某院2011年12月-2012年12月ICU亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型的研究

目的:对重症监护病房(ICU)临床分离的亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌的耐药性及碳青霉烯酶基因型进行研究,为临床防治提供理论依据。方法:收集2011年12月-2012年12月青岛市海慈医疗集团ICU临床分离的亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌65株,采用K-B琼脂纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、IMP、VIM 6种碳青霉烯酶基因,并对PCR产物进行测序。结果:65株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星、多黏菌素B的耐药率较低外,对其他药物的耐药率均在90%以上。65株扩增出OXA-51基因,56株扩增出OXA-23基因,6株扩增出VIM基因,检出率分别为100%、86.15%、9.23%,OXA-24、OXA-58及IMP均未检出;PCR产物测序表明与GenBank相关基因同源性为100%。结论:该单位ICU亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌的耐药现象严重;OXA-23型碳青霉烯酶的产生是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制之一。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药机制研究

目的 研究鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药机制。方法 对临床分离的3株耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌，采用KB纸片扩散法（CLSI／NCCLS2004年标准）进行药敏试验，三维试验检测ESBLs和AmpC酶，PCR方法检测TEM、SHV、PER、VEB、AmpC、IMP、VIM、OXA-23和OXA-24等9种耐药基因型，PCR阳性产物进行基因测序，结果在GenBank基因库中比对分析。结果 3株鲍曼不动杆菌为多重耐药菌株，三维试验均产生ESBLs，1株产生AmpC酶，耐药基因型检测3株TEM阳性，2株PER阳性，2株AmpC酶阳性及SHV、VEB和IMP、VIM、OXA-24型等均为阴性；3株OXA-23型均阳性；另外27株对亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌IMP、VIM，OXA-23和OXA-24型检测结果均阴性。结论 耐亚胺培南鲍曼不动杆菌携带TEM、PER、非诱导AmpC酶、OXA-23型碳青霉烯酶基因，产生OXA-23型碳青霉烯酶是主要耐药机制。     

耐碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌分子流行病学调查

目的对耐碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌之间的同源性进行分子流行病学调查，为防控院内感染提供依据。方法收集河南省人民医院重症监护病房2007年1—12月分离到的21株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌进行鉴定。用E-test法测定10种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC），脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析其耐药株的同源性，对碳青霉烯类基因OXA-23型、OXA-24型、IMP型、VIM型基因进行PCR扩增及序列分析。结果14株鲍曼不动杆菌菌株为同一耐药克隆株，并检出OXA-23型碳青霉烯酶，21株鲍曼不动杆菌菌株均未检出OXA-24、IMP、VIM基因型。结论该院相同耐药克隆株在重症监护病房不同患者身上流行，可能与行气管插管、呼吸机、氧气湿化瓶、护士手操作有关。     

重症监护病房耐碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌分子流行病学调查

目的 对重症监护病房耐碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌之间的同源性进行分子流行病学调查,为制定预防和控制其院内感染提供依据.方法 收集重症监护病房2007年1月至12月分离到的21株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌.采用全自动微生物分析系统PHOENIX 100对其进行鉴定,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析其耐药株的同源性,对碳青霉烯类基因OXA-23型、OXA-24型、IMP型、VIM型基因进行PCR扩增及序列分析.结果 14株鲍曼不动杆菌菌株为同一耐药克隆株,并检出OXA-23型碳青霉烯酶,21株鲍曼不动杆菌菌株均未检出OXA-24、IMP、VIM基因型.结论 相同耐药克隆株在重症监护病房不同患者身上流行,可能与行气管插管、呼吸机、氧气湿化瓶、护士手工操作有关.     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药性及OXA碳青霉烯酶检测

目的 分析97株临床分离的耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药特点及OxA碳青霉烯酶分布.方法 用国际标准平皿二倍稀释法,明确研究菌株的耐药表型;用脉冲场凝胶电泳法,对其进行分型并用PCR的方法,检测OXA碳青霉烯酶.结果 97株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌均为多药耐药菌株,其中2株为泛耐药菌株;主要存在7个流行克隆株;有78株菌携带bal-oxa-23基因(80.4%);2株菌携带bal-oxa-58基因(2.1%);未发现携带bal-oxa-24基因的菌株.结论 在我国的亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌中,OXA-23仍为主要分布的碳青霉烯酶.     

