全厚皮移植组(P<0 .0 5 ) ;复合移植组 FN在术后 1～ 12周低于开放创面组和刃厚皮移植组 ,术后 1～ 4周高于全厚皮移植组 (P<0 .0 5 ) ;复合移植组整合素 α2 在术后 1～ 12周低于开放创面移植组 ,术后 1～ 4周低于刃厚皮移植组 ,术后 1、2周高于全厚皮移植组 (P<0 .0 5 ) ;复合移植组整合素 β1 在术后 1～ 12周低     

Level of Fibronectin mRNA Is Markedly Increased in Human Chronic Wounds

BACKGROUND: Acute wound healing has been extensively investigated over the years, however, little is known about possible healing defects in chronic wounds. Fibronectin (FN) plays a critical role in different phases of wound healing and has been demonstrated to be degraded in chronic wounds by proteases. Fibroblasts cultured from chronic leg ulcers showed a higher level of FN compared to normal fibroblasts. OBJECTIVE: We explored whether the increase in FN protein in chronic wounds is due to increased FN mRNA. In addition, the level of alpha5beta1 integrin FN cell surface receptor was also examined. METHOD: Skin biopsies were taken from normal skin within a few hours of Mohs surgery and from the edge of chronic venous leg ulcers. In situ hybridization was performed to determine the level of FN mRNA. The level of integrin alpha5beta1 was determined by immunohistochemistry. RESULTS: The level of FN mRNA in normal skin and acute wounds was undetectable. In contrast, FN mRNA was heavily induced throughout the dermis of chronic wounds. Immunostaining using a monoclonal antibody against the alpha5 subunit of integrin revealed that chronic wounds and normal skin showed undetectable levels of alpha5beta1 integrin. A large induction of alpha5 was observed in acute wounds. CONCLUSION: For reepithelization to occur, epidermal keratinocytes need to migrate over the wound surface, a process requiring an interaction between FN and its cell surface receptor integrin alpha5beta1. These findings suggest that although FN mRNA is increased in chronic wounds, lack of FN cell surface receptor may prevent migration of epidermal keratinocytes in chronic wounds.