菲牛蛭规范化养殖标准操作规程(SOP)

目的:制定菲牛蛭规范化养殖标准操作规程(S0P)。方法:分别对菲牛蛭的养殖基地环境、养殖技术、病害防治、留种、采收加工、产品质量标准及监测等项目进行研究。结果:平均亩产菲牛蛭活体420.88 kg,平均每1 kg菲牛蛭鲜品含天然水蛭素43万AT-U,产品各项卫生及质量指标均符合国家有关的规定。结论:此S0P适用于广西地区的菲牛蛭养殖。     

菲牛蛭成分与急性毒性试验研究

目的:分析菲牛蛭中的氨基酸成分、有害物质含量与急性毒性,为评价菲牛蛭药材质量提供科学依据。方法:应用日立835-50型氨基酸自动分析仪、原子吸收分光光度法、CGC-ECD和CGC-NPD气相色谱法测定了菲牛蛭中含有的氨基酸成分、有害物质含量,并进行了菲牛蛭的初步急性毒性试验研究。结果:比较分析了宽体金线蛭、日本医蛭、欧洲医蛭、菲牛蛭四种水蛭的氨基酸含量结果,其差别不显著;菲牛蛭中重金属含量和有机氯以及有机磷农药残留量符合国家有关要求;菲牛蛭急性毒性试验结果表明其LD50大于10 g/kg,未见明显毒副作用。结论:菲牛蛭含有较高的氨基酸含量,而重金属和有机氯、有机磷农药残留量则较低,急性毒性试验LD50>10 g/kg,可考虑作为一种新药用资源而加以研究     

菲牛蛭冻干粉去腥方法的研究

目的:探索菲牛蛭冻干粉去腥工艺。方法:以抗凝血酶活性和感官评价为指标,筛选菲牛蛭冻干粉的最佳去腥工艺。结果:以7%的环糊精溶液,料液比1∶5,50℃水浴1 h除腥效果最佳。此方法处理后的菲牛蛭冻干粉抗凝血酶活性为631.7 U/g,感官评价分数为4.3分。结论:环糊精包埋对菲牛蛭冻干粉具有最佳除腥效果,同时最大程度的保存了其抗凝血酶活性,采用环糊精包埋法除去菲牛蛭冻干粉腥味切实可行。     

菲牛蛭提取物对顺铂治疗S180荷瘤鼠减毒作用的研究

目的:研究菲牛蛭提取物联合顺铂治疗S180荷瘤鼠效果及其减毒作用。方法:建立S180荷瘤鼠模型10天后,将40只BALB/c小鼠按肿瘤体积随机分为阴性对照组、顺铂组、菲牛蛭提取物组、菲牛蛭提取物+顺铂组。分组后开始给药,连续给药7天,第8天处死各组小鼠,取血清检测肝肾功能指标;取肾脏进行组织病理学检查;剥离肿瘤称重计算抑瘤率。结果:菲牛蛭提取物与顺铂联合使用具有抑制肿瘤生长的作用(P0.05)。与顺铂组比较,联合用药后菲牛蛭提取物可使S180荷瘤鼠的ALT、AST、TBIL、BUN、CREA含量降低(P0.05)。结论:菲牛蛭提取物与顺铂联合使用治疗S180荷瘤鼠具有相加作用,同时菲牛蛭提取物可减轻顺铂引起的肝肾毒性。     

广东菲牛蛭生活水体的化学环境

蛭类俗称蚂蟥,是传统中药。《本草纲目》对水蛭的药理、疗效、使用方法作了较全面记载。现代药理实验表明水蛭注射液能使肿瘤细胞坏死、消失,对网状内皮细胞有增强作用。与非吸血蛭类比较,吸血的菲牛蛭唾液腺含有较丰富的抗血液凝固水蛭素,在医药学上有重要价值。有关吸血蛭类繁殖饲养研究,国内谭恩光(2002)曾报道广东菲牛蛭H irud inariam an illensis Lesson的生长和生殖,及吸血山蛭的生态分布、生长、摄食和生殖[1~3]。国外K eegan(1968)对东南亚的菲牛蛭生活习惯进行观察[4]。1992年Steiner从产自马尼拉的菲牛蛭中分离纯化新的水蛭素,…     

