下呼吸道流感嗜血杆菌定植通过Toll样受体4影响哮喘小鼠免疫失衡

目的：观察下呼吸道流感嗜血杆菌定植对哮喘小鼠气道炎症和免疫失衡的影响,并研究其信号通路。方法：32只C57BL/6野生型(wild type,WT)和32只Toll样受体4(,TLR4)基因敲除(TLR4^-/-)小鼠为实验对象,其中C57BL/6 WT小鼠,随机分为对照(NC)组和哮喘(AC)组、注菌(NS)组、哮喘注菌(AS)组4组,每组8只。32只TLR4^-/-小鼠处理及分组同上。对AC组、AS组,分别用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏和激发,制备慢性哮喘小鼠模型;对NS、AS组,方经气道注入流感嗜血杆菌琼脂菌珠,制备气道定植菌模型。采用酶联免疫吸附法检测小鼠血清中IL-17、IL-10水平,用流式细胞仪检测小鼠脾脏单个核细胞中Th17、Treg及TLR4⁺细胞数,并进行三者相关性分析。结果：C57BL/6 WT小鼠中,与AC组、NS组和NC组相比,AS组IL-17水平、IL-17/IL-10比值、Th17、Th17/Treg比值、TLR4⁺细胞水平升高,IL-10、Treg降低,提示...     

乳化异氟烷预处理对缺血-再灌注损伤大鼠心肌Toll样受体4及血清TNF-α和IL-10浓度的影响

Toll样受体是一个主要分布于炎症细胞的识别病源分子的受体超家族,其最主要的生物学功能是促进细胞因子的合成和释放,引发炎症反应[1].而炎症因子水平的高低与缺血后心脏功能的损害及细胞坏死数量相关.有研究表明,Toll样受体4(TLR4)缺陷型小鼠缺血-再灌注后心肌炎症反应减轻,梗死面积减少[2],推测TLR4可能参与了缺血-再灌注诱导的炎症反应,而乳化异氟烷预处理是否影响缺血-再灌注心肌TLR4的表达尚不清楚,本研究拟在评价乳化异氟烷预处理对大鼠缺血-再灌注心肌TLR4 mRNA及血清中IL-10和TNF-α的影响,探讨其产生心肌保护作用的可能机制.     

FIZZ1与动脉粥样硬化关系探讨

目的 探讨FIZZ1在ApoE基因敲除鼠粥样斑块表达情况并探讨其可能的表达细胞.方法 C57BL/6J ApoE基因敲除鼠及C57BL/6J野生型小鼠各9只,分别喂食高脂饲料及普通饲料,24周后处死小鼠,自主动脉根部至腹主动脉离断整个血管,石蜡包埋后作连续切片,行HE染色及FIZZ1免疫组化.检测血管斑块内FIZZ1表达情况,体外模拟粥样斑块内Th2型细胞因子环境,检测斑块内FIZZ1表达是否与Th2型细胞因子刺激平滑肌细胞或巨噬细胞有关.结果 免疫组化可见FIZZ1在粥样硬化斑块内明显表达,Th2型细胞因子可以刺激巨噬细胞FIZZ1表达,但不能刺激平滑肌细胞FIZZ1表达.结论 正常血管壁内未见FIZZ1表达,ApoE基因敲除鼠粥样斑块表达FIZZ1,动脉粥样硬化斑块内Th2型细胞因子刺激巨噬细胞可能为FIZZ1表达机理之一.     

内皮型一氧化氮合酶基因敲除小鼠心肌细胞对苯福林诱导的过度增殖反应

目的:通过RNA定量检测和细胞面积测定两种方法,观察内皮型一氧化氮合酶基因敲除与野生型新生小鼠的离体心肌细胞对心肌肥大诱导因子反应性的差异.方法:实验于2007-08在顺德职业技术学院医学系实验研究中心完成.①实验材料:出生1～3 d C57BL/6品系内皮型一氧化氮合酶基因敲除小鼠和野生型小鼠,雌雄不拘.②实验方法:对小鼠心肌细胞及成纤维细胞进行培养,72 h后分为实验组和对照组,将肾上腺素能受体激动剂苯福林掺入培养心肌细胞,另设空白对照组:在基础培养液中加入与实验组等量的DMEM.③实验评估:采用DNA、RNA定量检测、细胞面积测定方法,在细胞水平观察内皮型一氧化氮合酶基因敲除小鼠和野生型小鼠心肌细胞增殖、肥大反应之间的差异.结果:①培养的心肌细胞在加入苯福林72 h后于显微镜下观察两组细胞均呈椭圆形、长菱形.②与对照组相比,实验组心肌细胞与成纤维细胞RNA检测及荧光值均增高(P＜0.05);空白对照组心肌细胞与成纤维细胞RNA检测荧光值均较实验组和对照组tE(P＜0.05).③与空白对照组相比,实验组和对照组心肌细胞与成纤维细胞面积荧光值均增高(P＜0.05);其中实验组心肌细胞面积荧光值较对照组高(P＜0.05).结论:内皮型一氧化氮合酶基因敲除小鼠其离体心肌细胞在心肌肥大诱导因子刺激下产生过度增殖反应.     

