血管内皮生长因子的表达和血管生成与人胃癌移植瘤生长的关系

探讨血管内皮生长因子的表达与肿瘤血管生成的关系。方法 :将VEGF165正、反义RNA表达载体导入人胃癌细胞 ,观察接种VEGF高表达和低表达胃癌细胞裸鼠移植瘤的生长情况 ,并对移植瘤进行组织学检查 ,检测其血管密度、组织增生及坏死程度等变化。结果 :VEGF正义转染细胞所致移植瘤的生长速度明显快于反义转染细胞所致的移植瘤 ;组织学检查发现 ,正义转染细胞移植瘤的血管密度显著高于反义转染细胞所致的肿瘤。结论 :血管内皮生长因子通过启动血管生成而促进肿瘤的生长 ,阻断血管内皮生长因子的产生可以抑制肿瘤的生长。     

人血管内皮生长因子C基因真核表达载体的构建及鉴定

目的：克隆血管内皮生长因子C（Vascular Endothelial Growth Factor C）功能片段的cDNA，构建人VEGF-C基因的真核表达载体，以便进一步研究VEGF—C在宫颈癌中表达的意义及在淋巴管生长及转移中的作用。方法：根据人VEGF—CcDNA序列，设计合成二对特异性引物，第一对5’端含有EcoR Ⅰ及第二对3’端含有XhoI酶切位点。运用RT—PCR法克隆人MDA—MB231中的VEGF—C cDNA部分编码序列（CDS）：经双酶切后将其克隆入真核表达载体pcDNA3．1（＋），重组质粒在处于感受态的大肠杆菌DH5d中扩增，纯化。通过PCR和双酶切鉴定阳性重组子及进行基因序列的测定。结果：用RT—PCR克隆到VEGF—CcDNA部分CDS；PCR和双酶切鉴定阳性重组子，显示有人VEGF—C cDNA编码序列，基因序列测定显示重组质粒上插入的人VEGF—C序列正确。结论：从富含VEGF—C的人MDA—MB231细胞系中克隆得到的VEGF—C基因功能片段cDNA．成功构建了人真核表达栽体pcDNA3．1（＋）／VEGF-C。     

VEGF165-PE38重组免疫毒素真核表达载体的构建及表达

目的构建血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物（PE38）基因的真核融合表达载体,研究其在HEK293细胞中的表达情况。方法通过PCR获得实验需要的VEGF165基因片段,通过酶切pRB391质粒获得铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38基因,再通过适当的酶切及连接反应,构建VEGF165与PE38融合基因的真核表达载体pIRES2-VEGF165-PE38-EGFP,重组质粒经限制性内切酶及DNA序列测定证实构建成功后,用Lipofectamine2000脂质体转染HEK293细胞,然后用RT—PCR及ELISA法检测VEGF165-PE38融合蛋白在HEK293细胞的表达。结果酶切分析及DNA序列测定证实,VEGF165-PE38融合基因被成功克隆入真核表达质粒载体pIRES2-EGFP,RT—PCR及ELISA法检测证实重组基因可在HEK293细胞表达。结论VEGF165-PE38融合基因可在HEK293细胞中表达,为进-步研究其对肿瘤血管内皮细胞的靶向毒性及临床应用奠定基础。     

Lewis y高表达对人卵巢癌RMG-I细胞裸鼠体内致瘤性及移植瘤VEGF和VEGFR表达的影响

目的：比较α1,2岩藻糖转移酶基因转染前后卵巢癌细胞株RMG-I的裸鼠体内致瘤性及移植瘤组织血管内皮生长因子及其受体VEGFR1和VEGFR2表达的变化。方法：利用已建立的Lewisy抗原稳定高表达卵巢癌细胞株RMG-I-H及转染前细胞株RMG-I为细胞模型,将转染前后细胞株种植裸鼠皮下建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,观察两组肿瘤生长情况。第5周处死动物,测量移植瘤重量,免疫组织化学方法检测肿瘤组织VEGF及VEGFR1、VEGFR2的表达。结果：转染组及未转染组裸鼠均有荷瘤形成,但转染组的成瘤时间（5.2±0.8d）早于未转染组（8.8±1.3d）,且转染组的瘤重和体积与未转染组相比均明显增加（P〈0.05）。转染组裸鼠移植瘤组织VEGF及VEGFR2表达量明显高于未转染组（P均〈0.05）。结论：Lewisy抗原高表达能增加卵巢癌RMG-I细胞的体内致瘤性,上调裸鼠移植瘤VEGF及VEGFR2的表达。提示Lewisy抗原能提高癌细胞的恶性程度,且该作用与VEGF及VEGFR2表达增高关系密切。     