鲍曼不动杆菌及其耐药基因的检测

目的探索一种检测鲍曼不动杆菌及其耐药基因的新方法。方法首先对近几年医院内鲍曼不动杆菌的耐药情况进行分析,选择临床上治疗鲍曼不动杆菌的首选药,再采用聚合酶链反应对鲍曼不动杆菌及其突变株进行检测。结果鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率最低,为9.37%,OXA-51基因扩增结果与细菌培养相符,OXA-23基因扩增与鲍曼不动杆菌耐亚胺培南的结果相符。结论采用PCR法对OXA-51基因扩增可以检测是否存在鲍曼不动杆菌,采用PCR法对OXA-23基因扩增可以检测鲍曼不动杆菌是否存在亚胺培南耐药性。从而快速检测鲍曼不动杆菌及其耐药基因,指导临床用药。     

鲍曼不动杆菌及其耐药基因的检测

目的：探索一种检测鲍曼不动杆菌及其耐药基因的新方法。方法首先对近几年医院内鲍曼不动杆菌的耐药情况进行分析,选择临床上治疗鲍曼不动杆菌的首选药,再采用聚合酶链反应对鲍曼不动杆菌及其突变株进行检测。结果鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率最低,为9.37%,OXA-51基因扩增结果与细菌培养相符,OXA-23基因扩增与鲍曼不动杆菌耐亚胺培南的结果相符。结论采用PCR法对OXA-51基因扩增可以检测是否存在鲍曼不动杆菌,采用PCR法对OXA-23基因扩增可以检测鲍曼不动杆菌是否存在亚胺培南耐药性。从而快速检测鲍曼不动杆菌及其耐药基因,指导临床用药。     

鲍曼不动杆菌的耐药性分析

目的:了解某院临床标本中检出鲍曼不动杆菌耐药状况,为临床合理用药治疗提供依据。方法:对某院2007年1月~2008年12月本院临床送检标本中分离的134株鲍曼不动杆菌(非重复菌株)进行耐药性分析。结果:头孢哌酮/舒巴坦对鲍曼不动杆菌的抗菌活性最好,对亚胺培南的耐药率为28.4%,对其他抗菌药物的耐药率都在30%以上。结论:对于耐碳青霉烯类(亚胺培南)的鲍曼不动杆菌引起的感染,可用头孢哌酮/舒巴坦治疗。     

耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌流行特征及耐药基因分析

目的调查分析我院2009年医院内获得性鲍曼不动杆菌对各种抗菌药物的耐药性,研究耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌感染的克隆流行情况以及碳青霉烯酶基因型。方法用琼脂稀释法进行药敏试验,按CLSI（2009）标准判断细菌耐药性,并用PFGE法对2009年的102株对碳青霉烯耐药菌进行同源性分析,多重PCR扩增碳青霉烯酶基因bla_OXA-51like,bla_OXA-24like,bla_OXA-58like。结果药敏试验结果显示鲍曼不动杆菌对米诺环素、替加环素、多粘菌素B耐药率较低,对碳青霉烯耐药高。PFGE结果显示我院存在A/B/C克隆株流行,主要分布于呼吸科以及ICU等病房,时间上呈散发流行。102株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌产OXA-23型碳青霉烯酶率为71.6%,产OXA-51型碳青霉烯酶率为84.3%,另外仅2株检出OXA-24型碳青霉烯酶,3株检出（）XA-58型碳青霉烯酶。结论我院在呼吸科以及ICU等病房存在A/B/C克隆株流行,碳青霉烯酶基因型以OXA-23、OXA-51型为主,由于对多种抗菌药物尤其是碳青霉烯类抗生素耐药性的增强和克隆株的流行,应积极采取有效措施预防和控制鲍曼不动杆菌感染。     

鲍曼不动杆菌的耐药性及产ESBL和碳青霉烯酶分析

目的:分析我院鲍曼不动杆菌的耐药性及产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)和产碳青霉烯酶情况.方法:K-B法进行药物敏感试验,运用表型确证试验检测ESBL,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶.结果:135株鲍曼不动杆菌中,对亚胺培南和关罗培南的耐药率高达72.6％,对阿米卡星、头孢噻肟等10种抗菌药物耐药率为61.5％～100.0％,对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低为34.8％,其次是左氧氟沙星耐药率为54.1％.其中有22株检出ESBL占16.3％;46株检出碳青霉烯酶占34.1％.结论:我院鲍曼不动杆菌耐药率高,应加强细菌检测和药敏试验,指导临床合理应用抗茵药物.对于临床经验用药建议选用头孢哌酮/舒巴坦;鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药可能与产ESBL和碳青霉烯酶有关.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药及基因分析

