奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞保护作用研究

目的探究奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞的保护作用及其机制。方法采用谷氨酸损伤PC12细胞建立模型,用MTS法考察奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞存活率的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2和Bax的变化。结果谷氨酸造模浓度为12.5 mmol/L,奇壬醇组细胞的存活率高于模型组(P 0.01)。模型组细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01),奇壬醇组细胞的凋亡率显著低于模型组(P 0.01)。与对照组相比较,模型组caspase-3和Bax蛋白的表达显著升高,Bcl-2蛋白的表达显著降低,而与模型组相比较,奇壬醇组caspase-3和Bax蛋白的表达量显著降低,Bcl-2蛋白的表达显著升高,差异均有统计学意义(P 0.01)。结论谷氨酸能诱导PC12细胞凋亡,而奇壬醇通过抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,发挥其对PC12的保护作用。     

MPP~+诱导PC12细胞氧化应激损伤的实验研究

目的:考察MPP+诱导PC12细胞氧化应激损伤作用,并探讨其机制。方法:以不同浓度、不同作用时间的MPP+作用于PC12细胞,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪测细胞凋亡率,紫外可见分光光度计测LDH、NO、NOS、MDA含量和SOD活性。结果:MPP+终浓度达到300μmol/L时,作用48h后可明显降低PC12细胞存活率(P0.001),提高细胞凋亡率(P0.01),增强LDH、NO、NOS、MDA的含量和降低SOD活性,有统计学意义(P0.05)。结论:MPP+能诱导PC12细胞氧化应激损伤,其作用机制可能是通过增加PC12细胞NO和NOS含量,引起胞内SOD的活性降低,从而引起脂质过氧化物增加来损伤多巴胺能神经细胞的。     

芍药苷对氯化钴诱导PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的研究芍药苷对氯化钴诱导PC12细胞氧化应激损伤的保护作用。方法芍药苷预先处理PC12细胞1 h,再加入CoCl_2共孵育24 h。采用MTT法检测PC12细胞存活率,利用DCFH-DA探针、Annexin FITC-V/PI双染法、JC-1探针检测芍药苷(100、200μg/mL)对PC12细胞ROS水平、细胞凋亡率及线粒体膜电位值(MMP)的影响。结果 CoCl_2诱导PC12细胞24 h后,其半数抑制浓度(IC_(50))为1.2 mmol/L。与模型组比较,200μg/mL芍药苷提高CoCl_2诱导PC12细胞存活率(P0.05),减少细胞内ROS水平(P0.05),抑制细胞凋亡(P0.05),提高MMP(P0.05)。结论芍药苷对CoCl_2诱导PC12细胞氧化应激损伤有显著保护作用。     

通络化痰胶囊对H2O2所致的PC12细胞凋亡的保护作用及机制

目的:探讨通络化痰胶囊对过氧化氢(H2O2)所致的大鼠嗜铬瘤细胞(PC12)细胞凋亡的保护作用及机制.方法:PC12细胞常规培养后,首先通过MTT检测细胞存活率的方法进行H2O2损伤模型的摸索和通络化痰胶囊药物浓度的筛选;确定造成PC12细胞损伤的H2O2浓度和通络化痰胶囊的安全作用浓度后,将处于对数生长期的PC12细胞分为对照组、模型组和通络化痰胶囊6.25,12.5,25,50,100mg·L-15个治疗组.用200 μmol· L-1H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞存活率、Hoechst33342荧光核染色观察细胞凋亡形态学改变、流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率、Western blot 方法检测与细胞凋亡线粒体途径密切相关的蛋白细胞色素C(CytC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达的变化.结果:200 μmol· L-1H2O2诱导PC12细胞损伤明显,浓度小于等于100 mg·L-1的通络化痰胶囊浓度对正常PC12细胞的存活率没有抑制作用.与模型组比较,各通络化痰治疗组PC12细胞存活率提高(P＜0.01),凋亡率下降(P＜0.01),Cytc和Caspase-3的表达减少(P＜0.01),其作用与剂量有关.结论:通络化痰胶囊可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞凋亡线粒体途径中凋亡相关CytC和caspase-3的表达有关.     

