山茱萸注射液中马钱素与莫诺苷的药代动力学研究

目的 :建立高效液相色谱法同时测定血浆中山茱萸单体成分马钱素和莫诺苷的浓度 ,研究小鼠静注和灌胃给药后体内药代动力学特点。方法 :采用DiamonsilTMC₁₈色谱柱 (4.6mm× 250mm ,5 μm) ,流动相乙腈 甲醇 0.2 %甲酸 (12∶8∶80 ) ,流速 1.0mL·min^-1,检测波长 237nm。结果 :马钱素和莫诺苷的回归方程分别为Y=1.76 4X-0.0615和Y=1.242X-0.00199,r=0.9999(n =9) ;马钱素和莫诺苷的线性范围分别为 0.38～68.2 5mg·L^-1和 0.66～117.2 2mg·L^-1;其最低检测浓度分别为 0.10,0.16mg·L^-1。马钱素的平均回收率及相对标准偏差分别为99.6% (2.0% ) ,102.0% (1.0% ) ,87.9% (7.2%) ,莫诺苷的平均回收率及相对标准偏差分别为 99.2% (2.5 % ) ,104.1% (1.2%) ,92.7%(4.2%) ,该法的日内和日间精密度 (RSD)均小于 6.8%。小鼠静脉注射山茱萸注射液后 ,药动学行为均符合二室模型 ,马钱素和莫诺苷的主要药动学参数T_1/2(α) ,T_1/2(β) ,K₂₁,K₁₂ ,K₁₀ ,V(c) ,AUC ,CL分别为3.2 ,2 5 .1min ,5.997,4 .981,3.564h^-1,0 .5 5 1L·kg^-1,13.59mg·L^-1·h ,1.965L·kg^-1·h^-1;3.6 ,21.5min ,5.926,3.833,3.797h^-1,0.647L·kg^-1,2 7.15mg·L^-1·h,2.457L·^-1·^-1。结论：首次建立了山茱萸注射液中马钱素和莫诺苷血药浓度的HPLC测定方法，阐明了山茱萸中马钱素和莫诺苷的药代动力学参数，方法的专属性强，结果可靠。     

反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中补阳还五汤中黄芪甲苷的含量及药动学研究

 目的对大鼠血浆补阳还五汤中黄芪甲苷的含量进行了测定,并进行了药动学研究。方法采用反相高效液相色谱法测定,其条件为色谱柱:C₁₈柱(4.6mm×250mm,5μm);检测波长:203nm;流动相:乙腈-水(35:65),流速:1mL·min^-1;柱压:(15.17±0.4137)MPa;温度:45℃。药动学参数采用3P87软件处理。结果血浆样品中黄芪甲苷线性范围为2.4～12μg,r=0.9996,回收率为100.2%,RSD为1.100%。黄芪甲苷药动学参数:复方:t_1/2α为1.392h;t_1/2β为14.24h;K₁₂为0.1624h^-1;K₂₁为0.3045h^-1;K₁₀为0.07958h<>sup-1;总苷:t_1/2α为2.641h;t_1/2β为37.12h;K₁₂为0.1283h^-1;K₂₁.为0.1071h^-1;K₁₀为0.04574h^-1。结论该法快速、简便,准确。补阳还五汤复方及总苷中黄芪甲苷药动学为二室模型。中药复方成分组合对药动学参数有一定影响。     

HPLC法测定乐肝清炎胶囊中栀子苷、甘草素的含量

目的:研究以HPLC法同时测定乐肝清炎胶囊中栀子苷、甘草素含量的方法。方法:采用KromasilC₁₈柱(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-0.5%冰乙酸为流动相,梯度洗脱,体积流量:1.0mL·min^-1,λ₁=238nm(检栀子苷),λ₂=276nm(检甘草素),柱温30℃。结果:栀子苷在(54.1～162.4)μg·mL^-1与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9998,甘草素在(5.2～15.5)μg·mL^-1与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999。平均加样回收率(n=9):栀子苷为99.66%;甘草素为99.90%。结论:本法操作简便,结果可靠,重现性好,可作为该产品质量控制的方法。     

