TIP30基因对ACC-2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:观察肿瘤抑制基因TIP30修饰后的人涎腺腺样囊性癌细胞(ACC-2)对裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法:BALB/cnu/nu鼠30只(4周龄,体重18-20g),随机分为3组,每组各10只;TIP30基因修饰的ACC-2细胞(AdTIP30/ACC-2)、野生型ACC-2细胞(wt/ACC-2)及对照基因LacZ修饰的ACC-2细胞(AdLacZ/ACC-2)分别注射小鼠背部皮下,观察肿瘤生长情况及小鼠存活时间.结果:①.AdTIP30/ACC-2组移植瘤出现时间比wt/ACC-2组及AdLacZ/ACC-2组晚3d,且肿瘤生长缓慢(P＜0.01);②.存活时间,AdTIP30/ACC-2组(53.0±3.3)d,有2只长期存活;wt/ACC-2组(26±2.2)d;AdLacZ/ACC-2组(29±2.4)d.结论:抑癌基因TIP30能够显著抑制人涎腺腺样囊性癌细胞在裸鼠体内生长,延长荷瘤小鼠存活期.     

TIP30对ACC-M裸鼠移植瘤抑制作用

目的:观察肿瘤抑制基因TIP30对涎腺腺样囊性癌高转移细胞(ACC-M)致裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法:设计CMV启动子序列的特异引物及Taqman探针进行实时PCR,制备AdTIP30/ACC-M病毒液.BALB/c nu/nu鼠30只(4周龄,体重18～20 g),随机分3组,各10只,AdTIP30/ACC-M、ACC-M及AdLaeZ/ACC-M分别注射小鼠背部皮下,观察肿瘤生长情况.结果:实时PCR测定AdTIP30/ACC-M病毒滴度为3.01×1010/ml,AdTIP30/ACC-M组移植瘤出现时间要比ACC-M组及AdLacZ/ACC-M组推迟4 d,肿瘤生长缓慢(P＜0.01).结论:实时PCR测定重组腺病毒滴度快速、简便、滴度高.抑癌基因TIP30能够显著抑制涎腺腺样囊性癌高转移细胞在裸鼠体内生长.     

减毒沙门菌体内介导基因转移对ACC-M抑制的实验研究

目的:观察构建含有Tip30与人IFN-γ基因的真核表达及共表达质粒的重组减毒伤寒沙门菌对腺样囊性癌肺转移抑制作用。方法:4周龄BALB/Cnunu雄鼠25只,随机分成5组,每组5只,其中对照组5只(PBS)、单纯减毒沙门菌组5只(SL7207)、携带人IFN-γ基因减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-IFN)、携带Tip30基因减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-Tip30)、携带Tip30与人IFN-γ基因的真核共表达质粒的重组减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-Tip30/IFN),均于尾静脉接种高转移腺样囊性癌(ACC-M)细胞。10d后对照组裸鼠口服PBS,其余各治疗组口服相应的减毒沙门菌,隔周1次,共3次。检测:裸鼠肺转移肿瘤细胞内IFN-γ、Tip30的表达、肿瘤生长体积、瘤体重量、带瘤存活期。结果:在治疗组裸鼠肺转移肿瘤细胞胞浆内有对应表达IFN-γ、Tip30;各治疗组均较对照组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长;携带基因治疗组较SL7207治疗组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长;联合基因治疗组较单基因治疗组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长。结论:减毒伤寒沙门菌不仅能作为载体介导基因对腺样囊性癌肺转移有抑制作用,而且自身对腺样囊性癌肺转移也有抑制作用。联合基因较单基因抑制效果好,有协同作用。     

人涎腺腺样囊性癌神经侵袭动物模型的建立

目的　建立人涎腺腺样囊性癌神经侵袭的动物模型 ,为研究腺样囊性癌神经侵袭的发生、发展提供实验依据和条件。　方法　将人涎腺腺样囊性癌细胞肺高转移株ACC M细胞注射入裸鼠眶下区皮下 ,分别于注射后7d、11d、14d、2 1d、2 8d、动物自行死亡或 5 6d时用HE染色方法观察肿瘤生长和神经侵袭的情况 ,并测量眶下神经管内神经侵袭的长度。结果　 85 7%的荷瘤裸鼠发生眶下管内神经侵袭。 7d、11d、14d、2 1d、2 8d和自行死亡组神经侵袭长度分别为 0 0 9mm、(0 2 7± 0 0 2 )mm、(0 38± 0 0 5 )mm、(0 6 8± 0 18)mm、(1 0 7± 0 36 )mm和 (2 1± 0 77)mm。结论　该模型是研究腺样囊性癌神经侵袭的良好模型 ,11～ 2 1d作为观察时限为宜 ,尤以 14d最佳     

