小鼠脑内兴奋性氨基酸的体外微透析法测定

在动物缺血缺氧性脑损伤的研究中,有关脑内兴奋性氨基酸毒性的研究近年来取得了很大进展。许多证据表明,缺血缺氧可导致动物脑内兴奋性氨基酸持续升高,细胞膜上离子通道病理性开放,细胞内C8z”超载,最后造成急性期神经元水肿和退变［’,‘］。因此,对脑内兴奋性氨基酸含量的测定已成为目前研究缺血缺氧性脑损伤及内源性保护机制的重要手段之一。为了深入研究缺血缺氧性脑损伤的机制,以及内源性的缺血缺氧耐受机制,我们建立了小鼠脑内兴奋性氨基酸的体外微透析一高效液相色谱（highper－il）IYllallceliquidChIDInaed,HPLC）…     

升麻苷H-1对脑缺血大鼠纹状体氨基酸类神经递质含量的影响

 目的:研究脑缺血大鼠脑纹状体区域细胞外液中氨基酸类神经递质的表达变化,以探讨升麻苷H-1神经保护作用的机制。方法:SD 大鼠随机分为假手术组、脑缺血组、升麻苷H-1高、中、低剂量组和金纳多组。用线栓法造成右侧大脑中动脉闭塞(MCAO),建立局灶脑缺血模型,假手术组和脑缺血组分别给予生理盐水腹腔注射,升麻苷H-1高、中、低剂量组和金纳多组分别给予不同剂量的药物腹腔注射,每天1 次,连续7 d。采用脑微透析技术在大鼠脑纹状体区域内进行微透析活体采样,将微透析液注入高效液相-电化学检测器,检测样品中谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)和γ-氨基丁酸(GABA)的含量。结果:与假手术组相比,脑缺血组的兴奋性氨基酸Glu和Asp在脑缺血后2 h浓度升高(P<0.05)。升麻苷H-1高剂量组、金纳多组分别与脑缺血组相比,Glu和Asp在脑缺血后2 h显著降低(P<0.05);升麻苷H-1低、中剂量组分别与脑缺血组相比,Glu和Asp在脑缺血后2 h 没有显著降低(P>0.05)。与假手术组相比,脑缺血组的抑制性氨基酸神经递质GABA 和Gly在脑缺血后3 h浓度降低(P<0.05)。升麻苷H-1高剂量组、金纳多组分别与脑缺血组相比,GABA 和Gly在脑缺血后3 h显著升高(P<0.05);升麻苷H-1低、中剂量组分别与脑缺血组相比,GABA 和Gly在脑缺血后3 h 没有显著升高。结论:升麻苷H-1可以抑制脑缺血时兴奋性氨基酸的过度释放,并增加抑制性氨基酸的浓度。升麻苷H-1不仅能透过血脑屏障,同时可调节脑缺血兴奋性氨基酸神经递质的功能紊乱,可能对缺血脑组织神经元有一定的保护作用。     

谷氨酸作为神经介质的研究进展

<正> Glu和Asp化学传递的研究使当代神经科学的进展日新月异、硕果累累。目前,已经确证神经科学中有很多具有抑制性作用。如GABA、DA、5—HT、脑啡肽(ENK)等,似乎都以抑制作用为主。但在中枢神经系统的通路中,兴奋性突触应占有多数并且发挥重要作用。因此,从六十年代开始许多研究者着手寻找中枢兴奋性介质,并把怀疑的焦点集中到谷氨酸(Glu)和门冬氨酸(Asp)两种氨基酸上。大家一致认为、它们至少是兴奋性介质的主要候选者。 Glu和Asp是带有双羧基结构的酸性氨基酸,存在于机体的各种组织,但它们在     

