不同配伍下防已黄芪汤中黄芪甲苷含量差异性分析

目的:分析不同配伍下防己黄芪汤中黄芪甲苷含量差异性。方法:使用高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)法检测不同组方下黄芪甲苷含有量状况,N2体积流量为2.2 mL/min,Diamonsil C18(2)色谱柱(6 mm,150×4.5 mm),漂移管温度为95℃,柱温为30℃,体积流量为1.1 m L/min,流动相乙腈-水(33∶67),并制作对照品与供试品溶液。结果:选取20 mL同一供试品溶液,色谱条件下0、2、4、6、8、10及12 h检测,得出峰面积RSD%为3.1%,说明12 h内供试品溶液的稳定性较好。选取10 mL黄芪甲苷对照品溶液,色谱条件下共进样6次,检测峰面积RSD%为3.0%,说明仪器精密度较好。制备6份供试品溶液,均进行20 m L,色谱条件检测,结构显示黄芪甲苷含量RSD%为2.9%,说明本研究方法重复性较好。精密称量6份含量已知样品,每份约重2.50g(其他药材数量不变,黄芪大约2.50g),加入2 m L含量为0.71 mg/mL的对照品溶液,依据上述供试品制备发检测加样的回收率状况,结果显示加样平均回收率为95.93%,RSD%为2.0%。制作供试品溶液,20 mL进样,检测其含量状况,不同组方防己黄芪中黄芪甲苷含量有显著改变。结论:HPLC-ELSD法检测结果可靠、准确,对检测防己黄芪汤中黄芪甲苷含量比较适宜。     

HPLC-ELSD法同时测定玉屏风总苷中黄芪皂苷Ⅱ及黄芪甲苷

目的建立HPLC-ELSD法测定玉屏风总苷中黄芪皂苷Ⅱ及黄芪甲苷。方法色谱柱为岛津VP-ODS(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈和0.2%的甲酸溶液,梯度洗脱;柱温为40℃;体积流量1 mL/min;ELSD参数为漂移管温度110℃,N2体积流量3.10 L/min。结果黄芪皂苷Ⅱ在0.62～19.28μg之间呈良好的线性关系(r=0.999 0),平均回收率为99.49%,RSD为1.48%(n=6)。黄芪甲苷在0.36～11.50μg间呈良好线性关系(r=0.999 6),平均回收率为99.33%,RSD为1.76%(n=6)。结论本法简单易行,方法学验证符合要求,适用于玉屏风总苷中黄芪皂苷Ⅱ及黄芪甲苷的定量测定。     

HPLC测定黄芪桂枝五物汤及方中药对的黄芪甲苷含量

目的:测定黄芪桂枝五物汤不同配伍情况下黄芪甲苷的溶出量。方法:采用高效液相色谱法,色谱条件:色谱柱:Hypersil ODSC18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相:甲醇-水(20∶80)为流动相;检测波长:201nm;流速:1.0mL/min。结果:不同配伍组黄芪甲苷的溶出量也不同,全方组为0.079%,黄桂组、黄姜组、黄白组、黄枣组、黄芪组分别为0.079、0.069、0.061、0.055、0.062%。结论:方中不同药味与黄芪配伍后,对黄芪甲苷的煎出量有不同程度的影响。     

HPLC-ELSD同时测定当归补血总苷中黄芪甲苷和黄芪皂苷Ⅱ

目的 建立HPLC-ELSD测定当归补血总苷(黄芪、当归)中的黄芪甲苷和黄芪皂苷Ⅱ的方法.方法 色谱柱Kromail C18(4.6mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水(37.5∶62.5);体积流量0.8 mL/min;ELSD参数:漂移管温度100℃;N2气流体积流量2.60 L/min.结果 黄芪甲苷在0.85 ～6.76 μg之间呈良好的线性关系(r=0.999 2),平均回收率为98.8％,RSD为1.50％.黄芪皂苷Ⅱ在1.05～8.4 μg之间呈良好的线性关系(r=0.999 4),平均回收率为95.7％,RSD为2.70％.结论 该法精密度、重复性良好,简便、快速、准确,适用于当归补血总苷中黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ的测定.     

HPLC-ELSD法测定补血颗粒中黄芪甲苷

目的 建立补血颗粒中黄芪甲苷的测定方法.方法 应用超声提取和高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD),检测,采用Hypersil ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温30℃;流动相:乙腈-水(35:65);体积流量:1.0 mL/min;蒸发光散射检测器检测参数:漂移管温度100.6℃,氮气流量2.7 L/min.结果 黄芪甲苷在2.0～12.2μg时,其线性关系良好(r=0.999 4);平均加样回收率为96.01%(RSD为1.34%).结论 该方法快速简便、精密度好、灵敏度高,可用于补血胶囊中黄芪甲苷的测定.     

