人CD34分化抗原转录调控序列的克隆与调控表达

目的：克隆有特异调控活性的人ＣＤ３４基因５’端转录调控序列。方法：根据已知的ＣＤ３４抗原基因５’－端启动子调控序列,自行设计２对引物,用巢式－ＰＣＲ方法从染色体ＤＮＡ中成功的克隆６６１ｂｐ长度的ＣＤ３４抗原转录调控序列（ＣＤ３４ＴＲＳ,ＣＤ３４ＴＲＳ片段插入启动子报告质粒ｐＥＧＦＰ－１,观察重组质粒ｐＣＤ３４ＥＧＦＰ在造血系细胞和非造血系细胞中的调控表达作用。结果：经限制性内切酶酶切鉴定及ＤＮＡ序列分析证实,克隆的ＣＤ３４启动子序列与文献报道的顺序基本一致,能特异调探ＥＧＦＰ基因在造血细胞系细胞Ｋ５６２中表达。结论：所克隆的人ＣＤ３４分化抗原转录调控序列有特异调控真核基因表达作用,本研究为构建造血干细胞特异性表达载体奠定了基础。     

MAL基因在人食管癌中表达显著下调

研究ＭＡＬ基因在人食管癌中的表达下调状况。方法采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和ＲＴ－ＰＣＲ方法检测了ＭＡＬ基因在４１对配对的食管癌组织和相应癌旁食管粘膜中的表达;应用ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ方法分析了ＭＡＬ基因在３个食管癌细胞系ＥＣ１０９、ＥＣ８７１２和ＥＣ９７０６中的存在及其表达。     

HER2/neu原癌基因胞外区片段DNA克隆及其在小鼠中诱导的抗体应答 *

目的：探讨维甲酸在预防和治疗肿瘤中的作用机制,分离受维甲酸调控的靶基因。方法：采用ＡＰ－ＰＣＲ测序、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及序列２同源分析等方法。结果：首次发现ＡＴＲＡ可上调线粒体基因ＡＴＰ酶第六亚单位表达,这种表达上调开始于Ａ－ＴＲＡ诱导早期并持续整个诱导过程（７ｄ）。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果证实了ＡＴＲＡ对线粒体基因ＡＴＰ酶第六亚单位的上调作用。夺线粒体基因组的转录调控区Ｄ－ｌｏｏｐ序列进行了初     

增强子结合蛋白家族一个新基因的3‘—非编码区序列对肝癌细胞7721生长的...

目的 观察所获得的增强子结合蛋白家族一个新基因ＨＰ８的３＇－非编码区（３＇ＵＴＲ）对肝癌细胞生长的影响。方法 将３＇ＵＴＲ序列亚克隆至真核表达载体ｐＢＫＣＭＶ中，运用磷酸钙沉法转染肝癌细胞７７２１。 结果 观察到细胞的生长受到较明显抑制。结论 表明该基因参与真核细胞转录调控，结合以前的实验结果（该基因在肝癌细胞中普遍高表达），提示该基因与细胞生长调控密切相关。     

人CEA启动子调控ADP核糖化毒素基因治疗大肠癌

目的 应用ＡＤＰ核糖化细菌毒素基因探讨对ＣＥＡ阳性大肠癌的组织特异性基因疗法。方法 从铜绿假单孢菌基因组ＤＮＡ和质粒ｐＥＴ１５ｂ－ＤＴ中分别克隆假单孢菌外毒素Ⅱ＋Ⅲ区基因（ＰＥＡ）和白喉外毒素Ａ链（ＤＴＡ）基因，引入Ｋｏｚａｋ序列，终止信号和酶切位点，测序后置于ＣＥＡ启动子调控下克隆到逆转录病毒载体中。研究体外表达和裸鼠体内抗肿瘤能力。结果 体外荧光素酶共转染试验证明ＣＥＡ启动子调控的毒性基因在Ｃ     

全反式维甲酸激活人肺腺癌细胞系GLC-82中-PIG-B高度同源基因-PIGB1

目的：探讨全反式维甲酸（all-trans retinlic acid,ＡＴＲＡ）诱导肿瘤细胞分化的分子机制。方法：采用Ｓouthern和Ｎorthern杂交方法对本室用ＡＴＲＡ诱导人肺腺癌细胞ＧＬＣ－８２,经消减杂交所构建的cＤＮＡ消减文库ＰＩＧＢ１,该基因与人ＰＩＧ－Ｂ（phosphaidylinlsitol glycan of clmplementaion class Ｂ）基因高度同源,在多种胎儿组织中均有表达。结论：ＰＩＧＢ１基因可能参与ＡＴＲＡ诱导肿瘤细胞分化过程。     