目的分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌（IRPA）的耐药性及耐药基因。方法聚合酶链反应（PCR）法对IRPA耐药相关基因（IMP、SPM、VIM、GIM、GES、OXA-10）和膜微孔蛋白基因OprD2进行检测;用脉冲场凝胶电泳进行菌株同源性检测;用VITEK2Compact进行细菌鉴定及药敏试验。结果28株IRPA对哌拉西彬他唑巴坦、妥布霉素耐药率均为32．1％,对环丙沙星、左旋氧氟沙星耐药率分别为46．4％和67．9％,对其他抗菌药物均呈较高的耐药性（82．1％～100．0％）;有4株对16种抗菌药物均耐药。OprD2基因为25．0％（7／28）,SPM基因为14．3％（4／28）,OXA-10基因为3．6％（1／28）;VIM、GIM、GES耐药基因未检出。结论IRPA的多重耐药现象较严重,治疗IRPA引起的感染首选哌拉西林／他唑巴坦、妥布霉素;耐药基因以IMP、OprD2为主。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因的研究

目的:研究耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IMPRPa)β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因的存在情况。方法:对60株临床分离的IMPRPa,采用聚合酶链(PCR)方法检测β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因IMP、VIM、OprD2,并对部分IMP、VIM基因的PCR扩增产物进行序列分析。结果:60株受试菌中,β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因检测阳性为:IMP7株,VIM18株,有3株菌同时携带IMP、VIM基因,IMP、VIM基因序列分析为IMP-1型和VIM-2型,OprD2基因缺失29株。结论:OprD2蛋白通道缺失和产金属β-内酰胺酶是IMPRPa耐亚胺培南的主要机制。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学及耐药机制

目的 研究碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌分子流行病学及对碳青霉烯类耐药机制。方法 KB法筛选对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌临床分离株24株,同时采用微量肉汤稀释法测定这些细菌的最低抑菌浓度,改良Hodge实验检测碳青霉烯酶;PCR检测碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaIMP、blaNDM、blaVIM、blaIMI、blaSPM、blaNDMOXA-23、blaNDMOXA-24、blaNDMOXA-48和blaNDMOXA-58)。结果 药敏试验显示碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌具有多重耐药性。PCR扩增碳青霉烯酶基因,blaIMP阳性率为58.3%,经测序为IMP-4,其余均为阴性。结论 肺炎克雷伯菌临床分离株对碳青霉烯类抗生素的耐药机制主要与产IMP-4金属酶有关。     

24株洋葱伯克霍尔德菌耐药性分析及β-内酰胺酶耐药基因检测

目的 了解洋葱伯克霍尔德菌耐药情况及耐药基因,为临床用药提供指导.方法 琼脂稀释法检测洋葱伯克霍尔德菌对10种抗生素的最低抑菌浓度(MIC); PCR法测定β-内酰胺酶耐药基因.结果 洋葱伯克霍尔德菌对头孢呋辛耐药率最高,达71.5%,其次氨曲南69.9%,左旋氧氟沙星66.7%,美罗培南66.6%,氯霉素62%;耐药...     

31例鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药分析及基因型研究

目的通过对我院住院患者的31株鲍曼不动杆菌对耐碳青霉烯类抗生素的药物敏感试验及对碳青霉烯酶基因的分析研究,为临床用药提供参考依据。方法用梅里埃细菌分析仪对细菌鉴定,并对细菌进行药敏试验,同时用碳青霉烯酶4种基因的特异性引物进行基因扩增和基因型的测序分析,再对基因类型与网上GemBank比对,确定编码酶基因的类型。结果 31株鲍曼不动杆菌对多粘菌素B、丁胺卡那霉素、左旋氧氟沙星的耐药率分别为4%、20%、50%。对哌拉西林/他唑巴坦、庆大霉素的耐药率分别为80%、85%。对本试验研究的其他9种抗菌药物的耐药率均在90%以上。携带OXA-51基因有21株(68%),携带D类碳青霉烯酶OXA-23基因有26株(84%),对OXA-24、OXA-58基因引物PCR扩增结果为阴性,并随机各抽取5株OXA-23基因为阳性菌株进行测序,并通过在网上GemBank对比,结果 OXA-23标准株有99%同源,OXA-51基因阳性的菌株与OXA-51标准株97%同源。结论多粘菌素B、丁胺卡那霉素、左旋氧氟沙星对耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌的敏感性较好,对其他抗生素有较强的耐药性。基因类型上以携带OXA-23型碳青霉烯酶基因为主,应合理地选用抗生素,防止多重耐药现象产生,对控制院感和疾病的疗效有极其重要意义。     

Real-time TaqMan PCR for rapid detection of genes encoding five types of non-metallo- (class A and D) carbapenemases in Enterobacteriaceae

A real-time TaqMan multiplex polymerase chain reaction (PCR) assay was developed to detect genes encoding five types of serine carbapenemases (GES, IMI/NMC, KPC, OXA-48 and SME). The assay was validated using control strains known to produce each of these types of enzyme and was then further assessed by ‘blindly’ testing 59 previously characterised clinical isolates, including 19 with serine (KPC or OXA-48) carbapenemases, 22 with metallo- (IMP, VIM or NDM) carbapenemases, and 18 with carbapenem resistance contingent upon extended-spectrum β-lactamase (ESBL) or AmpC production combined with porin loss. The assay detected and correctly assigned the serine carbapenemases in all five positive control strains and in 19 clinical isolates. No false-positive results were seen for isolates with metallo-enzymes or for those that lacked a carbapenemase. The five serine carbapenemase genotypes could also be distinguished by melt-curve analysis or the molecular size of the amplicons.     