LC-MS-MS法同时测定黄芪注射液和黄芪口服液中5种成分

目的建立LC-MS-MS法同时测定黄芪注射液和黄芪口服液中黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素5种有效成分的含有量。方法黄芪注射液和黄芪口服液甲醇稀释液在Agilent ZORBAX SB C18(2.1 mm×150 mm,5μm)色谱柱上分离,流动相为甲醇-水(含0.1%甲酸,70∶30,V/V);体积流量为300μL/min。MS采用电喷雾离子源,多反应监测方式进行正离子扫描。结果 5种成分在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,在黄芪注射液和黄芪口服液中的平均回收率分别为96.8%~102.3%和95.9%~101.5%。结论本法测得结果准确、可靠、灵敏度高,可用于黄芪注射液和黄芪口服液的质量控制。     

当归补血汤中黄芪的鉴别及黄芪甲苷的含量测定

目的:建立当归补血汤中黄芪的鉴别和黄芪甲苷的含量测定方法,为当归补血汤质量标准的建立奠定基础.方法:采用薄层色谱法定性鉴别当归补血汤中的黄芪药材,并利用高效液相色谱法测定黄芪甲苷含量.色谱柱:Diamonsil ODS-C18(5μ,250 mm× 4.6 mm)分析柱;流动相:乙腈-水(32:68);流速:0.6 mL/min;柱温:35℃;载气流速:2.7 mL/min; ELSD检测器漂移管温度:100℃;迸样量20μL.结果:黄芪的薄层色谱鉴别条件专属性好,高效液相色谱检测黄芪甲苷测定方法具有较好的准确性、重现性和可行性,样品在10.01 ～20.2μg范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为95.04％,RSD=0.61％.结论:所建立方法简便、准确,高效液相色谱分离效果好、线性范围宽、灵敏度高,可用于本品的质量控制.     

HPLC-ELSD法测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量

目的:建立高效液相法测定黄芪甲苷含量的方法。方法:采用蒸发光散射检测器(ELSD),以黄芪甲苷为对照品,对自制的黄芪注射液中黄芪甲苷的含量进行测定,色谱柱:MerckODSC18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈水(33∶67),流速:1.0ml/min,ELSD参数:漂移管温度为95℃,氮气气压为3.5kPa。结果:在选定的色谱条件下,当黄芪甲苷的进样量在0.396～3.168μg范围内时与峰面积积分值线性关系良好(r=0.9998,n=8),平均回收率为98.09%,RSD为2.52%。结论:HPLCELSD法具有准确、简便、灵敏度高、无干扰而且重现性好的优点,适合用于黄芪注射液中黄芪甲苷含量的测定。     

野生与栽培黄芪中毛蕊异黄酮苷的测定

目的 通过定量分析比较野生与栽培黄芪药材中毛蕊异黄酮苷的质量分数差异,为评价不同来源的黄芪药材的质量差异提供科学可靠的依据.方法 采用高效液相色谱法测定10批野生与12批栽培黄芪药材中毛蕊异黄酮苷的量.色谱条件:ZORBAX SB-C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,3.5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量:1 mL/min;检测波长:220 nm;柱温:250℃.结果 毛蕊异黄酮苷的工作曲线为Y=14 739 X-5.89,r=0.999 2,线性范围为0.010～0.015μg,加样回收率为104.7%,RSD=0.78%(n=6).10批野生与12批栽培黄芪药材中毛蕊异黄酮苷的平均质量分数分别为0.21 mg/g和0.24 mg/g.结论 本方法 测定结果 准确、重现性较好,可作为评价野生与栽培黄芪药材质量的方法之一.     

玉屏风汤剂不同配伍对黄芪甲苷含量的影响

目的 建立玉屏风汤剂中黄芪甲苷的含量测定方法,探讨不同配伍对玉屏风汤剂中黄芪甲苷含量的影响.方法 采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定.采用Phenomen色谱柱;流动相为乙腈-水(32:68);流速1 ml/min;柱温35℃;ELSD漂移温度103℃,载气(氮气)流量2.5 L/min. 结果 黄芪单煎相比,不同配伍的合煎对黄芪甲苷的含量均呈现不同程度的下降趋势.结论 玉屏风不同配伍汤剂中黄芪甲苷的含量在煎煮过程中存在动态变化,为玉屏风汤剂的配伍规律及物质基础的研究提供了一定的参考.     

