PCR技术在弓形虫检测上的应用

弓形虫是重要的人兽共患寄生虫,该虫能寄生于包括人在内的100多种脊椎类动物的有核细胞内,引起疾病和死亡。在人类,它的危害包括孕妇感染弓形虫后胚胎的先天性危害和后天性危害,可能造成胚胎的死亡、畸形和流产。免疫力正常的成年人感染弓形虫后,虫体多处于隐性状态,少数人可引     

弓形虫巢式PCR体系的建立及其对人,鼠弓形虫病的检测

本文根据弓形虫主要表面抗原基因的序列，自行设计合成了两对寡聚脱氧核糖核苷酸片段，构建了弓形虫特异的ＰＣＲ检测体系。经对弓形虫ＤＮＡ及人、鼠弓形虫病的初步检测，证明本ＰＣＲ体系具有敏感性高、特异性强、适用面广等特点。     

原位PCR对弓形虫感染鼠病理检测效果的观察

观察原位PCR方法在弓形虫感染病原学检测中的效果。以RH株弓形虫速殖子感染小鼠后第 2、 4、 6天处死 ,取肝脏制备石蜡标本及冰冻切片标本 ,以直接法原位PCR扩增并检测石蜡标本中的弓形虫DNA ,与免疫组化方法检测冷冻切片标本的结果相比较。 18例直接原位PCR法检测标本中均得到阳性信号 ,病原体检出率为 10 0 % ,优于免疫组化法 (11/18)。直接法原位PCR为检测病理标本中的弓形虫DNA提供了一种新的可行方法。     

PCR技术诊断弓形虫病的研究进展

应用PCR技术对弓形虫病进行定性和定量研究是近年来弓形虫病诊断的一个重要研究领域。本文就PCR技术在弓形虫病诊断中所用的引物、PCR类型以及在各种类型弓形虫病的应用研究作一概述。     

弓形虫巢式PCR体系的建立及其对人、鼠弓形虫病的检测

本文根据弓形虫主要表面抗原基因的序列，自行设计合成了两对寡聚脱氧核糖核苷酸片段，构建了弓形虫特异的ＰＣＲ检测体系。经对弓形虫ＤＮＡ及人、鼠弓形虫病的初步检测，证明本ＰＣＲ体系具有敏感性高、特异性强、适用面广等特点。     

11254例生殖道沙眼衣原体感染荧光PCR检测结果分析

目的对宝安区人民医院门诊病人生殖道沙眼衣原体感染,经荧光聚合酶链式反应（PCR）检测结果进行分析,探讨其感染现状及临床检测意义。方法采用荧光PCR方法检测11254例患者的沙眼衣原体（CT）的脱氧核糖核酸（DNA）．结果11254例患者标本中共检出832例阳性,总阳性率为7．39％;其中男性检测3612例,阳性数426例,女性7640例,阳性数406例,阳性率分别为11．79％,5．31％;男性女性发病比率差异有统计学意义（x^2=150．167,P〈0．001）。沙眼衣原体阳性患者高发年龄为20～39岁,占84．86％;支原体的合并感染率为14．18％。结论临床医生应注意临床病人多重感染的情况,应对全社会进行积极的健康的性教育与宣传,普及检测手段。     

弓形虫B1基因套式PCR检测技术研究

本文以弓形虫多拷贝的Ｂ１基因为靶基因建立了套式ＰＣＲ检测技术。弓形虫ＲＨ株、新疆、上海、昆山分离株ＤＮＡ均能出现清晰条带,而人组织及其它微生物ＤＮＡ不出现任何条带,弓形虫套式ＰＣＲ较普遍ＰＣＲ敏感１００倍。昆山分离株经套式ＰＣＲ扩增并进行ＤＮＡ测序与ＲＨ株完全一致。８０例孕妇外周血经弓形虫套式ＰＣＲ扩增４例阳性,阳性率５％。     