杠柳细胞悬浮培养体系中蔗糖浓度与氮源的考察

 目的 考察MS培养基中蔗糖浓度和氨态氮与硝态氮的比例（NH⁺₄∶NO^-₃以及初始总氮量对杠柳悬浮细胞生长和杠柳毒苷与4-甲氧基水杨醛积累的影响。方法 以3%蔗糖浓度为对照,设置1%、2%、4%、5%浓度梯度;设置NH⁺₄-NO^-₃分别为0∶1、1∶0、2∶1、1∶1、1∶2共5个处理;总氮含量以MS基本培养基（总氮含量60 mmol·L^-1为对照,实验组总氮含量分别为对照组的1/4、1/2和2倍。结果 4%的蔗糖最有利于杠柳细胞生长,5%的蔗糖有助于杠柳毒苷的合成,3%的蔗糖有利于4-甲氧基水杨醛的合成,4%的蔗糖最有利于杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛产量的提高。NH⁺₄-NO^-₃ 为1∶2有助于细胞生长和杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛的合成。总氮含量为N（60 mmol·L^-1时细胞生长最好;总氮含量为1/2N（30 mmol·L^-1时杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量最高,且产量也最高。结论 蔗糖浓度、氮源中氨态氮与硝态氮比例以及总氮含量的改变均可显著影响杠柳细胞生长和杠柳毒苷与4-甲氧基水杨醛的积累。     

京尼平苷及其代谢物在大鼠体内的药代动力学研究Ⅰ

目的:研究京尼平苷及其肠道代谢物京尼平在大鼠体内的药代动力学过程。方法:灌胃给予280 mg.kg^-1的京尼平苷,RP-HPLC测定血浆中京尼平苷及京尼平,应用BAPP统计模拟计算,得出相应的药代动力学参数。结果:主要药动学参数为:京尼平苷和京尼平最大血药浓度(C _max)分别为(3.23±0.37)μg.mL^-1,(17.41±5.27)ng.mL^-1;半衰期(t_1/2)分别为(1.00±0.35)h,(4.86±2.55)h;平均滞留时间(MRT)分别为(2.39±0.18)h,(7.86±3.61)h;曲线下面积(AUC i)(11.23±2.18)h.μg.mL^-1,(90.60±13.44)h.ng.mL^-1。结论:二者药代动力学均符合一室模型,京尼平苷在血浆中代谢消除较快,t_1/2为(1.00±0.35)h;京尼平血浆浓度较低,C _max为(17.41±5.27)ng.mL^-1。     

HPLC测定野菊花中蒙花苷与木犀草素的含量

目的:建立野菊花中蒙花苷与木犀草素的含量测定方法。方法:运用高效液相色谱法测定,色谱柱为Thermo Hypersil BDS C₁₈(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-四氢呋喃-水(50∶4∶46),流速0.6 mL.m in^-1;检测波长350 nm。结果:蒙花苷与木犀草素分别在0.015 2~0.152 mg.mL^-1和0.001 8~0.018 mg.mL^-1线性关系良好,r分别为0.999 8,0.999 4。平均回收率分别为98.9%,97.2%,RSD均小于3.0%。结论:本法方便,准确,可以用于野菊花药材的质量控制。     

