PI3K/CTGF信号通路在TGF-β1诱导A549细胞表达collagen I过程中的作用

 目的： 研究磷脂酰肌醇3-激酶/结缔组织生长因子（PI3K/CTGF）信号通路在转化生长因子β1（TGF-β1）诱导人肺腺癌A549细胞表达I型胶原蛋白（collagen I）过程中的分子机制。方法： 体外培养A549细胞,予TGF-β1刺激,观察CTGF和collagen I的mRNA和蛋白表达及PI3K信号通路的活化;PI3K抑制剂LY294002预先处理A549细胞后,观察TGF-β1刺激下CTGF和collagen I mRNA和蛋白表达的变化;CTGF特异性siRNA干扰A549细胞中CTGF的表达后,观察TGF-β1刺激下collagen I mRNA和蛋白表达的变化和PI3K信号通路的活化。结果： TGF-β1可以诱导A549细胞中CTGF和collagen I的mRNA和蛋白表达以及PI3K信号通路的活化;PI3K特异性抑制剂LY294002可以部分逆转TGF-β1诱导的A549细胞中CTGF和Collagen I mRNA和蛋白表达的升高。干扰CTGF可以降低TGF-β1诱导的A549细胞collagen I mRNA和蛋白表达,而不影响PI3K信号通路的活化。结论： CTGF是TGF-β1/PI3K信号通路调控的即刻早期反应效应蛋白,参与了TGF-β1诱导的A549细胞中collagen I表达。     

NOX-4调控PI3K信号通路参与TGF-β1诱导肺癌细胞表达Ⅰ型胶原蛋白

目的:研究NADPH氧化酶4(NOX-4)调控PI3K信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肺癌细胞表达Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)的作用及分子机制。方法:体外培养人肺癌A549细胞,予TGF-β1刺激后,观察NOX家族和collagen家族的mRNA和蛋白表达的变化,以及PI3K class I催化亚基的表达和PI3K信号通路活化的变化;NOX-4抑制剂二亚苯基碘鎓(DPI)预先处理肺癌细胞,观察TGF-β1刺激后collagen Ⅰ的mRNA和蛋白表达的变化以及PI3K class I催化亚基表达和PI3K信号通路活化。结果:TGF-β1可以诱导肺癌细胞中NOX-4和collagen Ⅰ的mRNA和蛋白表达升高,并诱导PI3K class I催化亚基中PIK3CD表达升高和PI3K信号通路的活化。NOX-4抑制剂DPI可以抑制TGF-β1诱导的collagen Ⅰ表达升高;抑制NOX-4并不影响TGF-β1诱导的PI3K催化亚基PIK3CD表达,但可以降低TGF-β1诱导PI3K信号通路的活化程度。结论:NOX-4经调控PI3K信号通路的活化参与了TGF-β1诱导肺癌细胞表达collagen Ⅰ的分子机制。TGF-β1/NOX-4/PI3K信号通路轴在肺癌细胞collagen Ⅰ的表达中发挥了调控作用。     

NOX-4调控PI3K信号通路参与TGF-β1诱导肺癌细胞表达I型胶原蛋白

 目的：研究NADPH氧化酶4（NOX-4）调控PI3K信号通路在转化生长因子β1（TGF-β1）诱导肺癌细胞表达I型胶原蛋白（collagen I）的作用及分子机制。方法：体外培养人肺癌A549细胞,予TGF-β1刺激后,观察NOX家族和collagen 家族的mRNA和蛋白表达的变化,以及PI3K class I催化亚基的表达和PI3K信号通路活化的变化;NOX-4抑制剂二亚苯基碘鎓（DPI）预先处理肺癌细胞,观察TGF-β1刺激后 collagen I的mRNA和蛋白表达的变化以及PI3K class I催化亚基表达和PI3K信号通路活化。结果：TGF-β1可以诱导肺癌细胞中NOX-4和collagen I的mRNA和蛋白表达升高,并诱导PI3K class I催化亚基中PIK3CD表达升高和PI3K信号通路的活化。NOX-4抑制剂DPI可以抑制TGF-β1诱导的collagen I表达升高;抑制NOX-4并不影响TGF-β1诱导的PI3K催化亚基PIK3CD表达,但可以降低TGF-β1诱导PI3K信号通路的活化程度。结论：NOX-4经调控PI3K信号通路的活化参与了TGF-β1诱导肺癌细胞表达collagen I的分子机制。TGF-β1/NOX-4/PI3K信号通路轴在肺癌细胞collagen I的表达中发挥了调控作用。     

