血清总胆红素参考方法的建立及其不确定度评估

目的建立血清总胆红素（T-BIL）参考方法,评价其性能,并评估其测量结果不确定度。方法根据国际医学检验溯源联合委员会（JCTLM）公布的相关文献建立参考实验室内部的血清总胆红素参考方法,对方法的线性、精密度和准确度进行评估,测量结果不确定度参照GUM文件进行评估。结果总胆红素标准曲线线性方程为：Y=0．00750X=0．00308,R2=0．9999,线性范围0～200mg／L;测量血清样本的相对标准偏差（CV）小于1．0％;测量IFCC-RELA样本,结果在等效范围内,相对标准不确定度[urep（c）]小于2．0％。结论成功建立了血清总胆红素参考方法,可用于血清总胆红素项目的量值溯源和标准化,为血清总胆红素常规检测系统向参考方法／g考物质溯源提供有效途径。     

改良尿酸酶法测量程序的性能评价

目的评价改良尿酸酶法测量程序性能,并评估其测量结果的不确定度。方法根据美国临床化学协会(AACC)公布的相关文件《血清尿酸候选参考方法优化和评价》,通过标准溶液重量法改善尿酸酶法测量程序的正确度,通过多次离心改善其精密度。评估该法改良后的正确度和精密度,并依据《测量不确定度表示指南》(GUM)评估其测量结果不确定度。结果尿酸标准曲线线性方程为Y=0.005 74X+0.003 09,R~2=0.999 99。测量血清样本的相对标准偏差[变异系数(CV)]1.0%;加标回收率为98.5%~101.5%,国际临床化学和检验医学联合会(IFCC)参考实验室外部质量评价计划(RELA)样本的测量结果与靶值的偏移均在±1.5%以内,相对标准不确定度2.0%。结论改良尿酸酶法测量程序为血清尿酸常规测量系统的溯源提供了简易、有效的方法。     

血清γ-谷氨酰基转移酶参考方法在国产试剂量值溯源中的应用

目的 应用血清γ-谷氨酰基转移酶(GGT)参考方法评价国产GGT试剂的溯源性.方法 按照国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)有关GGT活性测定的要求建立参考方法;根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)系列文件对建立的参考方法的主要性能进行评价;应用建立的参考方法评价国内不同厂家的GGT试剂在罗氏Cobas 6000和日立7170A全自动生化分析仪上测定结果的溯源性,并用经参考方法定值的新鲜人血清作为校准品实现不同检测系统检验结果的一致性和可比性.结果 GGT参考方法的批内不精密度和总不精密度均<1%,与国际参考实验室外部质量评价计划样品靶值的相对偏倚在等效限内;校准前常规检测系统与参考方法GGT检测结果在医学决定水平处的最大偏倚分别达到-47.53%、-34.11%、-30.07%,平均偏倚分别为14.53%、12.88%、12.48%;使用新鲜血清作为校准品校准后,最大偏倚分别降至-17.63%、-5.88%、-4.08%,平均偏倚降至7.50%、2.70%、1.87%.结论 GGT参考方法性能符合要求.应用参考方法赋值的新鲜人血清作为校准品进行校准是实现国内不同厂家酶学试剂检验结果一致性和可比性的有效途径.     

基于离子色谱技术的血清电解质参考测量程序测定结果的不确定度评定

目的建立一种合理评定基于离子色谱技术建立的血清电解质参考测量程序测定结果不确定度的评估方法。方法参照JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》、JJF1135-2005《化学分析测量不确定度评定》、CNAS-GL06《化学分析中不确定度的评估指南》,从样本峰面积、标准溶液浓度修正因子、样本处理修正因子和测量重复性4个方面评定2014年参考实验室外部质量评价计划(RELA)-A样本中钠、钾、镁、钙离子测定结果的不确定度。结果 2014年RELA-A样本中钠、钾、镁、钙的水平分别为3 177.79、228.84、48.95、127.01 mg/L,标准不确定度分别为5.66、1.38、0.38、0.75 mg/L,扩展不确定度(k=2)分别为11.33、2.76、0.75、1.50 mg/L。结论依据国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)推荐的血清电解质参考测量程序建立的测量不确定度评定方法可满足临床实验室对血清电解质参考测量系统的要求。     