羚羊角与钩藤联合用药抑制热性惊厥大鼠脑损伤作用机制研究

目的:探讨羚羊角与钩藤联合用药对热性惊厥所致发育期大鼠脑损伤的保护作用及其作用机制。方法:采用热水浴建立热性惊厥大鼠模型,实验分为5 组,空白对照组、模型组、羚羊角组、钩藤组、羚羊角与钩藤联合用药组(简称联用组),每组10 只,共50 只。通过HE 染色法观察组织病理情况;ELISA 法检测各组大鼠脑组织TNF-α、IL-1β、Glu 及Asp 含量;免疫组化法检测大鼠海马区TNF-α、IL-1β表达情况。结果:联用组、羚羊角组、钩藤组脑组织Asp、Glu、TNF-α及IL-1β及海马区TNF-α、IL-1β含量显著低于模型组(P<0.01,P<0.05)。联用组脑组织Asp、TNF-α及IL-1β含量较钩藤组显著降低(P<0.05)。联用组海马区TNF-α较羚羊角组、钩藤组显著降低(P<0.05),IL-1β较钩藤组表达显著降低(P<0.05)。结论:羚羊角与钩藤联合用药抑制热性惊厥所致大鼠脑损伤,效果优于羚羊角及钩藤单用,其作用机制可能与其抑制促炎症因子TNF-α、IL-1β及兴奋性氨基酸Asp、Glu 表达有关。     

束缚浸水应激对大鼠脑组织中游离氨基酸含量的影响

为探讨脑中神经递质与动物应激反应之间的关系,本研究运用双向上行层析法,测定了大鼠束缚浸水应激5 h后,脑组织中几种游离氨基酸的含量。结果表明:大鼠5 h束缚浸水应激后,脑中天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)3种兴奋性氨基酸的含量,较对照组分别增加了69.19%(P<0.05)、77.42%(P<0.01)、136.84%(P<0.01)。但抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(GABA)的含量变化不显著(P>0.05)。     

汉防己碱与1, 6-二磷酸果糖对兴奋性氨基酸所致突触体内游离钙浓度升高的影响

目的:研究汉防己碱(Tet)与1, 6-二磷酸果糖(FDP)对兴奋性氨基酸(EAA)诱导的突触体内游离钙浓度升高的影响。方法:制备大鼠脑突触体, 以荧光法测定突触体内游离钙浓度;加入谷氨酸(Glu, 100μmol·L^-1), 天冬氨酸(Asp, 100μmol·L^-1), N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA, 100μmol·L^-1)及Glu+Asp(50μmol·L^-1+50μmol·L^-1)后, 测定突触体内游离钙浓度的变化;提前给予Tet(10、30、60μmol·L^-1), FDP(15、30、75、150μmol·L^-1), MK-801(10、20μmol·L^-1)及Tet+FDP(10+15, 30+30μmol·L^-1)预孵, 再加入上述浓度的Glu、Asp、NMDA及Glu+Asp, 观察突触体内游离钙浓度的变化。结果:Glu、Asp、NMDA及Glu+Asp均呈剂量依赖性升高突触体内游离钙浓度, 提前给予不同浓度的Tet、FDP、MK-801及Tet+FDP, 均可使突触体内游离钙浓度呈剂量依赖性降低, 且以Tet+FDP的作用最明显。结论:Tet与FPD可显著抑制EAA诱导的突触体内游离钙浓度的升高, 这可能是二者保护缺血脑细胞的作用机制之一。Tet与FDP联合应用可能对缺血脑细胞有更强的保护作用。     

eNOS基因和FⅦ基因多态性与冠心病的相关性研究

目的 探讨内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)基因外显子7的Glu298Asp和凝血因子Ⅶ(coagulation factor VH,FVH)基因外显子8的Arg353Gin多态性与汉族人群冠心病(CHD)及老年人CHD发病的关系.方法 选取147例CHD患者和116例正常对照组人群,应用聚合酶链反瘟-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术检测eNOS基因Glu298Asp和FⅦ基因Arg353G1n多态性.结果 ①eNOS基因Glu/Glu、Glu/Asp、Asp/Asp基因型频率CHD组分别为78.9%、20.4%、0.68%和对照组分别为89.7%、10.3%和0.0%;FⅦ基因型频率CHD组和对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05);②Glu/Asp+Asp/Asp型和Asp等位基因频率CHD组(21.1%和10.9%)显著高于对照组(10.3%和5.2%)(P＜0.05),Asp等位基因对≥60岁老年人发生CHD的风险增高,OR=2.43,95%CI:1.22～4.86(P＜0.05);③携带FⅦ基因Arg/Gln+Gln/Gln型和Gin等位基因个体发生CHD的风险降低,OR=0.77,95%CI:0.33～0.56和OR=0.85,95%CI:0.38～0.53(P＞0.05).结论 eNOS基因Asp等位基因可能是汉族老年人CHD发病的遗传易感因素之一;FⅦ基因Arg353Gln多态性与CHD发病无关.     

