Shh、Gli1在脂多糖致小鼠急性肺损伤中的表达及与NF-κB的关系

目的 探讨Sonic hedgehog(SHH)信号通路中Shh、Gli1及核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤中的表达变化。方法 脂多糖腹腔注射复制小鼠急性肺损伤模型,实验动物随机分为实验组(脂多糖5 mg/kg)和对照组。分别于给药后6、12、24 h取肺组织,观察肺组织病理改变、肺湿干重比值(W/D)、RT-PCR和Western blot检测Shh、Gli1的m RNA和蛋白表达,Western blot检测NF-κB的蛋白表达。结果 实验组肺组织病理损伤评分及W/D比值明显高于对照组(P<0.05)。Shh的m RNA表达水平在各时间点均高于对照组(P<0.05),且与时间呈正相关(P<0.01)。6 h时Gli1的m RNA表达水平与对照组无明显差异(P>0.05),12、24 h时明显高于对照组(P<0.01),且与时间呈正相关(P<0.01)。与对照组相比,实验组6、12、24 h时Shh、Gli1的蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),且与时间呈正相关(P<0.01)。NF-κB的蛋白表达在各时间点均明显高于对照组(P<0.05)。结论 脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤中Shh、Gli1表达上调可能是脂多糖通过调控NF-κB来实现的。     

急性胰腺炎中Gli1 介导的炎性细胞因子的表达变化及意义

目的:探讨在急性胰腺炎中通过调控Gli1 信号后观察炎性细胞因子IL-6 的表达变化及意义。方法:本实验将C57 小鼠随机分为3 组:对照组、模型组、抑制组。雨蛙素腹腔注射诱导急性胰腺炎模型,HE 染色、检测淀粉酶水平证明模型造模成功,用RT-qPCR、Western blot 检测Gli1 在胰腺、肝、小肠、肺、肾组织的表达。用ELISA 方法检测炎性细胞因子IL-6。结果:雨蛙素腹腔注射诱导急性胰腺炎模型,HE 染色、检测淀粉酶水平证明模型造模成功,用RT-qPCR、Western blot 检测Gli1在胰腺、肝、小肠、肺、肾组织的表达。用ELISA 方法检测炎性细胞因子IL-6。与对照组相比较,雨蛙素注射后的模型组各个组织(胰腺、肝、小肠、肺、肾组织)Gli1 表达较对照组升高,再用Gant61(Gli 特异性抑制剂)抑制Gli1 后可见抑制组IL-6 表达较模型组升高。结论:在急性胰腺炎症过程中,Gli1 可能参与了AP 过程中远隔组织损伤和修复过程,且gli1 可能通过调控其下游的炎性细胞因子IL-6 而发挥保护作用。     

Shh/Gli1信号参与小鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障渗透性改变及运动功能恢复

目的:探讨sonic hedgehog/Gli1(Shh/Gli1)信号在小鼠脊髓损伤后病理变化及运动功能恢复中的作用。方法:成年雄性C57野生型、Gli1lz和Gli1lz/lz小鼠行T8节段脊髓夹伤及假手术。Gli1lz小鼠脊髓损伤及假手术后3 d行X-gal染色;7 d行Shh/PDGFr-α、Shh/GFAP、LacZ/GFAP染色,观察Shh/Gli1信号在小鼠脊髓损伤后的激活。C57野生型和Gli1lz/lz小鼠脊髓夹伤后7 d行GFAP染色和实时定量RT-PCR,观察星形胶质细胞反应;术后14 d尾静脉注射伊文氏兰观察血-脊髓屏障改变;术后1、3、5 d和7 d行BMS评分评价小鼠后肢运动功能。结果:脊髓损伤7 d后,损伤区Shh表达升高;Shh/Gli1信号报告基因LacZ表达升高,主要表达于反应性星形胶质细胞;免疫组织化学及实时定量RT-PCR结果显示Gli1基因敲除不影响脊髓损伤后GFAP表达;伊文氏兰染色及其定量分析显示Gli1lz/lz小鼠脊髓损伤后脊髓组织伊文氏兰外渗增加。BMS评分显示Gli1lz/lz小鼠运动功能恢复显著差于野生型小鼠。结论:Shh/Gli1信号在小鼠脊髓损伤后激活,可能参与脊髓损伤后血-脊髓屏障渗透性的改变,并影响脊髓损伤后的运动功能恢复。     