白细胞介素-6在ALD-DNA诱导的SLE模型小鼠SLE中的作用机制研究

目的探讨白细胞介素(IL)-6对ALD-DNA诱导的系统性红斑狼疮(SLE)模型小鼠SLE中的作用机制。方法在健康的雌性C57BL/6小鼠体内用活化淋巴细胞来源的DNA(ALD-DNA)免疫,从而诱导小鼠的SLE,未免疫的小鼠被用作对照。检测了疾病相关的一些发病指标,包括抗双链DNA抗体,尿蛋白和肾脏的病理学改变。结果 IL-6KO基因敲除的小鼠能抵抗ALD-DNA诱导的小鼠SLE模型。在IL-6KO免疫的小鼠中,CD4~+T细胞的活化状态低于野生型的免疫小鼠。胞内细胞因子染色结果表明,IL-6KO免疫的小鼠体内Foxp3的表达高于野生型免疫的小鼠。结论在ALD-DNA诱导的SLE模型中,IL-6可以抑制Treg细胞的分化,从而促进疾病的发展。     

糖脂毒性诱导胰岛β细胞炎症因子过表达的研究

目的了解高糖、高脂环境对胰岛β细胞功能和Toll受体3(TLR3)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、补体C3及补体C4表达的影响。方法培养小鼠胰岛β细胞株(NIT-1)经高糖高脂刺激后,应用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR3mRNA的表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP、补体C3及补体C4的表达。结果高糖高脂刺激后,胰岛β细胞增殖被抑制,TLR3mRNA、TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP、补体C3及补体C4的表达明显增加;并且高糖高脂(GZ)组胰岛β细胞损伤和炎症因子过表达程度明显高于高糖(G)组和高脂(Z)组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论高糖高脂可能通过激活TLR3信号通路等途径产生大量炎症因子和免疫因子,抑制胰岛β细胞增殖,导致胰岛β细胞功能障碍,并且糖、脂协同作用明显大于单独的糖、脂毒性。     

心肌功能损害的机制研究:Toll样受体4在脂多糖诱导小鼠心肌IL-1β基因表达中的作用

目的:探讨脂多糖诱导心肌炎症因子白细胞介素1β(interlukine1β,IL-1β)的表达过程中,Toll样受体4所起的作用,寻找心肌损害的防治方法。方法:以Toll样受体4基因突变型小鼠C3H/HeJ(n=36)及野生型小鼠BALB/C(n=36)为实验对象,给以腹腔内注射脂多糖(1mg/kg)或生理盐水。注射生理盐水的小鼠作为对照。用反转录-聚合酶链反应方法,对注射脂多糖前后两组小鼠心肌Toll样受体4和IL-1βmRNA表达进行半定量检测。结果:C3H/HeJ小鼠存在Tlr4突变。两种小鼠心肌均检测到Toll样受体4表达。脂多糖刺激后,野生型小鼠心肌IL-1βmRNA表达迅速显著增加,而突变型小鼠心肌未检测到IL-1β的表达。结论:TLR4在心肌表达,并且介导了脂多糖刺激下小鼠心肌局部IL-1β的基因表达。     

Toll样受体4在抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物诱导小鼠腹腔巨噬细胞表达炎症因子中的作用

目的观察抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物刺激小鼠腹腔巨噬细胞表达TNF-α、IL-1β、IL-6的效果,探讨Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法对C3H/He N(TLR4正常)小鼠、C3H/He J(TLR4缺陷)小鼠腹腔注射非特异性兔Ig G(R-Ig G)、抗β2GPⅠ抗体,72 h后用细胞免疫荧光法检测小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6的表达水平;抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物对小鼠腹腔巨噬细胞进行体外刺激,荧光定量PCR法检测细胞表达上述因子的mRNA水平,western blot法检测其蛋白质分泌水平。结果抗β2GPⅠ抗体刺激的C3H/He N小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β、IL-6的水平明显高于C3H/He J小鼠,并经细胞免疫荧光法验证;经体外刺激后,荧光定量PCR法结果显示抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物诱导C3H/He N小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平高于空白组或C3H/He J刺激组(P均0.01);western blot结果显示C3H/He N来源细胞TNF-α、IL-1β、IL-6分泌均显著高于C3H/He J来源细胞(P均0.01)。结论抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物能够促进小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,TLR4为介导此过程的受体之一。     