PTPN6 基因对人食管鳞状细胞癌Eca109 和Yes-2 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶6（non-receptor protein tyrosine phosphatase 6,PTPN6）基因在不同食管鳞状细胞癌细胞株中的表达及其对Eca109、Yes-2 细胞恶性生物学行为的影响。方法：应用qPCR 法检测不同食管鳞癌细胞株（TE1、Eca109、Kyse150、Kyse170、Yes-2）中PTPN6 mRNA的表达水平,以pcDNA3.1-PTPN6 质粒分别瞬时转染食管鳞癌细胞株Eca109和Yes-2,应用qPCR和Wb法检测PTPN6 mRNA和蛋白的表达水平,并应用MTS、克隆形成实验、划痕实验和Transwell 法检测过表达PTPN6 基因对食管鳞癌细胞恶性生物学行为的影响。结果：PTPN6 基因在5 种食管鳞癌细胞侏中表达均明显下调（均P<0.05）。与转染空载体的对照组相比,经pcDNA3.1-PTPN6 转染后,Eca109 和Yes-2 细胞均高水平表达PTPN6（P<0.05 或P<0.01）;过表达PTPN6 基因后,Eca109 和Yes-2 细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显被抑制（均P<0.05）。结论：PTPN6 基因高表达能抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其可能是影响食管鳞癌细胞生物学特性的一个重要因素。     

增强子结合蛋白家族一个新基因的3′-非编码区序列对肝癌细胞7721生长的影响

目的观察所获得的增强子结合蛋白家族一个新基因ＨＰ８的３′┐非编码区（３′ＵＴＲ）对肝癌细胞生长的影响。方法将３′ＵＴＲ序列亚克隆至真核表达载体ｐＢＫＣＭＶ中，运用磷酸钙沉淀法转染肝癌细胞７７２１。结果观察到细胞的生长受到较明显抑制。结论表明该基因参与真核细胞转录调控，结合以前的实验结果（该基因在肝癌细胞中普遍高表达），提示该基因与细胞生长调控密切相关     

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过TRAF2活化NF-kB

目的：为了探讨ＥＢ病毒（ＥＢＶ）中ＬＭＰ１的致瘤机制,对鼻咽癌ＬＭＰ１激活重要的核转录因子ＮＦ－_ＫＢ的机制进行了研究。方法：①以ＬＭＰ１阴性的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２及表达载体（ｐＳＧ５）的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ｐＳＧＳ为对照,采用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法在稳定表达ＬＭＰ１的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中证实ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２是否直接结合形成免疫共沉淀复合物;②在ＨＮＥ２－ＬＭＰ１细胞系导入ＴＲＡＦ２表达质粒或不同剂量ＴＲＡＦ２显性负性突变体（ＴＲＡＦ２Ａ６－ ８６）表达质粒,以 ＮＦ－ｋＢ报道基因方法确定 ＬＭＰ1是否通过 ＴＲＡＦ2活化 ＮＦ－ｋＢ ;③将ＬＭＰ１（１－２３１）（ＣＴＡＲ２缺失区）或ＬＭＰ１△１８７－３５１（ＣＴＡＲＩ缺失区）及不同剂量ＴＲＡＦ２Ａ６－８６瞬时导入ＨＮＥ２中以证实ＬＭＰ１ ＣＴＡＲ１或ＣＴＡＲ２是否介导了这种效应;④以转染或未转染ＴＲＡＦ２６－８６的ＨＮＥ２－ＬＭＰ１细胞系为材料,应用免疫共沉淀－Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法,确定ＴＲＡＦ２△６－８６是否竞争性抑制ＴＲＡＦ２与ＬＭＰ１结合。结果：①在ＨＮＥ２－ＬＭＰ１中ＬＭＰ１与ＴＲＡＦ２形成复合物     

miR-375靶向SHOX2调控人食管鳞癌细胞侵袭迁移的初步研究

目的 探讨miR-375/SHOX2轴对食管鳞癌细胞侵袭迁移能力的影响,为食管鳞癌的靶向治疗寻找潜在新靶点。方法 选取对数生长期的人食管鳞癌细胞（kyse-70、kyse-30）,分别过表达以及干扰miR-375和SHOX2基因,采用克隆形成、MTT、划痕、Transwell等体外细胞功能学实验检测miR-375、SHOX2对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,通过拯救实验验证miR-375对SHOX2的靶向调控作用。结果 与对照组的kyse-70、kyse-30细胞相比,过表达miR-375或干扰SHOX2基因后的细胞增殖率、克隆形成率和Transwell细胞穿透数均降低,差异均有统计学意义（P＜0.01）;与对照组的kyse-70、kyse-30细胞相比,干扰miR-375或过表达SHOX2后的细胞增殖率、克隆形成率和Transwell细胞穿透数均升高,差异均有统计学意义（P＜0.01）;miR-375过表达后的食管鳞癌细胞SHOX2基因表达减少,而抑制miR-375后SHOX2基因表达增强。拯救实验结果显示,共转染miR-375和SHOX2后细胞增殖和侵袭能力较对照组又有所增强。结论 miR-375抑制食管鳞癌细胞增殖和侵袭;SHOX2促进食管鳞癌细胞增殖和侵袭。miR-375靶向负调控SHOX2表达,对食管鳞癌细胞的增殖和侵袭起调控作用。     