总蛋白改良参考方法的建立及其用于临床检测结果的溯源性研究

目的建立测量总蛋白(TP)参考方法,评价不同实验室TP测定结果的溯源性。方法参照美国疾病控制与预防中心推荐的参考方法及相关文件,建立37℃温浴10min的总蛋白参考方法。根据美国临床实验室标准化协会系列文件对方法的精密度、正确度、线性范围等性能进行评价。应用该参考方法对新鲜血清进行赋值作为校准品校准广州21家实验室,比较校准前、后赋值血清校准品、血清样本测定结果间的偏移,进行检验结果的可比性评价。结果改良参考方法的精密度评价样本浓度为55.48、88.68g/L的CV分别为0.56%、1.23%,标准参考物质909C与靶值的偏移为1.76%,分析测量范围上限128.69g/L。与参考方法测量结果比较,赋值血清校准品校准前平均偏移为6.38%,校准后降为1.86%,样本血清1、2校准前偏移分别为6.04%和8.71%,校准后降为-1.61%、-0.13%。结论改良的双缩脲法测量TP方法性能好,应用参考方法对新鲜血清进行赋值能够实现不同检测系统结果的溯源性。     

基于电感耦合等离子体质谱法血清钙离子检测候选参考方法的建立

目的基于电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS),建立一种检测血清钙离子的候选参考方法。方法方法学建立.将从医院收集到的血清标本以0.3%硝酸溶液直接稀释100倍,在血清标本基质溶液中添加不同浓度钙标准溶液,配制含血清基质的标准品溶液。以锗(Ge)为内标,采用标准加入法,计算血清钙离子浓度。对所建立的候选参考方法进行线性、精密度、正确度的性能评估和方法比对。结果血清钙离子浓度在0.000~20.400 mmol/L内(稀释后浓度为0.000~0.204 mmol/L)线性良好(R2>0.9999);批内不精密度为0.22%~0.47%,批间不精密度为0.64%~0.77%,总不精密度为0.98%~1.09%;检测3个浓度SRM 956d,结果均在证书要求的不确定度范围内,相对偏移分别为-0.16%,0.04%,0.23%;该方法参加2017年参考实验室外部质量评价计划(RELA),比对通过。与检验医学溯源联合委员会(JCTLM)所列参考方法进行比较,结果一致性良好。本研究所建立的候选参考方法与临床常规电极方法进行比较,具有良好的相关性。结论成功建立血清钙离子检测候选参考方法,线性范围宽、具有良好的精密度与准确度。     

血清尿酸紫外分光光度参考方法的建立及性能评价

目的以尿酸酶紫外光度法为基础,建立血清中尿酸测定的参考方法并评价其性能.方法 用新鲜患者血清样本、迈瑞常规复合校准品等对方法的精密度进行评估;用有证参考物质SRM909bⅠ和Ⅱ、IFCC参考实验室质评样本Rela A/B对方法的准确度进行初步评价,同时测定新鲜人血清并与同位素稀释质谱法进行方法学对比,验证方法准确度.结果 方法对新鲜患者血清、厂家复合校准品等不同类型样本批内不精密度CVintra小于1%,总不精密度CVt小于2%;有证参考物质SRM909bⅠ/Ⅱ测定结果均在参考值范围内,对UA参考实验室能力验证样本Rela A/B测定结果与中心值结果相对偏差小于0.5%;血清样本测定结果与同位素稀释液相质谱法可比,线性回归斜率1.005,相关系数0.999,医学决定水平处引入的相对误差小于3.25%.结论 血清尿酸紫外分光光度法已基本建立,精密度和准确度符合要求,测量结果和同位素稀释液相色谱/质谱法可比,可为常规系统尿酸溯源体系的建立和性能评估提供便捷有效的方法.     