Akt/GSK-3β/Snail通路在TGF-β_1诱导A549/DDP细胞上皮间质转化中的作用

目的:通过观察转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导前后Akt/GSK-3β/Snail信号通路相关分子的表达情况,探讨A549/DDP细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的分子机制。方法:TGF-β_1(5μg/L)作用48 h,观察A549/DDP细胞的形态变化,并测定EMT标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达情况,评估TGF-β_1是否成功诱导A549/DDP细胞发生EMT。进一步将A549/DDP细胞分为TGF-β_1(+)组、TGF-β_1(-)组和LY294002组,应用Western blot法检测各组Akt/GSK-3β/Snail通路相关分子Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3βSer9和Snail的蛋白水平。结果:形态学观察可见TGF-β_1(+)组的细胞变得更加狭长,呈纺锤形,细胞间较为疏散,形态与间充质细胞相似。与TGF-β_1(-)组比较,TGF-β_1(+)组E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin蛋白表达上调(P0.05);各组间Akt和GSK-3β的蛋白表达水平并无明显差别,TGF-β_1(+)组的p-Akt、p-GSK-3βSer9和Snail蛋白水平较TGF-β_1(-)组明显增强(P0.05);PI3K抑制剂LY294002与TGF-β_1同时刺激细胞后,p-Akt、p-GSK-3βSer9和Snail的蛋白水平较TGF-β_1(+)组下调(P0.05)。结论:TGF-β_1干预Akt/GSK-3β/Snail信号通路,促进Akt和GSK-3β的磷酸化,提高Snail的表达水平,诱导A549/DDP细胞发生EMT。     

PI3K和MAPK信号通路对A549细胞FOXO1蛋白表达及其亚细胞定位的调节

目的探讨非小细胞肺癌中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/AKT和丝裂原活化蛋白激酶MAPK/ERK信号通路对Forkhead转录因子(Fox蛋白家族)FOXO1活性的影响及分子机制。方法体外培养人非小细胞肺癌系A549,分别选用PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002和MAPK/ERK信号通路特异性抑制剂UO126及两种抑制剂联合处理细胞之后,MTT比色法检测其对细胞增殖的影响;Western blot检测蛋白FOXO1、p-FOXO1及信号下游蛋白Bim表达的变化;免疫荧光法检测FOXO1蛋白在A549细胞中亚细胞的定位的变化。结果与对照组相比,LY294002和UO126都能明显地抑制A549细胞的增殖,且具有时间依赖性。Western blot结果显示,FOXO1的蛋白水平未见显著性变化,而FOXO1的磷酸化水平明显下降,Bim的表达相应增加。免疫荧光结果显示,FOXO1在A549细胞中的核转位增多。LY294002和UO126联合处理A549细胞时,较药物单独作用效果明显增加。结论 PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路能调节FOXO1磷酸化水平,且具有协同作用,抑制其转录活性。FOXO1通过激活Bim蛋白,促进细胞凋亡,抑制细胞的增殖。     