石菖蒲醇提物对SH-SY5Y细胞增殖及抗氧化损伤作用

目的:研究石菖蒲醇提物对SH-SY5Y细胞增殖的影响和对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用。方法:以不同浓度(0.01,0.05,0.10,0.25,0.50,1.00g/L)的石菖蒲醇提物培养SH-SY5Y细胞24h,观察细胞形态,并用MTT法测算存活率。以与上述相同浓度组的石菖蒲醇提物预保护SH-SY5Y细胞24h后,加入H2O2继续培养24h,观察细胞形态,测算存活率。结果:与对照组相比,0.25、0.50g/L的石菖蒲醇提物对SH-SY5Y细胞的增殖有显著促进作用(P0.01);与H2O2模型组相比,0.25、0.50g/L的石菖蒲醇提物可显著减轻H2O2诱导的氧化损伤(P0.01)。结论:石菖蒲醇提物在一定浓度内有促进SH-SY5Y细胞增殖及抗H2O2诱导的氧化损伤的功效。     

楮实子提取物对衣霉素诱导的细胞ERS的改善作用及其分子机制

目的:探讨楮实子提取物对衣霉素诱导的细胞内质网应激(ERS)模型的影响及其分子机制。方法:楮实子含药血清干预衣霉素处理的PC12细胞制备内质网应激模型,造模后分为ERS模型组和楮实子高、中、低剂量组。运用CCK8法检测各组内质网应激模型PC12细胞存活率;流式细胞仪检测细胞的凋亡率及细胞周期;利用免疫印迹法检测GRP78及Caspase-12蛋白表达。结果:楮实子含药血清可提高经衣霉素处理后的PC12细胞存活率(P0.05),楮实子使衣霉素(Tu)诱导的内质网应激细胞的细胞周期中的G2期明显增加(6.9%19%),ERS模型组细胞凋亡率为8.36%,而楮实子高剂量组细胞凋亡率为4.51%,楮实子可下调凋亡相关蛋白GRP78、Caspase-12的表达,降低内质网应激反应。结论:楮实子可有效缓解衣霉素诱导的细胞毒性,增加细胞周期阻滞,其作用机制可能是通过细胞周期阻滞,在G2期对损伤的细胞进行修复,缓解内质网应激的进一步进展,进而抑制细胞凋亡。     

哈巴苷对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞毒性的保护作用

目的探讨哈巴苷对β淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导的PC12细胞毒性的影响。方法 PC12细胞以哈巴苷(20、40、80μmol/L)预孵育3 h后以Aβ25-35(30μmol/L)损伤24 h;MTT法检测细胞增殖;检测细胞上清液中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用Annexin-V-FITC双染法检测细胞凋亡率;检测活性氧(ROS)的生成;Western blotting法检测Akt、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,Aβ25-35使PC12细胞的存活率显著降低(P0.01),细胞上清液中MDA水平显著升高(P0.01)、GSH和SOD水平显著降低(P0.01),细胞内ROS水平显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著增加(P0.01),细胞内p-Akt、Bcl-2蛋白表达下调(P0.01),Bax蛋白表达显著上调(P0.01);哈巴苷预孵育PC12细胞3 h,使细胞上清液中的MDA水平降低,GSH和SOD水平显著升高(P0.05、0.01);明显剂量依赖性抑制细胞凋亡;上调p-Akt和Bcl-2蛋白表达(P0.05、0.01),并下调Bax蛋白表达(P0.05、0.01)。结论哈巴苷改善Aβ25-35诱导的PC12细胞毒性,可能通过激活PI3K/Akt信号通路和上调细胞内SOD水平发挥作用。     

龙血通络胶囊对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:本文探讨过氧化氢(H_2O_2)诱导PC12细胞损伤后,龙血通络胶囊的神经保护作用及其潜在作用机制。方法:以500μmol·L~(-1)H_2O_2构建PC12细胞损伤模型,实验分为空白组,模型组(H_2O_2,500μmol·L~(-1)),龙血通络胶囊组(LTC,1,2,4 mg·L~(-1))。通过细胞增殖毒性检测(CCK-8),胞内活性氧(ROS)水平,线粒体膜电位水平(JC-1),细胞凋亡率以及蛋白免疫印迹法(Western blot)评价龙血通络胶囊对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的神经保护作用。结果:与空白组比较,模型组的细胞存活率显著降低(P0.01),ROS水平显著上升(P0.01),线粒体膜电位水平下降,细胞凋亡率显著升高(P0.01),剪切的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)水平显著上升(P0.01)。与模型组比较,LTC组(1,2,4 mg·L~(-1))能浓度依赖性升高细胞的存活率(P0.01),降低ROS水平(P0.05),维持线粒体膜电位水平,降低细胞的凋亡水平(P0.01),并显著降低PARP蛋白的剪切水平(P0.01)。结论:龙血通络胶囊对H_2O_2诱导的PC12细胞损伤具有显著的保护作用,其作用机制可能是通过抑制胞内氧化应激,维持线粒体功能,促进DNA修复等途径进而抑制神经细胞凋亡。     