多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺类相关耐药基因研究

目的 调查我院2005年临床分离多重耐药铜绿假单胞菌（PA）的耐药性分析并探讨其耐药基因的存在状况。方法对31株临床分离的铜绿假单胞菌用纸片扩散法检测其药敏表型,采用聚合酶链反应（PCR）法检测β-内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白OprD2基因,并与相关药敏表型比较。结果31株铜绿假单胞菌对16种抗菌药物的耐药率为48．4％～100％;β-内酰胺酶编码基因PER、VIM、CARB、IMP、TEM、OXA-10的检出率分别为6．4％、3．2％、3．2％、3．2％、3．2％、3．2％,未检出GES、SHV、VER基因,31株外膜通道蛋白OprD2基因缺失,检出率为100％。结论本院多重耐药铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类抗生素的耐药主要与外膜通道蛋白OprD2基因缺失有关。     

胶体金免疫层析法在碳青霉烯酶检测中的价值及应用

目的 系统性评价胶体金免疫层析法在耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)碳青霉烯酶型检测中的价值及性能情况, 为实验室进行CRE碳青霉烯酶快速检测提供可靠依据。方法 对收集的70株无菌部位分离的CRE菌株同时使用PCR扩增、基 因测序和胶体金免疫层析法进行碳青霉烯酶型检测,以测序结果为参考标准,评价胶体金免疫层析法的实验室检测性能。结 果 检出碳青霉烯酶基因69株,其中KPC型49株,OXA-48型12株,IMP型1株,NDM型3株,同时检出KPC和OXA-48型2株, 同时检出OXA-48和NDM型1株,同时检出KPC和NDM型1株,未检出以上5种基因型1株。胶体金免疫层析法结果与测序结果相 比灵敏度100%,特异度97.1%。不符合2株,其中1株为测序结果同时存在KPC和OXA-48两种型,胶体金检测结果为KPC型;1 株为测序结果同时存在KPC和NDM两种型,胶体金检测结果为KPC型。结论 胶体金免疫层析法作为一种新的CRE碳青霉烯酶 型检测方法,操作简单,结果容易判读,能够短时间内检测出CRE中的产KPC、OXA-48、VIM、IMP和NDM型碳青霉烯酶的 情况,灵敏度和特异度能够满足临床需求,可作为实验室进行碳青霉烯酶型快速检测的方法,指导临床诊治CRE。     

High prevalence of OXA-143 and alteration of outer membrane proteins in carbapenem-resistant Acinetobacter spp. isolates in Brazil

Carbapenem resistance amongst Acinetobacter spp. has been increasing in the last decade. This study evaluated the outer membrane protein (OMP) profile and production of carbapenemases in 50 carbapenem-resistant Acinetobacter spp. isolates from bloodstream infections. Isolates were identified by API20NE. Minimum inhibitory concentrations (MICs) for carbapenems were determined by broth microdilution. Carbapenemases were studied by phenotypic tests, detection of their encoding gene by polymerase chain reaction (PCR) amplification, and imipenem hydrolysis. Nucleotide sequencing confirming the enzyme gene type was performed using MegaBACE 1000. The presence of OMPs was studied by sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and PCR. Molecular typing was performed using pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). All isolates were resistant to carbapenems. Moreover, 98% of the isolates were positive for the gene encoding the enzyme OXA-51-like, 18% were positive for OXA-23-like (only one isolate did not show the presence of the insertion sequence ISAba1 adjacent to this gene) and 76% were positive for OXA-143 enzyme. Five isolates (10%) showed the presence of the IMP-1 gene. Imipenem hydrolysing activity was detected in only three strains containing carbapenemase genes, comprising two isolates containing the bla(IMP) gene and one containing the bla(OXA-51/OXA-23-like) gene. The OMP of 43 kDa was altered in 17 of 25 strains studied, and this alteration was associated with a high meropenem MIC (256 μg/mL) in 5 of 7 strains without 43 kDa OMP. On the other hand, decreased OMP 33-36 kDa was found in five strains. The high prevalence of OXA-143 and alteration of OMPs might have been associated with a high level of carbapenem resistance.