GM1对Aβ诱导的AD大鼠海马CA1区神经元损伤的保护作用研究

目的观察GM1对Aβ诱导的AD大鼠学习记忆及海马神经元损伤的保护作用。方法实验分为3组:假模型组、盐水对照组、GM1治疗组。用立体定向技术向大鼠双侧海马CA1区局部注射Aβ25～35 10μl(1μg/μl)建立大鼠AD模型,用GM1腹腔局部注射给予干预。采用Morris水迷宫实验评价大鼠空间分辨及学习记忆能力,用TUNEL染色法观察AD大鼠海马CA1区神经元凋亡,用Western blot方法检测Bcl-2、Bax蛋白含量。结果Aβ25～35诱导的AD大鼠海马CA1区神经元凋亡明显,并可见Bax表达明显增强,Bcl-2少许表达。GM1治疗组海马结构比较完整,可见少量神经元凋亡,而Bcl-2蛋白表达增强、Bax蛋白表达下降,与盐水对照组相比,上述变化在两组间均有显著性差异(P<0.01)。Morris水迷宫实验也提示GM1对AD大鼠模型的学习、空间记忆能力有明显的改善(P<0.01)。结论 (1)GM1能抑制大鼠海马神经元凋亡,起到脑保护作用,从而改善大鼠空间分辨及学习记忆能力。(2)GM1可促使Bcl-2高表达、Bax表达下降,这可能是其减少海马神经细胞凋亡,产生脑保护作用的机制之一。     

脑梗死患者血清NO-2/NO-3和cGMP 变化的研究

Serum NO^-₂/NO^-₃ and cGMP in 52 cerebral ischemia patients were measured with copper-coated cadmium reduction method and radioimmunoassay.The results showed that serum NO^-₂/NO^-₃ in patients at acute period group was significantly higher than that at recovery period group and normal subjects group (P<0.01).Meanwhile,serum cGMP at acute period group was also higher than that at recovery period group and normal subjects group (P<0.01).These results indicated that NO involves in the progress of cerebral ischemia .Using NO inhibitor to decreases the over production of NO in cerebral ischemia may become a specific treatment for cerebral ischemia.     

钾离子通道KCNQ2、KCNQ3与良性家族性新生儿惊厥

钾离子通道与中枢神经元的电活动密切相关,其结构和功能异常将改变神经元兴奋性,引起癫痫发作,其中,KC-NQ2、KCNQ3通道异常即导致良性家族性新生儿惊厥(BFNS)。深入探讨BFNS的KCNQ2、KCNQ3通道突变分子致病机制,将有助于引导BFNS今后的基因治疗研究,并为遗传咨询提供理论基础。     

癫痫状态大鼠海马HSP70 mRNA及GAD67 mRNA表达水平的研究

目的研究癫痫演变过程中特定脑区选择性神经元损伤与修复机制。方法采用分子杂交方法动态观察了马桑内酯(coriariaLactone,CL)诱导的癫痫状态大鼠海马区早期神经元损伤标志物热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)70mRNA及谷氨酸脱羧酶(glutaminaciddecarboxylase,GAD)67mRNA表达水平的变化,同时也观察了大鼠行为学及脑电图改变。结果侧脑室注射CL后20分钟,大鼠出现连续发作的四肢抽搐伴有EEG持续性的棘慢波及尖波发放。注射CL后2小时组大鼠海马GAD67mRNA表达水平有所降低,但HSP70mRNA表达变化不明显,注射CL后8小时组大鼠海马GAD67mRNA表达水平明显低于对照组(P＜0.01),HSP70mRNA表达水平较对照组明显增高(P＜0.01)。结论癫痫状态期间大鼠海马区可能存在神经元损伤与修复过程,而且GABA能神经元受到不同程度的损伤。     

多巴胺D2、D3受体基因多态性与汉族人精神分裂症相关研究

目的探索多巴胺D2受体(Dopamine D2receptor,DRD2)基因第8外显子Taq I A位点多态和多巴胺D3受体(Dopamine D3receptor,DRD3)基因第5内含子Msp I位点多态与汉族人群精神分裂症是否关联及其在不同性别是否存有差异。方法使用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(Polymerase chain reaction-re-striction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)及DNA测序技术,对317例精神分裂症患者及310名对照DRD2Taq I A基因多态性和DRD3Msp I位点基因多态性进行检测。结果患者组与对照组间DRD2 Taq I A位点等位基因分布差异显著(P<0.01)、两两基因型对比(A1/A2与A1/A1相比:P<0.05;A2/A2与A1/A1相比:P<0.01)及两基因型联合对比(A1/A2+A2/A2与A1/A1:P<0.01)组间差异也显著。性别分层研究DRD2Taq I A位点女性组间差异显著(P<0.01),男性组间差异无意义(P>0.05)。DRD3Msp I位点的基因型频率、等位基因分布及性别分层分析等所有数据均显示患者组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。风险因子趋势检验结果DRD2Taq I A位点等位基因A2:P<0.01;DRD3Msp I位点等位基因2:P>0.05。结论所得数据支持DRD2Taq I A位点等位基因A2可能为精神分裂发生的风险因子,特别对女性而言。数据分析不支持DRD3Msp I位点基因与精神分裂发生有关。此结果需更进一步研究证实。     