Hh信号通路因子Shh、Ptch1和Gli1在大黄蛰虫丸抗大鼠肝纤维化中的表达及调节作用

目的探讨大黄蛰虫丸(DZP)对CCl4诱导肝纤维化大鼠肝脏Hedgehog(Hh)信号通路因子Shh、Gli1、Ptch1的影响及其机制。方法选SD雄性大鼠30只,体质量180～200 g,随机分为对照组(N组)、模型组(M组)和灌药组(D组)。后2组行CCl_4诱导肝纤维化造模,8周后D组、C组大鼠分别给予DZP药液灌胃,NG组大鼠给予等量生理盐水。连续灌胃4周后,断头处死各组大鼠,摘取肝脏,应用HE和Masson染色法检测各组别大鼠肝组织纤维化程度;应用Western blot和RT-PCR法分别检测各组大鼠肝组织Hh信号通路因子Shh、Ptch1、Gli1的蛋白及基因表达水平,用Quantity One图像分析软件进行条带光密度分析,计算光密度值(A值)。结果 M组大鼠肝纤维化明显,而D组大鼠肝的纤维化程度显著改善。Hh信号通路因子Shh、Ptch1、Gli1的基因和蛋白表达水平检测结果显示:与N组相比,M组大鼠肝组织中三者的A值均显著上调(P<0.05);而与M组相比,D组大鼠肝组织中三者的A出现显著下调(P<0.05),数据表明大鼠肝纤维化造模成功后,给予DZP干扰,后者可能通过抑制Shh、Gli1、Ptch1的基因和蛋白表达,从而抑制了肝纤维化过程中异常激活的Hh信号通路。结论 DZP可能通过抑制异常激活的Hh信号通路来逆转大鼠肝纤维化。     

Shh基因在胚胎发育过程中的调控作用

在胚胎发育过程中,hh(hedgehog)基因参与编码和调控长、短信号途径.Echelard等[1]研究发现:在果蝇和其它一些无脊椎动物体内只有一种hh基因;在脊椎动物体内则有同源hh基因;而在哺乳动物体内则有3种hh基因,它们分别是Shh、Ihh和Dhh.     

尿胰蛋白酶原—2在急性胰腺炎检测中的意义

临床上诊断急性胰腺炎常常检测血 /尿淀粉酶 ,但该检测的敏感性和特异性不尽人意。近来 ,芬兰ＭｅｄｉｘＢｉｏｃｈｅｍｉ ｃａ公司推出层析法尿胰蛋白酶原 2快速检测试纸 ,被许多专家推荐为急性胰腺炎筛选试验[1,2 ] 。我们将层析法尿胰蛋白酶原 2快速检测试纸用于急性胰腺炎诊断 ,并与血 /尿淀粉酶检测进行比较。1　材料和方法6 9例患者 (46例男性 ,2 3例女性 )为 1999年 10月～2 0 0 0年 10月因急性腹痛于邮电总医院急诊室就诊患者 ,平均年龄 42岁 (18～ 6 7岁 )。尿胰蛋白酶原 2测定 :采用芬兰ＭｅｄｉｘＢｉｏｃｈｅｍｉｃａ公司生产…     