HPLC测定血浆中黄豆苷元浓度及其人体药动学研究

 目的建立HPLC测定人血浆中黄豆苷元浓度的方法,进行其人体药动学研究。方法以氟康唑为内标,血浆样品经预处理后,选用HypersilODS₂色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),甲醇-水(49∶51)为流动相,流速1.0mL·min^-1,室温260nm处测定。结果黄豆苷元血浓度线性范围为5～640μg·L^-1,最低定量浓度为5μg·L^-1;相对回收率为89.53%～110.35%,绝对回收率为61.24%～85.04%,日内、日间变异系数均<12%。黄豆苷元药动学参数t_1/2为(3.863±0.983)h,ρ_max(192.261±115.077)μg·L^-1,t_max(0.900±0.409)h,AUC_0～12(490.839±162.855)μg·h·L^-1,AUC_0～∞(535.279±163.190)μg·h·L^-1。结论本法分离效果良好,灵敏度高,重现性好,回收率高,日内、日间误差小,适用于黄豆苷元人体药动学及生物利用度研究。     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中莫诺苷血药浓度

莫诺苷是从中药山茱萸Cornus officinalis Sieb. & Zucc.中提取分离获得的环烯醚萜苷类化合物,具有神经保护等多种药理活性.本研究首次采用LC-MS/MS技术建立了大鼠血浆中莫诺苷浓度的测定方法.血浆样品采用蛋白沉淀法,以金丝桃苷作为内标,色谱柱为Inertsil C8-3色谱柱(2.1 mm×50 mm,5 μm),流动相为水(含1 mmol·L^-1甲酸钠)-乙腈梯度洗脱,流速0.4 mL·min^-1.采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,多反应监测(MRM).莫诺苷在2~5 000 μg·L^-1 (r= 0.995 7)线性关系良好,最低定量限为2 μg·L^-1.方法精密度、准确度、回收率和基质效应均符合生物样品测定的要求,适合大鼠血浆中莫诺苷浓度的测定.应用该方法进行莫诺苷在大鼠体内的药代动力学研究,给药剂量为20 mg·kg^-1,绘制血药浓度-时间曲线,并采用DAS 2.0 计算得主要药代动力学参数:AUC_0-∞为(587.6±290.7) μg·min·L^-1,C_max为(334.2±148.0) μg·L^-1,T_max为(0.6±0.3) h,t_1/2为(0.7±0.3) h.     

肉苁蓉生品及不同炮制品麦角甾苷含量比较研究

 目的：对肉苁蓉生品及不同炮制品中麦角甾苷的含量进行比较研究。方法：采用高效液相色谱法测定麦角甾苷含量，使用YWG-C₁₈色谱柱，甲醇-10 ml/L乙酸(35∶65)为流动相,UV检测波长为332 nm,麦角甾苷在0.1～0.8 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(回归方程[WTBX]Y=299 492X+1 165,r=0.999 9,[WTBZ]平均回收率为98.83%,[WTBX]RSD[WTBZ]为1.68%)。结果：生品含量高于炮制品，为0.337 8%,高压酒炖品含量最低，为0.059 6%,炮制品中炮制的温度越高，时间愈长，含量愈低。结论：以助阳活性成分麦角甾苷为考察指标时，肉苁蓉药材不宜高温、高压长时间炮制。本法操作简便，结果准确，可作为评价肉苁蓉质量的方法。     

RP-HPLC同时测定菝葜中落新妇苷和黄杞苷的含量

 目的建立同时测定菝葜药材中落新妇苷和黄杞苷含量的HPLC方法。方法采用Agilent Extend-C₁₈(4.6 mm×250 mm,5μm)柱,以甲醇-水-磷酸溶液(35:65:0.1)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,柱温35℃,检测波长为290nm。结果落新妇苷和黄杞苷分别在2.16×10^-3～1.08,3.176×10^-3～1.588μg内呈良好的线性关系;精密度试验RSD分别为0.75%,0.24%;重复性试验RSD分别为0.79%,0.89%;平均加样回收率分别为100.90%,98.71%。结论建立的方法可用于菝葜药材的质量控制。     

