葛根素对高糖诱导HUVEC-12细胞氧化损伤的保护作用

目的研究葛根素对高糖诱导人脐静脉内皮细胞HUVEC-12氧化损伤的保护作用。方法用含100 mmoL/L葡萄糖和10、25、50μmo L/L葛根素的培养基共同孵育HUVEC-12细胞36 h后,测定细胞存活率,细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性,细胞内活性氧(ROS)水平及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平。qPCR检测细胞中SIRT1、PGC-1α mRNA表达,酶联免疫吸附法检测培养液中SIRT1、PGC-1α蛋白含有量。结果葛根素可增加HUVEC-12细胞存活率,抑制细胞LDH释放,清除ROS,降低MDA含有量与Caspase-3活性,增加SOD、CAT活性和GSH含有量。同时,葛根素还能提高SIRT1、PGC-1α mRNA表达及蛋白含有量。结论葛根素能通过激活SIRT1/PGC-1α通路来保护高糖诱导HUVEC-12细胞氧化损伤。     

地连二心颗粒对H_2O_2致小鼠成纤维细胞损伤的保护作用研究

目的:观察地连二心颗粒对H_2O_2致小鼠成纤维细胞损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法:用H_2O_2诱导L929细胞建立氧化损伤模型。MTT法检测不同浓度地连二心颗粒对L929细胞增殖的影响,荧光酶标仪和Hoechst33258染色检测地连二心颗粒对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内活性氧(ROS)含量的影响,比色法测定上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量,用Griess法和ELISA法检测上清液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)含量,比色法测定L929细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性,Western blot检测L929细胞中Bcl-2、Bcl-x L和Bax、Bad蛋白表达。结果:当地连二心颗粒浓度低于100μg/ml时,无论单用地连二心颗粒还是与H_2O_2联用均对L929细胞增殖具有促进作用,但是当其浓度大于400μg/ml或与H_2O_2联用大于200μg/ml时,均对其细胞生长具有抑制作用;地连二心颗粒(25、50、100μg/ml)可抑制L929细胞凋亡,降低细胞内ROS含量;升高上清液中SOD、CAT和GSH-Px活性,降低MDA含量,降低上清液中促炎因子i NOS、NO、TNF-α、IL-1β、IL-6含量,上调抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x L蛋白表达,下调促凋亡蛋白Bax、Bad蛋白表达,降低Caspase-3和Caspase-9的活性。结论:地连二心颗粒对H_2O_2致L929细胞氧化损伤具有较好的保护作用,它主要通过抑制损伤的L929细胞过量产生ROS,增强内源性抗氧化酶GSH-Px、SOD、CAT的活性,降低MDA含量,抑制其分泌i NOS、NO、TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎因子,促进其分泌IL-4、IL-10抗炎因子,上调抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x L表达,下调促凋亡蛋白Bax、Bad蛋白表达及降低Caspase-3和Caspase-9活性,进而提高L929细胞存活率,来发挥对受损L929细胞的保护作用。     

异甘草素对氧糖剥夺/复糖复氧损伤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的研究异甘草素对氧糖剥夺/复糖复氧损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法细胞SH-SY5Y建立OGD/R损伤细胞模型。NC Nrf2-siRNA、siRNA-Nrf2质粒转染SH-SY5Y细胞,并培养48 h,20μmol/L异甘草素预处理2 h后构建OGD/R损伤,24 h后继续加入20μmol/L异甘草素再培养24 h。OGD/R损伤48 h后,测定细胞活力,LDH水平,caspase-3、caspase活性,ROS、MDA、SOD、GSH水平;RT-PCR检测Bcl-2、Bax、NQO1、HO-1 mRNA表达;Western blot检测HO-1蛋白表达。结果 OGD/R诱导SH-SY5Y细胞活力降低,caspase-3、caspase活性升高,ROS、MDA水平升高,SOD、GSH-Px水平降低,Bcl-2、NQO1、HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达降低,Bax mRNA表达增高(P<0.01);经异甘草素干预后,OGD/R SY5Y细胞活力升高,caspase-3、caspase活性降低,ROS、MDA水平降低,SOD、GSH水平及Bcl-2、NQO1、HO-1...     

