人膀胱癌多重抗药性逆转的实验研究

为探讨膀胱癌多重抗药性逆转机理，应用阿霉素（ＡＤＭ）大剂量短暂冲击结合低浓度持续递增法，获得了具有多重抗药性的ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞。通过测定细胞内ＡＤＭ聚积量和钙离子浓度，发现ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞内ＡＤＭ聚积量显著低于ＢＩＵ８７细胞（Ｐ＜００５）；维拉帕米（ＶＰＬ）、奎宁能使ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞内ＡＤＭ聚积量增加（Ｐ＜００５），两者协同应用基本上可逆转ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞的抗药性。结果表明：（１）细胞内ＡＤＭ聚积量减少是抗药细胞的重要变化，在细胞抗药性发生机理中可能起主导作用，（２）ＶＰＬ、奎宁能逆转ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞的抗药性，可能与增加细胞内ＡＤＭ聚积量有关，与钙通道无关。     

人膀胱癌BIU—87细胞系多重抗药性的形成

应用阿霉素，大剂量短暂冲击结合低浓度持续递增法，逐步诱导人膀胱癌移行上皮细胞系ＢＩＵ－８７，在体外持续培养６个月，获得了具有多重抗药性的ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞。该细胞能在浓度为２．０ｇ／Ｌ的ＡＤＭ中持续增殖。通过测定抗癌药物５０％抑制浓度发现，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞对阿霉素的敏感性下降了２１倍同时对表阿霉素，长春新碱，足叶乙甙，也具有显著的交叉抗药性，对顺铂，丝裂霉素，５氟尿嘧啶和氨甲喋呤无抗     

人膀胱癌细胞耐药株多基因蛋白表达的意义

为研究膀胱肿瘤细胞耐药机制，使用药物浓度递增的方法，分别采用阿霉素（ＡＤＭ）或足叶乙甙（ＶＰ１６）建立了人膀胱癌耐药细胞株ＢＩＵ８７／Ａ和ＢＩＵ８７／Ｖ，并进行了耐药倍数分析。ＢＩＵ８７／Ａ对ＡＤＭ、ＶＰ１６的耐药倍数分别为５７４、５９４；ＢＩＵ８７／Ｖ对ＡＤＭ、ＶＰ１６的耐药倍数分别为６５、５４。采用免疫组化的方法分析Ｐ５３、ｂｃｌ２蛋白和Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）在细胞中的表达，结果显示ＢＩＵ８７三种蛋白均阴性，而ＢＩＵ８７／Ａ、ＢＩＵ８７／Ｖ的三种蛋白均阳性，且ＢＩＵ８７／Ａ的表达量均多于ＢＩＵ８７／Ｖ。结果说明突变型Ｐ５３蛋白、ｂｃｌ２蛋白和Ｐｇｐ表达在细胞耐药机制中可能起重要作用     

抗P-糖蛋白单克隆抗体JSB-1和环孢素A协同逆转人膀胱癌MDR的研究

为了证实抗Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）单克隆抗体协同环孢素Ａ（ＣｓＡ）逆转人膀胱癌耐药细胞亚株的抗药性以及建立能有效地克服ＭＤＲ的治疗方案，对人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ８７细胞系和ＢＩＵ８７／ＡＤＭ耐药细胞亚株经柔红霉素（ＤＮＲ）与抗Ｐｇｐ单克隆抗体ＪＳＢ１和单独或联合ＣｓＡ；ＪＳＢ１和单独或联合异搏定（Ｖｅｒ）处理后，采用ＭＴＴ法评价细胞毒作用，荧光分光光度计检测细胞内ＤＮＲ的聚集量。结果：ＪＳＢ１和ＣｓＡ能协同增加ＤＮＲ对ＢＩＵ８７／ＡＤＭ的抗肿瘤作用，但ＪＳＢ１和Ｖｅｒ联合应用却不存在这种协同效应。结果显示：ＪＳＢ１和ＣｓＡ联合应用能增加细胞毒剂对具有Ｐｇｐ表达的ＭＤＲ肿瘤的抗肿瘤效应，是适合于临床应用的多药抗性逆转方案。     

抗P—糖蛋白单克隆抗体JSB—1和环孢素A协同逆转人膀胱癌MD…

为了证实抗Ｐ－糖蛋白单克隆抗体协同环孢素Ａ逆转入膀胱癌耐药细胞亚株的抗药性以及建立能有效地克服ＭＤＰ的治疗方案对人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ－８７细胞系和ＢＩＵ－８７．ＡＤＭ耐药 株经柔红霉素与抗Ｐ－ｇｏ单克 抗 ＪＳＧＢ－１和单独或联合ＣｓＡ；ＪＳＢ－１和单独或联合异搏定自理后，采用Ｍ ＴＴ法评价细胞毒作用荧光光光度计检测细胞民内ＤＮＲ的聚集量。结果ＪＳＢ－１和ＣｓＡ能协同增加ＤＮＲＢＩＵ－８７／ＡＤ     