Shh/Ihh在小鼠胚胎椎间盘形成过程中的表达

文题释义：Shh,Ihh：哺乳动物Hedgehog基因存在3种同源基因,分别为Sonic Hedgehog,India Hedgehog以及Desert Hedgehog,分别编码Shh,Ihh以及Dhh蛋白。它们在胚胎的发育、成体组织和器官干细胞的自我更新与增殖过程中发挥重要的作用。他莫昔芬：是一种选择性雌激素反应调节剂。当向CreER^T2小鼠体内注射他莫昔芬时,由他莫昔芬代谢所产生的雌激素类似物与ERT结合,从而使CreER^T2进入细胞核内发挥Cre重组酶活性。背景：研究表明,Sonic Hedgehog(Shh)在小鼠脊索细胞内有表达,India Hedgehog(Ihh)主要在小鼠胚胎椎体的软骨样细胞以及后期形成的终板中表达。但关于Shh以及Ihh在小鼠胚胎椎间盘形成过程中的表达情况并不清楚。 目的：探究Shh和 Ihh信号在小鼠胚胎椎间盘形成过程中的表达。 方法：将雄性的Shh-CreER^T2; R26-mTmG/+小鼠与雌性R26-mTmG/+小鼠进行交配,获取不同时期(E8.5,E11.5,E12.5,E14.5,E16.5,E18.5)的孕鼠,注射10 g/L的他莫昔芬10 μL/g。当小鼠胚胎处于P0时,取小鼠胚胎椎间盘组织进行基因型鉴定;同时将雄性的C57BL/6小鼠与雌性的C57BL/6小鼠进行交配,获取不同时期(E11.5,E12.5,E14.5,E16.5,E18.5)的孕鼠,取小鼠胚胎椎间盘组织进行分析。通过免疫荧光法检测Shh信号在小鼠胚胎椎间盘形成过程中的表达;免疫组织化学法检测Ihh信号在小鼠胚胎椎间盘形成过程中的表达。所有涉及动物的相关实验均获得苏州大学动物伦理委员会的批准。 结果与结论：①经PCR扩增筛选出基因型为Shh-CreERT2; R26-mTmG/+小鼠胚胎;②免疫荧光染色结果显示,在椎间盘形成过程中,髓核细胞内Shh表达水平逐渐降低;③免疫组织化学染色结果显示,在椎间盘形成过程中,髓核细胞内Ihh表达水平逐渐升高;④结果表明Shh和Ihh在椎间盘形成过程中均发挥调控作用,在一定程度上为研究椎间盘退变的分子机制奠定基础。 ORCID: 0000-0001-9429-2339(巩婷婷) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

血浆ET与ANF在急性胰腺炎早期发病中的作用及意义

目的探讨内皮素(ET)与心钠素(ANF)在急性胰腺炎(AP)早期发病中的作用及临床意义.方法采用放射免疫分析测定急性发病期(24～48)h轻症急性胰腺炎(MAP)35例,重症急性胰腺炎(SAP)17例和正常对照组(NC)30例的血浆内皮素与心钠素的含量.Imrie评分＞3分,APACHE Ⅱ评分≥8分者为SAP.结果SAP患者Imrie评分和APACHE Ⅱ评分明显高于MAP患者(P＜0.05,P＜0.01).SAP患者血浆ET水平(59.20±10.69)pg/ml明显增高,MAP患者血浆ET水平(34.20±9.44)pg/ml明显降低,两组之间比较以及与NC组比较具有非常显著差异(P＜0.001).SAP和MAP患者血浆ANF分别为(155.76±34.24)pg/ml,(181.59±58.15)pg/ml,与NC组(165.51±57.16)pg/ml比较无明显变化(P＞0.05).结论ET可能参与了SAP早期胰腺微循环障碍,对胰腺组织具有内源性损伤作用.提示早期给予拮抗ET或ET-A受体的药物,可能有利于减轻胰腺组织损害,改善胰腺微循环,防止胰腺出血坏死性改变.ANF可能对AP早期的胰腺血循环无明显影响.     