头孢曲松对脑损伤后海马谷氨酸及谷氨酸转运体-1的影响

目的:观察β-内酰胺抗生素头孢曲松对创伤性脑损伤大鼠海马谷氨酸(Glutamate,Glu)及谷氨酸转运体-1(Glutamate transporter subtype-1,GLT-1)的影响。方法:将60只健康成年SD大鼠随机分三组:假手术组(Sham组)、脑创伤模型组(TBI组)、头孢曲松组(CTX组),采用改良Feeney法制备大鼠创伤性脑损伤模型,致伤后立即腹腔注射头孢曲松(200mg/kg)。伤后6 h、12 h、24 h及48 h取材,采用干湿比重法测定脑组织含水量;高效液相色谱法检测大鼠海马兴奋性氨基酸Glu水平;免疫组织化学法及Western blot法检测大鼠海马组织GLT-1的分布及表达情况。结果:模型组大鼠较Sham组相比,脑组织含水量明显增加(P0.05),海马区Glu水平显著升高(P0.05),大鼠海马GLT-1的蛋白表达量明显下调(P0.05)。与模型组大鼠比较,头孢曲松治疗组大鼠脑水肿减轻(P0.05),大鼠海马Glu水平明显下降(P0.05),GLT-1的蛋白表达量上调(P0.05)。结论:β-内酰胺抗生素头孢曲松可以阻断兴奋性神经毒性,减轻脑水肿程度。     

内皮型一氧化氮合酶基因和凝血因子Ⅶ基因多态性与老年人冠心病的相关性研究

[摘要] 目的 探讨内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）基因外显子7的Glu298Asp和凝血因子Ⅶ（coagulation factor Ⅶ，FⅦ）基因外显子8的R353Q多态性与与汉族人群冠心病（CHD）及老年人CHD发病的关系。方法 选取147例CHD患者和116例正常对照组人群，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析技术检测eNOS基因Glu298Asp和FⅦ基因R353Q多态性。结果 （1）eNOS基因Glu/Glu、Glu/Asp、Asp/Asp基因型频率CHD组分别为78.9%、20.4%、0.68%和对照组分别为 89.7%、10.3%和0.0%；FⅦ基因型频率CHD组和对照组之间差异无显著性（P>0.05）；（2）Glu/Asp+Asp/Asp型和Asp等位基因频率CHD组(21.1% and 10.9%)显著高于对照组(10.3% and 5.2%)（P<0.05）， Asp等位基因对≥60岁老年人发生CHD的风险增高，OR=2.43，95%CI：1.22～4.86（P<0.05）；（3）携带FⅦ基因RQ+QQ型和Q等位基因个体发生CHD的风险降低，OR=0.77,95%CI:0.33～0.56和OR=0.85,95%CI:0.38～0.53(P>0.05)。结论 eNOS基因Asp等位基因可能是汉族老年人CHD发病的遗传易感因素之一；FVII基因R353Q多态性与CHD发病无关。     

白松片对应激大鼠模型海马Glu、Asp、GABA含量的影响

目的:探讨中药白松片对应激大鼠海马谷氨酸、天冬氨酸、γ-氨基丁酸含量的影响.方法:将健康成年雄性大鼠48只,随机分为:正常对照、模型对照、氟西汀对照及白松片3个剂量6组,每组8只,通过强迫游泳建立应激大鼠模型.采用预防加治疗给药,高效液相色谱仪-荧光检测法检测大鼠海马Glu、Asp及GABA含量.结果:应激7天后,模型对照组海马Asp、Glu含量(分别为:1.522±0.294、5.123±0.491μmol/g),高于正常对照组,差异有显著性(P均<0.01);白松片等效、3倍、5倍剂量组海马Asp、Glu含量[Asp分别为:(1.268±0.237)μmol/g,(1.253±0.240)μmol/g,(1.168±0.135)μmol/g,Glu分别为(4.051±0.752)μmol/g,(3.565±0.671)μmol/g(3.435±0.443)μmol/g]均低于模型对照组,差异有显著性,(P<0.05、P<0.01).结论:白松片能降低应激大鼠海马Asp、Glu的含量.