Lewis y高表达对人卵巢癌RMG-Ⅰ细胞裸鼠体内致瘤性及移植瘤VEGF和VEGFR表达的影响

目的:比较α1,2岩藻糖转移酶基因转染前后卵巢癌细胞株RMG-Ⅰ的裸鼠体内致瘤性及移植瘤组织血管内皮生长因子及其受体VEGFR1和VEGFR2表达的变化.方法:利用已建立的Lewis y抗原稳定高表达卵巢癌细胞株RMG-Ⅰ-H及转染前细胞株RMG-Ⅰ为细胞模型,将转染前后细胞株种植裸鼠皮下建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,观察两组肿瘤生长情况.第5周处死动物,测量移植瘤重量,免疫组织化学方法检测肿瘤组织VEGF及VEGFR1、VEGFR2的表达.结果:转染组及未转染组裸鼠均有荷瘤形成,但转染组的成瘤时间(5.2±0.8 d)早于未转染组(8.8±1.3 d),且转染组的瘤重和体积与未转染组相比均明显增加(P＜0.05).转染组裸鼠移植瘤组织VEGF及VEGFR2表达量明显高于未转染组(P＜0.05).结论:Lewis y抗原高表达能增加卵巢癌RMG-Ⅰ细胞的体内致瘤性,上调裸鼠移植瘤VEGF及VEGFR2的表达.提示Lew-is y抗原能提高癌细胞的恶性程度,且该作用与VEGF及VEGFR2表达增高关系密切.     

胃癌组织中COX-2和VEGF表达及其相关性研究

目的探讨环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和血管内皮生长因子(vascularendothelial growthfactor,VEGF)在人胃癌组织中表达及其相关性。方法应用免疫组织化学SABC法检测53例人胃癌组织中COX-2、VEGF和CD34的表达,并以40例正常胃粘膜标本作为对照。对CD34阳性血管进行微血管密度(microvesseldensity,MVD)计数。对COX-2和VEGF的表达采用半定量计分法判定,并结合临床资料进行统计学分析。结果53例人胃癌组织中,COX-2表达阳性者44例,阳性率为83.0%;VEGF表达阳性者45例,阳性率为84.9%。COX-2表达与VEGF表达相关显著(P<0.05)。并且,COX-2和VEGF的表达与TNM分期(P<0.05,P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01,P<0.05)和远处转移(P<0.01,P<0.05)相关。COX-2/VEGF同高表达组中MVD值(79.5±25.8)高于COX-2/VEGF同低表达组中的MVD值(45.0±13.9),差异非常显著(P<0.01)。结论胃癌组织中COX-2与VEGF共表达,并相互协同促进肿瘤血管生成和转移。     

NM-3对裸鼠移植胃癌组织VEGF-C、VEGF-D和VEGF-R-3表达的影响

目的:探讨NM-3对裸鼠移植人胃癌组织微淋巴管生成的影响及可能机制.方法:28只未分化人胃腺癌SGC-7901移植BALB/C裸鼠随机分为4组,每组7只,分别腹腔内注射生理盐水、NM-3、卡铂及NM-3加卡铂,每周2次,剂量为NM-3 10mg/kg,卡铂 5mg/kg.于第8周末处死裸鼠,取下肿瘤组织,定量免疫组化染色检测移植瘤组织VEGF-C、VEGF-D和VEGF-R-3表达.结果:各组VEGF-C免疫组化染色阳性面积(μm2)为:卡铂组(1647.83±501.70)、NM-3组(2106.01±437.11)及联合给药组(1825.61±277.24),均较生理盐水对照组(2962.84±519.77)显著下降(P＜0.05),各治疗组之间无显著差别.VEGF-D值:NM-3组(1032.25±460.44)及联合给药组(1009.08±370.13),较生理盐水组(1882.15±359.38)及卡铂组(1854.00±322.07)均显著下降(P＜0.05),卡铂组较生理盐水组下降,但 是差别无显著意义.VEGF-R-3值:NM-3组(1222.05±470.80)及联合给药组(1103.34±265.94)较生 理盐水组(2123.05±117.99)下降,并有显著意义(P＜0.05),而卡铂组(1668.30±256.34)与生理盐水组比较差异无显著性;各治疗组之间无显著差别.结论:NM-3能够抑制胃癌微淋巴管生成,并能增强卡铂的抗肿瘤作用.     