应用mRNA差异显示方法克隆维甲酸诱导的人肺腺癌GLC-82细胞分化相关基因

目的克隆维甲酸诱导的人肺腺癌ＧＬＣ８２细胞分化相关基因。方法在全反式维甲酸诱导人肺腺癌ＧＬＣ８２细胞系分化的基础上,采用ｍＲＮＡ差异显示技术,对这个细胞系以全反式维甲酸诱导前及诱导后８小时、２４小时和４天的细胞基因表达差异情况进行分析。结果在全反式维甲酸诱导前后的细胞之间存在明显的基因表达差异。有些基因经维甲酸（ＲＡ）诱导后持续表达或瞬时表达,而有些基因经ＲＡ作用后表达水平降低或完全被抑制。经克隆筛选,获得了一些经全反式维甲酸诱导激活或抑制的差异表达基因片段,对其中的３个片段进行了序列分析和同源性比较。结论全反式维甲酸具有调控分化相关基因表达与否的重要作用,由ＲＡ诱导的肿瘤细胞再分化是一个多基因参与的过程     

应用mRNA差异显示方法克隆维甲酸诱导的人肺腺癌GLC—82细胞分化 …

目的 克隆维甲酸诱导的人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞分化相关基因。方法 在全反式维甲酸诱导人肺腺癌ＧＬＣ－８２细胞分化的基础上,采用ｍＲＮＡ差异显示技术,对这个细胞系以全反式维甲酸诱导前及诱导后８小时、２４小时和４天的细胞基因表达差异情况进行分析。结果 在全反式维有后的细胞之间基因表达差异。有些基因经维甲酸（ＲＡ）诱导后持续表达或瞬时表达,而有些基因经ＲＡ作用后表达水平钷完全被抑制。经克隆筛选,获得了一     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对食管癌细胞ncRNA/mRNA表达谱的影响

目的:分析组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA处理前后,食管癌细胞株EC109中差异表达的非编码RNA(ncRNA)和mRNA表达谱,初步预测与TSA作用相关的ncRNA和mRNA。方法:采用MTT、细胞周期等方法检测TSA的效应;运用应用芯片技术分别检测TSA处理前后EC109细胞中ncRNA和mRNA表达谱变化,并对差异ncRNA和mRNA表达谱进行整合分析。结果:TSA以剂量时间依赖方式抑制细胞增殖,细胞周期阻滞和凋亡的发生。芯片检测共发现461个ncRNA和758个mRNA显著性差异表达,生物信息学分析显示差异涉及红比霉素、阿霉素代谢过程、氧化还原、核小体的装配、染色质结构组织和端粒的结构组织等。通过数据库分析预测及整合分析,得到了361个ncRNA-mRNA靶基因对。结论:差异表达的ncRNA和mRNA对TSA的生物学效应密切关联,为进一步研究基因功能及其在肿瘤中的生物学意义奠定基础。     

全反式维甲酸对胶质瘤SHG-44细胞基因表达谱的影响

背景与目的:胶质瘤有恶性进展的趋势,而诱导分化治疗可诱导高级别肿瘤的分化,使肿瘤恶性程度降低甚或转为正常。本研究旨在检测全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)处理后胶质瘤SHG-44细胞的基因表达谱改变,为进一步研究胶质瘤的基因治疗奠定基础。方法:以10μmol/LATRA处理SHG-44细胞后,提取总RNA进行反转录聚合酶链反应,并以荧光染料Cy3和Cy5标记cDNA产物,然后进行芯片杂交,检测ATRA诱导前后SHG-44细胞的基因表达谱,获得差异表达基因;随机选择数个差异基因进行Northern杂交实验,以验证cDNA微阵列的结果。结果:应用cDNA微阵列检测发现ATRA处理前后的SHG-44细胞之间存在42个差异表达基因,其中表达上调28个、表达下调14个。这42个差异表达基因按功能分为:凋亡类3个、细胞迁移和转移类3个、细胞周期与生长调节类2个、细胞骨架类2个、分化类1个、细胞代谢类5个、癌基因1个、氧化磷酸化类1个、受体与信号传导类2个、核蛋白体类3个、泛素-蛋白酶系统类2个、生长因子与细胞因子类1个及其他类相关基因16个。结论:ATRA可引起胶质瘤SHG-44细胞基因表达谱的改变,上述差异表达基因可能不仅介导药物诱导胶质瘤分化的机制,而且调节胶质瘤的演进。     