双歧杆菌对高脂饮食诱导的C57BL/6小鼠非酒精性脂肪肝的影响

目的 探讨双歧杆菌是否通过改变肠道菌群,减少肠道局部炎症,调节系统性炎症,从而减轻高脂饮食诱导的C57BL/6小鼠的非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD）。方法 将32只雄性C57BL/6小鼠作为实验动物,分为对照饲料组、对照饲料加双歧杆菌干预组、高脂饲料组和高脂饲料加双歧杆菌干预组,每组分2笼,每笼4只。检测小鼠血清糖脂代谢及肝功能水平。通过油红O染色和苏木精-伊红（H-E）染色评估小鼠肝脏脂肪变性情况。采用实时荧光定量PCR检测小鼠回肠、结肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和肠黏膜闭锁小带蛋白1(zonula occludens 1,ZO-1)、紧密连接蛋白（occludin）的表达。通过Illuminate Miseq平台微生物多样性测序检测小鼠粪便中肠道菌群的结构变化。结果 高脂饲料加双歧杆菌干预组C57BL/6小鼠肝脏脂肪变性程度明显低于高脂饲料组。与高脂肪饲料组相比,高脂饲料加双歧杆菌干预组炎症因子TNF-α、IL-6表达明显下降,肠道炎症减轻。与对照饲料组相比,高脂饲料组肠道菌群...     

Toll样受体3基因缺陷促进四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化损伤

目的:探讨Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)基因缺陷对于四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠模型肝纤维化损伤程度的影响。方法:将20只野生型雄性小鼠和20只TLR3基因缺陷型(TLR3-/-)雄性小鼠分别分为野生型对照组、野生型造模组、TLR3-/-对照组和TLR3-/-造模组,每组各10只。对照组腹腔注射玉米油,造模组腹腔注射四氯化碳。造模8周后采集血液标本,应用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、白蛋白(albumin,ALB)水平;采用马松三色染色法对肝组织胶原沉积程度进行分析;采用α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)免疫组织化学染色法检测肝星状细胞的激活情况;应用试剂盒检测肝组织中的羟脯氨酸含量;采用实时荧光定量PCR法检测肝组织中纤维化标志物Ⅰ型胶原、炎性因子[包括肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素6(interleukin-6,IL-6)和单核细胞趋化因子1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)]以及促纤维化分子[包括转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP1)和血小板衍生生长因子受体(platelet-derived growth factor receptor,PDGFR)]的表达。结果:TLR3基因缺陷对于四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠血清中的ALT、AST、TBIL、ALB水平变化无影响。TLR3基因缺陷可加重四氯化碳诱导的肝组织胶原沉积和肝星状细胞激活;促进四氯化碳诱导的小鼠肝组织中羟脯氨酸的升高;使四氯化碳诱导的肝纤维化标志物Ⅰ型胶原增多,也使肝组织中炎性因子TNF-α、IL-6和MCP-1以及促纤维化分子TGF-β、TIMP1和PDGFR表达升高。结论:TLR3基因缺陷可促进四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠肝组织中的胶原沉积和肝星状细胞激活,促进肝组织炎性因子释放,使肝促纤维化分子上调。以上提示,TLR3是肝纤维化病理过程中的一个保护性基因。     

