宫颈小细胞神经内分泌癌中人乳头瘤病毒的研究

目的探讨宫颈小细胞神经内分泌癌中高危型人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）感染情况。方法提取1例33岁宫颈小细胞神经内分泌癌患者手术切除组织癌变区域蜡块中的DNA,通过巢式PCR方法检测其中HPV感染情况。结果该患者肿瘤切除组织高危型HPV18型阳性。结论利用巢式PCR方法分型检测宫颈小细胞神经内分泌癌中的高危型HPV型别,其准确性及敏感性均较高。     

应用聚合酶链反应检测食管癌组织中人乳头瘤病毒

目的 探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)与我国河南地区食管癌发生的相关性.方法 应用HPV L1通用引物GP5+/6+、HPV16E6和HPV18E6型特异性引物多聚酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR),检测林州市食管癌组织中HPV存在状况.结果 31例食管癌组织中,29例检测到HPV阳性,阳性率为93.5%;其中19例检测到HPV16 E6基因,阳性率为61.3%,8例为HPV18 E6基因阳性,阳性率为25.8%,5例HPV16E6和18E6基因均阳性,为混合感染.HPV16和18型阳性率为71.0%.结论 我国河南省林州市食管癌组织中有HPV存在,并且HPV感染可能是食管癌发生的重要病因.     

保定地区食管癌患者癌组织中人乳头瘤病毒感染的检测

目的 探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)与我国河北省保定地区食管癌发生的相关性.方法 应用HPV LI通用引物GP5+,6+、HPV16 E6和HPV18 E6型特异性引物多聚酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR),检测保定地区食管癌组织中HPV存在状况.结果 42例食管癌组织中,37例检测到HPV阳性,阳性率为88.1%;其中19例检测到HPV16 E6基因,阳性率为45.2%,8例为HPV18 E6基因阳性,阳性率为19.0%,5例HPV16 E6和18 E6基因均阳性,为混合感染.结论 我国河北省保定地区食管癌组织中有HPV存在,并且HPV感染可能是食管癌发生的重要影响因子.     

林州市地区食管癌活检组织中人乳头瘤病毒的研究

目的探讨在我国河南省林州市地区食管癌（esophageal carcinoma,EC）活检标本中人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）,特别是高危型HPV的感染状况。方法收集的食管癌活检标本,使用通用引物的套式PCR反应检测HPV的核酸,分别使用型特异性PCR检测HPV16和18的感染。结果18例活检标本全部为HPV阳性,其中HPV16的阳性率为13／18,HPV18的阳性率为4／18,HPV16／18的复合感染为4／18。结论我国河南省林州市地区食管癌活检组织中有HPV存在,其中HPV16的感染占很大比例,并且HPV感染可能是食管癌发生的重要病因。     

应用原位PCR技术检测阴茎癌组织中人乳头瘤病毒DNA

目的：研究人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与阴茎癌的关系。方法：应用原位ＰＣＲ技术对４６例阴茎癌组织中的ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ进行检测。结果：３３例阴茎癌中检测到了ＨＰＶＤＮＡ（７１．７％），其中２９例ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性（６３．０％），６例ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性（１３．０％），２例ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ均阳性，４例ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性而ＨＰＶ１６阴性；２例淋巴结转移癌，３例癌旁不典型增生组织和１例癌旁增生组织ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性。结论：阴茎癌与ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８感染有密切关系，原位ＰＣＲ技术是一项敏感性高、特异性强的技术。     

子宫颈组织中人乳头瘤病毒16型E6基因片段的定量PCR检测

目的探讨子宫颈组织中人乳头瘤病毒(HPV)16型E6基因的含量与疾病严重程度的关系.方法用定量聚合酶链反应(PCR)检测20例慢性宫颈炎,6例宫颈非典型增生,18例宫颈癌组织中HPV16E6基因的拷贝数.结果HPV16E6基因在慢性宫颈炎,宫颈非典型增生及宫颈癌组织中的平均拷贝数(拷贝/μgDNA)分别为6.16×104,5.33×106和6.45×106.统计学处理表明,宫颈非典型增生及宫颈癌组织中E6基因的拷贝数显著高于慢性宫颈炎(P<0.01),宫颈癌组织中E6基因的拷贝数高于宫颈非典型增生组织,但差异无显著性(P>0.05).结论HPV16E6基因的拷贝数与宫颈疾病程度呈正相关,定量检测HPV16E6基因可作为监测宫颈癌高危人群的一种方法.     