全反式维甲酸和二甲亚砜诱导人食管癌细胞wtp53基因的表达

目的探讨野生型p53(wtp53)基因表达与食管癌细胞分化相关性。方法采用全反式维甲酸(ATRA)和二甲亚砜(DMSO)诱导人食管癌Eca109细胞分化,应用甲基绿-派洛宁染色、软琼脂集落形成、原位杂交方法分别检测细胞分化和wtp53的基因表达变化。结果ATRA和DMSO作用5d后可以抑制Eca109细胞增殖,诱导细胞分化及降低集落形成率。wtp53基因表达随着Eca109细胞分化而增高。结论ATRA和DMSO可上调Eca109细胞wtp53的表达使其趋向正常细胞分化。     

Reversible upregulation of tropomyosin-related kinase receptor?B by geranylgeranoic acid in human neuroblastoma SH-SY5Y cells

All-trans retinoic acid (ATRA) plays crucial roles in cell survival and differentiation of neuroblastoma cells. In the present study, we investigated the effects of geranylgeranoic acid (GGA), an acyclic retinoid, on differentiation and tropomyosin-related kinase receptor?B (TrkB) gene expression in SH-SY5Y human neuroblastoma cells in comparison with ATRA. GGA induced growth suppression and neural differentiation to the same extent as ATRA. Two variants (145 and 95 kD) of the TrkB protein were dramatically increased by GGA treatment, comparable to the effect of ATRA. Following 6- to 8-day GGA treatment, the effect of GGA on TrkB was reversed after 2-4 days of its removal, whereas the effect of ATRA was irreversible under the same conditions. Both GGA and ATRA upregulated the cellular levels of three major TrkB messenger RNA splice variants in a time-dependent manner. Time-dependent induction of cell cycle-related genes, such as cyclin?D1 and retinoblastoma protein, and amplification of the neural progenitor cell marker, brain lipid binding protein, were suppressed by GGA treatment and were completely abolished by ATRA. ATRA and GGA induced retinoic acid receptor?β (RARβ) expression, whereas the time-dependent expression of both RARα and RARγ was abolished by ATRA, but not by GGA. Our results suggest that GGA may be able to restore neuronal properties of SH-SY5Y human neuroblastoma cells in a similar but not identical way to ATRA.     

HL-60细胞向单核系和粒系分化的比较蛋白质组学研究

背景与目的：已有研究发现NSC67657和全反式维甲酸可以诱导HL-60细胞分别向单核系和粒系分化。本研究比较分析不同诱导剂诱导HL-60细胞向单核系和粒系分化前后以及分化中的蛋白表达差异,发现与单核系和粒系分化有关的关键蛋白。方法：分别采用粒系分化诱导剂全反式维甲酸和单核系分化诱导剂NSC67657诱导HL-60细胞分化,MTT法检测细胞增殖情况：流式细胞技术分析细胞表面特异性分化抗原（CD11b／CD14）的表达,根据CD14表达情况计算细胞分化百分率;细胞化学染色对HL-60的两系分化进行验证。改良双向电泳分离技术对HL-60细胞全蛋白进行分离,PDQuest软件分析寻找差异蛋白点,基质辅助激光解吸-飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）对蛋白点进行分析,RT-PCR和免疫印迹对差异蛋白ICAT进行验证。结果：全反式维甲酸和NSC67657均抑制HL-60细胞增殖,并分别诱导HL-60细胞向粒系和单核系分化。在2μmol／LATRA和10μmol／LNSC67657作用5d后．CD11b和CD14的表达均在90％以上,细胞化学染色支持细胞两系分化的结论。蛋白质组学分析表明,HL-60细胞分别向粒系和单核系分化后,有25个差异蛋白点的变化趋势在两系分化中是相同的,有10个差异蛋白点在单核系分化后表达有差异。有15个差异蛋白点在粒系分化后表达有差异：ICAT是其中差异蛋白之一,通过基因和蛋白水平验证．发现ICAT在NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化过程中表达升高,而在粒系和非处理细胞中表达无显著性差异。结论：双向电泳／MOLDI-TOFMS对HL-60细胞分化前后细胞全蛋白进行分析．发现了一批与两系分化有关的蛋白分子．为关键蛋白的筛选及其功能研究提供了重要的启示。