胶质瘤相关癌基因1在肝细胞癌中的表达及其与Shh、Vimentin、E-cadherin蛋白的相关性研究

目的:研究胶质瘤相关癌基因1( Gli1)在肝癌中的表达及其与肝癌临床病理特征之间的关系,探讨Gli1表达与sonic hedgehog通路配体Shh、EMT标记物Vimentin以及E-cadherin表达的相关性,由此分析其在肝癌EMT过程中的作用.方法:收集63例肝细胞癌组织及相对应的癌旁组织应用免疫组化,RT-PCR法检测Gli1在肝细胞癌及癌旁组织中的表达情况,同时应用免疫组化法检测Hedgehog信号通路配体Shh、EMT标记物Vimentin以及E-cadherin在肝细胞癌及癌旁组织中的表达情况,使用Mann-Whitney U检验分析肝细胞癌组织与癌旁正常组织Gli1的mRNA含量以及蛋白表达差异.使用卡方检验分析Gli1蛋白在肝细胞癌组织中的表达与患者临床特征的关系.使用Spearmen秩检验分析肝细胞癌组织中Gli1蛋白表达分别与Shh、Vimentin及E-cadherin这三种蛋白表达的关系.结果:肝细胞癌组织中Gli1蛋白及mRNA含量明显高于癌旁正常肝组织;Gli1蛋白表达分别与肿瘤肝内转移或淋巴结转移(x2=6.205,P＜0.05)、门静脉侵袭(x2=4.014,P＜0.05)、高Edmonson病理分级(x2=19.668,P＜0.05)以及TNM肿瘤分期较晚(x2=7.091,P＜0.05)有关;肝细胞癌组织中Gli1蛋白表达与Shh(r=0.574,P＜0.05)、Vimentin蛋白(r=0.467,P＜0.05)表达呈明显正相关,而与E-cadherin蛋白(r=-0.439,P＜0.05)呈负相关.结论:Gli1在肝细胞癌中表达增加,且与肝癌侵袭转移有关的临床病理特征具有相关性,Gli1可能在Shh配体的作用下激活Hedgehog信号通路,并可能诱导肝癌发生与侵袭转移相关的EMT过程.     

Shh和Ptch在胃癌中的表达及其临床意义

目的检测Shh、Ptch在胃癌中的表达,分析其与临床病理特征的关系,探讨二者在胃癌发生发展的作用。方法采用免疫组化法检测116例胃癌、50例正常胃粘膜中Shh、Ptch的表达。结果 Shh和Ptch在胃癌中高表达,且与肿瘤直径、浸润深度、分化程度、淋巴结转移及预后相关(P<0.05)。二者表达呈正相关。结论 Shh和Ptch的表达上调可能与胃癌的发生发展有关,并起协同作用。     

小鼠对雨蛙肽诱发急性胰腺炎易感性的品系差异

目的: 小鼠是常用于胰腺炎研究的模式动物。然而不同品系的小鼠似乎对胰腺炎有着不同的易感性,但缺乏系统的对比研究。我们因此比较了C57BL/6J、BALB/c和ICR 小鼠对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎易感性的差异。方法: 2月龄C57BL/6J、BALB/c和ICR雌鼠各12只,随机分为实验组(n=6)和对照组(n=6)。实验组予以腹腔注射雨蛙肽(50 μg/kg),每小时1次,共注射7次;对照组同法注射等量生理盐水。分别于第1次注射后的0、3、6、9、12、24 h取小鼠血浆,并于24 h处死小鼠取其胰腺组织。测定各组小鼠的血浆淀粉酶和脂肪酶活性;观察其胰腺组织的病理形态学改变程度及炎症因子表达水平。结果: 雨蛙肽诱导胰腺炎后,BALB/c和ICR小鼠的血浆淀粉酶和脂肪酶水平较C57BL/6J小鼠升高更为显著;C57BL/6J小鼠与其它2种品系的小鼠相比,其胰腺病理形态学改变程度较轻,胰腺组织炎症因子表达水平也较低。结论: BALB/c和ICR小鼠对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎的敏感性比C57BL/6J小鼠高。这一结果对急性胰腺炎研究中小鼠品系的合理选择具有指导意义。     

应激因子在急性胰腺炎中的研究进展

急性胰腺炎(AP)是威胁人类生命健康的常见疾病,氧化应激能抑制胰腺腺泡细胞分泌、激活细胞内蛋白酶和促进应激因子释放,最终导致胰腺细胞发生凋亡和器官功能障碍.急性、慢性应激因子在急性胰腺炎的发生、发展过程中呈现截然相反的作用,其机制仍需进一步实验研究.     

Hypocalcemia in acute pancreatitis revisited

Hypocalcemia is a frequent finding in acute pancreatitis. Severe hypocalcemia can present with neurological as well as cardiovascular manifestations. Correction of hypocalcemia by parenteral calcium infusion remains a controversial topic as intracellular calcium overload is the central mechanism of acinar cell injury in pancreatitis. The current article deals with the art and science of calcium correction in pancreatitis patients.     

