五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠Jak2/Stat3信号通路的调控作用

目的:研究五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠Jak2/Stat3信号通路的调控作用,探讨其对AA大鼠发挥治疗作用的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、五味温通除痹胶囊0. 8 g/kg、1. 6 g/kg、3. 2 g/kg剂量组和雷公藤多甙片40 mg/kg组,复制AA大鼠模型。造模后第12天,灌胃给予相应药物,1次/d,共12天。HE染色观察踝关节软骨损伤情况,ELISA法测定血清IL-6和IL-10的含量,免疫组化和Western blot技术检测p-Jak2、Jak2、p-Stat3、Stat3蛋白的表达,RT-PCR检测Jak2、Stat3 mRNA的变化。结果:与空白组比较,模型组大鼠足肿胀度增加,关节病理损伤明显,血清IL-6含量增高,IL-10含量降低,关节滑膜中p-Jak2、p-Stat3蛋白和基因均上调。相比于模型组,五味温通除痹胶囊各剂量不仅可改善AA大鼠关节软骨损伤程度,降低血清IL-6含量,增加IL-10的水平,还可下调Jak2、Stat3 mRNA和p-Jak2、p-Stat3蛋白的表达。结论:抑制Jak2/Stat3通路的激活,降低炎症反应,是五味温通除痹胶囊治疗RA的可能作用机制。     

当归拈痛汤对风湿热痹型佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白LC3，Beclin1，p62表达的影响

目的:研究当归拈痛汤对风湿热痹型佐剂性关节炎大鼠的防治作用及对自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3),自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),p62表达的影响。方法:将6周龄SD雄性大鼠随机分为正常组,风湿热痹模型组,当归拈痛汤低、中、高剂量组(5.67,11.34,22.68 g·kg^-1),甲氨蝶呤(MTX)组(1.35 mg·kg^-1),每组10只,通过对大鼠尾根部皮下注射灭活结核分支杆菌佐剂建立佐剂性关节炎大鼠模型,用人工气候箱进行风湿热痹证模型造模16 d,于免疫当天灌胃给药,持续28 d。进行大鼠一般情况观察及足趾肿胀度、关节炎指数(AI)检测,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠膝关节滑膜组织病理形态学改变,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠滑膜组织LC3,Beclin1,p62的mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化法分别检测大鼠滑膜组织LC3,Beclin1,p62的蛋白表达。结果:与正常组比较,风湿热痹模型组大鼠给药16,20,24,28 d时足趾肿胀度显著升高(P<0.01),AI显著升高(P<0.01),滑膜细胞增生显著,自噬蛋白LC3,Beclin1蛋白及mRNA表达显著上调(P<0.01),p62蛋白及mRNA表达显著下调(P<0.01);与风湿热痹模型组比较,各给药组大鼠足趾肿胀度减轻,滑膜增生情况有不同程度改善,LC3,Beclin1的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01),p62的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),且当归拈痛汤中剂量组防治效果最佳。结论:当归拈痛汤对风湿热痹型佐剂性关节炎大鼠有明显的防治作用,且这种防治作用可能与调控滑膜组织中自噬相关因子LC3,Beclin1,p62的表达,抑制自噬有关。     