miR-146 调控TLR4/NF-κB 通路减少卵泡颗粒细胞凋亡及干预卵巢早衰中的机制研究

目的 探究miR-146 通过调控Toll 样受体4（TLR4）/ 核因子-κB（NF-κB）减少卵泡颗粒细胞凋亡和干预卵巢早衰（premature ovarian failure,,POF ）的机制。方法 野生小鼠实验:60 只SPF 级C57BL/6 小鼠随机分为对照组（n=30）和POF 组（n=30）。POF 组建立卵巢早衰模型,造模后15 天qPCR 检测2 组小鼠卵巢组织中miRNA-146表达水平;基因敲除鼠实验:40 只C57BL/6 小鼠和20 只miR-146 敲除小鼠分为三组:对照组（n=20）、野生型POF组（n=20）和miR-146 敲除POF 组（n=20）,野生型POF 组和miR-146 敲除POF 组建立POF 模型,建模后15 天HE染色分析各组小鼠卵巢组织病理情况及原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和闭锁卵泡数,ELISA 检测各组小鼠卵巢组织炎症信号通路分子TLR,NF-κB, 肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）的表达水平;Western blot 检测卵巢组织凋亡蛋白BCL2-Associated X 蛋白（Bax）,B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl2）和TLR4 信号通路蛋白TLR4,NF-κB表达水平。结果 野生鼠实验表明与对照组相比,POF 组小鼠卵泡中miR-146 表达水平下调（0.51±0.14 vs 1.52±0.21）,差异具有统计学意义（t=7.338,P<0.01）;基因敲除鼠实验表明:与对照组相比,野生型POF 组和miR-146 敲除POF组原始卵泡（9.43±2.03,6.43±1.60 vs 16.82±2.11）、初级卵泡（6.15±1.11,5.01±1.10 vs 8.88±1.12）、次级卵泡（5.11±1.71,4.01±1.26 vs 7.11±1.34）均降低,闭锁卵泡（10.17±1.41,11.46±1.96 vs 7.18±1.64）升高,差异具有统计学意义（F=7.787, 8.214, 9.726, 7.811, 均P<0.01）。与对照组相比,野生鼠POF 组和miR-146 敲除POF 组小鼠卵巢组织TLR4（68.18±5.92pg/ml,91.11±16.34 pg/ml vs 24.81±2.81 pg/ml）,NF-κB（74.19±8.11 pg/ml,88.11±16.71pg/ml vs 68.18±5.92 pg/ml）,TNF-α（72.81±2.10 pg/ml,94.31±2.26 pg/ml vs 28.07±3.67 pg/ml）和IL-6（69.19±7.11,81.11±16.34 vs 19.43±10.81 pg/ml）分泌显著升高,差异均有统计学意义（F=6.281, 7.264, 8.724, 6.817, 均P <0.01）;与对照组相比,野生鼠POF 组和miR-146 敲除POF 组小鼠卵巢组织Bax 蛋白表达水平降低（1.18±0.19. 0.61±0.14 vs1.81±0.21）,Bcl2 蛋白表达升高（0.59±0.05, 0.91±0.05 vs 0.58±0.02）,TLR4（1.10±0.12, 0.41±0.04 vs 1.13±0.11）和NF-κB（0.81±0.02, 0.31±0.06 vs 0.87±0.27）降低,差异均有显著性统计学意义（F=7.235, 6.714, 7.612 ,7.737, 均P<0.01）。结论 miR-146 具有减少卵泡颗粒细胞凋亡的作用,其机制可能与TLR4/NF-κB 信号通路的调控和抑制炎症因子的释放相关。     

内皮源性toll样受体4在急性肺损伤中的作用

目的 探索内皮源性或髓源性细胞表面toll样受体4(TLR4)介入急性肺损伤(ALI)的作用. 方法 采用TLR4基因突变(C3H/HeJ品系,TLR4mut/mut)及野生型(C3H/HeN,TLB4+/+)小鼠,通过骨髓移植建立"内皮细胞TLR4+/+髓系细胞TLR4mut/mut"(WT/Mutant:受体/供体)及Mutant/WT嵌合体小鼠,尾静脉注射LPS(5 mg·kg-1)复制ALI模型,5 h后测肺组织湿干重比(W/D),肺通透指数(LPI),肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平、炎症因子及黏附分子水平. 结果 TLR4mut/mut小鼠肺损伤较TLR4+/+小鼠较轻,WT/Mutant组小鼠肺组织损伤较Mutant/WT组重,且WT/Mutant组与WT/WT组差异无统计学意义.WT/Mutant组小鼠肺组织MPO水平、ICAM-1表达水平较Mutant/WT组高,且ICAM-1表达水平WT/Mutant组小鼠与WT/WT小鼠比较差异无统计学意义.炎症因子TNF-α、IL-1β的水平Mutant/WT组较WT/Mutant组高. 结论 内皮源性TLR4通过调控黏附分子表达而促进PMN肺组织招募,在介导LPS诱导的ALI中的发挥核心作用.     

