食管癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化检测及其临床意义

目的探讨Ras相关结构域家族基因1A（RASSF1A）启动子区异常甲基化与食管癌发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法,检测66例食管癌组织及相应的癌旁正常组织RASSF1A基因启动子区异常甲基化。分析食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化与临床病理特征的关系。结果在食管癌组织、癌旁正常组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率分别为48．5％（32／66）、6．1％（4／66）。淋巴结转移者食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率（61．1％）明显高于无淋巴结转移者（33．3％）（χ^2=5．055,P=0．025）;晚期（Ⅲ～Ⅳ期）食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率（69．2％）明显高于早期（Ⅰ～Ⅱ期）（35．0％）（χ^2=7．392,P=0．007）;食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化与肿瘤分化程度无相关性（P〉0．05）。结论食管癌组织中存在RASSF1A基因启动子区的异常甲基化,甲基化与食管癌病理分期和淋巴结转移有关。     

食管癌组织RASSF1A的表达及其与基因启动子甲基化的关系

目的探讨RASSF1A表达及其基因启动子甲基化在食管癌发生中的作用。方法取40例食管癌患者肿瘤组织及癌旁组织,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测RASSF1A的mRNA表达,用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测RASSF1A基因启动子的甲基化。结果 RASSF1A mRNA在食管癌组织、癌旁组织表达缺失率分别为77.5%（31/40）、2.5%（1/40）,差异有统计学意义（P〈0.05）。癌旁组织均未发现甲基化,而癌组织中甲基化率为67.5%（27/40）。所有甲基化的食管癌组织RASSF1A mRNA表达缺失。结论食管癌的发生与RASSF1A基因表达缺失有关联,而RASSF1A基因启动子区甲基化是RASSF1A基因表达缺失的原因。     

RASSF1A基因在子宫颈癌组织中的表达及其与人乳头瘤病毒-16感染的关系

目的 探讨RASSF1A mRNA在子宫颈癌组织中的表达与子宫颈癌发生、发展的作用及其与HPV-16感染的关系。方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测56例子宫颈癌组织、36例子宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织和20例子宫颈正常组织中RASSF1A mRNA的表达;同时采用聚合酶链反应（PCR）检测子宫颈癌组织中HPV-16感染情况。结果 正常宫颈、CIN和子宫颈癌组织中的RASSF1A mRNA的表达缺失率分别为0％（0／20）、22．2％（8／36）和50．0％（28／56）。晚期（Ⅲ～Ⅳ期）宫颈癌组织中RASSF1A mRNA的表达缺失率（82．4％）明显高于其在早期（Ⅰ-Ⅱ期）宫颈癌组织中的表达缺失率（35．9％）。子宫颈鳞癌组织中RASSF1A mRNA的表达缺失率（63．3％）明显高于其在子宫颈腺癌中的表达缺失率（34．6％）（P〈0．05）。子宫颈癌组织低分化组的RASSF1A mRNA的表达缺失率（70．8％）明显高于其在中、高分化组（37．5％）中的表达缺失率。子宫颈癌组织中RASSF1A mRNA的表达缺失与HPV-16感染呈负相关（P〈0．05）,且这种关系在子宫颈腺癌中表现的更加明显。结论 RASSF1A基因的表达缺失可能在子宫颈癌的发生、发展过程起着重要的作用。     

食管癌组织中S期激酶相关蛋白2mRNA的表达意义

目的：探讨S期激酶相关蛋白2mRNA在食管癌及其癌旁组织中的表达及其与食管癌临床病理特征的关系．方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测S期激酶相关蛋白2mRNA在45例手术切除的食管癌组织及癌旁组织中的表达．结果：S期激酶相关蛋白2mRNA表达率在食管癌中为66．6％（30／45）,而癌旁组织中为24．4％（11／45）,差异有显著性（P〈0．05）．S期激酶相关蛋白2mRNA阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小、及有无淋巴结转移无关,与肿瘤分化程度及TNM分期有关（P〈0．05）．结论：S期激酶相关蛋白2的高水平表达促进了食管癌的发生发展．并将可能为食管癌的早期诊断和治疗提供新的手段．     