新风胶囊对佐剂性关节炎大鼠Beclin1/PI3K-AKT-mTor的影响

目的观察佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜中自噬相关基因5、7、12(Atg5,7,12)mRNA、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬标志物Beclin1、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶向蛋白(m Tor)及血清细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10的表达水平变化及新风胶囊对其的影响。方法将48只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、西药组(来氟米特,5.0 mg/kg)和中药组(新风胶囊,3.0 g/kg),每组12只。干预30天后,观察各组大鼠体质量、足趾肿胀度(E%)、关节炎指数(AI)及踝关节病理及超微结构变化;检测大鼠滑膜中Atg5、7、12 mRNA表达;检测滑膜LC3-Ⅱ、Beclin1、PI3K、AKT、m Tor蛋白表达;检测大鼠血清IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10含量。结果与正常组比较,模型组E%、AI、IL-1β、TNF-α升高,体重、IL-4、IL-10、Atg5 mRNA、Atg12 mRNA、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达降低(P0.01,P0.05),PI3K、AKT、m Tor蛋白表达升高(P0.01)。与模型组比较,两个给药组E%、AI、IL-1β、TNF-α、Atg12 mRNA、PI3K、AKT、m Tor蛋白表达降低(P0.01,P0.05),IL-4、IL-10、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达升高(P0.01,P0.05);西药组Atg5降低(P0.01),Atg7 mRNA升高(P0.05)。与西药组比较,中药组体重、IL-4、Atg5 mRNA、Atg12 mRNA、PI3K、m Tor蛋白表达升高(P0.01,P0.05)。结论AA大鼠滑膜细胞自噬水平下降,导致滑膜细胞的过度增生,引起关节肿胀,致炎因子上升,抑炎因子下降,引起关节的炎症反应。中药新风胶囊可以改善关节炎指数、足趾肿胀度,改善滑膜自噬相关基因及蛋白表达。     

刺山柑对类风湿关节炎大鼠滑膜组织自噬相关蛋白表达的影响

目的:观察刺山柑果风湿止痛贴对类风湿关节炎大鼠滑膜组织自噬相关蛋白表达的影响,并探究刺山柑治疗类风湿关节炎（RA）的可能作用机制。方法:将40只无特定病原体（SPF）级SD大鼠采用随机数字法分为正常组,模型组,阳性药组和刺山柑组,每组10只,对造模的大鼠在足跖底部注射0.1 mL完全弗氏佐剂。模型组、阳性药组和刺山柑组分别于大鼠左后足跖部外敷空白凝胶、伤湿止痛膏以及刺山柑果风湿止痛贴,每组持续干预21 d。观测关节炎（AI）指数和足爪容积的指标,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,蛋白质印迹法检测滑膜组织中微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin蛋白复合物-1（Beclin-1）蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组和阳性药组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均上升（P<0.05,P<0.01）,刺山柑组LC3-Ⅱ蛋白表达降低（P<0.01）,Beclin-1蛋白表达升高（P<0.01）;与模型组比较,阳性药组Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达差异无统计学意义,刺山柑组LC3-Ⅱ蛋白表达降低（P<0.01）,Beclin-1蛋白表达升高（P<0.01）。结论:刺山柑果风湿止痛贴治疗AA大鼠比伤湿止痛膏疗效更加显著,从而为刺山柑治疗RA提供一定的科学依据,其相关机制可能与蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1表达有关。     

艾灸对类风湿性关节炎大鼠滑膜组织自噬相关分子表达的影响

目的:观察艾灸对类风湿性关节炎(RA)大鼠滑膜组织中自噬相关基因(Atg)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-失调51样激酶1(ULK1)、Beclin-1和微管相关蛋白轻链3(LC3)表达及滑膜细胞超微结构的影响,探讨艾灸通过细胞自噬途径发挥抗炎和调节细胞增殖作用的机制。方法:40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、香烟灸组和药物组,每组8只。采用风、寒、湿环境因素结合左后足跖皮下注射完全弗氏佐剂建立RA模型。艾灸组使用直径0.9 cm的艾条对"足三里"(左侧)施灸,施灸距离皮肤2 cm,每日1次,每穴每次灸20 min,共灸15 d;香烟灸组处理方法同艾灸组,用直径0.8 cm普通卷烟代替艾条;药物组予以雷公藤多苷片混悬液灌胃(0.8 mg/100 g),每日1次,连续给药15 d。用足跖容积测量仪测量各组大鼠左后肢足跖容积,透射电镜观察滑膜细胞超微结构,荧光定量PCR法检测滑膜组织Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA的表达,Western blot法检测滑膜组织LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠左后肢足跖容积增加(P0.01),滑膜组织Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均显著降低(P0.01)。与模型组比较,艾灸组和药物组大鼠足跖关节容积均显著降低(P0.01),Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均显著升高(P0.01);香烟灸组Atg3、Atg12、ULK1 mRNA表达显著增加(P0.05,P0.01)。与艾灸组比较,药物组、香烟灸组大鼠左后肢足跖关节容积均增加(P0.05,P0.01),香烟灸组Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均降低(P0.01,P0.05),药物组Atg3、ULK1 mRNA表达显著升高(P0.01)。与香烟灸组比较,药物组左后肢足跖关节容积显著降低(P0.01),Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均显著升高(P0.01)。与正常组比较,模型组滑膜细胞损伤明显,出现病理性改变;与模型组比较,艾灸组、药物组和香烟灸组均有不同程度缓解。结论:RA模型大鼠关节滑膜细胞的自噬水平低于正常大鼠,艾灸和雷公藤多苷灌胃干预能改善关节肿胀和滑膜细胞损伤,增强其自噬水平,且艾灸的消肿作用强于雷公藤多苷。艾灸可能通过提高自噬水平发挥修复RA滑膜细胞损伤的作用。     