NR1反义抑制剂对局灶性脑缺血作用的初步研究

目的探讨NR1反义寡核苷酸对局灶性脑缺血的治疗作用。方法于大鼠大脑中动脉闭塞后2小时、24小时分别经侧脑室注射磷酸缓冲液(PBS)、错义寡核苷酸(MSODN)及反义寡核苷酸(ASODN)，然后在不同时间点进行神经功能缺损评分，术后第5天进行Nissl染色、TTC染色及梗死体积比测定。结果各组局灶性脑缺血的神经功能缺损评分无显著性差异；反义寡核苷酸治疗组的梗死体积比显著低于单纯缺血组；反义寡核苷酸治疗组海马各区神经元损伤轻，神经元丢失相对较少。结论局灶性脑缺血后侧脑室注入NR     

垂体腺瘤TGF-β1和CTGF的表达及意义

目的探讨垂体腺瘤转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达及意义。方法收集手术切除且病理学证实的垂体腺瘤标本58例,根据术前MRI检查和术中发现分为纤维化垂体腺瘤(19例)和非纤维化垂体腺瘤(39例)。采用逆转录聚合酶链式反应检测TGF-β1和CTGF m RNA表达水平。结果与非纤维化垂体腺瘤相比,纤维化垂体腺瘤TGF-β1和CTGF m RNA表达水平均显著增高(P<0.05)。结论 TGF-β1和CTGF高表达可能垂体腺瘤纤维化有关。     

神经生长因子对大鼠脑缺血后海马CA1区神经细胞凋亡的影响

Objective　To investigate the protective action of nerve growth factor (NGF) on neuronal apoptosis by ischemic insults.Methods　Global ischemia in Wistar rats was induced using four-vessel occlusion,and NFG group intraventricular adminstration of NGF after ischemia,control group received the same volue of solvent.At the 3 days after ischmia,terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP-biotion nick endlabeling (TUNEL) hippocampal CA₁ sector.Result　The results showed that the number of TUNEL positive cells to the number of whole cells in the CA₁ subified was 21.3±13.7% in NGF group,and 13.9%±11.6% in control group,significant difference between the ratios in two group (P<0.01).Conclusion　It was suggested that intraventricular NGF has a protective effect on neuronal appoptosis by ischemic insults.     

β2 and α2 adrenergic receptors mediate the proneurogenic in vitro effects of norquetiapine

Positive modulation of adult hippocampal neurogenesis may contribute to the therapeutic effects of clinically relevant antidepressant drugs,including atypical antipsychotics.Quetiapine,an antipsychotic which represents a therapeutic option in patients who are resistant to classical antidepressants,promotes adult hippocampal neurogenesis in preclinical studies.Norquetiapine,the key active metabolite of quetiapine in humans,has a distinctive receptor profile than the parent compound.The drug is indeed a high affinity norepinephrine transporter inhibitor and such activity has been proposed to contribute to its antidepressant effect.At present,no information is available on the effects of norquetiapine on adult neurogenesis.We extensively investigated the activity of quetiapine and norquetiapine on adult murine neural stem/progenitor cells and their progeny.Additionally,selective antagonists for β₂/α₂ adrenergic receptors allowed us to evaluate if these receptors could mediate quetiapine and norquetiapine effects.We demonstrated that both drugs elicit in vitro proneurogenic effects but also that norquetiapine had distinctive properties which may depend on its ability to inhibit norepinephrine transporter and involve β₂/α₂ adrenergic receptors.Animal care and experimental procedures were approved by the Institutional Animal Care and Use Committees(IACUC)at University of Piemonte Orientale,Italy(approval No.1033/2015PR)on September 29,2015.     

γ-Adducin减轻Aβ1-42诱导的神经元突起损伤

目的 探讨γ-Adducin蛋白是否可减轻Aβ_1-42纤维诱导的神经元突起损伤。方法 实验一:培养原代神经元,用10 μmol/L Aβ_1-42纤维处理神经元24 h,采用神经元特异性标记物MAP2检测神经元突起损伤,用TUNEL染色检测神经元凋亡; 实验二:分别用对照病毒和表达γ-Adducin的腺相关病毒感染神经元,蛋白表达5 d后再分别加入Aβ_1-42纤维处理,用免疫荧光染色法观察γ-Adducin蛋白过表达对Aβ_1-42纤维引起的神经元突起损伤的影响,用Dil染色检测神经元树突棘密度的变化。结果 Aβ_1-42纤维对神经元的突起具有损伤作用,并且引起神经元凋亡; 过表达γ-Adducin蛋白对Aβ_1-42纤维引起的神经元突起和树突棘损伤均有保护作用。结论 γ-Adducin蛋白可减轻Aβ_1-42纤维导致的神经元突起损伤,它可能是1个新的阿尔茨海默病治疗靶点。     