原位杂交法检测基质金属蛋白酶-9mRNA在食管鳞癌组织中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在食管鳞状细胞癌中mRNA的表达。方法采用原位杂交的方法检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中mRNA的表达。结果食管鳞癌组织及癌旁不典型增生组织中MMP-9mRNA表达均高于正常黏膜组织,表达量分别为71．0％、54．8％、48．4％,组间比较差异有统计学意义（采用χ^2检验,χ^2=6．876,P〈0．05）;食管鳞癌组织中基序逆向诱导半胱氨酸丰富蛋白（RECK）基因蛋白表达与癌组织的分化程度、不同浸润深度及有无淋巴结转移密切相关（采用χ^2检验,χ^2分别为7．458,11．737,3．916,P均〈0．05）。结论MMP-9的高表达可能与食管癌的发生有关,且RECK的低表达可能是癌变早期的分子事件。     

食管癌组织中基质金属蛋白酶—2mRNA的表达

目的：探讨食管癌组织中基质蛋白酶－2（MMP-2)mRNA的表达。方法：用反转录PCR（RT－PCR）法检测41例食管癌患者的癌组织、癌旁组织MMP－2mRNA的表达。结果：食管癌患者的癌组织MMP-2 mRNA的表达率（25／41）与癌旁组织的表达率（15／41）比较差异有显著性（P＜0．05）。有淋巴结转移的食管癌患者癌组织MMP－2mRNA的表达率（15／19）与无淋巴结转移者的表达率（10／22）比较差异有显著性（P＜0．05）。侵及浆膜层者的表达率（13／18）高于未侵及浆膜层者（12／23），但差异无显著性。结论：MMP－2在食管癌的侵袭和转移中起到十分重要的作用。     

MMP10、FHIT基因在食管癌中的表达及临床意义

目的：探讨基质金属蛋白酶10（MMP10）、脆性组氨酸三联体（FHIT）基因在食管癌中的异常表达及二者对其发生、发展的作用。方珐：应用免疫组化法对54例食管癌组织及癌旁正常组织MMP10、FHIT基因的表达水平进行检测,并研究与病史及临床病理指标的关系。结果：MMP10在食管癌组织阳性表达率为35．19％（19／54）,而食管癌旁正常组织为阴性表达。FHIT基因在食管癌组织中缺失率为72．22％（39／54）,明显高于食管癌旁正常组织中缺失率12．96％（7／54）,二者差异有统计学意义（P〈0．01）。MMP10在食管癌中的表达与食管癌组织分化程度呈负相关（r=-0．697）,与P—TNM分期呈正相关（r=0．85）．淋巴结转移组明显高表达（P〉0．05）。FHIT基因缺失与食管癌患者的性别、病史长短、吸烟、饮酒、P-TNM分期及淋巴结转移无明显关系（P〉0．05）。而与食管癌组织分化程度有关（P〈0．05）。结论：MMP10在食管癌组织中有较高的阳性表达率,而FHIT基因存在较高的缺失率,且二者与食管癌临床病理指标有关．提示MMP10、FHIT基因在食管癌的发生、发展中起重要作用。     

胃癌组织中P53及P21蛋白的表达及意义

目的：探讨P53和P21蛋白异常表达在胃癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组化技术检测38例胃癌及相应癌旁组织中P53和P21蛋白的表达。结果：胃癌组织P53蛋白表达率84．21％（32／38）,癌旁组织P53蛋白表达均为阴性。胃癌组织P53蛋白表达率明显高于癌旁组织,差别具有显著性（χ^2=55．27,P〈0．05）。胃癌组织P21蛋白阳性表达率52．63％（20／38）,癌旁组织P21蛋白阳性表达率89．73％（34／38）,胃癌组织P21蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织,差别有显著性（χ^2=12．546,P〈0．05）。胃癌组织中P21与P53蛋白共同阳性表达率为47．36％,但两者无相关性（P〉0．05）。结论：P53和P21蛋白表达异常与胃癌发生有着密切关系。     