玉屏风散配方颗粒与传统汤剂中黄芪甲苷含量的比较

目的比较玉屏风散配方颗粒与传统汤剂中黄芪甲苷的含量。方法采用高效液相色谱-蒸发光检测法测定。色谱条件:Waters C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-水(32:68);流速:1.0 m L/min。ELSD参数:漂移管温度110℃,载气流量2.1L/min。结果配方颗粒与传统汤剂中黄芪甲苷的含量分别为2.12%,2.00%。结论玉屏风散传统汤剂与配方颗粒的含量相当。     

HPLC-ELSD同时测定复方扶芳藤胶囊中卫矛醇和黄芪甲苷的含量

目的:建立复方扶芳藤胶囊(红参,黄芪、扶芳藤等)中卫矛醇和黄芪甲苷的含量测定方法。方法:采用正相HPLC法,色谱柱:Lichrospher5-NH2柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水(91∶9);流速1.0mL/min;柱温为28℃;检测器:PL-ELS2100型蒸发光散射检测器(漂移管温度:65℃,雾化室温度:50℃,气体流量:0.9L/min)。结果:卫矛醇进样量在2.91～29.1μg范围内,黄芪甲苷在1.03～10.3μg范围内,其峰面积的自然对数(Y)与进样量的自然对数(X)呈良好的线性关系(r>0.9990),卫矛醇和黄芪甲苷的平均加样回收率分别是99.24%和103.17%,RSD分别为2.6%和1.8%(n=6)。结论:该方法稳定、重复性好,结果准确,可作为复方扶芳藤胶囊中卫矛醇和黄芪甲苷的含量测定方法。     

HPLC-ELSD法测定芪葛口服液中黄芪甲苷

目的测定芪葛口服液中主要成分黄芪甲苷。方法采用HPLC-ELSD法。色谱柱为Agilent Zorbax-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(33∶67),柱温30℃,体积流量1 mL/min,蒸发光散射检测漂移管温度43℃,雾化器温度35℃,氮气压力172 kPa;进样量5μL。结果黄芪甲苷在1.012~10.120μg具有良好的线性关系,平均加样回收率为96.89%,RSD为1.58%。结论本方法简便、快捷、重现性好,适用于芪葛口服液的质量控制。     

HPLC法同时测定天山岩黄芪中4种异黄酮

目的建立HPLC法同时测定天山岩黄芪中4种异黄酮的含有量。方法天山岩黄芪70%乙醇提取液的分析采用YMC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-0.2%甲酸为流动相,梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;检测波长254 nm;柱温35℃。结果毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素分别在1~50、2~70、0.8~50、2~70μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率95.1%~104.1%,RSD 0.5%~2.8%。结论该方法稳定可靠,可用于天山岩黄芪的质量控制。     

HPLC-ELSD法测定补中益气片中黄芪甲苷的含量

目的建立补中益气片中黄芪甲苷含量的测定方法。方法采用HPLC-ELSD蒸发光散射检测法,色谱柱为ODSC18(4.6mm×250mm,20μm);流动相:乙腈-水(1∶2);进样10μL;室温;流速:0.8mL/min;漂移管温度:105℃;气体流速:2.70mL/min。结果黄芪甲苷对照品在2.528～12.640μg范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9995,平均回收率为99.25%。结论本方法操作简便,结果准确,重现性好,可用于控制该制剂的质量。     

HPLC-ELSD法测定不同来源黄芪药材中黄芪甲苷含量

目的:测定不同来源黄芪药材中黄芪甲苷的含量,为黄芪药材的质量评价提供实验依据。方法:采用HPLC-ELSD法,色谱条件:Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相:乙腈-水(32∶68);流速:1.0 m L·min-1;柱温:30℃。ELSD参数:载气流速2.7 L·min-1;漂移管温度:105℃。结果:黄芪甲苷的线性范围为2.5~12.5μg,r=0.9996(n=6),平均加样回收率为102.40%(RSD1.76%)。结论 :不同产地黄芪药材黄芪甲苷含量存在较大差异。该方法简便快捷,重现性好,可广泛用于黄芪药材的质量控制与评价。     