苗药金乌健骨方对类风湿关节炎滑膜细胞自噬的调控作用研究

目的:探讨金乌健骨方对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞自噬基因LC3、Beclin-1、Bcl-2、VPS34表达的影响。方法:取3代RA滑膜细胞,加金乌健骨方总提物低、中、高浓度(0.06、0.6、6.0 mg/mL)及雷公藤多苷(0.03 mg/mL)干预24 h后,采用透射电镜观察细胞自噬情况,PCR检测LC3、Beclin-1、Bcl-2、VPS34 mRNA表达水平;Western blot检测LC3、Beclin-1蛋白表达。结果:空白对照组细胞无明显自噬小体或自噬溶酶体,各给药组滑膜细胞胞浆中自噬小体和自噬溶酶体明显增多。与空白对照组比较,除金乌健骨方低浓度组外,各给药组滑膜细胞LC3、Beclin-1、VPS34 mRNA表达均显著降低,Bcl-2 mRNA表达显著升高,LC3、Beclin-1蛋白表达显著降低(P0.01)。以金乌健骨方高浓度组和雷公藤多苷组作用最明显。结论:苗药金乌健骨方能抑制RA滑膜细胞自噬相关基因LC3、Beclin-1、VPS34的表达,增强Bcl-2的表达水平。     

月华胶囊对耐多药结核分支杆菌感染自噬的影响

目的:以月华胶囊含药血清对耐多药结核分支杆菌感染小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)进行干预,探讨其对耐多药结核分支杆菌感染巨噬细胞自噬的作用及其机制。方法:低温冷冻干燥法制备月华胶囊,大鼠按3.02 g·kg^-1灌胃给药7 d,制备月华胶囊含药血清。体外培养RAW264.7,耐多药结核分子杆菌。以细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测含药血清对RAW264.7的增殖能力并选定其有效浓度。细胞分为模型组(10%胎牛血清);月华胶囊含药血清组(10%月华胶囊);自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)+月华胶囊含药血清组(5 mg·L^-1的3-MA+10%月华胶囊含药血清);雷帕霉素(Rap)组(200 mg·L^-1的Rap+10%胎牛血清);正常组(10%胎牛血清)。除正常组外,各组细胞培养24 h后,按细胞-细菌1∶10感染4 h。透射电镜观察细胞自噬体的出现和形成;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中I型微管相关蛋白轻链3(LC-3Ⅰ),Ⅱ型微管相关蛋白轻链3/I型微管相关蛋白1轻链3(LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ),Beclin-1蛋白的表达;间接免疫荧光染色法观察细胞中LC3B荧光颗粒、斑点及亮度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中LC3,Beclin-1 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量均无显著变化,细胞无荧光颗粒、斑点,无荧光亮度。与模型组比较,月华胶囊含药血清组及Rap组细胞,均可观察到自噬体的形成,细胞LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均明显升高(P<0.05),月华胶囊含药血清组细胞荧光颗粒和荧光斑点明显增多,Rap组细胞荧光颗粒和荧光斑点增多非常明显,荧光闪亮,可判定细胞荧光呈现为阳性;自噬抑制剂3-MA+月华胶囊含药血清组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均无明显升高。结论:月华胶囊含药血清能使耐多药结核分支杆菌感染细胞产生自噬而发挥抗结核的免疫效应,其机制是通过调控自噬相关蛋白LC3,Beclin-1蛋白及其mRNA的表达水平,促使LC3-I趋向LC3-Ⅱ的转化加快而实现的。     