免疫细胞化学技术检测P－糖蛋白在人膀胱癌MDR细胞亚株中的表达

为探讨肿瘤细胞耐药性，以人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７为亲本，以递增阿霉素剂量的方法，历时８个月，成功地诱导建立了一株耐药细胞亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ。通过生物学鉴定发现此细胞对阿霉素的相对时受度较亲本细胞提高了６．３倍，对阿霉素类似物柔红霉素、表阿霉素及天然生物碱类抗癌药长春新碱、鬼臼乙叉甙有明显的交叉耐药性，对顺铂、丝裂霉素则无交叉耐药性。为进一步阐明其耐药机理，应用链霉亲和素－生物素免疫细胞化学技术对其耐药性进行研究发现，约７５％的ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞Ｐ－ｇｐ过表达，而亲本细胞均为阴性。由此结果表明，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ耐药性的产生主要是由于Ｐ－ｇｐ膜泵功能增强介导产生细胞内药物外溢增多所致，是其产生耐药性的主要原因，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ的建立为进一步针对Ｐ－ｇｐ药泵功能逆转其抗药性的研究奠定了实验基础。     

膀胱癌化疗药物敏感性的实验研究

以膀胱癌细胞株（ＢＩＵ－８７）为靶细胞，采用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法进行了膀胱癌腔内化疗药物敏感试验及条件选择的实验研究。结果发现丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）、噻替哌（ＴＨＴ）、顺铂（ＤＤＰ）对ＢＩＵ－８７细胞杀伤作用较明显，但在１ｍｇ／ｍｌ、２ｈ作用条件下均未达到５０％抑制率、需增加药物浓度和延长作用时间。认为ＭＭＴ、ＴＨＴ、ＤＤＰ对ＢＩＵ－８７细胞的毒性作用与药物浓度和作用时间有关；为达到最大疗效，药物     

肿瘤坏死因子α对膀胱肿瘤细胞作用的影响因素探讨

目的 探讨肿瘤坏死因子抗膀胱癌细胞作用的影响因素。方法 将肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）和不同浓度的丝裂霉素（ＭＣ），顺铂（ＣＤＤＰ）以及干扰素α（ＩＦＮ－α）作用于体外培养的膀胱癌细胞系ＢＩＵ－８７，用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定细胞毒效果。结果 ＴＮＦ－α对ＢＩＵ－８７细胞有明显的浓度依赖性抑制作用，ＭＣ（２．５～５．０ｍｇ／Ｌ）或ＩＦＮ－α（２５００Ｕ－５０００Ｕ／ｍｌ）与ＴＮＦ－α（１００００Ｕ／     

人膀胱癌阿霉素耐药株BIU－87／ADM的建立及其耐药机理的研究

以人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７为亲本，经递增阿霉素（ＡＤＭ）剂量的方法，历时８个月，建立了一株耐药亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ．此细胞株对ＡＤＭ的耐受程度较亲本细胞提高了６．３倍，对柔红霉素（ＤＮＲ）、表阿霉素、长春新碱和鬼臼乙叉甙有明显的交叉耐药性，但对顺铂、丝裂霉素无交叉耐药性。与亲本细胞相比，耐药亚株生长慢，倍增期延长，汇合密度低，异形性明显，有巨细胞形成。进一步研究表明，耐药亚株对ＤＮＲ蓄积减少；免疫化学显示，７５％的耐药细胞Ｐ－ｇｐ过表达。因而耐药细胞内ＤＮＲ低聚集主要是Ｐ－ｇｐ膜泵功能增强介导产生细胞内药物外溢增多所致，是其产生耐药性的主要原因。但并非所有ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ均表达Ｐ－ｇｐ，其他耐药机理的共存是有可能的。ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ及其亲本细胞为寻求逆转人膀胱癌耐药的新型化疗增敏剂或综合化疗方案提供了良好的实验模型。     

逆转录病毒载体介导HSV—TK基因在膀胱癌细胞的表达和作用

应用基因工程技术构建了带ＨＳＶＴＫ基因的逆转录病毒重组体ｐＬＮＳＸＴＫ，磷酸钙沉淀法转染ＰＡ３１７细胞，建立了重组病毒的载体产生细胞系ＰＡ３１７／ＴＫ细胞。用病毒上清感染人的膀胱癌细胞株ＢＩＵ８７，Ｇ４１８筛选抗性克隆ＢＩＵ８７／ＴＫ细胞。提取ＰＡ３１７／ＴＫ和ＢＩＵ８７／ＴＫ细胞的ＤＮＡ，用ＤＩＧ标记检测证实整合了ＨＳＶＴＫ基因，在病毒上清用ＲＴＰＣＲ检测到目的基因的转录。转导ＨＳＶＴＫ基因的膀胱癌细胞获得对ＡＣＶ的化学敏感性，给予ＡＣＶ可有效地杀伤肿瘤细胞。     