TNP-470抗人涎腺腺样囊性癌裸鼠肺转移作用的实验研究

肿瘤生长需依赖新生血管生成以维持其营养及代谢要求 ,抗肿瘤血管生成可成为控制肿瘤生长和转移新的治疗途径。我们观察血管生成抑制物TNP 4 70不同应用时间对肺高转移性涎腺腺样囊性癌 (ACC M )在裸鼠体内生长和转移的抑制作用 ,探讨其作用机理 ,为临床试验提供参考依据。1 材料与方法 :①动物实验 :ACC M细胞 (上海第二医科大学附属第九人民医院口腔外科肿瘤生物实验室建立并提供 )经裸鼠尾静脉注射形成肿瘤肺转移动物模型。 4 5只裸鼠随机被分成接种后第 1、7、14天用药组及对照组。用药组动物分别给予皮下注射 30mg/kg的TNP 4 70 …     

TIP30蛋白在ACC-M细胞中的表达鉴定及作用

目的 :筛选含有TIP3 0的涎腺腺样囊性癌高转移细胞 ,检测TIP3 0蛋白在涎腺腺样囊性癌高转移细胞中的表达 ,检测携带外源性TIP3 0细胞的细胞周期分布变化。方法 :应用脂质体转染方法将TIP3 0导入ACC M细胞中 ,G418筛选阳性克隆 ,用免疫印记杂交法 (Westernblot)检测转染细胞中TIP3 0蛋白的表达 ;流式细胞仪测定细胞周期分布。结果 :筛选 14d后 ,含有TIP3 0的ACC M克隆形成 ,TIP3 0蛋白在ACC M中表达稳定 ;携带外源性TIP3 0的细胞G0 G1期比例增高 ,G2 M、S期细胞比例降低。结论 :ACC M细胞能稳定表达外源基因TIP3 0 ,携带外源性TIP3 0的细胞G0 G1期细胞比例增高 ,G2 M、S期细胞比例降低 ,从而影响ACC M细胞的生长 ,是TIP3 0抑制涎腺腺样囊性癌细胞生长的可能机制之一。     

神经生长因子对腺样囊性癌神经侵袭作用的实验研究

目的:探讨神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对腺样囊性癌(adenoidcysticcarcinoma,ACC)神经侵袭的作用。方法:免疫组化方法检测8只神经侵袭裸鼠模型体内ACC癌组织中NGF的表达,比较邻近神经的ACC癌组织与远离神经的癌组织中NGF阳性表达细胞的密度。另10只神经侵袭模型的裸鼠随机分为实验组和对照组,实验组裸鼠腹腔内注射抗NGF抗体40μg/次,隔天一次,持续14d;对照组注射等量磷酸盐缓冲液。统计学t检验比较两组神经侵袭长度的差异。结果:ACC细胞中表达NGF,且邻近神经的ACC中NGF阳性表达细胞的密度显著高于远离神经的ACC。体内注射NGF抗体的实验组动物神经侵袭的长度为(0.156±0.025)mm,显著短于对照组的(0.378±0.050)mm,P<0.01。结论:ACC中NGF的表达增强与神经侵袭相关,NGF能促进ACC的神经侵袭。     

Docetaxel对涎腺粘液表皮样癌高转移细胞增殖及转移力的抑制作用

目的 :研究Docetaxel对涎腺粘液表皮样癌高转移细胞M3 SP4 增殖及转移力的抑制作用。方法 :用细胞计数法、克隆形成法、流式细胞术、癌细胞裸鼠尾静脉注射法、癌细胞裸鼠颌下腺原位接种法研究Docetaxel对M3 SP4 细胞增殖及转移力的抑制作用。结果 :Docetaxel对M3 SP4 细胞具有浓度及时间依赖性生长抑制作用 ,作用 72h后 ,IC3 0 和IC50 分别为 0 .34nmol/L和 0 .6 3nmol/L ;IC3 0 浓度的药物作用于M3 SP4 细胞 ,对照组及处理组细胞群体倍增时间分别为 32 .7h和 43h ;对照组及药物作用浓度分别为 0 .0 5nmol/L及 0 .1nmol/L时 ,克隆形成率为 ( 2 9.2± 1.4) %和 ( 2 0 .2± 0 .8) % ,( 2 .8± 0 .4) % ;在裸鼠体内实验中对照组及治疗组〔30mg/(kg·周 )〕肺表面的转移结节数为 11± 3.4和 0 ;裸鼠颌下腺重量 ( g)为 1.2 0± 0 .2 3和 0 .31±0 .0 5。结论 :Docetaxel可明显抑制M3 SP4 细胞的增殖及转移力。     