利用丝素固定化凝血酶分离纯化菲牛蛭中的水蛭素

目的:利用制备的丝素固定化凝血酶分离纯化菲牛蛭中的水蛭素。方法:以抗凝血酶活力(ATU)回收率为指标进行牛蛭素的固定化凝血酶萃取,通过正交实验优化萃取及反萃取条件。最后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定实验样品的纯度。结果:菲牛蛭素A萃取的最佳条件为:水蛭素初始浓度9 ATU/mL,温度30℃,pH4.30,时间45 min;反萃取温度30℃,pH 7.4,时间30 min,ATU回收率55.73%。菲牛蛭素B萃取的最佳条件为:水蛭素初始浓度9 ATU/mL,温度30℃,p H 5.2,时间45 min;反萃取温度30℃,pH 7.2,时间30 min,ATU回收率23.96%。菲牛蛭素A、B实验样品PAGE图均只有1条带。结论:该文利用制备的丝素固定化凝血酶可以有效的应用于菲牛蛭素的分离纯化。     

中药水蛭品种考证及资源可持续利用发展探讨

该文通过系统地本草文献梳理与研究指出,传统中医使用的水蛭是生于水中,个头较小且能吸食人及牛马血的水蛭.具有这些特性的水蛭的品种有日本医蛭Hirudo nipponia Whitman、丽医蛭H.pulchra Song、南京牛蛭Poecilobdella nanjingensis sp.Nov.、菲牛蛭P.manillensis (Lesson)以及湖北牛蛭P.hubeiensis Yang 5个品种,与2010年版《中国药典》水蛭项下所规定的动物品种来源不完全一致.建议《中国药典》修改并补充水蛭的品种来源,保留原有日本医蛭H.nipponica Whitman,增补菲牛蛭P.manillensis (Lesson),暂时保留宽体金线蛭Whitmania pigra Whitman、尖细金线蛭W.acranulata Whitman,并进一步加强丽医蛭H.pulchra Song、南京牛蛭P.nanjingensis sp.Nov.以及湖北牛蛭P.hubeiensis Yang的化学成分和药理作用以及资源分布的研究,以待作为药用品种补充.     

我国菲牛蛭的研究概况

综述了我国菲牛蛭的地理分布、野生资源情况、生态习性和采收季节、化学成分、生物活性成分、药理学作用、分离纯化以及菲水蛭素基因的克隆和序列测定。认为菲牛蛭可作为一种新的药用资源加以研究。     

水蛭头、尾抗凝活性的比较及晾干后对活性的影响

水蛭头、尾抗凝活性的比较及晾干后对活性的影响汪文茉张秋海欧兴长(中国中医研究院基础理论研究所北京100700)为考察水蛭哪个部位作用最强及晾干后对活性的影响,我们测定了两种吸血水蛭(菲牛蛭和日本医蛭)的头部、尾部及其全体的比活性。并比较了干品全体和鲜活水蛭全体(折合成干重)的比活性。1材料与方法1.1材料1.1.1水蛭日本医蛭HirudenipponicaWhitman,安徽巢湖地区收集,菲牛蛭PoecilobdelamanillensisLesson,海南岛收集,....     

中药菲牛蛭化学成分的分析

推牛蛭（Hirudinaria manillensis Lesson）系医蛭科，牛蛭属环节动物，别名为马尼拟医蛭，俗名金边蚂蟥，其资源在我国的广东、广西和海南十分丰富。菲牛蛭是水蛭的一种，水蛭是一味传统的中药，始载于《神农本草经》，     