地黄清蒸不同时间5-羟甲基糠醛含量变化研究

目的:考察地黄清蒸不同时间5-羟甲基糠醛含量的变化规律。方法:采用高效液相色谱法,C₁₈色谱柱(6mm×200mm,5μm),流动相甲醇-水(15∶85),流速1mL.min^-1,柱温24℃,检测波长284nm。结果:5-羟甲基糠醛在0.01~0.08μg呈良好线性关系,r=0.9999 (n=5),平均回收率100.2%,RSD2.7% (n=5)。结论:地黄在蒸制过程中,5-羟甲基糠醛的含量在一定时间范围内随着时间的延长而增加。     

UPLC法测定地黄中梓醇的含量

目的：采用UPLC法测定地黄中梓醇的含量。方法：色谱柱ACQUITY UPLC BEH RP18（2.1mm×100mm,1.7μm）;流动相为乙腈-水（5∶95）;检测波长为210nm;流速为0.08mL.min^-1;柱温为35℃。结果：梓醇与其他峰均能达到基线分离;其色谱峰形好。梓醇的含量在（3.06～18.36）μg时与峰面积呈良好的线性关系（Y=4417.4x＋860.53,R=0.9997）,平均回收率为100.97%,方法精密度RSD=1.56%（n=6）。结论：该方法简便、快速、准确、重复性好,可作为地黄中梓醇的有效检测方法。     

明目地黄丸(浓缩丸)质量标准研究

目的制定明目地黄丸(浓缩丸)(熟地黄、当归、酒萸肉、牡丹皮、白芍、山药、枸杞子、菊花等)的质量标准。方法采用薄层色谱法对明目地黄丸(浓缩丸)中的牡丹皮、当归、白芍、熟地黄等进行定性鉴别;HPLC法测定明目地黄丸(浓缩丸)中马钱苷、丹皮酚和芍药苷。马钱苷色谱条件:色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为四氢呋喃-乙腈-甲醇(1∶8∶4)-0.05%磷酸溶液(8∶92),检测波长为236 nm,体积流量为1.0mL/min;丹皮酚色谱条件:色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(48∶52),检测波长为274 nm,体积流量为1.0 mL/min;芍药苷色谱条件:色谱柱为Agilent Zorbax C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86),检测波长为230 nm,体积流量为1.0 mL/min。结果处方中当归、牡丹皮、芍药苷的薄层色谱鉴别专属性较强。马钱苷、丹皮酚和芍药苷分别在40.43～1 213.02 ng、40.43～1 213.02 ng和40.43～1 213.02 ng范围内线性关系良好(r均为1.000 0),平均回收率分别为96.4%(n=6),98.2%(n=6)和98.3%(n=6);RSD值分别为0.8%,0.8%和2.1%。结论本研究所建立的方法简便快速,准确可靠,可有效控制明目地黄丸(浓缩丸)的质量。     

酒地黄炮制过程中4种活性成分含量变化

目的建立地黄“九蒸九晒”过程中4种活性成分HPLC检测方法,探索酒地黄炮制过程中活性成分的含量变化。方法采用YMC-Pack ODS-A色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长203、334 nm,柱温35℃,测定酒地黄炮制过程中梓醇、毛蕊花糖苷、地黄苷D和益母草苷含量。结果建立了地黄“九蒸九晒”过程中4种活性成分HPLC检测方法;梓醇、毛蕊花糖苷、地黄苷D和益母草苷在各自范围内线性关系良好(r均大于0.999),精密度、稳定性、重复性良好(RSD均小于2.5%),平均加样回收率为97%~101%(RSD<2%)。梓醇、地黄苷D和益母草苷含量随蒸制次数增加而不同程度下降。结论本研究初步探索了地黄炮制过程中4种活性成分的变化过程,所建立的方法稳定可靠。     