白血病抑制因子受体在人涎腺腺样囊性癌细胞系中的表达

目的 :探讨白血病抑制因子受体 (LIFR)与人涎腺腺样囊性癌转移的相关性。方法 :以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC 2及其肺高转移株ACC M作为研究肿瘤转移分子机制的模型 ,应用RT PCR技术和免疫组化方法检测LIFR的表达。结果 :RT PCR检测表明LIFRmRNA在肺高转移细胞株ACC M细胞中的表达低于在ACC 2细胞中的表达 ,免疫组化检测表明LIFR蛋白在ACC M细胞中表达降低。结论 :LIFR在涎腺腺样囊性癌转移过程中可能发挥抑制作用。     

肝素抗涎腺腺样囊性癌细胞裸鼠肺血管粘附研究

目的　通过观察肝素对人涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株 (ACC -M )细胞在裸鼠肺、肝组织的粘附影响 ,证实其对腺样囊性癌肺高转移细胞肺粘附的抑制作用。方法　裸鼠腹腔注射肝素后 ,经尾静脉注入氚标胸腺嘧啶核苷 (3 HTdR)标记的ACC -M细胞 (3 H -ACC -M ) ;分别检测细胞注射后 2h、6h、18h肺、肝组织单位重量的每分钟同位素脉冲数 (CPM )。结果　单位重量肺组织每分钟放射性计数CPM值 :空白对照组 2h、6h、18h分别为 1875 .75± 11.5 3、164 4.5 0± 2 7.2 0和 14 66.5 0± 12 5 .95 ;2 0 0单位肝素组 2h、6h、18h分别为 912 .0 0± 118.5 5、918.0 0± 44 .0 6和 766.60± 77.66。同一时间肝素组肺组织CPM值明显低于对照组 ,有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。单位重量肝组织CPM值在空白对照组和肝素组的相同时间点无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　肝素腹腔注射后可明显降低肺组织内ACC -M细胞对血管内皮细胞粘附数量 ,但对相同时间肝组织内ACC -M细胞粘附数量无显著影响 ,提示肝素具有抑制腺样囊性癌肺转移的作用     

腺病毒介导HSV-TK/GCV与IL-2基因对人涎腺腺样囊性癌的抑制作用

目的探讨腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶（Herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir,HSV-TK/GCV）与白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）基因联合应用对涎腺腺样囊性癌的抑制和杀伤作用。方法将0.2 ml细胞浓度为2×107/ml的涎腺腺样囊性癌高转移细胞株（salivary adenoid cystic carcinoma cell line withhigh tendency of lung metastasis,ACC-M）的细胞悬液接种于20只裸鼠皮下,建立涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤模型。随机将20只荷瘤裸鼠分为A组：HSV-TK/GCV和IL-2联合基因治疗组（TK（IL-2组）;B组：HSV-TK/GCV组（TK组）;C组：空病毒组（EGFP组）;D组：ACC-M组;每组5只。分别于瘤体内注射TK（IL-2;TK;EGFP和无菌生理盐水。注射48小时后,对A、B、C组裸鼠每日腹腔注射GCV,D组每日腹腔注射生理盐水,连续10天。最后一次给药后第二天处死裸鼠,观察各组裸鼠的肿瘤体积和瘤重的变化,计算肿瘤生长抑制率;对移植瘤进行组织病理学观察;应用流式细胞仪检测移植瘤的细胞凋亡情况。结果在A组和B组中,ACC-M的生长均受到显著抑制。治疗后体积数减少,与ACC-M组比较差别有极显著性（P〈0.01）。A组和B组抑瘤率分别为91%和76%;光镜下观察A组和B组均出现了明显的细胞凋亡;流式细胞仪检测A组和B组有明显的凋亡峰出现,凋亡率分别为30.55±0.23和13.53±0.32;C组凋亡率为10.07±0.31,D组凋亡率为8.34±0.41%。除C、D组之间差别无明显性外,其余各组之间差别均有极显著性（P〈0.01）。A组和B组的细胞S期比例明显增加,G2/M期比例明显降低。结论 HSV-TK/GCV联合IL-2基因对ACC-M移植瘤有明显抑制作用,抑瘤效果优于单独应用HSV-TK/GCV系统。     

nm23-h1抑制腺样囊性癌高转移细胞株肺转移的实验研究

目的:研究nm23-h1对腺样囊性癌细胞株(adnoid cystic carcinoma cell line-M,ACC-M)的肺转移是否具有抑制作用。方法:20只裸鼠,随机分为两组,实验组每只裸鼠经尾静脉注入5×106个用阳离子脂质体介导nm23-h1质粒体外转染所得阳性表达的ACC-M细胞,对照组注入等量的未转染ACC-M细胞,1周及4周时处死动物获取肺标本,常规组织学观察。结果:1周时实验组未见转移,而对照组有少量小转移灶;4周时实验组肺内仍未见转移灶,对照组可见大量灰白色转移结节。结论:nm23-h1对ACC-M的肺转移具有抑制作用。     