RASSF1A基因在膀胱癌中的表达及意义

目的：研究RASSF1A基因在膀胱移行细胞癌（BTCC）中的表达，探讨RASSF1A在BTCC发生、发展中的作用。方法：采用鼠抗人RASSF1A单克隆抗体及免疫组化检测8例正常膀胱组织及37例膀胱移行细胞癌组织中的RASSF1A蛋白表达。结果：RASSF1A蛋白的表达率在正常膀胱组织中为100％（8／8），在膀胱癌组织中为24．3％（9／37）。两组间表达率差异具有统计学意义（P〈0．05）。其中在表浅型（Ta—T1）组表达率为25％（4／16），浸润型（T2-T4）组表达率为23．8％（5／21），二组中表达率差异无统计学意义（P〉0．05）。其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级表达率分别为27．3％（3／11）、22．22％（4／18）、25．0％（2／8）。该三组之间表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：RASSF1A基因的失表达或低表达，可能与膀胱移行细胞癌的发生有关，而与其临床分期、病理分级无关。该基因有望作为早期诊断膀胱肿瘤发生的肿瘤学标记物。     

应用RT-PCR分析食管癌组织中lrig1基因的表达

目的：观察lrigl基因在食管鳞癌中的表达及意义．方法：采用RT．PCR检测36例食管鳞状细胞癌癌组织、相应的癌旁组织和远癌组织中lriglmRNA的表达情况．PCR产物经凝胶电泳，比较3种组织中ragl与GAPDH条带的灰度值之比，半定量分析IriglmRNA的表达水平．结果：36例食管癌组织中有15例（42％）lriglmRNA检测到阳性表达，21例（58％）lriglmRNA表达缺失，其阳性表达率低于相应的癌旁组织（92％）和远癌组织（100．0％，P〈0．05）；癌组织中lriglmRNA表达水平（0．76±0．22）低于相应的癌旁组织（0．89±0．33）和远癌组织（1．13±0．40）；随着肿瘤分化程度的升高，lriglmRNA在癌组织中的阳性表达率也增加（P〈0．05），但lriglmRNA表达缺失与食管癌临床分期（TNM），淋巴结有无转移和病理类型均无统计学差异（P〉0．05）．结论：lriglmRNA在食管癌组织中存在表达缺失和低表达，提示Irigl基因在食管癌的发生发展中可能具有抑癌基因的作用．     

食管鳞癌组织中RASSF1A和FGF3基因的表达及其意义

目的研究食管鳞癌组织中RASSF1A和FGF3基因的表达及其意义。方法采用免疫组织化学Envision二步法检测RASSF1A和FGF3蛋白在80例食管鳞癌及20例食管正常黏膜组织中的表达情况。结果食管鳞癌组织中RASSF1A阳性表达率81.25%,食管正常黏膜组织阳性表达率95.0%,差异有统计学意义（P〈0.01）;食管鳞癌组织中FGF3阳性表达率93.8%,正常粘膜组织阳性表达率50.0%,差异有统计学意义（P〈0.01）。RASSF1A低表达与食管鳞癌病理分期及食管鳞癌浸润深度相关（P〈0.01）;FGF3高表达与食管鳞癌病理分级密切相关（P〈0.05）,并与淋巴结转移、食管鳞癌浸润深度相关（P〈0.05）;两者表达皆与食管鳞癌患者的民族、性别分型无关（P〉0.05）。RASSF1A与FGF3表达呈负相关性,r=-0.419,P〈0.01。结论RASSF1A和FGF3可以成为判断食管鳞癌恶性程度和预后的检测指标。     