正交试验法优选菲牛蛭饲料配方研究

目的 优化菲牛蛭Poecilobdella manillensis的人工饲料3种主要成分配比,确定饲料的最佳配方。方法 采用湿土网箱法养殖菲牛蛭,以存活率和个体体质量增长率为考察指标,采用L₉(3⁴) 正交试验法,考察血球蛋白粉（NP-90）、血浆蛋白粉（NP-2002）和维生素C（VC）3个因素,优选菲牛蛭人工饲料。采用层次分析法统计正交试验,分析各因素各水平对试验结果的影响权重。结果 以菲牛蛭存活率为考察指标时,3种因素对成活率的影响为VC＞NP-90＞NP-2002,以0 NP-90、1% NP-2002和0.05% VC组合为最佳;以菲牛蛭个体体质量增长率为考察指标时,3种因素对个体体质量增长率的影响大小依次为NP-2002＞NP-90＞VC,饲料配方以0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC组合为最优。层次分析表明,各因素对正交试验的指标值影响的主次顺序为NP-90＞NP-2002＞VC,0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC的权重最大,正交试验的最优方案为0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC。按0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC及其他成分配制饲料饲喂菲牛蛭,进行验证试验,结果饲料组菲牛蛭成活率达100%,个体体质量增长率达19.91%。结论 按0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC及其他成分配制饲料可作为菲牛蛭人工饲料。     

蚂蝗及其混淆品菲牛蛭的高效毛细管电泳法鉴别

目的 探求更为快捷、准确的水蛭药材的鉴定方法.方法 采用高效毛细管电泳法对蚂蝗和混淆品菲牛蛭进行蛋白多肽的分析.条件为石英毛细管 (75 μm×57 cm ),电解缓冲液为20 mmol/L,硼酸盐溶液(pH 8.5),电压为20KV,检测波长254 nm.结果 蚂蝗与菲牛蛭的高效毛细管电泳图谱之间有明显差异,重复性良好.结论 高效毛细管电泳可作为鉴定方法,用于快速准确地鉴别蚂蝗与菲牛蛭.     

水提取法和仿生提取法研究菲牛蛭不同炮制品的体外抗凝活性

目的:采取不同的提取方法研究菲牛蛭炮制前后抗凝活性变化。方法:分别采用水提取法及模拟胃肠道环境的仿生提取法提取菲牛蛭活体冻干品、清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的活性成分,测定活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性4个凝血指标,并采用Lorry法测定其蛋白含量,综合评价2种提取方法下的菲牛蛭及其炮制品的抗凝活性。结果:无论是水提取法,还是仿生提取法,APTT、PT、TT均显示炮制后抗凝活性降低,抗凝活性顺序为活体冻干品>清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品,此结果与抗凝血酶活性及蛋白含量顺序一致。结论:高温炮制方法会降低菲牛蛭的抗凝活性。     

七种水蛭抗血小板聚集与抗凝血研究

七种水蛭体外抗血小板聚集与抗凝血实验研究结果表明，日本医蛭、菲牛蛭、湖北牛蛭在两方均有明显的作用。尖细金线蛭与宽体金线蛭的水煎提取物具有较强的抗血小板聚集作用，尖细金线蛭与光润金线蛭抗凝血作用较好，而宽体金线蛭、尖细金线蛭和光润金线蛭的超声提取物则表现促血小板聚集的作用。     

中药水蛭各部位提取物对高分子葡聚糖所致大鼠血瘀模型的影响

中国将水蛭作为破血逐瘀药而用于血瘀症的治疗。本实验观察水蛭各部位治疗血瘀症的疗效和初步的作用机理。1　实验部分1.1　药品与试剂　水蛭 (宽体金线蛭、菲牛蛭 ,产地 :广东 )各部分提取物配制成一定浓度 ,备用。A .宽体金线蛭水煎液 (1g生药·mL-1) :取宽体金线蛭粗粉10 0g ,浸泡 30min后 ,常法水煎 3次 ,每次 1h ,过滤浓缩成每1mL相当于生药 1g ,备用。B .菲牛蛭水煎液 (1g生药·mL-1) :取菲牛蛭粗粉 10 0 g ,同上法制备。C .宽体金线蛭醇提液 (1g生药·mL-1) :取宽体金线蛭粗粉10 0 g ,用 95 %乙醇回流提取 3次 ,每次 1h ,过滤浓缩…     