α-干扰素对膀胱癌细胞多药耐药性逆转的研究

目的研究α干扰素（αＩＦＮ）对膀胱癌多药耐药性的逆转作用。方法应用ＭＴＴ法检测阿霉素（ＡＤＭ）的细胞杀伤作用。荧光法检测细胞内阿霉素浓度和斑点杂交法检测ｍｄｒ１ｍＲＮＡ相对含量。结果５００ＩＵ／ｍｌαＩＦＮ能明显增强阿霉素对耐药细胞ＢＩＵ８７／ＡＤＭ的杀伤作用,但不能增强阿霉素对敏感细胞ＢＩＵ８７的杀伤作用;αＩＦＮ能增加阿霉素在ＢＩＵ８７／ＡＤＭ细胞内的积聚,但不改变ｍｄｒ１ｍＲＮＡ在细胞内表达量。结论αＩＦＮ对膀胱癌细胞多药耐药性具有逆转作用,其机制与αＩＦＮ增加细胞内抗癌药物浓度有关,与增加ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达量无关。     

垂直法,B超引导经皮肾活检成功率比较

垂直法、Ｂ超引导经皮肾活检成功率比较丁尧海，梁俊林，张囊萍，刘文渊，汤俊达ＡＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥＳＴＵＤＹＯＦＶＥＲＴＩＣＡＬＡＮＤＵＬＴＲＡＳＯＮｌｃＲＥＡＬ－ＴＩＭＥＧＵＩＤＡＮＣＥＲＥＮＡＬＢＩＯＰＳＩＥＳＤｉｎｇＹａｏｈａｉ；ＬｔａｎｇＪｉ...     

多药耐药基因在泌尿系统肿瘤细胞系中的表达

目的检测泌尿系统肿瘤多药耐药基因及其产物的表达。方法对肾颗粒细胞癌细胞系ＧＲＣ１，肾透明细胞癌细胞系ＲＣＣ９４９，膀胱移行细胞癌细胞系ＢＩＵ８７、Ｔ２４、ＥＪ，前列腺癌细胞系ＰＣ３ｍ和对照的白血病细胞系ＨＬ６０进行免疫细胞化学和逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测。结果只有ＧＲＣ１同时表达Ｐ糖蛋白（ＰＧＰ）和ＭＤＲ１基因ｍＲＮＡ，其他肿瘤细胞系均无表达。结论泌尿系肿瘤细胞系多数无ＰＧＰ也没有ＭＤＲ１基因ｍＲＮＡ水平的表达，只有ＧＲＣ１例外     

人膀胱癌阿霉素耐药株BIU—87／ADM的建立及其耐药机理的研究

以人膀胱癌细胞抗株ＢＩＵ－８７主亲本，经递增阿霉素（ＡＤＭ）剂量的方法，历时８个月，建立了一株耐药亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ。此细胞株对ＡＤＭ的耐受程度较产本细胞提高了６．３倍，对柔红霉素（ＤＮＲ），表阿霉素，长春新碱和鬼臼乙叉甙有明显的叉耐药性，但对顺铂，丝裂霉素无交叉耐药性，与亲本细胞相比耐药亚株生长慢，倍增期延长，汇合密度低，异形性明显，有巨细胞形成。进一步研究表明，耐药亚株对ＤＩＲ蓄积减少，     

抗膀胱癌单克隆抗体导向的粘附性LAK细胞体外抗膀胱癌作用的研究

为了进一步探索治疗膀胱癌的新途径，用人体脾脏组织制备粘附性淋巴因子激活的杀伤细胞（Ａ－ＬＡＫ细胞），通过生物素－亲和素系统将抗人膀胱癌单克隆抗体（ＢＤＩ－１）与Ａ－ＬＡＫ细胞偶联构建出ＢＤＩ－１－Ａ－ＬＡＫ细胞偶联物。采用４小时５１Ｃｒ释放法测定ＢＤＩ－１－Ａ－ＬＡＫ细胞偶联物体外对人膀胱癌ＢＩＵ－８７细胞的杀伤率，结果显示，扩增５天从每克人脾脏组织可制备得５．５×１０８个Ａ－ＬＡＫ细胞，ＢＤＩ－１－Ａ－ＬＡＫ细胞偶联物对ＢＩＵ－８７细胞具有较强的特异性杀伤作用。提示ＢＤＩ－１－Ａ－ＬＡＫ细胞偶联物可望用于膀胱癌导向治疗     