P13K/Akt信号通路在白蛋白诱导肾小管上皮细胞转化生长因子β1表达中的作用

目的 研究白蛋白对人肾小管上皮细胞(HK-2)分泌转化生长因子β1(TGF-β1)的影响,以及P13K/Akt信号通路在这一过程中的作用.方法 体外培养HK-2细胞,分为对照组、白蛋白(BSA)组和白蛋白加抑制剂(BSA+Ly294002)组.分别于培养12、24、48 h后,用MTT法检测HK-2细胞的增殖;RT-PCR检测HK-2细胞TGF-β1 mRNA的表达;Western印迹测定HK-2细胞TGF-β1和磷酸化的PI3K(p-PI3K)、Akt(p-Akt)蛋白分泌.结果 白蛋白可明显诱导HK-2细胞增殖(P<0.05),诱导后12 hBSA组与对照组比较,TGF-β1 mRNA表达明显上调(0.472±0.025比0.233±0.021,P<0.05);TGF-β1蛋白明显上调(296±20.1比100±13.2,P<0.05);p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著增加(P<0.05).加Ly294002 12 h时HK-2增殖受抑制;48 h时TGF-β1 mRNA、蛋白和p-PI3K、P-Akt蛋白的表达也受到抑制(均为P<0.05).结论 白蛋白通过活化PI3-K/Akt信号转导通路诱导肾小管上皮细胞产生TGF-β1.     

双氢睾酮对Aβ_(1-42)诱导的突触损害的保护作用

目的:探讨双氢睾酮(DHT)对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞突触损害的影响及机制。方法:本研究分为对照组、Aβ_(1-42)组、DHT组及Aβ_(1-42)+DHT组,以Aβ_(1-42)处理SH-SY5Y细胞建立突触损害细胞模型,予DHT预处理,利用Western Blot及免疫荧光检测突触后致密区蛋白95(PSD-95)、Homer-1蛋白的表达变化,并采用磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路阻断剂LY294002观察PI3K/Akt信号通路在DHT突触保护过程中的作用。结果:Aβ_(1-42)可剂量依赖地下调SH-SY5Y细胞PSD-95、Homer-1蛋白的表达。而DHT预处理则可显著增加Aβ_(1-42)处理的SH-SY5Y细胞PSD-95、Homer-1的表达,该效应可被PI3K/Akt特异抑制剂LY294002所逆转。结论:DHT可通过激活PI3K/Akt信号通路逆转Aβ_(1-42)诱导的突触损害。     

PTTG抑制PI3K/AKT信号通路诱导皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的机制

目的探讨垂体肿瘤转化基因(pituitary tumoRtransforming genes,PTTG)对皮肤鳞状细胞癌细胞活力、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法将设计合成的PTTG特异性siRNA(si-PTTG)转染人皮肤鳞癌细胞系A431(si-PTTG组),无干扰作用siRNA(NC组)及未转染的空白细胞(空白组)作为对照组,LY294002作为PI3K/AKT信号通路的抑制剂。通过MTT法、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒及ROS检测试剂盒分别检测细胞活力、凋亡率和ROS含量。Western blot法检测PTTG、AKT、p-AKT、Cyclin D1和Bax蛋白表达。结果si-PTTG转染A431细胞后,PTTG表达明显降低(P<0.05)。与空白组比较,si-PTTG组和LY294002组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,si-PTTG组ROS含量明显升高,p-AKT和Cyclin D1蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高(P<0.05)。A431细胞转染si-PTTG,并用LY294002处理,细胞活力明显低于LY294002组,凋亡率高于LY294002组(P<0.05)。结论沉默PTTG表达可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞活力,诱导细胞凋亡,其机制与细胞ROS水平增高及PI3K/AKT通路抑制有关。     