胃癌患者血清VEGF、p53的表达及意义

目的通过检测胃癌患者血清VEGF及p53的含量,探讨VEGF和p53在胃癌中的表达与肿瘤的发生、发展、预后的关系。方法所有标本均采用深圳晶美生物公司提供的VEGFELISA试剂盒及奥地利Bend-erMedesystems公司提供的p53ELISA试剂盒进行检测。结果血清VEGF含量正常对照组为55.73±8.36pg/ml,胃癌组为201.85±92.13pg/ml,二组比较有显著性差异(P<0.001),血清p53含量正常对照组为0.16±0.04U/ml,胃癌组为0.45±0.10U/ml,二组比较有显著性差异(P<0.001)。结论通过对胃癌患者血清VEGF及p53含量的检测,可以为胃癌的诊断、治疗提供依据。     

胃癌组织COX-2、VEGF-C表达与淋巴结转移及预后关系的研究

目的:探讨环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)在胃癌组织中的表达及其与淋巴管生成、淋巴结转移及预后的关系.方法:采用免疫组织化学SABC法检测 51例胃癌及相应的癌旁组织COX-2、VEGF-C及受体VEGFR-3表达,计数肿瘤内淋巴管密度(LVD),并结合临床病理特征和随访资料进行分析.结果:胃癌组织COX-2、VEGF-C表达阳性率分别为62.8%(32/51),60.7%(31/51).COX-2表达与VEGF-C(r=O.74,P＜0.05)、临床分期(r=0.34,P＜0.05)、淋巴管密度(r=0.69,P＜0.01)和淋巴结转移(r=0.57,P＜0.01)呈正相关,与病理分化呈负相关(r=-0.58,P＜0.01).VEGF-C表达与淋巴管密度(r=0.45,P＜0.01)、淋巴结转移呈正相关(r=0.46,P＜0.05).随访5年,胃癌组织COX-2表达与生存率呈负相关,COX-2表达阴性组5年生存率(36.8%)显著高于COX-2表达阳性组(15.6%)(P＜0.05).结论:在胃癌组织中,COX-2、VEGF-C高表达,COX-2与VEGF-C、淋巴管密度、淋巴结转移呈正相关.推测COX-2通过诱导VEGF-C表达参与淋巴结转移.胃癌组织COX-2检测可能对推测预后具有重要意义.     

重组FN多肽真核表达载体pCH510衔接化疗治疗小鼠肿瘤的研究

目的：研究肿瘤化疗后转pCH510质粒是否提高疗效,以及二者衔接是否需要特定的条件。方法：采用瘤细胞接种建立小鼠肿瘤模型：通过基因转染,观察pCH510对不同接种量所形成的小鼠肿瘤的抑制作用以及小鼠肿瘤化疗后立即进行pCH510转染的抑瘤效果;采用细胞培养技术,观察小鼠体内注射化疗药物后,其对小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞激活功能的影响;采用细胞计数的方法,观察化疗药物所致小鼠腹腔巨噬细胞和外周血免疫细胞数量变化的动力学;另外小鼠肿瘤化疗后第5天进行pCH510转染,观察抑瘤效果。结果：转染pCH510对不同接种量形成的小鼠肿瘤生长都有抑制作用,并呈负相关。化疗药物可使免疫细胞代谢降低,活化受阻,在化疗后第3天免疫细胞数降至最低,约10d左右恢复正常;化疗后立即连续10d转染pCH510质粒,疗效没有增强;化疗5d后,再连续15d转染pCH510质粒,则疗效明显增强。结论：化疗后转染pCH510质粒,对小鼠肿瘤治疗效果更好,但由于化疗既降低免疫细胞数量,又抑制其功能,化疗后立即转染pCH510质粒是不恰当的,并且转染治疗时间不宜过短。pCH510、化疗和化疗 pCH510三者对肿瘤不同抑制特点的比较显示化疗具有两面性,既抑瘤又捉瘤。     