广东菲牛蛭生长和生殖的研究

目的研究室内菲牛蛭生长动态和生殖,为人工饲养菲牛蛭提供基础资料.方法在同一个卵袋产下的幼蛭,放入盛有天然水的80 cm×60 cm×50 cm的玻璃缸内饲养,每10 d称牛蛭体重1次,每天记录水温,每月换水一次,每次在野外采回的水要检测10种化学成分.在活兔身上吸血,每次称出吸血量.观察生长发育变化、记录交配产卵过程.结果从孵化出的幼蛭经14个月时间,吸血5,6次,生长发育达到性成熟,第1,2,3次吸血为幼体阶段,第4次吸血后进人亚成体阶段,第5次吸血后,部分个体达到性成熟,有的个体第6次吸血后进人性成熟.生长动态曲线是一跳跃曲线.记录了交配、产卵过程.结论阐明牛蛭生长动态和生殖过程.在室内饲养牛蛭成功.     

菲牛蛭及其制品的抗血栓、溶血栓作用

已有较多的文献报道了水蛭的抗血栓、溶血栓药效学研究结果，而与菲牛蛭相关的抗血栓与溶血栓作用却未见较详细的研究报道。菲牛蛭是一种药典尚未收载的吸血水蛭物种，作者对其氨基酸组成成分、有害元素含量、农药残留量、体外生物活性、急性毒性试验及动物药效学试验进行了较深入的研究，本实验报道其在抗血栓、溶血栓方面的药效学试验结果。     

5种水蛭中尿嘧啶,黄嘌呤,次黄嘌呤的含量比较

采用反相HPLC法测定了宽体金线蛭、光润金线蛭、尖细金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭及不同产地的宽体金线蛭中尿嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤的含量。色谱柱为Shim-pack CLC-ODS C_(18)柱,流动相:0.05mol/l的磷酸氢二铵溶液(pH=8.4),流速:0.8ml/min,检测波长:254nm,回收率:>98.0％。本法准确、快速、重现性好。     

菲牛蛭提取物体外抗肿瘤活性的研究

目的研究菲牛蛭提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法 1进行细胞毒性检测:采用MTT法检测菲牛蛭提取物对小鼠成纤维细胞L-929的细胞毒性作用,计算致半数细胞毒性所需要浓度(CC50);2采用MTT法,以半数抑制浓度(IC50)为评价抗肿瘤活性强度的指标,分别对BEL-7402人肝癌细胞、Lo Vo人结肠癌细胞、Hela人宫颈癌细胞、TCA-8113人舌鳞癌细胞、MCG-803人胃癌细胞、NCI-H460人肺癌细胞等6种不同来源部位的常见人恶性肿瘤细胞进行抗肿瘤活性的筛选。结果菲牛蛭提取物对正常细胞L-929的CC50值为165.159ATU/ml;对BEL-7402、Lo Vo、Hela、TCA-8113、MCG-803、NCI-H460肿瘤细胞的IC50值分别为2.9105,7.5605,5.2885,10.331,1.7815,2.7825ATU/ml。结论菲牛蛭提取物对6种以上肿瘤细胞的增殖均具有抑制作用,但对正常细胞L-929毒性作用较弱。     

温度、密度、喂食周期对菲牛蛭育苗影响的研究

研究了温度,密度,喂食周期对菲牛蛭幼苗的生长规律。分别设置7个温度(18,22,26,30,34,38℃和自然温度),5个密度(75,125,200,275,350条/L)和6个喂食周期(2,4,6,8,12,16 d),经30 d的养殖后考察各处理的存活率,增长率,特定增长率等生长指标。特定生长率与温度之间存在二次曲线相关,其回归方程式为y=-0.066x2+3.543 1x-38.09(R2=0.837 9),当水温为26.84℃,菲牛蛭幼苗的特定增长率为最大9.461 4,菲牛蛭幼苗最适生长水温在26~30℃。水温为38℃时,菲牛蛭幼苗全部死亡;特定增长率与密度之间存在显著直线回归关系,其回归方程式为y=-0.005 7x+9.197 3(R2=0.998 3);特定增长率与喂食周期之间存在显著直线回归关系,其回归方程式为y=-0.468 2x+10.574(R2=0.998 8)。