尿素参考方法建立及在正确度验证中的应用

目的建立同位素稀释气相色谱串联质谱(isotope dilution gas chromatography tandem mass spectrometry,ID-GC/MS)测定人血清尿素(Urea)参考方法,并用于临床实验室正确度验证新鲜冰冻血清样本靶值的确立。方法参照国际检验医学溯源联合委员会推荐方法,建立本实验室Urea参考方法,采用美国国家标准和技术研究院标准参考物质(standard reference material,SRM)909c及国际临床化学协会提供的比对样本2014RELA-A和2014RELA-B考察所建方法的精密度与准确性,并将建立的参考方法用于上海地区小分子正确度验证新鲜冰冻血清Urea靶值的确立。结果参考方法测量SRM909c相对偏移为-0.25%,2014RELA-A和2014RELA-B测定结果与靶值的相对偏移分别为0.00%、-0.10%,测量不精密度≤1.5%,验证了方法的准确性和不精密度。以实验室检测结果均值为靶值,允许总误差8%为标准评价,正确度调查样品201411、201412、201511、201512的不合格率分别为4.17%、1.39%、0.00%、1.59%;若以参考方法定值结果为靶值,则正确度调查样品不合格率分别为11.11%、1.39%、1.59%、3.17%。结论建立的ID-GC/MS测定血清Urea参考方法精密度、准确性均较好,靶值的确定对实验室检测结果分析有重要意义,该参考方法的建立有望用于上海地区临床实验室正确度验证计划。     

血清肌酐参考方法的建立及其在正确度调查中的应用

目的建立同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)测定人血清肌酐的参考方法,并运用于临床实验室正确度调查新鲜冰冻血清样本靶值的确立。方法按照国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)推荐方法,建立本实验室肌酐参考方法,利用参考物质SRM909c及RELA比对样本考察所建方法的精密度与准确度,并将建立的参考方法用于上海地区小分子正确度调查新鲜冰冻血清肌酐靶值的确立。结果参考方法测量参考物质SRM909c相对偏移为0.69%,测量不精密度2%,初步验证了方法的准确度和精密度。正确度调查样本201411、201412、201421、201422酶法检测结果与参考方法测定值的相对偏移分别为14.97%、-2.77%、-1.37%、-1.92%;苦味酸法检测结果与参考方法测定值的相对偏移分别为21.39%、2.10%、6.22%、2.38%。除201411样本(为低浓度样本)外,其余样本不同常规分析系统测定的血清肌酐浓度与参考方法赋值结果的相对偏移均不超过8%。结论建立的ID-LC/MS/MS测定血清肌酐的方法精密度、准确度均较好,靶值的确定对实验室检测结果分析有重要意义,该参考方法的建立有望在上海地区临床实验室正确度计划中发挥一定作用,并建议临床实验室重视低浓度下肌酐测量的准确度和一致性。     

自建生化检测系统的性能评价

目的探讨不同检测系统间实验结果的可比性，以证实自建检测系统的试验结果的可靠性。方法按美国CLIA88能力比对检验的分析要求，比对实验应建立在检测系统的分析性能的基础上。本文分析性能评价包括不精密度，不准确度、线性，分析灵敏度（检测线），方法学比较。结果自建系统项目丙氨酸氨基转移酶（ALT）、尿素（Urea）、肌酐（Crea）、总胆固醇（TC）、血清蛋白A1（ApoA1）、人血清脂蛋白B（ApoB）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）与Roche可溯源参考检测系统试验结果相关系数〉0．975。低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）存在方法学的差异试验结果相关系数〈0．975。检测不精密度CV值满足美国CLIA88能力比对检验的质量分析要求。线性检测范围满足临床检测线性要求，特别线性高值要求。结论自建检测系统性能评价试验结果与Roche可溯源参考检测系统试验结果比对具有相关性，不确定度也相应增加。各种性能相关性满足统计学原理并不证明其具有溯源性。     

ALT和AST参考方法的建立与性能评价

目的建立测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的参考方法,并评价其主要分析性能。方法按照国际临床化学与检验医学联合会（IFCC）有关ALT和AST活性测定的要求建立参考方法,并优化其实验条件;根据美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）系列文件（EP5-A2、EP15-A、EP6-A）对建立的参考方法的精密度、准确度、线性范围等性能进行评价。结果紫外分光光度计、分析天平、pH计、电子温度计、移液器和容量瓶均检定合格,不确定度符合方法要求。温控器显示为37.2℃时,比色杯内溶液温度最接近37℃;比色杯内溶液180 s后可达到设定温度;移液器加样模式实验显示吸一档打两档,打时靠壁为精密度最佳的加样模式。ALT和AST参考方法的批内不精密度均〈1%,总不精密度均〈2%,符合精密度性能要求;日本临床化学会酶参考品及国际参考实验室外部质量评价计划样本检测结果的相对偏倚均符合设定目标;ALT和AST参考方法分析测量范围上限分别为335.8、363.6 U/L,均高于IFCC文献报道。结论ALT和AST参考方法已基本建立,精密度、准确度及线性范围等性能指标均符合方法要求,可应用于临床研究。     