PCR在弓形虫及弓形虫病研究中的应用

本文综述了PCR在检测弓形虫DNA、诊断弓形虫病以及在基因克隆与表达等方面的研究中的应用。     

敏感性PCR检测猪肉弓形虫方法的建立与应用

目的建立一种敏感快速的猪肉弓形虫PCR检测方法,并用来检测市售猪肉弓形虫的感染情况。方法采用不同数量的弓形虫模拟感染猪肉样本,分别以529 bp重复序列、B1基因、SAG1、SAG2、SAG3作为目标检测基因,对其敏感性进行评价,在此基础上运用敏感的靶标检测100份市售猪肉样本中弓形虫的感染情况。结果 529 bp重复序列的敏感性最高,用此靶标检测合肥市售猪肉,弓形虫阳性率为17%。结论 529 bp重复序列基因是一个可用于肉制品中弓形虫PCR检测的理想靶标。     

聚合酶链反应掺入法制备标记探针检测弓形虫感染的研究

本文采用聚合酶链反应（PCR）技术，以Dig一i1—dUTP代替部分dTTP直接制备标记弓形虫特异性rDNA基因片段作为探针，用于检测弓形虫感染。该探针和弓形虫核酸抽提物杂交阳性，而与恶性疟原虫、间日疟原虫、杜氏利什曼原虫以及正常人血样核酸抽提物杂交阴性，该探针至少可检测出相当于156虫数的水平，结果表明：PCR掺入法是一种简便、有效的制备标记探针的方法，以该法制备的弓形虫rDNA基因探针适用于弓形虫感染的诊断及流行病学调查研究。     

恶性肿瘤并发弓形虫感染的研究

本文采用间接血凝试验(IHA)方法,对75例恶性肿瘤患者,62例普通病人及正常人对照组75例,进行血清弓形虫抗体的检测,以效价≥1:64为阳性。结果表明,恶性肿瘤组感染率为33.3%,普通病人组感染率为11%(P<0.01),正常对照组感染率为5%以下(P<0.001)。以恶性葡萄胎患者感染率最高,达83%;其次为白血病及消化道肿瘤,分别为40%,39%,以上三种肿瘤患者的抗体滴度几何均数(GMT)分别为48.51,63.59和38.1。7例乳腺癌和11例肺癌患者抗体均为阴性。     

脑脊液中弓形虫循环抗原的组分分析

本文在国内首先应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＢ对弓形虫循环抗原（ＣＡｇ）阳性脑脊液标本进行抗原组分分析，并用正常人脑脊液、ＲＨ株弓形虫速殖子的代谢抗原（ＭＡ）及细胞质抗原（ＣＡ）作为平行对照。结果显示，脑脊液及ＲＨ株ＭＡ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白区带范围均在１４～１０８ｋＤ处，在３８～６７ｋＤ处有明显的电泳区带。ＥＬＩＢ反应后均在５０ｋＤ处出现明显的反应区带。从而证实，脑脊液标本中的ＣＡｇ为弓形虫虫体在宿主体内增殖的代谢及裂解产物。同时提示，酶联免疫印迹技术（ＥＬＩＢ）可代替弓形虫的病原学检查，以作为弓形虫病急性、活动性感染的确诊指标。     

南昌地区人群弓形虫血清流行病学研究

目的调查南昌地区人群弓形虫感染的现状和动态,为制定科学防治对策提供依据。方法采用问卷方式调查居民的性别、年龄、文化程度、职业及卫生习惯等;采用ELISA方法检测人群血清弓形虫IgG抗体。结果南昌地区人群弓形虫IgG抗体阳性率为8.01%,比1990年上升了37.39%。城乡结合部人群IgG抗体阳性率高于城区和农村地区人群,猫犬等动物密切接触者、临床免疫功能低下者和不良饮食卫生习惯者阳性率高于其他人群。结论南昌市居民弓形虫感染率呈上升趋势,喂养宠物及不良饮食习惯是弓形虫感染的重要因素。应采取健康教育、早期检查及治疗等综合性预防控制措施,并加强对重点人群的监测。     