痹祺胶囊治疗胶原诱导型关节炎大鼠的作用机制研究

目的探究痹祺胶囊对胶原诱导型关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠中软骨寡聚基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)表达的影响。方法随机选取10只SD大鼠作为对照组,其余大鼠建立CIA模型,CIA大鼠随机分为模型组,痹祺胶囊中、高剂量(0.6、0.9g/kg)组,甲氨蝶呤(1.67mg/kg)组,连续给药4周,观察大鼠的一般情况和足肿胀变化,检测大鼠血清中COMP水平、滑膜中COMP蛋白表达、软骨中COMP mRNA表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血清中COMP水平、滑膜中COMP蛋白表达、软骨中COMP mRNA表达均显著升高(P<0.001);与模型组比较,各给药组大鼠血清中COMP水平、滑膜中COMP蛋白表达、软骨中COMP mRNA表达均显著降低(P<0.001)。结论痹祺胶囊可能通过下调COMP表达,抑制炎性细胞浸润、滑膜增生和关节软骨破坏,从而治疗类风湿关节炎。     

扶脾柔肝方含药血清对大鼠原代肝星状细胞上皮间质转化及自噬的影响

目的观察扶脾柔肝方(FRR)含药血清对大鼠原代肝星状细胞(PHSC)上皮间质转化及自噬的影响。方法体外培养大鼠原代肝星状细胞,设立空白对照组,模型组,FRR低、中、高剂量组(20、40、80 g·kg~(-1),10%含药血清),氯喹组(CQ,50μmol·L~(-1)),采用转化生长因子-β1(TGF-β1,10 ng·mL~(-1))刺激PHSC发生上皮间质转化,给予相应药物干预24 h。RFP-GFP-LC3斑点法观察HSC自噬;脂滴染色观察脂质变化情况;实时荧光定量PCR法和Western Blot检测各组细胞中Beclin-1、LC3-Ⅱ、E-cadherin、α-SMA mRNA和蛋白表达。结果与空白对照比较,模型组HSC自噬增强(P0.01),脂质减少(P0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显升高(P0.01),E-cadherin降低(P0.01);与模型组比较,FRR中、高剂量组HSC自噬减弱(P0.01),脂质增加(P0.05,P0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显降低(P0.01),E-cadherin升高(P0.01);与氯喹组比较,FRR大剂量组Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显降低(P0.01),E-cadherin升高(P0.01)。结论 FRR药物血清可降低大鼠HSC自噬水平,增加细胞脂质,降低Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达,升高E-cadherin表达,具有逆转HSC上皮间质转化与抑制细胞自噬的功效。     

化瘀通络汤对脑小血管病致认知功能障碍患者执行功能的影响

目的观察扶脾柔肝方(FRR)含药血清对大鼠原代肝星状细胞(PHSC)上皮间质转化及自噬的影响。方法体外培养大鼠原代肝星状细胞,设立空白对照组,模型组,FRR低、中、高剂量组(20、40、80 g·kg~(-1),10%含药血清),氯喹组(CQ,50μmol·L~(-1)),采用转化生长因子-β1(TGF-β1,10 ng·mL~(-1))刺激PHSC发生上皮间质转化,给予相应药物干预24 h。RFP-GFP-LC3斑点法观察HSC自噬;脂滴染色观察脂质变化情况;实时荧光定量PCR法和Western Blot检测各组细胞中Beclin-1、LC3-Ⅱ、E-cadherin、α-SMA mRNA和蛋白表达。结果与空白对照比较,模型组HSC自噬增强(P0.01),脂质减少(P0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显升高(P0.01),E-cadherin降低(P0.01);与模型组比较,FRR中、高剂量组HSC自噬减弱(P0.01),脂质增加(P0.05,P0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显降低(P0.01),E-cadherin升高(P0.01);与氯喹组比较,FRR大剂量组Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显降低(P0.01),E-cadherin升高(P0.01)。结论 FRR药物血清可降低大鼠HSC自噬水平,增加细胞脂质,降低Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达,升高E-cadherin表达,具有逆转HSC上皮间质转化与抑制细胞自噬的功效。     