尖锐湿疣组织中人乳头状瘤病毒的检测

用免疫组织化学、ＤＮＡ原位杂交和聚合酶链反应技术，检测人生殖器尖锐湿疣和女阴假性湿疣组织中人乳头状瘤病毒衣壳抗原（ＨＰＶ－Ａｇ）和病毒核酸序列（ＨＰＶ－ＤＮＡ），并观察了ＨＰＶ在尖锐湿疣组织中的分布特点与病变组织学改变的关系。结果显示尖锐湿疣中ＨＰＶ－Ａｇ阳性率为７１．４％（３５／４９）；原位杂交ＨＰＶ６／１１ＤＮＡ阳性率为９６．５％（２８／２９）；ＰＣＲ扩增后尖锐湿疣ＨＰＶ６／１１／１６／１８ＤＮＡ阳性率为１００％（５３／５３）；假性湿疣ＨＰＶ６／１１／１６／１８ＤＮＡ阳性率为２１．４％（３／１４）。观察ＨＰＶ－Ａｇ和ＨＰＶ－ＤＮＡ分布，表明ＨＰＶ增殖性感染和尖锐湿疣特异的病理改变密切相关。     

用聚合酶链反应检测食管癌组织中人乳头瘤病毒DNA

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对汕头市区６８例食管癌的石蜡包埋标本进行人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ序列检测，结果显示，ＨＰＶＤＮＡ总阳性率为６６．１８％（４５／６８），检出型别主要为ＨＰＶ６、１１、１６，检出率分别为２７．９４％、３６．７６％和２７．９４％，经统计学处理三型间无显著性差异；ＨＰＶ－１８及未定型别各占８．８２％。值得注意的是ＨＰＶ感染中多重感染占阳性病例的５３．３３％（２４／４５）。初步结果表明，汕头市食管癌高发区有较高的ＨＰＶ感染率，此与食管癌的发生，可能有密切关系。     

人喉癌组织中人乳头瘤病毒DNA的检测

目的为探讨喉癌与人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染的关系和ＨＰＶ在喉癌中基因组型的分布与表达。方法应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）制备非放射性探针标记物－地高辛标记ＨＰＶ共有引物探针,对１４６例喉不同病变的新鲜组织标本（喉癌６８例,喉其它病变４８例,正常喉组织３０例）,进行ＨＰＶ６,１１,１６,１８,３１,３３,３５,４２,５８共９型ＨＰＶＤＮＡ感染的检测;阳性者用多重引物ＰＣＲ方法分型。结果喉癌ＨＰＶ感染阳性率４５．６％（３１／６８）,喉癌颈转移淋巴结组织阳性率２０．０％（３／１５）,喉癌前病变阳性率１１．８％（２／１７）,声带息肉阳性率６．３％（１／１６）,１５例癌旁及１５例癌周正常喉组织均为ＨＰＶＤＮＡ阴性。ＨＰＶＤＮＡ型别分布在喉癌中以ＨＰＶ１６、１８型为主,喉良性病变中以ＨＰＶ６、１１型为主。结论喉癌发生与ＨＰＶ感染有关。     

人乳头状瘤病毒不同型别与宫颈病变的相关性研究

目的探讨人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）不同型别与宫颈病变性质的关系。方法应用ＰＣＲ技术和原位杂交方法对６１例宫颈上皮内瘤（ＣｅｒｖｉｃａｌｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌＮｅｏｐｌａｓｉａＣＩＮ）和１２例宫颈鳞癌（ＳＣＣ）进行ＨＰＶ６Ｂ／１１、１６、１８ＤＮＡ检测。结果ＰＣＲ检测结果显示ＨＰＶ６、１１主要分布于低度鳞状上皮内病变（６１９％）和一部分ＣＩＮⅡ中（２０％），而在ＣＩＮⅢ和ＳＣＣ中检测不到；ＨＰＶ１６、１８的检出率随ＣＩＮ级别增高而增加，在ＳＣＣ中高达８３３％。原位杂交结果显示在低度鳞状上皮内病变中，地高辛（Ｄｉｇ）标记的ＨＰＶ６Ｂ／１１、１６、１８ＤＮＡ杂交物质在核中均呈细颗粒状，为“游离型”。上述杂交阳性信号形态亦出现于ＣＩＮⅡ的所有ＨＰＶ６Ｂ／１１及部分ＨＰＶ１６、１８型感染中，而ＣＩＮⅢ和宫颈鳞癌及部分ＣＩＮⅡ中，其杂交阳性信号均为非颗粒状的“整合型”。结论低度鳞状上皮内病变是以ＨＰＶ６、１１低危型为主的多型别病毒的繁殖性感染，ＣＩＮⅢ和宫颈鳞癌为ＨＰＶ１６、１８高危型病毒的整合型感染，而在ＣＩＮⅡ中存在着ＨＰＶ６，１１和ＨＰＶ１６，１８的繁殖性感染及ＨＰＶ１６，１８的整合型感染     