南昌地区人群弓形虫血清流行病学研究

目的凋查南昌地区人群弓形虫感染的现状和动态，为制定科学防治对策提供依据。方法采用问卷方式调查居民的性别、年龄、文化程度、职业及卫生习惯等；采用ELISA方法检测人群血清弓形虫IgG抗体。结果南昌地区人群弓形虫IgG抗体阳性率为8．01％。比1990年上升了37．39％。城乡结合部人群IgG抗体阳性率高于城区和农村地区人群，猫犬等动物密切接触者、临床免疫功能低下者和不良饮食卫生习惯者阳性率高于其他人群。结论南昌市居民弓形虫感染率呈上升趋势，喂养宠物及不良饮食习惯是弓形虫感染的重要因素。应采取健康教育、早期检查及治疗等综合性预防控制措施，并加强对重点人群的监测。     

宫内感染弓形虫影响儿童生长发育的观察

目的了解宫内感染弓形虫对儿童身体、智力发育的影响.方法采用配对方法,选择1990～1996年保定市级医院经脐血弓形虫检测阳性的167例婴儿为出生阳性组,同时脐血弓形虫检测阴性的160例婴儿为出生阴性组.用比内、韦氏智力量表测定其智商值(IQ值);采用全国9市城区和郊区健康儿童体格发育测量数字为标准,均数加减2个标准差为正常,分析弓形虫感染与儿童智力、身体发育的关系.观察干预措施效果.结果宫内感染弓形虫儿童智力发育明显偏低,视力发育差,而对身高、体重无明显影响,给予合理的干预措施,能使智力得到改善提高.结论宫内感染弓形虫婴儿出生后,应进行系统抗弓形虫治疗,以减轻其对脑部、眼部的损害,给予合理的干预措施,提高儿童智力水平,促进其健康发育成长.     

L-精氨酸和L-瓜氨酸在体外活化巨噬细胞抗弓形虫感染中的作用

目的：探讨增加细胞外Ｌ－精氨酸（一氧化氮生物合成的底物）或Ｌ－瓜氨酸（通过再循环生成Ｌ－精氨酸）浓度是否可提高活化巨噬细胞（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，Ｍ）诱生一氧化氮（ＮＯ）的产量及其对细胞内抑制或杀伤弓形虫速殖子的能力。方法：用ＲＨ株刚地弓形虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉ）速殖子感染活化Ｍ后，观察活化Ｍ在含不同浓度Ｌ－精氨酸和Ｌ－瓜氨酸培养基中培养１８ｈ后的ＮＯ产量、感染率以及纳虫泡内弓形虫速殖子数。结果：（１）活化Ｍ在生理水平的Ｌ－精氨酸浓度（８０μｍｏｌ／Ｌ）下可明显抑制细胞内弓形虫速殖子的增殖，并依赖于ＮＯ的产量；（２）增加细胞外源的Ｌ－精氨酸或Ｌ－瓜氨酸可明显提高Ｍ诱生的ＮＯ产量，进而降低Ｍ的感染率，并抑制细胞内弓形虫速殖子的增殖；（３）Ｌ－瓜氨酸可完全替代Ｌ－精氨酸提高Ｍ诱生的ＮＯ产量及其抑制或杀伤弓形虫速殖子的能力。结论：活化Ｍ胞浆内生理水平的Ｌ－精氨酸诱生的内源性ＮＯ产量足以抑制细胞内弓形虫速殖子的繁殖，但不能防止细胞感染，增加细胞外生物合成ＮＯ的底物浓度可提高Ｍ抑制或杀伤细胞内弓形虫速殖子的能力。     

白血病患者对弓形虫的易感性及其临床意义

目的探讨白血病患者对弓形虫的易感性及并发弓形虫感染后,经抗弓形虫治疗的临床意义. 方法应用PCR/DNA探针检测技术,对白血病患者及对照组人群进行弓形虫病原DNA检测.结果白血病患者中弓形虫DNA检测阳性率为15.8%,而同期住院的非白血病病人的阳性率为3.3%,差异非常显著.在白血病病例组中,以复发难治性患者的阳性率最高,显著高于其它组.白血病病人弓形虫检测组,在对原发病系统化疗的基础上,另加用抗弓形虫药物,治疗组的缓解率均比未治疗组为高,尤其是对弓形虫阳性的慢性白血病病例和复发难治病例,可进一步提高其缓解率.结论白血病病人对弓形虫易感,在白血病病例组中,以复发难治性患者的阳性率最高,并发弓形虫感染的病人另加用抗弓形虫药物治疗后,可提高其缓解率.