针刺百会穴对阿尔茨海默病模型大鼠自噬相关蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的影响

目的:观察针刺百会穴对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马区自噬相关蛋白1(Beclin1)和微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)的影响,探讨针刺治疗AD的可能作用机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、针刺组,每组10只,空白组常规喂养,不给予任何干预,假手术组在双侧脑室注射人工脑脊液,模型组、针刺组以链脲佐菌素(STZ)双侧脑室注射诱导阿尔茨海默病模型,并确认造模成功。针刺组选取百会穴进行针刺治疗,造模成功后第2天针刺,连续干预28 d。28 d后利用水迷宫检测大鼠学习记忆能力,免疫印迹法(WB)观察脑组织内自噬相关蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达。结果:假手术组逃避潜伏期以及跨越平台次数与空白组比较,差异无统计学意义(P0.05);与空白组比较,模型组逃避潜伏期延长、跨越平台次数减少,差异有统计学意义(P0.01),大鼠出现明显的学习记忆障碍;与模型组比较,针刺组逃避潜伏期明显降低、跨越平台次数增加(P0.05)。假手术组Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达与空白组比较,差异均无统计学意义(P0.05);模型组海马组织中Beclin-11、LC3-Ⅱ蛋白表达均低于空白组(P0.05);针刺组Beclin-11、LC3-Ⅱ蛋白表达高于模型组(P0.01)。结论:针刺百会穴可提高阿尔茨海默病大鼠海马区Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,改善大鼠学习记忆能力;针刺百会穴治疗AD的机制之一可能是调控自噬相关蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达。     

电针对失神经骨骼肌萎缩大鼠自噬相关因子的影响

目的探讨电针对失神经骨骼肌萎缩大鼠自噬相关因子的影响。方法健康SD大鼠30只随机分为假手术组、模型组、电针组,每组10只。采用暴露并切断坐骨神经的方法制备失神经骨骼肌萎缩大鼠模型,假手术组只暴露坐骨神经不离断神经。造模后第2天,电针组电针术侧足三里、承山两穴,每日1次,每次10 min;其余两组只固定,不作处理,连续干预21 d。测定术侧腓肠肌湿重比,HE染色观察腓肠肌组织病理变化,Masson染色观察腓肠肌纤维变化,Western blot检测腓肠肌组织p62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白表达,q RT-PCR检测腓肠肌组织Beclin-1、Vps34、LC3Ⅱ/LC3ⅠmRNA表达。结果与假手术组比较,模型组腓肠肌湿重比明显下降,腓肠肌组织内部肌纤维严重萎缩变形,p62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白和Beclin-1、Vps34、LC3Ⅱ/LC3ⅠmRNA水平明显升高(P0.05);与模型组比较,电针组的腓肠肌湿重比明显升高,腓肠肌萎缩较模型组明显减轻,电针组可明显降低Beclin-1蛋白和Beclin-1、Vps34、LC3Ⅱ/LC3ⅠmRNA水平(P0.05)。结论电针干预能下调失神经骨骼肌萎缩大鼠腓肠肌中Beclin-1、Vps34、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达,提示电针可能通过抑制细胞自噬的激活,稳定细胞内环境,延缓肌萎缩的进程。     

电针干预佐剂性关节炎大鼠踝关节滑膜细胞凋亡的MMP-3、MMP-9分子调节机制

目的观察电针干预对佐剂性关节炎大鼠踝关节滑膜细胞凋亡和相关蛋白基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法32只雄性SD大鼠被随机分为生理盐水组、模型组、电针干预组和假电针干预组,每组8只。生理盐水组大鼠在双侧足垫部注射模拟造模,其余大鼠用弗氏完全佐剂在双侧足垫部注射造模。电针干预组大鼠予以电针干预。假电针干预组予以假电针刺激处理。HE染色观察模型大鼠踝关节炎症进展情况,Tunnel法检测模型大鼠踝关节滑膜细胞凋亡情况,RT-PCR检测踝关节滑膜的MMP-3、MMP-9的mRNA表达,Western blot检测踝关节滑膜的MMP-3、MMP-9的蛋白表达。结果HE染色显示,电针干预组大鼠的关节炎症显著轻于模型组。Tunnel法检测,电针干预可以促进关节炎大鼠的滑膜细胞凋亡。RT-PCR和Western blot检测结果显示,电针干预可以显著降低关节炎大鼠踝关节滑膜组织中的MMP-3、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论电针干预可以显著减轻佐剂性关节炎大鼠的关节炎症和增殖的滑膜细胞数量,其分子机制可能和电针降低局部的MMP-3、MMP-9蛋白的表达有关。     