腺苷A1受体敲除小鼠戊四氮点燃后脑组织病理形态学变化

目的:通过观察腺苷A1受体敲除小鼠戊四氮点燃后脑组织病理形态学变化,探讨腺苷A1受体的神经保护作用。方法:腺苷A1受体基因敲除纯合型(-/-)小鼠20只纳入敲除鼠组,腺苷A1受体基因敲除野生型小鼠20只纳入野生型组,C57BL/6小鼠10只纳入对照组。敲除鼠组和野生型组小鼠制作戊四氮点燃癫痫模型,于点燃成功后24 h、30 d采用尼氏染色观察各组小鼠海马及皮质神经元的形态结构变化。结果:野生型组小鼠点燃后皮质和海马神经元损伤较敲除鼠组出现晚、范围小,损伤程度轻。结论:腺苷A1受体对癫痫发作小鼠具有神经保护作用。     

心肌功能损害的机制研究：Toll样受体4在脂多糖诱导小鼠心肌IL-1β基因表达中的作用

目的：探讨脂多糖诱导心肌炎症因子白细胞介素1β(interlukine 1β，IL-1β)的表达过程中，Toll样受体4所起的作用，寻找心肌损害的防治方法。方法：以Toll样受体4基因突变型小鼠C3H／HeJ(n=36)及野生型小鼠BALB／C(n=36)为实验对象，给以腹腔内注射脂多糖(1mg／kg)或生理盐水。注射生理盐水的小鼠作为对照。用反转录-聚合酶链反应方法，对注射脂多糖前后两组小鼠心肌Toll样受体4和IL-1βmRNA表达进行半定量检测。结果：C3H／HeJ小鼠存在Tlr4突变。两种小鼠心肌均检测到Toll样受体4表达。脂多糖刺激后，野生型小鼠心肌IL-1β mRNA表达迅速显著增加，而突变型小鼠心肌未检测到IL-1β的表达。结论：TLR4在心肌表达，并且介导了脂多糖刺激下小鼠心肌局部IL-1β的基因表达。     

抵抗素样分子α在动脉粥样硬化斑块内的表达

目的 探讨抵抗素样分子α(RELMα)在ApoE基因敲除鼠动脉粥样硬化斑块内的表达及其对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移的影响.方法 C57BL/6J ApoE基因敲除鼠及C57BL/6J野生型小鼠各9只,喂食高脂饲料,24周后处死,自主动脉根部至腹主动脉离断血管,石蜡包埋血管后作连续切片,行HE染色及RELMα免疫组化,RT-PCR检测斑块内RELMα mRNA表达,用不同浓度的重组RELMα刺激培养的VSMC,观察VSMC增殖及其迁移情况,采用SPSS 11.0统计软件包,以one-wayANOVA分析各组之间的差异.结果 ApoE基因敲除鼠高脂饲养2,4周后,主动脉根部形成动脉粥样硬化斑块,免疫组化及其RT-PCR可见RELMα蛋白及其mRNA在粥样硬化斑块内明显表达,野生型C57BL/6J鼠血管壁内,未见RELMα讹及其mRNA表达,重组RELMα能刺激体外培养的VSMC增殖(RELMα刺激组cpm分别为[(2811.21±216.89),(4056.87±220.65),(5061.45±335.86),与对照组(1609.58±203.53)比较,P<0.01]重组RELMα也能刺激体外培养的VSMC迁移[RELMα刺激组迁移细胞数分别为(130.54±12.98),(158.39±11.58),(203.50±17.37),与对照组(70.54±11.92)比较,P<0.01].结论 RELMα在动脉粥样硬化斑块内表达,其能促进VSMC增殖及迁移.     

脓毒症的抗凝治疗

目前已经公认,脓毒症是由于感染引起的宿主过度全身炎症反应综合征[1-2].炎症和凝血系统复杂的相互作用是脓毒症的发病机制之一[3-4].脓毒症的炎症反应打破了凝血系统的平衡,使其向促凝状态倾斜.研究认为,宿主对入侵的致病微生物的初始反应可能是由Toll样受体(TLR)介导的.TLR是一种模式识别受体(PRRs),可以识别细菌、病毒和真菌细胞壁上的特异性细胞壁分子[5].     