脂质体介导nm23-h1质粒体内转染腺样囊性癌可行性

目的　研究阳离子脂质体介导nm23-h1质粒体内转染腺样囊性癌的可行性。方法　将腺样囊性癌细胞株体外培养后移植入40只裸鼠体内。ACC瘤体长至直径1 cm左右时,用脂质体包裹nm23-h1质粒进行瘤体内注射, 每次注入质粒-脂质体复合物0.1 ml,其中10只裸鼠每只注射2次,10只裸鼠注射1次,10只作空白对照,10只裸鼠多针道注射0.2 ml质粒及脂质体复合物。注射后2、3、7 d处死动物,获取肿瘤标本作常规组织学及免疫组化研究。结果　瘤体内注射质粒-脂质体复合物3 d后肿瘤细胞内均有nm23-h1表达,7 d后表达增加,肿瘤细胞外间质增加,2次注射较1次注射、多针道注射较单一针道注射有更多的细胞呈阳性表达。结论　脂质体介导nm23-h1 质粒体内转染腺样囊性癌可获得小范围阳性表达,但还不具备临床实施的可能性。     

TNP-470联合顺铂抗腺样囊性癌生长和肺转移的实验研究

目的　研究血管生成抑制剂TNP 470联合顺铂 (CDDP)对口腔腺样囊性癌生长及肺转移的抑制作用。方法　分别将建株的口腔腺样囊性癌肺转移细胞株 (ACC M)细胞悬液注射至裸鼠皮下和尾静脉 ,建立口腔腺样囊性癌皮下移植瘤及实验性肺转移模型。从移植后的第 3周开始 ,于裸鼠对侧皮下注射TNP 470 30mg/kg,隔日 1次 ,共7次。CDDP分别在第 3周和第 4周腹腔给药各 1次 ,剂量为 5mg/kg。停药后第 2d处死裸鼠。测量肿瘤大小 ,称重并计数肺转移结节数。以兔抗人Ⅷ因子相关抗原抗体免疫组化染色后 ,计数皮下瘤块血管密度。结果　与单用TNP 470相比 ,TNP 470联合CDDP对口腔腺样囊性癌生长和肺转移的抑制作用更强 ,但对皮下移植瘤的血管密度影响无明显差异。结论　TNP 470联合CDDP对口腔腺样囊性癌生长和肺转移有明显的抑制作用。     

PTEN抑癌基因对黏液表皮样癌实验性裸鼠肺转移的抑制作用

目的　探讨外源野生型PTEN抑癌基因对人高转移性黏液表皮样癌M3SP2细胞系实验性裸鼠肺转移能力的影响。方法　用脂质体介导方法将PTEN抑癌基因导入M3SP2细胞系 (M3SP2 -PTEN细胞 ) ,转染空载体的细胞系作为对照M3SP2 -pBp细胞 ) ,应用裸鼠肺转移实验测定癌细胞的体内转移能力 ,并进行组织学观察。结果　对照组裸鼠肺转移结节数为 (2 4 0± 1.2 )个 ,组织学观察瘤细胞转移灶体积大 ,细胞生长活跃 ,可见较多核分裂。实验组裸鼠肺转移结节数量减少为 (8 5± 3 4 )个 ,转移抑制率为 6 5 6 % ;组织学观察可见转移灶数量少、体积小 ,并有较多的坏死和凋亡细胞。结论　转染野生型PTEN抑癌基因能降低人高转移性黏液表皮样癌细胞转移能力。     

The biological behaviour of human adenoid cystic carcinoma cells transduced with interleukin-2-gene