通痹灵对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞MCP-1 mRNA表达的影响

目的:探讨中药复方制剂通痹灵(以桂枝芍药知母汤为基础)对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞单核细胞趋化蛋白 1(MCP-1)mRNA表达的影响。方法:采用半定量RT-PCR法测定佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞MCP-1 mRNA表达水平。结果:通痹灵明显抑制了佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞MCP-1 mRNA的表达,提示通痹灵治疗类风湿性关节炎的分子机制与抑制MCP-1基因表达有关。     

疏肝健脾方对肝纤维化大鼠自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的影响

目的观察疏肝健脾方对肝纤维化大鼠自噬蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的影响。方法将60只SD大鼠,随机分为正常组、模型组、疏肝健脾方(1.5、3.0、6.0 g/kg)组和阳性药秋水仙碱(0.1×10-3g/kg)组,每组10只。除正常组外,其余各组采用50%四氯化碳(CCl4)每周2次,连续12周皮下注射的方法,诱导肝纤维化大鼠模型。造模后第7周,灌胃给予不同剂量的疏肝健脾方和秋水仙碱,正常组和模型组给予等量溶媒,每天1次,连续6周。HE和Masson染色观察肝脏病理组织学损伤程度,免疫组化法检测肝组织中Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肝脏病理组织学损伤程度明显加重,肝组织中CollagenⅠ、α-SMA、Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P0.01);与模型组比较,疏肝健脾方(3.0、6.0 g/kg)组和秋水仙碱组肝组织损伤减轻,胶原纤维沉积减少(P0.05,P0.01),CollagenⅠ、α-SMA、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著降低(P0.05,P0.01)。结论疏肝健脾方具有抗肝纤维化作用,其机制与减少细胞自噬,降低能量的生成,从而抑制肝星状细胞活化有关。     

丹参通络解毒汤对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织Atg5、Beclin-1及LC3表达的影响

目的 观察丹参通络解毒汤对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠心肌组织Atg5、Beclin-1及LC3表达的影响,探讨其治疗MIRI的作用机制。方法 将大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、丹参通络解毒汤组和自噬抑制剂组,除空白组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎法建立MIRI大鼠模型,假手术组只穿线不结扎。造模结束后,丹参通络解毒汤组每日予丹参通络解毒汤（15.66g/kg）灌胃,其余各组大鼠均灌胃等体积生理盐水,连续7 d。自噬抑制剂组术后腹腔注射3-甲基腺嘌呤溶液（15 mg/kg）,透射电镜观察大鼠心肌组织超微结构;生化分析仪检测血清乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)水平;ELISA检测大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平;免疫组化检测大鼠心肌组织LC3蛋白表达;RT-PCR检测心肌组织Beclin-1 mRNA表达;Western blot检测大鼠心肌组织Atg5、Beclin-1和LC3蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠心肌纤维排列不整齐,结构破裂,有自噬小体形成;血清LDH、CK-MB和MDA水平显著升高,SOD水平显著降低...     