常山水提醇沉物对EC9706细胞周期、凋亡、能量代谢的影响

目的从细胞增殖、凋亡、细胞周期、能量代谢角度,研究常山水提醇沉物抗食管癌细胞EC9706的作用及机制。方法用MTT法检测EC9706细胞活性,流式细胞术检测药物对食管癌EC9706细胞凋亡、周期的影响,能量代谢检测系统检测药物对EC9706细胞能量代谢的影响。结果不同浓度常山水提醇沉物作用48 h后能有效抑制EC9706细胞增殖,呈剂量依赖性(P<0.01),可以有效促进细胞凋亡(P<0.05),将EC9706细胞阻滞于S期和G2/M期(P<0.05),并且明显抑制细胞糖酵解及线粒体代谢能力(P<0.01)。结论以上结果表明,常山水提醇沉物可能通过干预细胞周期、凋亡及能量代谢抑制食管癌EC9706细胞增殖。     

灯盏花素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的观察灯盏花素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用MTT法检测细胞相对存活率,流式细胞术检测凋亡率,DCFH-DA法检测细胞内活性氧水平;Rhodamine123染色法检测线粒体膜电位水平;Western blot法检测胞浆Cyt-C的表达;ELISA法检测caspase-3和caspase-9酶活性。结果 250μmol/L MPP+处理PC12细胞,细胞存活率显著降低,并明显诱导细胞产生凋亡。而经灯盏花素(12.5、25、50μg/L)预处理,有效抑制MPP+诱导的细胞调亡,明显增加PC12细胞存活率,同时使细胞活性氧的增加和线粒体膜电位的降低;并明显抑制胞浆Cyt-C的释放和caspase-3和caspase-9的高表达。结论灯盏花素预处理能明显提高MPP+诱导的PC12细胞损伤的细胞存活率,其机制可能与抑制细胞线粒体凋亡途径有关。     

橄榄苦苷对H_2O_2诱导的PC12氧化应激损伤的保护作用

目的:观察橄榄苦苷(Oleuropein)对H_2O_2诱导的PC12细胞氧化应激损伤的保护作用,并探讨其分子机制。方法:实验分为空白对照组、模型组和实验组。利用H_2O_2作用PC12细胞建立氧化应激损伤模型,实验组给予50、100、200、400μmol/L的橄榄苦苷分别作用24、48、72 h,采用MTT法检测PC12细胞的活力,TUNEL法检测细胞凋亡率,ELISA法检测超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)活性,免疫印迹法(western blot)检测胞浆细胞色素c(Cytochrome c,Cyt-c)、Caspase-3蛋白的表达。结果:橄榄苦苷能够抑制H_2O_2诱导的PC12细胞的活力下降(P0.01),降低H_2O_2诱导的PC12细胞的凋亡率(P0.05,P0.01),抑制H_2O_2诱导的PC12细胞内SOD及GSH-PX活力的降低(P0.01,P0.05),橄榄苦苷抑制H_2O_2诱导的细胞凋亡蛋白Cyt-c、Caspase-3表达的上调(P0.01,P0.05)。结论:橄榄苦苷对H_2O_2诱导的PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

康莱特注射液对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的观察康莱特注射液对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法取对数生长期人乳腺癌MCF-7细胞,分为对照组和康莱特不同浓度组(10、20、40μL/mL)。RPMI-1640培养基培养24 h后药物处理,采用MTT法检测康莱特注射液对MCF-7细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,Hochest荧光染色法检测细胞核变化,ELISA及Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果康莱特注射液作用12、24、48 h对MCF-7细胞增殖均有显著的抑制作用(P0.05,P0.01);与对照组比较,康莱特注射液作用48 h后G1/G0、G2/M期细胞比例增加(P0.001,P0.01),S期细胞比例下降(P0.01),细胞凋亡率升高(P0.05,P0.001),Bcl-2蛋白表达明显降低、Bax蛋白表达明显升高(P0.01,P0.001)。结论康莱特注射液能抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,其机制与降低Bcl-2蛋白表达和增加Bax蛋白活性有关。     