Kadipiro病毒TaqmanReal—timePCR检测方法的建立

目的利用TaqManReal—timePCR技术,建立Kadipiro病毒（KDV）实时荧光定量PCR检测方法。方法根据GenBank发表的KDV基因序列资料分析结果,在其第12片段基因区段设计KDV特异引物与探针,利用14株不同科属病毒核酸验证方法特异性,重复实验检验方法稳定性,利用体外转录的定量RNA标准品建立基因拷贝数定量分析模型。结果引物与探针具有良好的特异性,同一样品重复检测D值的变异系数均〈1．8％,定量分析模型的灵敏度为100拷贝／反应。结论建立了一种特异、灵敏、高效的KDV一步法TaqManReal-timePCR检测方法,为今后该病毒的监测与研究工作提供技术手段。     

乳腺癌中同源异型盒基因(HOX)A5表达的研究

目的研究乳腺癌组织中同源异型盒基因（HOX）A5mRNA和蛋白表达,并分析其与乳腺癌临床病理参数间的相关性,以探讨HOXA5基因在乳腺癌发生、发展及转移中的作用。方法运用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（Real-time RT-PCR）技术检测60例乳腺癌（其中54例浸润性导管癌）和24例乳腺良性病变中HOXA5 mRNA表达,免疫组织化学SP法检测HOXA5蛋白表达。统计学办法分析HOXA5攮因表达与乳腺癌临床病理参数间的关系。结果（1）乳腺癌中HOXA5 mRNA相对表达量为0．73～193．07,均值为20．85;乳腺良性病变中相对表达量为5．42～81.91,均值为30．94。乳腺癌HOXA5 mRNA表达明显低于良性乳腺病变（P〈0．01）。（2）乳腺癌中HOXA5蛋白表达减少或消失。（3）淋巴结转移阳性乳腺癌病例HOXA5 mRNA表达明显低于转移阴性组,两者间差异有统计学意义（P〈0．05）。HOXA5蛋白在淋巴结转移阳性和阴性乳腺癌中的表达差异具有显著性（P〈0．01）。淋巴结转移阳性的乳腺癌中HOXA5蛋白主要呈弱阳性表达或表达缺失,在淋巴结转移阴性的乳腺癌中主要呈中度至强阳性表达。（4）HOXA5 mRNA和蛋白表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学分型、浸润性导管癌分级等其他临床病理学参数间未见相关性（P〉0．05）。结论HOXA5基因表达异常可能与乳腺癌有关。HOXA5基因表达抑制可能与乳腺癌淋巴结转移有关。     

胃癌组织活化白细胞黏附分子的表达及其与临床病理的相关性

目的 观察活化白细胞黏附分子(ALCAM)在胃癌组织中的表达水平及其与临床病理的关系.方法 采用实时定量PCR和免疫组织化学方法分别检测33例胃癌及正常胃组织中ALCAM的mRNA和蛋白表达水平,分析其表达情况与临床病理资料的相关性.结果 胃癌ALCAM的mRNA表达水平[0.008 7(0.005 8～0.0167)]高于正常胃组织[0.0011(0.000 1～0.063 5),P＜0.05],尤其是低分化癌[0.012 8(0.008 2～0.0167)]及伴淋巴结转移者[0.0174(0.008 6～0.0307)]ALCAM的mRNA表达水平明显升高.免疫组织化学检测显示,无论胞质阳性染色或胞膜阳性染色,胃癌组织中ALCAM蛋白表达水平明显高于正常胃组织,有淋巴结转移的胃癌组织胞质ALCAM阳性比例[(100%(21/21)]明显高于无转移的胃癌组织[66.7%(8/21),P＜0.05].结论 胃癌组织中ALCAM高表达,且与胃癌淋巴结转移有关.     