体外肺癌上皮-间充质转化三维模型的建立及其对顺铂抵抗的机制研究

目的:探索转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导三维培养肺癌细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及对顺铂抵抗的相关机制。方法:用荧光倒置显微镜、扫描电镜及激光共聚焦观察人非小细胞肺癌细胞系95D在TGF-β1刺激前后的形态及蛋白表达变化,Western blot检测三维培养95D细胞在TGF-β1刺激前后相关蛋白表达变化,MTT法检测95D细胞发生EMT前后对顺铂的敏感性变化。结果:在三维培养条件下,95D细胞在TGF-β1刺激后,细胞球出现塌陷、细胞离散、迁移等现象,细胞球之间互相融合。激光共聚焦结果显示95D细胞在TGF-β1刺激后,E-cadherin蛋白表达无变化,N-cadherin和vimentin蛋白表达显著上调。Western blot结果显示,在TGF-β1刺激后,95D细胞的E-cadherin蛋白表达下调(P<0.05),N-cadherin和vimentin蛋白表达上调(P<0.05),p-AKT和p-mTOR蛋白水平升高(P<0.05)。而LY294002和rapamycin可逆转TGF-β1诱导的上述蛋白表达(P<0.05)。MTT结果显示,TGF-β1刺激组对顺铂的敏感性显著低于普通三维培养组(P<0.01),而LY294002和rapamycin增强TGF-β1刺激后95D细胞对顺铂的敏感性(P<0.01)。结论:TGF-β1诱导三维培养肺癌细胞发生EMT及对顺铂抵抗,可能是通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路实现的。     

PI3K/Akt调控内质网应激对GRP78的诱导

目的: 研究内质网应激条件下PI3K/Akt信号通路对HEK293细胞中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达水平的调控作用。方法: 采用PI3K抑制剂LY294002、Akt1失活型突变载体Akt1(K179M)及Akt siRNAs阻断内质网应激介导的Akt活化,采用Akt激活型突变载体Myr-Akt过度激活内质网应激介导的Akt活化,并利用RT-PCR和Western blotting技术分析内质网应激条件下PI3K/Akt信号途径对HEK293细胞中GRP78表达水平的调控作用。结果: LY294002、Akt1(K179M)及Akt1 siRNA均明显抑制了内质网应激对GRP78的诱导。Myr-Akt1明显促进内质网应激对GRP78的诱导。Myr-Akt2/3及Akt2/3 siRNA对GRP78的诱导均无影响。PI3K/Akt信号通路阻断或过度激活对GRP78 mRNA水平的诱导无影响,但是对GRP78的降解有显著影响。结论: HEK293细胞中,PI3K/Akt通过蛋白稳定性调节促进内质网应激对GRP78的诱导。     

LY294002对糖尿病肾病大鼠肾组织IL-1β与IL-6表达的影响

目的研究经静脉注射PI3K抑制剂LY294002对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾组织白介素-1β(IL-1β)与白介素-6(IL-6)表达的影响。方法成年健康清洁级SD雄性大鼠30只,随机分为假手术组(10)、模型组组(10)和PI3K抑制剂(LY294002)处理组。参照Anderson's方法制作糖尿病肾病大鼠模型。采用Western blot方法检测三组大鼠肾组织IL-1β与IL-6蛋白的表达;RT-PCR方法检测三组大鼠肾组织IL-1βmRNA与IL-6mRNA的表达。结果 Western blot结果显示,模型组与LY294002处理组肾组织IL-1β与IL-6蛋白的表达量均显著高于假手术组(0.05),而LY294002处理组比模型组肾组织IL-1β与IL-6蛋白的表达量明显降低(0.05)。RT-PCR结果显示,与假手术组比较,模型组与LY294002处理组肾组织IL-1βmRNA与IL-6mRNA的表达量均显著升高(0.05),而LY294002处理组肾组织IL-1βmRNA与IL-6 mRNA的表达则明显低于模型组(0.05)。结论 PI3K抑制剂LY294002能够下调DN大鼠肾组织IL-1β与IL-6的表达。     