熟地黄饮片、标准汤剂、中间体、配方颗粒的相关性

目的:建立熟地黄饮片、标准汤剂、中间体、配方颗粒的HPLC指纹图谱,并对其质量相关性进行评价。同时结合出膏率和毛蕊花糖苷转移率等指标,评价熟地黄配方颗粒制备工艺的科学性和合理性。方法:采用HPLC法对多批次饮片、标准汤剂、中间体及配方颗粒进行指纹图谱检测和毛蕊花糖苷含量测定。指纹图谱方法采用Phenomenex Luna 100A C18(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%磷酸水,流速1.0 m L·min^-1,检测波长300 nm。毛蕊花糖苷含量测定方法参照2015年版《中国药典》熟地黄饮片项下方法。同时,结合出膏率和毛蕊花糖苷转移率,进行配方颗粒制备过程中量值传递相关性分析。结果:熟地黄饮片、标准汤剂、中间体中毛蕊花糖苷含量基本一致,熟地黄中间体、配方颗粒的出膏率、毛蕊花糖苷转移率均在标准汤剂标准范围之内且与标准汤剂基本一致;熟地黄17批饮片,17批标准汤剂,10批中间体及10批配方颗粒指纹图谱均呈现7个共有峰,呈良好的相关性;采用UPLC-Q-TOF-MS分析技术成分归属了熟地黄配方颗粒中13个主要色谱峰,对7个共有峰中4个共有峰进行了指认,分别为5-羟甲基糠醛、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、地黄苷。结论:熟地黄饮片、标准汤剂、中间体、配方颗粒的主要化学成分组成基本相同,熟地黄配方颗粒制备工艺合理,建立的HPLC指纹图谱方法可用于熟地黄配方颗粒的生产全过程的质量控制。     

地黄不同炮制品组成的增液汤降低糖尿病大鼠血糖血脂作用的对比研究

目的:通过对地黄不同炮制品组成的增液汤降低糖尿病模型大鼠血糖、血脂作用的对比研究,说明生地黄与熟地黄功效异同。方法:SD雄性大鼠高脂肪饲料饲养,一次性腹腔注射(ip)链脲佐菌素(STZ)35 mg.kg-1建立糖尿病模型;按血糖随机分为模型对照组,阳性盐酸二甲双胍组(1.5 g.kg-1),鲜地黄-增液汤组(10.2 g.kg-1),生地黄-增液汤水提组(7.8 g.kg-1),熟地黄-增液汤水提组(7.8 g.kg-1),生地黄-增液汤醇提组(7.8 g.kg-1),熟地黄-增液汤醇提组(7.8 g.kg-1),每组10只,连续灌胃(ig)给药3周,分别观察各组大鼠体重、摄食量、饮水量及血糖血脂的变化。结果:与对照组相比,鲜地黄-增液汤组血糖(9.22±0.88)mmol.L-1和生地黄-增液汤水提组血糖(7.65±1.02)mmol.L-1、醇提组血糖(8.35±2.58)mmol.L-1与模型组血糖(12.72±1.28)mmol.L-1相比均能极显著降低(P<0.01),同时均能极显著降低糖尿病大鼠摄食量、饮水量、口服糖耐量和血清甘油三酯(TG)(P<0.01),生地黄-增液汤水提组还能极显著性降低血清总胆固醇(CHO)(2.12±0.33)mmol.L-1(P<0.01)和显著性升高高密度脂蛋白(HDLC)(1.07±0.21)mmol.L-1,鲜地黄-增液汤和生地黄-增液汤醇提组能显著性降低CHO(P<0.05),对HDLC则无显著性差异,熟地黄-增液汤水提、醇提组对血糖和血脂的影响与模型组相比均无显著性差异。结论:鲜地黄、生地黄组成的增液汤都有降低糖尿病大鼠的血糖和血脂的作用,且水提物、醇提物无明显的差异性;熟地黄-增液汤水提、醇提物对血糖和血脂作用均不明显。地黄生熟异用对增液汤降糖、降脂作用影响较大。     