血清钙测量参考方法的复现及方法学评价

目的 用火焰原子吸收光度法复现血清钙的准确测定方法并加以考察,评价其是否可以作为候选参考方法应用于临床实验室.方法 在盐酸和氯化镧存在条件下,将血清准确稀释50倍,使用处于最佳工作状态下的AA 6800原子吸收分光光度计,在波长422.67nm处测定.结果 在2个月内对2个浓度水平血清各测定6批,每批重复测定3次,批内变异系数(CV)为0.31%～0.38%;批间CV为0.16%～0.30%;总CV为0.35%～0.49%.在严格操作条件下,血清总钙测定准确度为±1%,回收率为98.9%～101.1%.实验证实,该测定方法未发现明显系统误差.基质中已知的其他成分对血清钙的测定结果无干扰.结论 火焰原子吸收光度法测定血清钙精密度高、准确度好,建议其作为测定血清总钙的候选参考方法.     

同位素稀释质谱法测定血清肌酐浓度的不确定度评定

目的探讨同位素稀释质谱法(ID-MS)测量血清肌酐浓度的不确定度评定方法。方法应用ID-MS建立测定血清肌酐浓度的参考测量程序,严格按照《测量不确定度表示指南》(简称GUM)评定不确定度,即严格根据测量模型对各不确定度分量进行详细分析和定量,加减项用绝对值、乘除项用相对值合成各标准不确定度分量;同时,用传统评定方法和蒙特卡洛方法(MCM)分别对血清肌酐浓度测量结果进行不确定度评定。结果对特定血清进行赋值,其肌酐浓度为347.4μmol/L。按照ID-MS测量模型,并严格应用GUM原理进行不确定度评定,其合成标准不确定度的相对值为0.89%,而传统方法评定结果为0.93%,较GUM法高4.8%;采用MCM评定各不确定度分量,其合成标准不确定度的相对值为0.64%,较严格GUM法低27.9%,其测量结果的95%可信区间为343.1~351.8μmol/L。结论与GUM法评定结果比较,传统评定方法结果偏高,而MCM偏低,3种评定方法存在差异。建议采用GUM法,根据测量模型对各不确定度分量进行定量和合成。有条件的话,可用MCM评定不确定度。     

丙氨酸氨基转移酶检测方法确认

目的对献血者的丙氨酸氨基转移酶(ALT)采用速率法进行检测,并对这种方法进行性能验证,证明其满足ISO15189的要求。方法按照CNSA-CL02:2012《医学实验室质量和能力认可准则》及《血站技术操作规程》(2012版)的要求对检测系统的精密度、正确度、灵敏度、可报告范围、生物学参考区间以及测量不确定度进行验证。结果 ALT质控血清和两个浓度献血者标本检测20次和20d的批内不精密度5.0%,批间不精密度6.7%;正确度估计通过2014年的原卫生部室间质评结果分析和校准品结果分析,相对偏倚均小于1/2CLIA′88允许总误差;可报告范围用直线回归得到回归方程Y=0.995 1 X-5.618 4,r=0.999 7(R2=0.999 4),该检测范围内结果准确;生物学参考区间为0.0~32.7U/L;测量不确定度为(74.90±3.32)U/L。结论 ALT检测方法的性能指标均符合ISO15189的预期要求,该方法可以作为实验室的血液筛查检测方法。     

Criteria for evaluating nonquantitative assays: application to serum choriogonadotropin

We present guidelines for assessing the performance of nonquantitative (qualitative) assay methods. Criteria to be evaluated include analytical sensitivity, imprecision near limits of detection, analytical specificity, accuracy over a wide range of analyte concentrations, potential interferents, and technical ease of performance. A protocol was developed to evaluate several nonquantitative assay kits for detection of human choriogonadotropin (hCG) in serum. These include Tandem Icon HCG (Hybritech), Quest Pregnancy Test (Quidel), Concep-7 beta hCG (Leeco), and Beta Quik V (Pacific Biotech). Quantitative measurement of beta-hCG by RIA (Immophase beta hCG, Corning Medical) was used as the reference method. Results of this evaluation are discussed. The guidelines established and utilized in this report are adaptable to the evaluation of assay kits that measure other analytes by qualitative techniques.     