喉鳞状细胞癌中RASSF1A基因启动子区甲基化及蛋白表达

目的：探讨RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的关系。方法：运用甲基化特异性PCR,检测RASSF1A基因在48例喉癌组织、相对应癌旁组织及48例正常人外周血中的启动子区甲基化情况。用Western blotting方法检测喉癌组织、癌旁组织及正常人外周血中RASSF1A表达情况。结果：在48例喉癌组织、相对应的癌旁组织和48份正常人外周血中,RASSF1A基因启动子区分别有34例（70.83%）、11例（22.92%）和6例（12.50%）发生了甲基化, 喉癌组织甲基化程度明显高于癌旁组织和正常人外周血（P<0.05）。在48例喉癌组织中27例（56.25%）不能正常表达RASSF1A蛋白,而相对应癌旁组织中仅有8例（16.67%）,喉癌组织中RASSF1A蛋白的表达程度明显低于癌旁组织(P<0.01)。启动子区发生甲基化的34例喉癌组织中共有25例（73.53%）呈弱阳性,而7例未发生甲基化的喉癌组织中为1例（14.29%）,两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论：RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的发生有关,有望成为喉癌诊断的分子标志。     

鳞癌中缺氧诱导因子-1α、血管生成因子在食管鳞癌中的表达及临床病理意义

目的 探讨食管鳞癌中缺氧诱导因子(HIF-1α)和血管生成因子(VEGF)的表达及其与临床病理之间的关系.方法 采用荧光定量RT-PCR和免疫组化分别测定食管鳞癌组织和切端正常组织HIF-1α、VEGF表达水平.对比分析HIF-1α、VEGF在食管鳞癌组织和正常切端中的表达以及HW-1α和VEGF与肿瘤侵犯深度、淋巴结转移(含淋巴侵犯)、肿瘤组织分化程度之间的关系.结果 HIF-1α mRNA在食管鳞癌组织中的相对表达量为5.88+1.12,在食管切端正常组织中的相对表达量为4.76±1.26,前者明显高于后者(P=0.014);VEGF mRNA在食管鳞癌组织中相对表达量为12.79±2.51,在食管切端正常组织中的相对表达量为10.92±2.23,前者明显高于后者(P=0.010);食管鳞癌组织中HIF-1α蛋白质阳性率50%(21/42),明显高于正常切端组织的14%(6/42);VEGF蛋白质阳性率76%(32/42),明显高于正常切端组织的33%(14/42).HIF-1α mRNA、VEGF mRNA表达趋向于与淋巴结转移相关(分别P=0.073、P=O.063).HIF-1α蛋白质表达在胞核和(或)胞质中,HIF-1α蛋白表达与淋巴结转移及淋巴侵犯、肿瘤组织分化相关(分别P=0.013、P=0.028).但没有发现HIF-1α mRNA与VEGF蛋白之间有显著相关性.结论 肿瘤组织中HIF-1α除蛋白质水平受缺氧调节外,还可能存在转录及转录后水平调节;通过对HIF-1α与临床病理关系的研究表明HIF-1α亦与淋巴结转移和肿瘤组织分化程度密切相关.因此,HIF-1α与VEGF有可能作为反映食管癌诊断及进展的生物学指标,成为抗血管生成治疗的靶点.     

膀胱移行细胞癌中RASSF1A基因的表达及其临床意义

目的研究RASSF1A基因在膀胱移行细胞癌(TCC)中的表达及其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应检测45例膀胱TCC及其相应癌周正常组织中RASSF1A基因mRNA表达情况,采用免疫组织化学方法检测38例膀胱TCC及18例癌周正常组织中RASSFIA蛋白表达情况。结果与癌周正常组织相比,60.0%(27/45例)的膀胱TCC组织中发现RASSF1A mRNA表达异常下调。RASSF1A蛋白在膀胱TCC组织中的阳性表达率为36.8%,明显低于癌周正常组织中的83.3%(P<0.05)。不同临床分期和病理分级间RASSF1A mRNA表达异常和RASSF1A蛋白阳性表达的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论RASSF1A的失表达可能参与膀胱TCC的发生。     