THP-1细胞中A20蛋白对TLR1和TLR2诱导免疫反应影响的研究

目的研究A20蛋白与Toll样受体1(TLR1)和Toll样受体2(TLR2)信号通路产生炎症因子的关系,探讨A20蛋白在TLR1和TLR2信号通路中的分子机制,为细菌性感染疾病的抗炎和基因治疗提供基础理论依据。方法预先用Pam3CSK4处理的THP-1细胞,用Pam3CSK4再刺激,分析Pam3CSK4预处理对Pam3CSK4诱导的细胞因子产生的影响;RT-PCR和Western blot检测Pam3CSK4处理后TLR1和TLR2及My D88的表达水平;采用siRNA转染抑制A20表达,验证A20在Pam3CSK4诱导免疫耐受中的作用。结果 Pam3CSK4预处理可下调Pam3CSK4再刺激所诱导的细胞因子表达水平,包括IL-1β、TNF-α及IL-8,同时Pam3csk4预处理下调Pam3csk4所诱导的JNK、p38及NF-κB的信号传导;另外Pam3CSK4显著上调A20的表达水平,且有剂量及时间依赖性;A20过表达细胞中,Pam3csk4诱导的促炎症细胞因子的表达被逆转。结论 A20是诱导Pam3csk4耐受的重要调节因子,对Pam3csk4诱导的炎症反应具有负调控作用。     

心肌梗死微环境中氧化低密度脂蛋白对树突状细胞诱导炎症反应的影响

目的：体外模拟高脂血症小鼠心肌梗死（myocardial infarction, MI）和肾素-血管紧张素系统（RAS）被激活的内环境,研究氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）能否在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的基础上进一步诱导树突状细胞（dendritic cells, DCs）的成熟、迁移和炎症反应,并探讨可能参与其中的信号通路。方法：诱导C57BL/6J小鼠骨髓细胞分化成DCs,然后加入坏死心肌细胞上清,分别给予AngⅡ和ox-LDL+AngⅡ干预48 h。流式细胞仪检测DCs的成熟标志物（CD83）和协同共刺激分子（CD86）的表达,用qPCR、ELISA方法测定炎性因子的表达。Western 印迹法检测核因子κB（NF-κB）和IκB磷酸化程度,以及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）和Toll样受体（TLR）4信号通路的表达。结果：ox-LDL能够在AngⅡ基础上进一步诱导CD83和CD86的表达,增强炎性因子和趋化因子的表达,增强NF-κB和IκB磷酸化程度（P<0.05）。ox-LDL能够在AngⅡ基础上进一步上调LOX-1的表达,同时激活了TLR4-MyD88-NF-κB通路（P<0.05）。结论：ox-LDL可能在AngⅡ的基础上进一步诱导DCs免疫成熟、迁移和炎症反应;LOX-1-TLR4-MyD88-NF-κB信号通路可能参与DCs成熟,以及DCs在高脂血症合并心肌梗死发生和发展中引起炎症反应的过程。     

Toll样受体4在实验性急性坏死型胰腺炎形成中的介导作用

目的　应用抗内毒素受体 Toll样受体 4 (TLR4 )抗体体内注射观察其对小鼠实验性急性坏死型胰腺炎 (ANP)的影响 ,探讨内毒素信号通路 ,尤其是Toll样受体 4在ANP发生中的介导作用。方法　 1 0只BALB/c小鼠随机分为ANP组和ANPTLR4抗体处理组。ANP模型制备采用腹腔内注射雨蛙肽和脂多糖 (LPS)。TLR4抗体处理组于LPS注射前 1 5min静脉注射TLR4单克隆抗体 ,剂量为 2 0 μg。 1 2h后处死小鼠并收取标本。测定血清淀粉酶和乳酸脱氢酶 (LDH)水平 ;胰腺组织切片行HE染色并作病理评分 ;RT PCR检测胰腺组织炎性介质TNF α、IL 1 β和ICAM 1mRNA表达变化 ;免疫组化和westernblot检测胰原组织核因子 -κΒ (NF κΒ)p6 5亚单位蛋白表达的改变 ;酶组织化学方法检测中性粒细胞特异性髓过氧化物酶(MPO)活性的变化。结果　与ANP模型组相比 ,TLR4抗体处理组血清淀粉酶活性 [1 2 6 1 2± 5 70 6U/Lvs2 341 2± 892 2U/L ,P <0 0 5 ]和LDH活性 [1 92 6± 4 0 0U/Lvs2 5 74± 2 77U/L ,P <0 0 5 ],较ANP模型组显著升高 ;病理评分结果显示 ,TLR4抗体处理组胰腺组织坏死和炎症反应程度明显加重 ;胰腺组织炎性介质TNF α、IL 1 β和ICAM 1mRAN表达呈显著上调 ;胰原组织NF κBp6 5亚单位的蛋白表达也呈上调趋势 ;反映中性粒细胞