电化学发光免疫分析法检测血清雌二醇的性能验证

目的评估电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测血清雌二醇(E₂)的性能。方法应用相关标准评价ECLIA检测E₂的正确度、精密度、分析测量范围、临床可报告范围、功能灵敏度及生物参考区间。结果5个批号质控品实测值与靶值的相对偏移均在可接受范围内(≤±25%),正确度验证通过。低水平质控品批内和批间变异系数(CV)分别为1.40%和1.80%,高水平质控品批内和批间CV分别为0.80%和0.86%,符合国家临床检验中心室间质量评价标准及基于生物学变异设定的质量规范,精密度验证通过。E₂检测结果在17.8~11992.0 pmol/L范围内呈线性,证明厂家提供的分析测量范围(18.4~11010.0 pmol/L)符合要求。临床可报告范围上限为110100.0 pmol/L,最大稀释倍数为10倍,功能灵敏度为43.5 pmol/L,符合验证要求。生物参考区间符合可接受标准。结论ECLIA检测血清E₂的各项性能基本满足实验室要求,可为临床提供可靠的检测结果。     

Evaluation of simultaneous measurement of lutropin and follitropin with the SimulTROPIN radioimmunoassay kit

We evaluated the analytical performance of the "SimulTROPIN" (Becton-Dickinson Inc.) radioimmunoassay for the simultaneous measurement of lutropin (LH) and follitropin (FSH) in human serum. Dose response, linearity, analytical recovery, sensitivity, and reagent stability were all acceptable. Cross reactivity with other structurally related hormones [choriogonadotropin (CG) and thyrotropin (TSH)] was minimal. A normal reference interval was established for nonmidcycle, ovulatory women. We confirm the low degree of CG and TSH cross reactivity with LH and FSH reported by Becton Dickinson and conclude that this assay is an acceptable method for laboratory use in the simultaneous quantification of these analytes.     

梅毒螺旋体荧光定量PCR检测方法的建立和初步临床应用

目的 建立一种利用MGB-Taqman探针的快速、灵敏、特异、准确定量检测梅毒螺旋体的方法。方法选择梅毒螺旋体的基因组的保守区域，设计合成引物和MGB-Taqman探针，构建质粒标准品pMD18-T-TP．优化定量PCR反应体系，并进行方法学评价。结果1）成功构建了重组质粒pMD18-T-TP。2）建立了利用MGB-Taqman探针的荧光定量PCR方法，其线性范围：10^1～10^10％opies／μl；灵敏度：10copies／μl；重复性：批内CV为2．02％，批间CV为2．83％，日间CV为4．23％；特异性：100％。3）初步临床应用证明：该方法比血清学检测方法灵敏度更高，假阳性率低。结论利用MGB-Taqman探针定量检测梅毒螺旋体的方法灵敏度高，特异性高，操作简便，适合临床检验诊断的要求。     

国际临床化学联合会酶学测定参考方法实验室网络的初步建立

目的 总结我国实验室运行国际临床化学联合会(IFCC)酶学测定参考方法情况和参加IFCC参考实验室室间质评(RELA)结果,了解我国酶学参考测量水平.方法 目前国内有8家实验室运行全部或部分IFCC酶学参考方法.各实验室按IFCC参考方法建立测量程序,评价各自程序的精密度与准确性,精密度评价按美国临床和实验室标准协会(CLSI)EP-5进行,准确度评价采用国际有证参考物质.7家实验室参加2006年RELA.结果 各实验室目前能达到的批内变异系数(CV)均在1.5%以内,批间精密度在2%以内.部分实验室进行了有证参考物质分析,测定结果偏倚在给定的不确定度范围内.我国酶学实验室在2006年RELA中具有与除外组相似的室间CV,只是样本A乳酸脱氢酶(LDH)及样本B ALT的室间CV较大,但剔除可能离群值后室问CV与除外组相似.结论 中国酶学实验室经过5年的发展,现在无论从硬件配置还是技术力量上均已接近国外同类实验室,我国临床酶学参考实验室网络已初步建立.