白细胞介素-34/集落刺激因子-1R在转化生长因子-β1诱导A549细胞上皮-间质转化中的表达

目的探讨白细胞介素-34/集落刺激因子-1受体(IL-34/CSF-1R)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导A549细胞发生上皮-间质转化(EMT)中的表达。方法体外培养A549细胞;CCK 8法检测不同浓度TGF-β1在不同时间点对A549细胞增殖的影响;选用5μg/L TGF-β1刺激A549细胞(0、12、24、48h),提取细胞蛋白和RNA,Western blotting法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏连蛋白(E-Cad)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白的变化;Real-time PCR法检测IL-34、CSF-1R、MMP-2、MMP-9基因表达的变化。结果 TGF-β1对A549细胞的增殖无明显影响(P0.05)。TGF-β1刺激A549细胞后,间质细胞标志性蛋白α-SMA表达升高,上皮细胞标志性蛋白E-Cad表达下降,纤维化相关的MMP-2蛋白表达升高,MMP-9蛋白表达先升高后下降,TIMP-1蛋白早期出现短暂性增高后,呈持续降低趋势(P0.01)。IL-34mRNA表达逐渐升高,CSF-1R mRNA、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达先升高后下降(P0.01)。结论 TGF-β1诱导A549细胞的EMT过程中,存在IL-34/CSF-1R的动态表达。     

Effect of transforming growth factor beta 1 on neonatal rat latent transforming growth factor beta binding protein 2 in cardiomyocytes

目的 探讨转化生长因子β1 (TGF-β1)在诱导心肌细胞表达转化生长因子结合蛋白2(LTBP2)中的作用及信号传导通路.方法 培养乳鼠心肌细胞;实时定量聚合酶链式反应、蛋白质印迹和免疫细胞化学方法检测不同时间和不同浓度的TGF-β1对大鼠乳鼠心肌细胞LTBP2基因及蛋白表达的影响;用TGF-β1相关信号通路阻断剂探讨TGF-β1调节LTBP2表达改变的信号传导机制.结果 LTBP2基因表达随着TGF-β1浓度增加(0、2、5及10 μg/L)而明显升高,在5μg/L时刺激最强(P＜0.05);5μg/L的TGF-β1刺激下心肌细胞内LTBP2基因和蛋白表达的升高呈时间依赖性,均在12 h最高,24 h开始呈下降趋势(P＜0.05或P＜0.01);免疫细胞化学结果显示TGF-β1明显升高LTBP2的表达.信号传导通路研究显示TGF-β1在心肌细胞内主要通过ERK信号通路和PI3K信号通路诱导LTBP2的表达.结论TGF-β1在乳鼠心肌细胞内通过ERK信号通路和PI3K信号通路上调LTBP2的表达.     

Ghrelin活化人T细胞翻译起始分子通过mTOR信号转导通路

目的:探讨Ghrelin活化人T细胞翻译起始分子的信号转导机理。方法:采用微柱法分离人外周血T细胞,采用Western blot方法检测mTOR信号通路分子和蛋白质翻译调控分子的磷酸化状态和含量。采用mTOR抑制剂:雷帕霉素,PI3KⅠ抑制剂:LY294002,PI3KⅢ抑制剂:3-甲基腺嘌呤,Ghrelin拮抗剂:Des-Lys-3-GHRP6和AKT抑制剂:A443654和Ghrelin研究相应信号通路。结果:①人T细胞表面有Ghrelin受体(GHSR1a)表达。②Ghrelin与GHSR1a结合后可活化mTOR。③Ghrelin磷酸化两个mTOR下游靶分子4E-BP-1和P70 S6K,P70 S6K进一步磷酸化核糖体S6蛋白。④Ghrelin磷酸化蛋白质翻译起始帽子结构的两个重要分子eIF4E和eIF4G。结论:Ghrelin促进人T细胞mRNA翻译起始的机理是活化mTOR信号转导通路。     