不同生长年限黄芪中黄芪甲苷和多糖含量比较

目的：通过不同生长年限黄芪药材中黄芪甲苷和黄芪多糖的含量比较,为选择黄芪的适宜采收时间提供依据。方法采用高效液相色谱蒸发光散射检测法测定黄芪甲苷含量,色谱柱为 Hypersil-Keystone C18,流动相为乙腈-水（33∶67）,流速1 mL/min,漂移管温度105℃,空气流速2.7 L/min。采用苯酚-硫酸比色法测定黄芪多糖含量,测定波长490 nm。结果黄芪甲苷的线性范围为1.25～6.28μg,平均回收率为97.28%（RSD＝1.42%）;黄芪多糖的线性范围为10～100μg,平均回收率为99.02%（RSD＝0.94%）。生长1年以上黄芪中黄芪甲苷含量均符合《中华人民共和国药典》标准,生长3年者黄芪甲苷含量最高;生长3年者黄芪多糖含量最高,2年者稍低。结论从黄芪甲苷和黄芪多糖的含量综合来看,适宜采收的黄芪生长年限至少为2年。     

康艾注射液中黄芪甲苷的检测

目的:建立检测康艾注射液中黄芪甲苷含量的HPLC-ELSD法。方法:采用薄层色谱法鉴定黄芪甲苷,采用高效液相色谱法,以蒸发光散射检测器检测,采用外标二点法对数方程计算其含量。色谱柱:SHIMADZUVP-ODS(4.6mm×250mm);流动相:乙腈—水(35:65);流速:1.0mL/min;柱温:30℃;ELSD参数:雾化器温度55℃,漂移管温度为90℃,氮气气压0.75MPa,气体流速为1.15L/min。结果:在色谱图中黄芪甲苷与其它色谱峰完全分离。黄芪甲苷在进样量为0.64～3.20μg时有良好的线性关系Y=1.412X+9.0692(r=0.9999),平均回收率为95.00%,RSD为0.91%。结论:HPLC-ELSD法具有准确、简便、无干扰而且重现性好的优点,适合用于康艾注射液中黄芪甲苷含量的测定。     

川芎嗪与黄芪甲苷配伍对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制

摘要：目的：研究川芎嗪与黄芪甲苷及不同浓度配伍对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化损伤模型的保护作用及机制。方法：建立H2O2诱导损伤模型,将细胞分为十七组,空白对照组、过氧化氢(0.2mmol/L)模型组,川芎嗪（40,80,160μg/mL）剂量组、黄芪甲苷（10,20,40μg/mL）剂量组及两两配伍组,MTT法检测不同浓度川芎嗪、黄芪甲苷及其配伍对氧化损伤人脐静脉内皮细胞的增值影响,筛选出最佳配伍比例;检测最佳配伍组MDA含量和SOD活性,Annexin V- FITC/PI 染色荧光显微镜观察细胞凋亡率, Western Blot 检测 p- Akt 和Akt 蛋白的表达 ,RT-PCR检测AKt mRNA的表达。结果： 与模型组相比,川芎嗪与黄芪甲苷不同浓度配伍组均能提高细胞存活率,且川芎嗪（80μg/mL）剂量组 黄芪甲苷（40μg/mL）剂量组具有极显著差异(P<0.001);川芎嗪、黄芪甲苷配伍组降低细胞MDA含量(P<0.001),提高细胞SOD活力(P<0.001)。同时,川芎嗪、黄芪甲苷配伍组能降低细胞凋亡率（P<0.01）,上调 p-Akt/Akt蛋白（P<0.01）,上调Akt基因mRNA的表达（P<0.001）。结论：川芎嗪（80μg/mL） 黄芪甲苷（40μg/mL）对 H2O2诱导的 HUVECs氧化损伤有保护作用,能缓解氧化应激诱导的 HUVECs 凋亡,其机制与 PI3K/Akt 信号通路有关     

黄芪党参颗粒中黄芪甲苷含量的HPLC测定方法

目的：建立黄芪党参颗粒中黄芪甲苷含量的HPLC测定方法。方法：以ELSD为检测器,色谱柱C18（Alltech Hypersil ODS 4.6 mm×150 mm,5μm）;流动相：乙腈∶水（40∶60）,流速：1.0 mL/min;柱温：25℃;漂移管温度：100℃,载气量：2.6 L/min。结果：回归方程y=1.5471x＋2.6231（r=0.9996）,黄芪甲苷在1.656～4.968μg/mL之间峰面积与浓度线性关系良好。平均回收率为101%。结论：该法简便可靠,可为黄芪党参颗粒质量控制提供依据。