人乳头状瘤病毒分型检测在宫颈细胞学诊断为ASCUS分层处理中的意义

目的 探讨人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)分型检测在宫颈细胞学诊断为不典型鳞状细胞意义不明确(atypical squamous cell of undetermined significance.ASCUS)分层处理中的意义.方法 对184例宫颈细胞学诊断为ASCUS的患者,分别进行HPV检测和阴道镜下宫颈组织活检.结果 184例宫颈细胞学诊断为ASCUS的患者中,经组织病理学证实炎症112例(60.87%),CIN Ⅰ级33例(17.93%),CIN Ⅱ级17例(9.24%),CIN Ⅲ级8例(4.35%),宫颈鳞癌4例(2.17%),宫颈湿疣10例(5.43%).其中124例经检测呈高危型HPV(high-risk types HPV,HR-HPV)阳性,阳性率为67.39%(124/184),随后经病理学证实炎症66例(53.23%),CIN Ⅰ级22例(17.74%),CIN Ⅱ级16例(12.90%),CIN Ⅲ级8例(6.45%),宫颈鳞癌4例(3.23%),宫颈湿疣8例(6.45%).HPV阳性组CIN以上病变检出率明显高于HPV阴性组(P<0.003).结论对宫颈细胞学诊断为ASCUS的患者,建议作HPV检测,若HR-HPV阳性,则需进一步阴道镜下宫颈活检;若HPV阴性,酌情处理.     

流感病毒型别及亚型的多重RT-PCR方法快速检测

目的为适应流感疫情监测中快速诊断的需要,建立敏感特异的流感病毒多重逆转录PCR(MRTPCR)检测方法。方法对甲1型(H1N1)、甲3型(H3N2)、乙型流感病毒的血凝素(HA)基因保守区域分别设计引物进行MRTPCR。另设计了两对引物对H1N1和H3N2亚型流感病毒的神经氨酸酶(NA)N1、N2作亚型判断。结果MRTPCR可特异性检测出各型流感病毒的目的片段,相互间无交叉反应。二次PCR反应后对H1N1、H3N2流感病毒的检测灵敏度可达0.10TCID50/50μl以下,对乙型流感病毒的检测灵敏度可达0.01TCID50/50μl以下。应用此方法也可特异性地检测出H1N1和H3N2流感病毒的NA基因。结论用MRTPCR从临床患者含漱液标本中检出相关流感病毒的灵敏度要高于用狗肾传代细胞(MDCK)或鸡胚分离的灵敏度,达到了快速、敏感、正确检测流感病毒及其亚型的目的。     

促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤的临床病理学研究

目的探讨促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤（DSRCT）的细胞学和组织学形态、免疫学表型以及在石蜡包埋组织中检测EWS-WT1融合基因的可行性。方法回顾性复习15例DSRCT的临床资料、1例细胞学形态、14例组织学形态和15例免疫学表型,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测1例石蜡包埋组织中的EWS-WT1融合性mRNA,经测序证实并确定融合类型。结果13例为男性,2例为女性,年龄范围12～38岁,平均23．8岁。临床上多表现为腹部不适、腹胀、腹痛和腹部包块,伴有呕心、便秘和体重减轻等症状。体检显示,多数病例于中下腹可触及质硬肿块,境界不清,活动度差。影像学检查显示腹腔或盆腔内多个或单个结节状肿块,直径为3—25cm,平均8．6cm。细胞学涂片显示,在出血性的背景中可见散在、成簇的小圆细胞,核染色深,核仁不清,核分裂象易见,胞质稀少。组织学上,肿瘤由深染的小圆细胞、卵圆形细胞及短梭形细胞组成,呈大小不一、外形不规则的巢状排列,大的瘤巢中央可见坏死,瘤巢之间为大量增生的纤维结缔组织,可伴有玻璃样变性。所有病例均弥漫强阳性表达AE1／AE3、波形蛋白、结蛋白和神经特异性烯醇化酶,部分病例尚表达CAM5．2、上皮膜抗原、CD57、嗜铬粒素A、突触素和WT1,不表达肌生成素、CK5／6、CD117、钙（视）网膜蛋白和CD99。RT-PCR检测出EWS-WT1融合性mRNA,测序结果显示由EWS基因的7号外显子与WT1基因的8号外显子融合所产生,融合性基因含有KTS序列。结论（1）DSRCT是一种好发于青少年男性腹腔和盆腔内、具有多向性分化的高度恶性小圆细胞肿瘤。（2）瘤细胞特征性的波形蛋白和结蛋白核旁点状染色,在DSRCT的诊断和鉴别诊断中具有十分重要的价值。（3）在石蜡包埋的DSRCT组织中能检测出EWS-WT1融合基因的转录产物,RT-PCR可作为DSRCT一项实用的分子遗传学诊断手段。     