黄芪甲苷通过调控ET-1对糖氧剥夺致损伤星形胶质细胞中 NLRP3通路的影响北大核心

目的:研究黄芪甲苷通过调控内皮素(ET-1)影响星形胶质细胞中NLRP3通路的作用机制。方法:糖氧剥夺构建星形胶质细胞损伤模型,用qRT-PCR检测细胞中ET-1 mRNA表达,鉴定造模成功与否。CCK-8法筛选黄芪甲苷对模型细胞干预的最佳作用浓度(30μmol/L)和时间(24 h)。细胞分为5组:正常对照组、模型组、心钠肽(ET-1抑制剂)组、黄芪甲苷组、联合组。CCK-8检测各组细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;qRT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达;ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平;Western Blot检测NLRP3通路蛋白NLRP3、Caspase-1表达。结果:与正常对照组比较,模型组细胞增殖能力及Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、炎症因子水平及Bax、Caspase-3 mRNA表达和NLRP3、Caspase-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各给药组细胞增殖能力及Bcl-2蛋白表达显著升高,细胞凋亡率、炎症因子水平及Bax、Caspase-3 mRNA表达和NLRP3、Caspase-1蛋白表达显著降低(P<0.05),其中联合组的效果最显著。结论:黄芪甲苷可通过抑制ET-1表达进而抑制NLRP3信号通路来保护缺血性星形胶质细胞损伤。     

小檗碱通过下调miR-1290缓解高糖诱导的足细胞损伤研究

目的探究小檗碱对高糖诱导的足细胞损伤的影响及其对miR-1290的调控作用。方法采用高糖诱导小鼠肾足细胞MPC5建立细胞损伤模型,给予不同浓度(1.0、2.5、5.0μmol/L)小檗碱进行干预,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Western blotting法检测细胞B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)蛋白表达情况;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;采用qRT-PCR法检测miR-1290 mRNA表达情况。将阴性对照(mi R-NC)和mi R-1290模拟物(miR-1290mimics)分别转染至MPC5细胞,给予5μmol/L小檗碱进行干预,考察miR-1290对小檗碱抑制高糖诱导的细胞凋亡及炎性因子分泌的影响。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著升高(P0.05),miR-1290mRNA表达水平显著升高(P0.05)。与模型组比较,小檗碱组细胞凋亡率显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05),Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著降低(P0.05),miR-1290mRNA表达水平显著降低(P0.05)。与小檗碱+miR-NC组比较,小檗碱+miR-1290 mimics组细胞凋亡率显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著升高(P0.05)。结论小檗碱能够通过下调mi R-1290表达抑制高糖诱导的足细胞凋亡及炎性反应,从而减轻细胞损伤。     

红芪多糖对高糖培养下雪旺细胞Bcl-2/Caspase-3信号通路的影响

目的:通过观察红芪多糖(HPS)对高糖培养下雪旺细胞(SCs)B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)信号通路的影响,探讨HPS在治疗糖尿病周围神经病变(DPN)过程中可能的作用机制。方法:选取出生5～7 d的SD乳鼠4只,随机分为正常组、高糖组、HPS+高糖组、α-硫辛酸(α-LA)+高糖组,从坐骨神经部位提取SCs,放入37℃,5%CO2培养箱中培养,待细胞达整瓶的80%后,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法筛适宜高糖,HPS及α-LA干预的实验浓度,蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白与mRNA的表达情况,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)法流式细胞术检测各组SCs的凋亡率。结果:Western blot,Real-time PCR检测结果显示,与正常组比较,高糖组Bcl-2蛋白及mRNA表达水平降低,Bax、Caspase-3蛋白及mRNA表达水平升高,...     