大剂量安定与硫喷妥钠—安定诱导对心瓣膜手术病人血流动力…

对４３例ＣＰＢ下心瓣膜直视手术病人进行了血流动力学监测，其中采用大剂量安定诱导（Ｉ组）２２例，硫喷妥钠－安定诱导（Ⅱ组）２１例，诱导后，两组ＣＩ，ＭＰＡＰ，ＰＴＲＩ，ＬＶＷＩ及ＲＶＷＩ均降低，Ｉ组尚伴ＨＲ，ＭＡＰ，ＰＣＷＰ和ＰＶＲＩ下降，Ⅱ组ＲＡＰ及ＳＶＲＩ增加，气管插管后，两组ＲＡＰ，ＰＩＲＩ及ＳＶＲＩ显著增高Ｉ组ＭＡＰ，ＭＰＡＰ，ＰＣＷＰ增高，Ⅱ组ＣＩ下降，锯胸骨后，Ⅱ组ＣＩ，ＬＶＷＩ及ＲＶＷ     

反义N－rasl DNA片段对人膀胱癌BIU－87细胞系作用的研究

将载有反义人Ｎ－ｒａｓｌ（ｅｘｏｎｌ）ＤＮＡ片段的重组表达质粒ｆＰＧＶ１－ＭＴ－Ｎｒａｓｌ（Ａ）导入人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ－８７细胞系，可以导致ＢＩＵ－８７细胞恶性行为的部分改变，表现在生长速度减慢２１．７％～６５．６％，３Ｈ－ＴｄＲ掺入降低４５．８％，软琼脂克隆形成能力下降４８．３％，同时，Ｎ－ｒａｓ－ｍＲＮＡ及Ｐ２１ｒａｓ表达减少。     

反义N—rasl DNA片段对人膀胱癌BIU—87细胞系作用的研究

将载有反义人Ｎ－ｒａｓｌ（ｅｘｏｎｌ）ＤＮＡ片段的重组表达质粒ｆＰＧＶ１－ＭＴ－Ｎｒａｓｌ（Ａ）导入人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ－８７细胞系，可以导致ＢＩＵ－８７细胞恶性行为的部分改变，表现在生长速度减慢２１．７％～６５．６％，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入降低４５．８％，软琼脂克隆形成能力下降４８．３％，同时，Ｎ－ｒａｓ－ｍＲＮＡ３及Ｐ２１ｒａｓ表达减少。     

血透前后甲状腺素、胰岛素、钙调蛋白对红细胞膜钙泵的影响

血透前后甲状腺素、胰岛素、钙调蛋白对红细胞膜钙泵的影响林新伟，刘钟明ＴＨＥＥＦＦＥＣＴＳＯＦＴＨＹＲＯＸＩＮＥ，ＣＡＭ－ＯＤＵＬＩＮ．ＡＮＤＩＮＳＵＬＩＮＯＮＣａ（２＋）ＡＴＰａｓｅＡＣＴＩＶＩＴＹＯＦＲＥＤＢＬＯＯＤＣＥＬＬＭＥＭ－ＢＲＡＮＥＤＵＲ...     

氧化低密度脂蛋白刺激人肾小球系膜细胞产生单核细胞趋化蛋白-1由核因子-κB活化调控

目的 研究核因子ＫＢ（ＮＦ－ＫＢ）在氧化低密度脂蛋白（Ｏｘ- ＬＤＬ）诱导的体外培养的人肾小球系膜细胞表达单核／巨噬细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）中的作用。方法 采用凝胶迁移率变动分析检测ＮＦ－ＫＢ的ＤＮＡ结合活性变化，以免疫组织化学观测细胞内ｐ６５的核转位，用细胞ＥＬＩＳＡ法检测细胞内 ＭＣＰ－１及ＩＫＢα蛋白含量变化。结果 不同浓度（１０、２５、５０、１００μｇ／ｍｌ）Ｏｘ－ＬＤＬ刺激肾小球系膜细胞均可引起细胞ＮＦ-ＫＢ的ＤＮＡ结合活性增强、ＩＫＢα蛋白表达下降以及ＭＣＰ－１蛋白表达增强，以５０μｇ／ｍｌ刺激１ｈ ＮＦ－ＫＢ活化及ＩＫＢα表达减弱最明显，作用２４ｈＭＣＰ-１表达水平最高。ＮＦ－ＫＢ俯活化的同时伴有ｐ６５核转位。上述效应可被ＮＦ－ＫＢ特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯（ＰＤＴＣ）所抑制。结论Ｏｘ－ＬＤＬ刺激人肾小球系膜细胞产生ＭＣＰ－１是由ＮＦ－ＫＢ调控，ＮＦ－ＫＢ参与了脂质肾损害的发病过程。