miR-let-7a调节PI3K/Akt信号通路抑制人系膜细胞增殖和炎症反应

为探究miR-let-7a对LPS诱导的人系膜细胞(human mesangial cell, HMC)增殖和炎症反应的影响及其通过调节PI3K/Akt信号通路发挥作用的机制,体外条件下用0.1μg/mL LPS处理HMC, CCK-8法检测各时间点细胞活性;Western blotting检测HMC增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、凋亡相关蛋白BAX及信号通路蛋白PI3K、p-Akt的表达情况;qPCR检测细胞中miR-let-7a及炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6和Ⅳ型胶原蛋白mRNA的表达。转染miR-let-7a mimic或inhibitor改变HMC中miR-let-7a的表达,或使用抑制剂LY294002阻断HMC中PI3K/Akt信号通路,观察不同处理对HMC增殖、炎症反应及PI3K/Akt信号通路激活的影响。结果显示,LPS处理可诱导HMC增殖和炎症反应,抑制miR-let-7a的表达(均P<0.05)并激活PI3K/Akt信号通路(均P<0.01);与LPS组相比,过表达miR-l...     

转化生长因子β1对乳鼠心肌细胞转化生长因子结合蛋白2表达的影响

 目的：探讨转化生长因子β1（TGF-β1）在诱导心肌细胞表达转化生长因子结合蛋白2（LTBP2）中的作用及信号传导通路。 方法：培养乳鼠心肌细胞;实时定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白质印迹和免疫细胞化学方法检测不同时间和不同浓度的TGF-β1对大鼠乳鼠心肌细胞LTBP2基因及蛋白表达的影响;用TGF-β1相关信号通路阻断剂探讨TGF-β1调节LTBP2表达改变的信号传导机制。 结果：LTBP2基因表达随着TGF-β1浓度增加（0、2、5、10 ng/mL）而明显升高,在5 ng/mL时刺激最强（P < 0.05）;5 ng/mL的TGF-β1刺激下心肌细胞内LTBP2基因和蛋白表达的升高呈时间依赖性,均在12 h最高,24 h开始呈下降趋势（P < 0.05或P<0.01）;免疫细胞化学结果显示TGF-β1明显升高LTBP2的表达。信号传导通路研究显示TGF-β1在心肌细胞内主要通过ERK信号通路和PI3K信号通路诱导LTBP2的表达。 结论：TGF-β1在乳鼠心肌细胞内通过ERK信号通路和PI3K信号通路上调LTBP2的表达。     

乙肝病毒X 蛋白结合蛋白可能通过PI3K / Akt 信号通路影响肝癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)通过调控PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测人正常肝脏细胞HL7702和肝癌细胞HepG2、Hep3B、Huh7中HBXIP mRNA和蛋白表达;以肝癌细胞HepG2为研究对象,MTT实验、划痕实验检测过表达HBXIP及抑制HBXIP对肝癌细胞增殖和迁移的影响,Western blot检测过表达HBXIP的肝癌细胞中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达,分析PI3K抑制剂(LY294002)对过表达HBXIP的肝癌细胞增殖和迁移的影响。结果:与HL7702细胞比较,肝癌细胞HepG2、Hep3B、Huh7中HBXIP mRNA和蛋白相对表达水平均明显升高(P0.05);过表达HBXIP能够促进肝癌细胞增殖和迁移能力,促进肝癌细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达,而沉默HBXIP后肝癌细胞增殖和迁移能力降低;使用LY294002阻断PI3K/Akt信号通路能够逆转过表达HBXIP对肝癌细胞增殖和迁移的促进作用。结论:HBXIP在肝癌细胞中高表达,可能通过激活PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞增殖和迁移。     