重症急性胰腺炎坏死组织清除术的体会

目的 探讨重症急性胰腺炎坏死组织清除术适应症和方式。方法 回顾性分析我院1986年至1998年间收治的重症急性胰腺炎坏死组织清除术的37例患者,A组早期手术22例,B组感染性坏死手术15例。结果 感染性坏死手术组的并发症率和死亡率显著低于甲期手术组。结论 手术适应症和时机的选择是重症急性胰腺炎治疗的关键。     

粉防己碱对急性胰腺炎大鼠血清灌注的离体大鼠胃的保护作用及其机制

目的:研究急性胰腺炎(AP)大鼠血清对带血管灌流的离体大鼠胃内、外分泌功能的影响以及粉防己碱(Tet)的干预作用及其机制。方法:采用大鼠胆胰管逆行注射3%去氧胆酸钠复制AP模型,造模后5 h取动物血清。制备带血管灌流的离体大鼠胃, 经胃动脉输注AP血清, 并用Tet干预。从门静脉收集流出液,检测其中胃泌素、生长抑素、白细胞介素6(IL-6)及细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子1(CINC-1)水平的变化。同时从食管下段经贲门插管灌注生理盐水,从幽门收集流出液检测其中胃蛋白酶及胃酸分泌的变化。结果:AP大鼠胰腺组织破坏严重,胃壁出现多处糜烂、出血和溃疡,血清淀粉酶活性明显升高。用此AP血清灌流可引起离体胃胃泌素分泌增多,生长抑素分泌减少,IL-6和CINC-1分泌也增加,同时胃腔流出液中胃酸和胃蛋白酶含量增加。Tet可一定程度逆转AP血清刺激引起的胃泌素、胃酸和胃蛋白酶分泌的增多以及生长抑素分泌的抑制, 减少炎症介质的释放(P<0.05),减轻胃黏膜损伤。结论:急性胰腺炎相关的胃损害与炎症血清有害成分的刺激有关。Tet可干预AP血清刺激所致的离体大鼠胃内、外分泌功能的改变,从而发挥对胃的保护作用。     

The fusion of autophagosome with lysosome is impaired in L-arginine-induced acute pancreatitis

Background & aims: Acute pancreatitis is an inflammatory pancreatic disease that carries considerable morbidity and mortality. The pathogenesis of this disease remains poorly understood. We investigated the incidence of autophagy in mice following induction of acute pancreatitis. Methods: Mice were received intraperitoneal injections of L-arginine (200 mg × 2/100 g BW), while controls were administered with saline. Pancreatic tissues were assessed by histology, electron microscopy and western blotting. Results: Injection of L-arginine resulted in the accumulation of autophagosomes and a relative paucity of autolysosomes. Moreover, the autophagy marker p62 is significantly increased. However, the lysosomal-associated membrane protein-2 (Lamp-2), a protein that is required for the proper fusion of autophagosomes with lysosomes, is decreased in acute pancreatitis. These results suggest that a crucial role for autophagy and Lamp-2 in the pathogenesis of acute pancreatitis. Conclusions: Our data suggest that the autophagic flux is impaired in acute pancreatitis. The depletion of Lamp-2 may play a role in the pathogenesis of acute pancreatitis.     

Diagnostic value of immunoreactive phospholipase A2 in acute pancreatitis

Summary In a prospective clinical trial 85 patients with acute pancreatitis were analysed for serum total amylase, pancreatic amylase, pancreatic lipase, trypsin, elastase 1, and immunoreactive phospholipase A₂ (IR-PLA₂). The diagnostic sensitivity of serum IR-PLA₂ was comparable to that of serum total amylase, pancreatic amylase, and trypsin. The specificity of IR-PLA₂ is superior to that of serum total amylase determination due to the fact that the IR-PLA₂ determination is based on an antibody against human pancreatic PLA₂.     

Hedgehog信号在胰腺炎症损伤中的作用机制

Hedgehog信号通路广泛参与多种器官急慢性炎症损伤、细胞再生和组织修复.尽管急性胰腺炎和慢性胰腺炎发病机制各异,在炎症损伤的同时,组织的自身修复和再生机制必然启动.国内外的研究已经证实,Hedgehog信号通路与其他信号通路发生交联反应,参与调节胰腺炎症程度、细胞再生以及纤维化,干预Hedgehog信号通路明显影响胰腺炎症进程和纤维化的程度.