CH50多肽体内激活巨噬细胞及其抗肿瘤作用研究 *

研究重组FN多肽CH50在体内激活巨噬细胞及其抗肿瘤作用的特点。方法：体内注射CH50和/或转染IFN-γ基因,检测巨噬细胞产生的各种因子,测定荷瘤鼠体内肿瘤生长速度。结果：CH50单独作用可促进巨噬细胞产生NO,TNF,IL-1等因子,但激活作用较慢。注射CH50和转染IFN-γ基因不分先后,均可在体内协同作用,迅速激活巨噬细胞。单独注射CH50能够抑制肿瘤结节的形成,其抑制作用呈剂量依赖关系;低剂量CH50对 <1 mm 的肿瘤结节已有很强的抑制作用,较大剂量时对>1 mm的肿瘤结节也有很强的抑制作用。CH50与IFN-γ在体内的协同作用使其抑制体内肿瘤生长的作用更强。结论：CH50与IFN-γ作为体内巨噬细胞激活的双信号因子在肿瘤治疗中具有极大的应用潜力。     

转化生长因子β1及其Ⅱ型受体在原发性肝癌中的表达

目的：研究重组ＦＮ多态ＣＨ５０在体内激活巨噬细胞及其抗肿瘤作用的特点。方法：体内注射ＣＨ５０和／或转染ＩＦＮ－γ基因,检测巨噬细胞产生的各种因子,测定荷瘤体内肿瘤生长速度。结果 ＣＨ５０单独作用可促进巨噬细胞产生ＮＯ,ＴＮＦ,Ｈ－１等因子,但激活作用较慢,注射ＣＨ５０和转梁ＩＮＦ－γ基因不分先后,均可在体内协同作用,迅速激活巨噬细胞。单独注射ＣＨ５０能够抑制肿瘤结节的形成,其抑制作用呈剂量依赖关系     

血管内皮生长因子在肿瘤中的表达及其临床意义

肿瘤的生长、浸润和转移依赖于肿瘤血管生成 ,血管内皮生长因子 (VEGF)是最重要的一种血管生成刺激因子。VEGF特异性作用于血管内皮细胞 ,通过促进内皮细胞增殖、增加血管通透性 ,以诱导肿瘤血管生成 ,在肿瘤的发生发展中起关键作用。因而VEGF在肿瘤的恶性程度和预后判断以及治疗方面有重要的临床应用价值。     

VEGF_(121)重组腺相关病毒载体的构建与鉴定

[目的]构建VEGF121腺相关病毒载体,为VEGF121的体外表达及临床研究提供实验基础。[方法]RT-PCR获取人VEGF121基因克隆入pAAV-MCS载体中,构建pAAV-VEGF121表达载体,利用双酶切及DNA测序鉴定pAAV-VEGF121载体的构建。[结果]RT-PCR扩增出一条444bp的特异性泳带,双酶切结果表明成功构建pAAV-VEGF121载体,DNA测序结果与VEGF121 mRNA一致。[结论]成功构建pAAV-VEGF121载体,为VEGF基因的进一步作用机制研究打下实验基础。     

人肿瘤坏死因子-α基因真核表达载体的构建

目的 :构建可在真核细胞内表达人肿瘤坏死因子alpha(hTNF α)基因的真核表达载体。方法 :应用RT PCR的方法从足月妊高征患者的胎盘组织中 ,扩增出hTNF αcDNA ,连接至载体pMD 18 Tvec tor中 ,经酶切鉴定与序列测定证实后 ,以亚克隆法构建于真核表达载体pcDNA3.1 myc his(- )A ,B ,C的相应酶切位点 ,通过RT PCR方法检测其在体外转导绒癌耐药细胞后hTNF α基因的表达。结果 :自胎盘中克隆的hTNF αcDNA经序列测定证实 ,与Genbank的序列完全一致 ;用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定证实 ,克隆基因正确插入载体pcDNA3 1 myc his(- )A ,B ,C。经脂质体介导转导绒癌耐药细胞后 ,检测到其在转导的细胞中稳定表达。结论 :通过DNA重组技术成功地构建了可在体外稳定表达hTNF αcDNA全长的真核表达载体     