红景天苷对高糖致内皮细胞表面损伤的保护作用及机制研究

目的:探究红景天苷对高糖诱导下内皮细胞表面损伤的保护作用及机制。方法:对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)以高糖诱导其损伤,并用10-6、10-5、10-4mol/L的红景天苷处理,检测并比较HUVECs细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、细胞凋亡、细胞表面血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、ATP、Bcl-2、Bax、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和活性氧(ROS)等指标。结果:与正常对照组比较,模型组细胞活力、SOD、ATP和Bcl-2显著降低(P0.05),LDH、MDA、细胞凋亡率、VCAM-1、ICAM-1、ATP、Bcl-2、Bax、TNF-α、IL-1α、IL-6、MCP-1和ROS显著升高(P0.05)。与模型组比较,红景天苷中、高浓度组细胞活力、SOD、ATP、Bcl-2显著升高,LDH、MDA、细胞凋亡率、VCAM-1、ICAM-1、Bax、TNF-β、IL-1α、IL-6、MCP-1、ROS显著降低(P0.05)。结论:红景天苷对高糖诱导下的HUVECs损伤具有保护作用,其作用呈浓度依赖性,其机理可能与抗氧化、抗凋亡及抑制炎症反应有关。     

芒果苷对高糖诱导的β细胞凋亡的影响及机制研究

目的:研究芒果苷对胰岛β细胞的保护作用及并探讨其可能的作用机制。方法:建立高糖诱导INS-1细胞凋亡模型,用不同浓度的芒果苷预处理细胞,MTT法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达,荧光探针法检测细胞内ROS水平,丙二醛(MDA)检测试剂盒检测细胞内MDA水平。结果:33 mmol/L葡萄糖能显著诱导INS-1细胞凋亡,芒果苷能以浓度依赖性保护INS-1细胞,降低细胞凋亡率,同时能恢复高糖引起的Bcl-2蛋白表达降低,降低Bax蛋白表达;33 mmol/L葡萄糖能诱导INS-1细胞产生ROS及MDA,芒果苷处理细胞能显著降低ROS及MDA水平。结论:芒果苷可能通过降低细胞内氧化压力抑制高糖诱导的INS-1细胞凋亡。     

芒果苷对高糖诱导β细胞凋亡的影响及机制研究

目的:研究芒果苷对胰岛β细胞的保护作用及并探讨其可能的作用机制。方法:建立高糖诱导INS-1细胞凋亡模型,用不同浓度的芒果苷预处理细胞,MTT法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达,荧光探针法检测细胞内ROS水平,丙二醛(MDA)检测试剂盒检测细胞内MDA水平。结果:33 mmol/L葡萄糖能显著诱导INS-1细胞凋亡,芒果苷能以浓度依赖性保护INS-1细胞,降低细胞凋亡率,同时能恢复高糖引起的Bcl-2蛋白表达降低,降低Bax蛋白表达;33 mmol/L葡萄糖能诱导INS-1细胞产生ROS及MDA,芒果苷处理细胞能显著降低ROS及MDA水平。结论:芒果苷可能通过降低细胞内氧化压力抑制高糖诱导的INS-1细胞凋亡。     

康莱特注射液对人肺腺癌细胞A549凋亡的影响及机制

目的观察薏苡仁注射液(康莱特注射液)对人肺腺癌细胞A594凋亡的影响,并探讨康莱特抗肺腺癌细胞的作用及机制。方法体外培养人肺腺癌细胞株A549,分别加入5,10,15,20,25 mL/L康莱特注射液,对照组加等量生理盐水,孵育48 h后,采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期的变化;20 mL/L康莱特注射液孵育48 h后,收集细胞,FCM测定细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、免疫印迹(Western blot)法分别测定Caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas、FasL mRNA和蛋白的表达情况。结果康莱特注射液处理后,G1期的细胞均显著增加,S期细胞明显减少;20 mL/L康莱特注射液处理A549细胞48 h后,细胞凋亡率、Caspase-3、Bax、Fas、FasL mRNA和蛋白表达显著升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下降,Bcl-2/Bax比值显著降低。结论康莱特注射液可通过上调A549细胞Caspase-3、Fas和FasL的表达,降低Bcl-2/Bax比值,诱导其凋亡,产生抗肿瘤作用。