腺苷A1受体激动剂对缺血损伤的兔脊髓神经元凋亡的影响

目的观察腺苷A1受体激动剂对脊髓缺血性损伤后的神经元凋亡的影响。方法建立兔脊髓缺血模型,给予腺苷A1受体激动剂(CPA),观察兔神经功能恢复,通过病理切片,计算脊髓前角正常神经元,再应用免疫荧光染色检测BCL-2表达水平,western-blot的方法观察caspase3、caspase9、BCL-2、BCL-X1、BAX、BAD表达水平。结果与DMSO组相比,CPA组兔神经功能明显改善。caspase3、caspase9、BCL-2、BCL-X1表达水平显著高于DMSO组,而BAX、BAD表达水平则明显降低。结论腺苷A1受体激动剂可能通过抑制神经元凋亡对脊髓缺血损伤发挥保护作用。     

阿托伐他汀对Aβ1-40诱导AD大鼠的影响

目的观察阿托伐他汀对Aβ1-40诱导AD大鼠模型的保护作用,探讨其可能机制。方法雄性SD大鼠40只,体质量250～300g,随机分为空白对照组、假手术组、Aβ组、Aβ+生理盐水组、Aβ+阿托伐他汀组,每组8只。后3组在大鼠双侧海马CA1区立体定向注射Aβ造AD模型,假手术组注射生理盐水,正常对照组不作任何处理。Aβ+阿托伐他汀组在造模1周前开始给予阿托伐他汀20mg.kg-1.d-1灌胃,Aβ+生理盐水组给予等量生理盐水灌胃。造模4周后,采用Morris水迷宫衡量大鼠学习记忆水平;测定大鼠脑皮质、海马组织AchE、ChAT活性的变化;蛋白印迹技术检测大鼠海马区GFAP的表达。结果与空白对照组相比,Aβ组大鼠的学习记忆能力明显下降(P<0.05);脑皮质、海马组织内AchE活性明显升高(P<0.05),ChAT活性明显降低(P<0.05),GFAP的表达升高(P<0.05),与Aβ组相比,Aβ+阿托伐他汀组大鼠的学习记忆能力明显提高(P<0.05);大脑皮质、海马组织内AchE明显减低(P<0.05),ChAT活性明显升高(P<0.05),GFAP的表达下降(P<0.05)。结论阿托伐他汀Aβ1-40诱导AD大鼠模型的学习记忆能力有明显提高,其作用机制与抑制AchE和GFAP活性、提高ChAT活性有关。     

DJ-1基因g.168185del多态性与新疆维吾尔族、汉族帕金森病的关系

目的探讨DJ-1基因启动子区多态性位点g.168₁85del与新疆维吾尔（维）族、汉族帕金森病（PD）的关系。方法提取364例原发性PD患者（PD组,维族175例,汉族189例）及346名正常对照者（正常对照组）基因组DNA,采用PCR方法扩增DJ-1启动子区基因片段,测序验证g.168₁85del的基因型和等位基因频率。结果 PD组与正常对照组间、PD组中维族亚组与汉族亚组间〗DJ-1基因g.168₁85del基因型及等位基因频率差异无统计学意义。结论 DJ-1基因g.168₁85del多态性可能与维族及汉族PD的遗传易感性无关。     

NIM811对Na2S2O4引起小鼠HT22细胞缺氧/复氧损伤的保护作用的研究

目的探讨环孢菌素衍生物NIM811对连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄)引起的小鼠海马神经元细胞(HT22)的缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法以小鼠HT22培养细胞制备缺氧/复氧细胞模型,实验分组为正常对照组、Na₂S₂O₄组、Na₂S₂O₄+NIM811组、NIM811组。CCK-8检测细胞生存率、流式细胞术检测细胞凋亡、JC-1试剂检测线粒体膜电位、用钙离子指示剂Rhod-2 AM观察线粒体内钙离子水平、DCFH-DA法检测细胞活性氧(ROS)水平。结果与Na₂S₂O₄组比较,给予NIM811处理后:(1)细胞活性增高38%(P<0.01);(2)细胞凋亡减少27%(P<0.01);(3)线粒体膜电位上升(P<0.01);(4)线粒体内钙离子水平下降(P<0.01);(5)活性氧(ROS)水平降低(P<0.01)。结论NIM811对Na₂S₂O₄引起小鼠海马神经元细胞缺氧/复氧损伤有保护作用,其机制可能为NIM811维持线粒体动态平衡和抑制细胞凋亡有关,NIM811对未来临床治疗缺血性脑卒中具有潜力。