血管抑制素基因真核表达载体的构建及转染研究

目的：构建血管抑制素（angiostatin,AG)基因真核细胞表达载体并进行转染研究。方法：根据已发表的血管抑制基因的核苷酸序列,设计并合成一对引物、以鼠的纤溶酶原核酸为模板进行PCR扩增,将其基因克隆到真核表达载体pRC/CMV中,进行序列分析和酶切鉴定后,运用 质体将重组质粒pRC/CMV-AG转入胰腺癌SW1990细胞中,观察其表达情况,以及其对血管内皮细胞生长的作用。结果：PCR扩增出一长1．4kb的片断,酶切和序列分析证明含完整的AG基因序列,与已知的血管抑制素基因的同源性很高（＞96％）。Western blot证实重组体pRC/CMV-AG有较高的表达,对血管内皮细胞的生长有一定的抑制作用。结论：重组体pRC/CMV-AC是一种高效真核表达载体;克隆的AG基因能抑制血管内皮细胞的生长。     

血管内皮生长因子在卵巢子宫内膜异位症组织中的表达及其临床意义

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）在卵巢子宫内膜异位症组织中表达的意义。方法应用免疫组化技术及体视学方法定量检测30例卵巢子宫内膜异位症（EMs）患者的异位和在位内膜组织中VEGF的平均光密度（MOD）和微血管密度（MVD）的表达,30例非EMs子宫内膜做为对照组。结果VEGF在EMs患者在位内膜中的平均光密度为（0.47±0.12）,明显高于EMs患者异位内膜（0.32±0.08）及对照组子宫内膜（0.39±0.14）; MVD在EMs患者异位内膜中的表达为（41.58±14.72）,明显高于EMs患者在位内膜（31.30±19.89）及对照组子宫内膜（20.70±16.17）; VEGF在EMs患者在位内膜和对照组子宫内膜的表达分泌期均高于增生期（P〈0.05）; VEGF、MVD在EMs组以及对照组中表达均呈正相关,在EMs组在位内膜中的相关性明显高于对照组。结论血管生成是EMs形成的必要条件,在位内膜中高表达的VEGF提示：具有特质性的子宫内膜可能是EMs发病的关键因素。     

小剂量羟基喜树碱抗鼠H22移植瘤血管生成的体内实验研究

背景与目的：有研究提示某些化疗药物在小剂量应用时具有一定的抗血管生成作用,因此本研究旨在探讨小剂量羟基喜树碱（hydroxycamptothecin, HCPT）对小鼠H22细胞移植瘤的生长抑制作用及对血管生成的抑制作用。方法：建立小鼠皮下肝癌H22模型; 以环磷酰胺（cyclophosphamide, CTX）为阳性对照,0.9%氯化钠溶液为阴性对照,HCPT（0.2和0.4 mg/kg）连续腹腔给药10 d,观察用药后移植肿瘤生长情况,计算抑瘤率; 免疫组织化学法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达及微血管密度（microvessel density, MVD）。结果：HCPT抑瘤作用明显,0.2和0.4 mg/kg治疗组的抑瘤率分别为23.53%和43.25%,与0.9%氯化钠溶液对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：小剂量HCPT对小鼠H22移植瘤具有一定的生长抑制作用;同时可明显抑制肿瘤组织中VEGF的表达水平和MVD,推测其抗肿瘤作用可能与对血管生成抑制作用有关。     

Spatial Expression of VEGF-A in Human Glioma

Astrocytoma, especially of high grade, is dependent on neovascularization for its growth and progression. The expression of vascular endothelial growth factor (VEGF-A), an important angiogenesis factor, has been demonstrated in perinecrotic cells in glioblastoma. In order to achieve more knowledge regarding the process of astrocytoma angiogenesis and growth we have investigated the expression of VEGF-A immunohistochemically in different areas of tumors.In 21 patients with astrocytomas of varying grade serial stereotactic biopsies were performed. Biopsies were taken from brain adjacent to tumor (BAT), tumor periphery, and tumor center. In the BAT region of high-grade astrocytomas, we found a frequent expression of VEGF-A in tumor cells and less frequent in blood vessels. In the periphery, there was an expression mainly in tumor cells while in the center of grade IV tumors VEGF-A was also frequently expressed in cells adjacent to necrosis. VEGF-A in astrocytoma grade II was demonstrated in viable tumor cells preferentially in the periphery but also in peripheral vessels and in centrally located tumor cells.The findings indicate that, in addition to hypoxia in necrotic areas there may be other factors that stimulate the expression of VEGF-A. It is suggested that VEGF-A may be a prerequisite for the aggressive and infiltrative growth of astrocytomas. Therefore, when operating high-grade astrocytomas it may be of importance to resect this aggressive peripheral part of the tumor and also to take this finding into account when planning radiotherapy.