CCN1在脂多糖诱导急性肺损伤中的表达调控和在炎症反应中的作用

目的:体内观察富半胱氨酸蛋白61(CYR61/CCN1)在正常肺组织中的表达定位和在脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤中的表达变化,体外研究LPS调控CCN1表达的分子机制和CCN1在LPS诱导炎症介质表达中的作用。方法:分别通过免疫组化(IHC)染色及免疫荧光法观察CCN1在小鼠肺组织和气道上皮细胞16HBE中的表达定位;气道滴注LPS建立小鼠急性肺损伤模型,IHC观察CCN1在肺组织中的表达变化;体外研究中,分别予气道上皮16HBE细胞以ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路特异性抑制剂预处理2 h后加入LPS刺激,通过RT-qPCR和Western blot检测CCN1的mRNA和蛋白表达变化;分别通过CCN1-siRNA和重组CCN1蛋白刺激16HBE细胞,qPCR检测炎症介质白细胞介素6(IL-6)、IL-8、转化生长因子β(TGF-β)和血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA水平。结果:CCN1在正常肺组织中以气道上皮表达为主,在LPS诱导的急性肺损伤小鼠气道上皮细胞中CCN1表达升高;LPS可刺激16HBE细胞中CCN1的表达水平升高,其中ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路特异性抑制剂可以不同程度逆转LPS诱导的CCN1表达升高。重组CCN1蛋白可以诱导16HBE细胞中IL-6、IL-8、TGF-β和VEGF的mRNA合成,干扰CCN1可以部分逆转LPS刺激后IL-6、IL-8、TGF-β和VEGF的mRNA合成。结论:气道上皮来源的CCN1在急性肺损伤中表达升高,其表达调控涉及ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路;CCN1在介导LPS诱导的炎症介质表达过程中发挥了重要作用。本研究为未来急性肺损伤诊治的潜在靶点提供了一定的理论基础。     

PI3K/PKB信号通路在TGF-β_1诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白中的作用

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白(OPN)的调控作用。方法:体外培养LX-2人肝星状细胞株,予TGF-β1(终浓度2.5、5、10、20μg/L)刺激24 h或予TGF-β1(终浓度10μg/L)刺激12 h、24 h、48 h;先经PI3K/PKB信号通路特异性抑制剂wortmannin(0.1μmol/L)预处理1 h,再予10μg/L TGF-β1刺激24 h,收集细胞,采用real-time PCR及Western blotting法检测OPN表达情况。结果:TGF-β1能够促进LX-2细胞表达OPN,在一定浓度和时间范围内,其表达量随着TGF-β1浓度和时间的增加而增加,呈剂量和时间依赖性关系;经wortmannin预处理再予TGF-β1刺激的LX-2细胞,与对照组相比,OPN表达受到明显抑制(P0.01)。结论:TGF-β1对LX-2人肝星状细胞OPN表达具有诱导作用,此作用可能受PI3K/PKB信号通路的调控。     

CaSR在oxLDL诱导的A7r5细胞增殖及迁移中的作用

目的:探讨钙敏感受体(calcium-sensing receptor,Ca SR)在氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox LDL)诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7r5细胞)增殖及迁移中的作用及信号机制。方法:Brd U掺入法检测细胞增殖;伤口愈合实验及Transwell迁移分析检测细胞迁移情况;Western blot方法检测Ca SR、PCNA、ERK MAPK通路及PI3K/AKT通路的蛋白表达。结果:(1)小剂量(10 mg/L)ox LDL作用A7r5细胞24 h促进细胞的增殖和迁移;(2)ox LDL增加A7r5细胞的Ca SR表达;(3)Ca SR拮抗剂NPS2390抑制了ox LDL的作用,而激动剂Gd Cl_3进一步增强了ox LDL的作用;(4)ox LDL可促进p-AKT、pERK蛋白表达;(5)PI3K/AKT通路抑制剂LY294002、ERK MAPK通路抑制剂PD98059能够抑制ox LDL诱导的细胞增殖和迁移效应;(6)NPS2390抑制了ox LDL诱导的p-AKT和p-ERK蛋白表达,而Gd Cl_3作用相反。结论:(1)ox LDL诱导A7r5细胞增殖及迁移效应;(2)Ca SR参与ox LDL诱导的A7r5细胞增殖及迁移作用;(3)Ca SR通过活化PI3K/AKT通路及ERK MAPK信号通路参与ox LDL诱导的A7r5细胞增殖及迁移作用。