Adenoid cystic carcinoma (ACC) of the salivary glands is a highly infiltrative malignant tumour with a tendency for lung metastasis. Gene therapy could be a potentially effective therapy for ACC and its metastasis. The aims of the study were: To transduce interleukin-2 (IL-2) gene into an ACC cell line with predisposition for lung metastasis (ACC-M); to compare the bioactivity of the gene-transduced cells and the parent cell line in vitro and in vivo. The IL-2 gene was transduced via a bicistronic retroviral vector into the ACC-M cells. The growth rate and DNA cell cycles of the parent ACC-M, the control viral vector AmGCEN, and the gene transduced AmIL-2 cell cultures were compared quantitatively and by flow cytometry, respectively. The tumourigenic ability of the three cell lines was verified by inoculation in athymic nude mice. The tumours developed were extracted and compared quantitatively and histologically. There was no difference in the growth rate and the DNA count between the ACC-M, AmGCEN, and AmIL-2 cell cultures. In the animal experiment, both the ACC-M and AmGCEN cells stimulated lung metastasis in all the mice, whereas there was no tumour found in the 1 x 10(6) AmIL-2 cells inoculation. On 3 x 10(6) AmIL-2 cells stimulation, three out of six mice developed tumours but the mass and volume of the tumours were smaller than the other two groups. Under light microscopy, the ACC-M tumours were mainly poorly differentiated with minimal cellular matrix, whereas the AmIL-2 tumours were well differentiated with ample matrix. The transduction of IL-2 gene can reduce the tumourigenicity of ACC-M cells and induces tumour cell differentiation in mice. The IL-2 gene can be a potential effective gene for the treatment of adenoid cystic carcinoma of salivary glands and its lung metastasis.     

nm23-h1转染腺样囊性癌细胞及其增殖能力的实验研究

目的　考察nm23-h1导入腺样囊性癌细胞(ACC-M)后对其体内、外增殖的影响。方法　以阳离子脂质体 (lipofectamine)介导nm23-h1转染ACC-M细胞,体外培养并用G418培养基筛选,体外观察转染组生长情况,并用细胞爬片免疫组化ABC法染色Ki67单克隆抗体;将nm23-h1阳性表达的ACC-M植入10只裸鼠皮下,同时以未转染的 ACC-M作对照,观察肿瘤大小。4周后处死动物,获取标本,常规固定、包埋、切片后采用免疫组化LsAB法研究Ki67 的表达并用流式细胞仪对转染组和非转染组的移植瘤进行细胞周期时相分析。结果　体外培养转染组细胞生长较未转染组慢,这种趋势随着转染组传代次数的增加而更加明显,Ki67呈阳性表达,未转染组Ki67呈部分阳性表达;转染组ACC-M体内移植瘤早期(2周)生长缓慢,2周后生长无统计学差异(P>0.05),细胞周期时相分析结果与之一致。组织切片显示瘤体Ki67,nm23-h1表达均为阴性。结论　nm23-h1的导入可能对ACC-M细胞增殖具有短时间的抑制作用。     

nm23—h1基因导入对腺样囊性癌分化的影响

目的 探讨nm23h1基因对腺样囊性癌细胞分化的影响。方法 体外用了子脂质体介导nm23－h1质粒转染人口腔涎腺样囊性癌（ACC）细胞株,筛选出转染阳性细胞克隆,并植入4只裸鼠颌面部,3w后获取标本,石蜡包埋后进行常规组织学及免疫组织化学检查,实验以未转染的阴性细胞克隆植入4只裸鼠作对照。结果 nm23－h1阳性ACC植入裸鼠体内后肿瘤细胞有向原代细胞回归的倾向,即由实体型向筛状型或管状型转变,肿瘤细胞周围的肿瘤间质增多,巢状的肿瘤细胞外围有基底膜样结构;肿瘤细胞在体内增殖的过程中,表达nm23－h1的细胞数量有逐渐减少、表达强度减弱的趋势。结论 以nm23-h1为靶基因的治疗同时具有抑制转移和促进分化的作用,具有较大的研究价值和临床应用前景。     

中药"参阳"方对人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用

目的:前瞻性研究表明,中药“参阳”方能够延长口腔癌患者的生存期并提高生存率,但其抗癌机制尚不十分明确。本研究的主要目的是观察中药“参阳”方对人舌鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将体外培养的人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞接种于裸鼠皮下,建立人舌鳞癌移植瘤模型,共48只,随机分为4组:“参阳”方A组、B组、阳性对照组和阴性对照组。采用灌胃方法进行药物干预,共30d,观察各组的抑瘤效果及对裸鼠一般状况、生存时间和脾脏指数的影响。结果:每只鼠每天喂养“参阳”方72.8mg,能轻度抑制Tca8113细胞移植瘤的生长,抑瘤率为22.04%;裸鼠的脾脏指数明显提高(t检验,P<0.05);生命延长率为18.9%。主要脏器的组织学检查未见病理改变,表明所用剂量药物无明显的毒副反应。结论:“参阳”方对荷瘤鼠的直接抗癌作用较弱,其对口腔鳞癌的治疗作用可能是通过调节机体的免疫功能而实现。