MTA1基因过表达与直肠癌浸润和转移的关系

目的：研究MTA1基因mRNA在直肠癌中的表达,阐明该基因可能是直肠癌浸润和转移的分子机制之一。方法：建立测定MTA1基因mRNA表达的逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）最适条件,在半定量水平测定42 例直肠癌标本癌组织和癌旁正常粘膜组织MTA1基因mRNA表达的相对水平,探讨与临床和病理组织学特征的关系。结果：42例直肠癌中有17例MTA1基因mRNA过度表达（癌组织与癌旁正常粘膜组织MTA1基因mRNA表达半定量之比≥2）,过度表达MTA1基因mRNA的直肠癌浸润层次深,淋巴结转移率高,与剩余病例组比较有显著差异（P<0.05）。结论：MTA1基因过度表达与直肠癌浸润和转移相关。     

2009-2010年山西省流感／甲型H1N1流感的病原学监测分析

目的分析掌握山西省2009--2010年流感／甲型H1N1流感的流行特征,为预测和防控流感／甲型H1N1流感流行提供科学依据。方法对哨点医院和集体发热疫情进行监测采样,采用病毒核酸检测法和细胞培养法分离鉴定流感／甲型H1N1流感病毒,并对2009年5月至2010年4月山西省录入“中国流感监测信息系统”的流感样病例监测报告数据及其样本病原学监测数据进行统计分析。结果山西省全年均有流感病毒活动,2009年流行优势毒株为甲型H1N1流感病毒,流行最高峰在11月（阳性率为58．1％,甲型H1N1占88．1％）,主要导致59岁以下人群发病,其中5-24岁年龄组阳性率较高,进入2010年后乙型（Victoria系）流感病毒的活动有所增加,成为流行株。结论流感样病例监测和病原学监测,可以及时反映流感活动状况,对于掌握该省流感／甲型H1N1流感流行规律有着重要意义。     

实验性柯萨奇B_(3m)病毒性心肌病变及其病原的原位逆转录-聚合酶链反应检测

目的　建立柯萨奇B3m(CoxB3m)病毒性心肌病变模型 ,用原位PCR方法检测心肌病变中的病原 ,以阐明CoxB3m病毒在发病过程中的作用。方法　 (1)用Balb/C小鼠 30只 ,制作CoxB3m病毒性急性心肌病变模型 ,5 0只制作慢性反复感染心肌病变的动物模型 ;并与 2 5只正常Balb/C小鼠相对照 ;(2 )对病毒反复感染所致慢性心肌病变动物模型的左室侧壁厚度及左室腔的面积大小 ,采用KS40 0型图像分析系统进行图像分析 ;(3)应用碱性磷酸酶联接的抗地高辛抗体标记的核苷酸直接掺入法建立原位PCR检测心肌组织中柯萨奇B3m病毒RNA。结果　不论是在急性或反复感染的慢性心肌病变模型心肌组织中 10 0 %可找到CVB RNA阳性信号 ,慢性病变者经图像分析证明左心腔扩大 ,室壁变薄 ,与正常对照组相比P <0 .0 1～ <0 .0 5。结论　在病变心肌组织中 ,用原位PCR检测都有阳性的CVB RNA信号 ,说明柯萨奇B3m病毒不仅能引起急性病变 ,反复感染者亦可造成慢性病变 ,后者心腔常扩大且室壁变薄。