昆仙胶囊对胶原诱导关节炎大鼠滑膜组织IL-8及γIP-10mRNA表达的影响

目的：研究昆仙胶囊对胶原诱导关节炎大鼠滑膜组织白细胞介素-8（IL-8）及干扰素-γ诱导蛋白10（γIP-10）mRNA表达的影响。方法：将54只SPF级Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、甲氨喋呤（MTX）组和昆仙胶囊低、中、高剂量组各9只。采用尾根部皮下注射胶原蛋白建立胶原诱导关节炎大鼠模型,检测各组关节滑膜细胞与软骨的病理变化,R T-PCR法检测各组滑膜组织IL-8及γIP-10 mRNA的表达水平。结果：MTX组和昆仙胶囊各剂量组大鼠关节滑膜损伤较模型组明显改善（P〈0.05,P〈0.01）。与模型组比较,MTX组、昆仙胶囊各剂量组大鼠的IL-8 mRNA、γIP-10 mRNA的表达明显降低（P〈0.05,P〈0.01）;随着昆仙胶囊剂量的增加,关节滑膜组织IL-8 mRNA、γIP-10 mRNA的表达有下降的趋势;与MTX组、昆仙胶囊低、中剂量组大鼠比较,昆仙胶囊高剂量组大鼠的IL-8 mRNA、γIP-10 mRNA的表达明显降低（P〈0.05）。结论：昆仙胶囊可能通过抑制大鼠滑膜组织IL-8及γIP-10 mRNA基因表达,减轻大鼠滑膜细胞增生及软骨破坏来实现其治疗滑膜炎的目的。     

蚁附蠲痹颗粒对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中Caspase-3表达的影响

目的:观察蚁附蠲痹颗粒对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中Caspase-3表达的影响,探讨蚁附蠲痹颗粒治疗类风湿性关节炎的分子作用机制。方法:经计算机摄像系统采样后,采用Biomias计算机图像处理分析软件对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中信号强度进行分析,得出Caspase-3阳性染色面积及积分光密度值。结果:佐剂性关节炎模型组大鼠滑膜组织中Caspase-3表达(阳性总面积、积分光密度)较空白组明显的增高(P<0.05);阳性组和蚁附蠲痹颗粒高、中、低剂量组较空白组和模型组均显著增高(P<0.01)。结论:蚁附蠲痹颗粒使凋亡反应的效应者(Caspase-3)在滑膜组织中表达增强,促进细胞凋亡是其发挥治疗作用的一个重要环节。     

基于JAK2/STAT3信号通路探讨风湿宁胶囊对寒湿痹阻型类风湿关节炎的作用机制

目的:探讨风湿宁胶囊对寒湿痹阻型类风湿关节炎模型大鼠JAK2/STAT3信号通路的影响及作用机制。方法:SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、tofacitinib组(15mg·kg-1)和风湿宁高、中、低剂量组(1.32,0.66,0.33 g·kg-1)每组各12只;除正常组外,其余各组大鼠均采用人工气候箱模拟寒湿环境结合II型胶原诱导的方法制备寒湿痹阻型类风湿关节炎大鼠模型,造模成功后,各组大鼠灌胃给予相应药物进行干预,每日1次,连续28 d;观察药物对大鼠关节肿胀度、关节滑膜组织JAK2、STAT3及JAK2/STAT3通路负反馈抑制因子SOCS3的mRNA和蛋白表达情况。结果:风湿宁胶囊可显著降低寒湿痹阻型类风湿关节炎模型大鼠的关节肿胀度,抑制JAK2、STAT3 mRNA及蛋白的过表达,促进SOCS3 mRNA及蛋白表达。结论:风湿宁胶囊抑制JAK2/STAT3信号通路的过度激活作用是其治疗类风湿关节炎的重要机制之一。     

化痰消瘀方通过调节自噬对大鼠癌前病的改善作用

目的探究化痰消瘀方通过调节自噬对大鼠癌前病的改善作用。方法构建大鼠PLGC模型,将大鼠随机分为对照组、模型组、胃复春组(0.5 g/kg)及化痰消瘀方低、高剂量组(5、10 g/kg),灌胃给药4个月。记录大鼠在治疗过程的生存状况、体质量;HE染色观察胃窦部组织病理状态,免疫组化、Western blot及RT-PCR检测LC3、Raptor、Beclin-1蛋白及mRNA表达。结果与模型组比较,化痰消瘀方提高PLGC大鼠体质量(P0.05),抑制PLGC大鼠胃组织LC3、Raptor、Beclin-1蛋白及mRNA表达(P0.05),以上三者蛋白均在细胞核或细胞中表达,化痰消瘀方能改善PLGC大鼠胃窦部组织病理状态。结论化痰消瘀方能改善PLGC大鼠胃窦部组织病理状态,其可能机理在于降低胃组织LC3、Raptor、Beclin-1自噬相关蛋白及mRNA表达。