地黄的炮制对梓醇和5-羟甲基糠醛含量的影响

目的：研究地黄炮制过程对梓醇(catalpol)和5-羟甲基糠醛(5-HMF)含量变化的影响。方法：鲜地黄制成干地黄后分别以10%和50%的乙醇为液体辅料并分别在90 ℃和100 ℃的条件下反复蒸制得熟地黄,各条件下制得的样品经30%甲醇超声波提取2 h,利用反相HPLC分别在204,284 nm,流速1.0 mL·min^-1,流动相3%乙腈条件下测定梓醇和5-HMF的含量。结果：随着蒸制次数的增加,梓醇的含量减少,5-HMF的含量增加。液体辅料乙醇的体积分数和蒸制温度都对梓醇和5-HMF的含量有影响,10%乙醇,100 ℃的条件下炮制的熟地黄最优,在此条件下蒸7次以上的熟地黄中5-HMF的含量符合大韩药典标准。结论：分析了地黄炮制对梓醇和5-HMF含量的影响,为进一步研究地黄提供了依据。     

不同炮制加工的熟地黄对雌性大鼠排卵功能的影响

目的:探究不同炮制加工的熟地黄水煎液对雌性大鼠排卵功能的影响,为熟地黄的炮制加工与临床用药提供参考。方法:分别采用清蒸法(一蒸一晒)和传统法(九蒸九晒)炮制生地黄,得到2种不同炮制工艺的熟地黄。以动情周期正常的雌性成年大鼠为研究对象,设空白组和清蒸组、传统组。观察这2种熟地黄的水煎液对雌性大鼠动情周期、卵巢组织形态及血清激素水平的影响,清蒸组和传统组的给药剂量均为3.6 g·kg-1。建立熟地黄的HPLC指纹图谱,并结合药效学指标研究熟地黄对雌性大鼠排卵功能影响的差异。结果:与空白组比较,清蒸组大鼠血清中雌二醇和孕酮含量明显降低(P0.05),动情周期明显延长(P0.05),卵巢中闭锁卵泡数目明显升高(P0.05);传统组各项指标变化皆不明显,与空白组相比无统计学差异。谱效学结果显示毛蕊花糖苷与清蒸法制备的熟地黄抑制大鼠排卵作用呈正相关;传统法制备的熟地黄HPLC图谱中3,5号峰与抑制排卵作用呈负相关。结论:清蒸法炮制的熟地黄对正常雌性大鼠的排卵有一定抑制作用,传统法炮制的熟地黄在排卵功能方面有一定优势。     

地黄九蒸九晒炮制过程中益母草苷的含量测定及其动态变化

 目的建立地黄中益母草苷的分析方法,研究地黄在炮制过程中环烯醚萜苷类成分的变化规律。方法采用反相高效液相色谱法,以Hypersil GOLD-C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈-水(3∶97),流速为1mL·min^-1,检测波长203nm,柱温为40℃。结果益母草苷进样质量浓度在0.0221～0.1326mg·L^-1内,线性关系良好,r为0.9999,平均加样回收率为103.1%。结论本方法可用于熟地黄药材的质量控制。随着蒸制次数的增加,益母草苷作为环烯醚萜单糖苷,在熟地黄中的含量同梓醇一样呈逐渐减少的趋势,最后几乎全部降解。     

HPLC法同时测定知柏八味口服液中芒果苷、盐酸小檗碱和丹皮酚

目的建立HPLC法同时测定知柏八味口服液(知母、黄柏、牡丹皮、生地等)中芒果苷、盐酸小檗碱和丹皮酚。方法采用Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-33 mmol/L磷酸二氢钾溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.9 mL/min,检测波长317 nm,柱温50℃。结果芒果苷在1.288～12.88μg/mL(r=0.999 9)、盐酸小檗碱在2.666～26.655μg/mL(r=0.999 9)、丹皮酚在1.466～14.655μg/mL(r=0.999 8)有良好的线性关系,平均回收率分别为100.6%(RSD为1.6%,n=9)、99.6%(RSD为1.0%,n=9)、101.2%(RSD为1.5%,n=9)。结论所建方法简便、准确,可用于知柏八味口服液的质量控制。