FEZ1基因在食管鳞癌中的表达及意义

目的探讨肿瘤抑制基因FEZ1在食管鳞癌组织中的表达及其与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。方法采用原位杂交法检测50例食管鳞癌及正常食管组织中FEZ1 mRNA的表达情况,采用Western blot法检测FEZ1蛋白在低分化食管癌细胞株EC-1和高分化细胞株EC9706中的表达,分析其与食管鳞癌患者各临床病理指标的关系。结果FEZ1 mRNA在食管鳞癌组织中的阳性表达率为42.0%,显著低于正常食管组织(86.0%)(P=0.000);随肿瘤分化程度的升高,FEZ1 mRNA的阳性表达率也逐渐增加(P=0.007),并且其在食管鳞癌组织中的阳性表达率与淋巴结转移密切相关(P=0.013)。Western blot结果显示FEZ1蛋白在食管癌低分化细胞株中的表达水平低于食管癌高分化细胞株,但差异无统计学意义(P=0.062)。结论在食管鳞癌组织中存在FEZ1基因的失表达,其缺失与食管鳞癌的分化和转移有关。     

Toll样受体7和NF-κB在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨Toll样受体7(TLR7)和NF-κB在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测20例食管鳞癌及相应癌旁正常组织中TLR7和NF-κB mRNA的表达;采用免疫组织化学方法检测90例食管鳞癌及相应癌旁正常组织中TLR7和NF-κB蛋白的表达。结果 (1)食管鳞癌组织中TLR7和NF-κB mRNA的表达量为(0.72±0.59)、(0.69±0.32),显著高于癌旁正常组织的(0.45±0.36)、(0.47±0.16),其表达差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)食管鳞癌组织中TLR7和NF-κB蛋白的阳性表达率为77.6%(68/90)、75.4%(67/90),明显高于癌旁正常组织的18.9%(17/90)、33.3%(30/90),其表达差异均有统计学意义(P<0.05);TLR7蛋白表达与肿瘤的分化程度和肿瘤浸润深度密切相关,表达差异均有统计学意义(P<0.05);NF-κB蛋白(p65)表达与肿瘤的分化程度和淋巴结转移密切相关,表达差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)食管癌组织中TLR7和NF-κB蛋白的表达呈正相关(r=0.259,P=0.014)。结论 TLR7可能通过上调NF-κB mRNA和蛋白的表达,促进食管鳞癌的发生与发展。     

程序性死亡4基因在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:通过测定食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)患者肿瘤组织中程序性死亡4基因(Pdcd4)的表达,探讨Pdcd4与食管鳞癌发生、发展的关系。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应检测60例食管鳞癌组织中Pdcd4 mRNA的表达情况,同时应用免疫组织化学法检测石蜡包埋的178例食管鳞癌组织中Pdcd4的表达水平,相应的癌旁正常组织作为对照。结果:Pdcd4 mRNA在食管鳞癌组织中的表达量显著低于癌旁正常组织(P<0.01)。Pdcd4在癌旁正常组织中的阳性表达率为100.0%,明显高于食管鳞癌组织中的47.2%(P<0.01)。Pdcd4的表达与肿瘤的分化程度有关,在高分化食管鳞癌的阳性率为71.4%,中分化食管鳞癌的阳性率为43.4%,低分化食管鳞癌的阳性率为30.2%,高分化鳞癌中Pdcd4阳性率高于中分化及低分化癌(P<0.01);中、低分化食管鳞癌中Pdcd4阳性率差异均无统计学意义(P >0.05);Pdcd4阳性率在患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期和N分期间差异均无统计学意义(P >0.05)。结论:Pdcd4异常表达与食管鳞癌的组织病理分级有关。