金银花对H_2O_2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨金银花水提物对过氧化氢(H_2O_2)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法:采用H_2O_2损伤PC12细胞建立氧化损伤模型,以不同浓度金银花水提物(5、25和50μg/ml)进行研究,采用MTT法检测细胞活力,DCFH-DA检测ROS的水平,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫印迹实验检测细胞中Sirt3和凋亡相关蛋白蛋白表达。结果:不同浓度金银花水提物(5、25和50μg/ml)能够抑制H_2O_2诱导的细胞死亡并呈剂量依赖性。H_2O_2组细胞活力和凋亡率较对照组显著增加,给予金银花水提物作用48 h后,明显降低细胞内活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量,增加超氧化物歧化酶(SOD)活力,抑制H_2O_2诱导的细胞凋亡并上调Sirt3、IDH2、Bcl-2蛋白表达,下调Bax、caspase3蛋白表达。结论:金银花水提物能够抑制H_2O_2诱导的PC12细胞的氧化损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激引起的细胞凋亡并调控ROS/Sirt3途径有关。     

大黄醇提物对氯化血红素诱导HT22细胞自噬和凋亡的影响

目的 探究大黄醇提物对氯化血红素诱导损伤后HT22细胞自噬与凋亡的影响。方法 将HT22细胞分为正常组、模型组和大黄醇提物高、中、低剂量组(25、12.5、6.25μg/mL),给药干预24 h后，以40μmol/L氯化血红素诱导3 h建立细胞脑出血损伤模型。造模结束后，CCK-8法检测细胞存活率，试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot法检测细胞凋亡及自噬相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、微管相关蛋白轻链3(LC3)、Beclin1及P62表达。结果 与正常组比较，模型组细胞存活率降低(P<0.01),LDH漏出率、细胞凋亡率和Bax/Bcl-2、caspase-3、Beclin1、LC3蛋白表达升高(P<0.01),P62蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较，大黄醇提物各剂量组细胞存活率升高(P<0.05,P<0.01),LDH漏出率、细胞凋亡率和Bax/Bcl-2、caspase-3、Beclin1、LC3蛋白表达降低...     

南、北五味子醇提物对对乙酰氨基酚诱导的药物性肝损伤保护作用及药效差异研究

探究南、北五味子醇提物对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的药物性肝损伤保护作用及差异。CCK-8法检测南、北五味子醇提物对LO2细胞生存率的影响;构建APAP诱导的LO2细胞损伤模型,检测南、北五味子醇提物对细胞损伤的影响;利用APAP构建小鼠肝损伤模型并将小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组及不同批次南、北五味子醇提物组,通过小鼠血清ALT,AST检测,肝组织中的MDA,GSH,GSH-PX和SOD含量测定,HE染色以及TUNEL染色等评价不同批次南、北五味子醇提物对药物性肝损伤的保护作用。结果显示,醇提物剂量小于1 g·L~(-1)时不影响LO2细胞生存率。与模型组相比,南、北五味子醇提物各组均可显著抑制APAP诱导的肝细胞凋亡,提高细胞生存率,同时显著降低细胞培养上清中ALT,AST水平(P0.05或P0.01)。且北五味子醇提物各组生存率较为一致,而南五味子醇提物不同组之间生存率差异较大。利用APAP诱导的小鼠肝损伤模型研究表明,与模型组相比,南、北五味子醇提物各组均能够明显改善病理损伤,抑制细胞凋亡和血清中ALT和AST水平升高(P0.01),降低MDA含量(P0.01),同时显著提高GSH,GSH-PX和SOD活性(P0.01),其中南五味子醇提物-2组作用最佳(P0.05或P0.01)。与其他给药组相比,南五味子醇提物-1作用则较差(P0.05或P0.01)。该研究表明南、北五味子醇提物对APAP诱导的药物性肝损伤均有保护作用但不同产地南五味子作用差异较大。     

苦豆子总碱对PC12细胞的毒性

目的研究苦豆子总碱对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞的毒性。方法 PC12细胞与0. 5、1. 0、2. 0 g/L苦豆子总碱分别孵育24 h后,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞膜损伤,Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡,PI染色法检测细胞周期,FCM法检测细胞内Ca2+浓度。结果随着苦豆子总碱质量浓度增加,PC12细胞收缩、变小变圆、破裂脱落现象越明显。与对照组比较,苦豆子总碱组PC细胞存活率及G0/G1期、G2/M期细胞比例显著降低(P 0. 01),细胞LDH漏出率、早凋细胞及S期细胞比例、Ca2+浓度显著增加(P 0. 01)。结论苦豆子总碱对PC12细胞有明显毒性,其机制可能是通过诱导细胞凋亡、抑制细胞内DNA合成、阻滞细胞周期、引起细胞内Ca2+超载来导致细胞死亡。     

蒺藜皂苷对H2O2诱导PC12细胞凋亡保护作用及其机制研究

目的探讨蒺藜皂苷(gross saponin of Tribulus terrestris,GSTT)对H2O2诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cells,PC12)凋亡的保护作用及其机制。方法实验分为对照组、模型组及蒺藜皂苷高(GSTT1)、低(GSTT2)剂量组。用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax。结果与模型组比较蒺藜皂苷组随着剂量的增加PC12细胞存活率提高(P<0.001),凋亡比率下降(P<0.01),线粒体膜电位回升(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.05),而Bax的表达降低(P<0.05)。结论蒺藜皂苷可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。     

刺五加有效部位对MPP~+损伤PC12细胞的保护作用

目的:对刺五加有效部位进行体外药效学评价。方法:采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪测细胞凋亡率,紫外可见分光光度计测LDH的漏出量以及SOD、MDA、NO、NOS的活性和含量。结果:刺五加有效部位可以发挥良好的神经元保护作用,能提高MPP+损伤PC12细胞的存活率(P0.01),降低细胞凋亡率(P0.01),降低LDH的漏出量以及NO、NOS、MDA的含量和降低SOD活性,有统计学意义(P0.05)。结论:刺五加有效部位对MPP+损伤PC12细胞具有一定的保护作用,其作用机制可能是通过降低PC12细胞NO、NOS、MDA的含量和LDH的漏出量,引起胞内SOD的活性增强,从而降低细胞凋亡率,提高细胞存活率而实现的。     

生地黄水煎剂对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用研究

目的:探讨生地黄水煎剂对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法:以H2O2处理PC12细胞制作成氧化应激损伤模型,采用MTT法检测生地黄水煎剂对PC12细胞活性的影响,并采用Westen blot法检测PC12体外凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素C、caspase3的表达情况。结果:经150μmol/L H2O2处理的PC12细胞存活率明显降低,而经生地黄水煎剂(2.5、5、10mg/m L)预处理后,细胞存活率大致呈浓度依赖增长,并明显抑制细胞凋亡相关蛋白Bax、细胞色素C、cleaved-Caspase3的高表达,提高Bcl-2/Bax比值。结论:生地黄水煎剂对氧化应激损伤的PC12细胞凋亡具有保护作用,其保护机制是通过抑制细胞凋亡相关蛋白Bax、细胞色素C、cleaved-Caspase3的表达,并提高Bcl-2表达而实现的。     

栝楼桂枝汤对谷氨酸所致的PC12细胞损伤的保护作用

目的研究栝楼桂枝汤水提物(Glgzd)对谷氨酸所致的PC12细胞损伤的保护作用。方法采用15 mmol/L谷氨酸诱导PC12细胞损伤,栝楼桂枝汤水提物干预24 h后,采用MTT法检测细胞活力,荧光分光光度计检测细胞内ROS的表达,酶标仪检测细胞内GSH的含量。结果与对照组比较,谷氨酸诱导的PC12细胞存活率下降,ROS DCF荧光强度增强,GSH含量下降。经栝楼桂枝汤干预后,PC12细胞存活率提高,细胞内ROS表达减弱,GSH含量增加。结论栝楼桂枝汤可抑制谷氨酸引起的PC12细胞损伤,其作用机制可能是通过降低细胞内ROS的表达和增加GSH的含量这一途径。