大黄素自身抑制血管平滑肌细胞迁移和增殖

目的探讨大黄素对血管平滑肌细胞迁移和增殖的作用以及大黄素在血管平滑肌细胞中是否存在代谢过程。方法采用Transwell迁移系统和MTT法观察大黄素对血管平滑肌细胞迁移和增殖的影响。结果大黄素能显著抑制平滑肌细胞迁移,5μg/mL大黄素抑制率为83·3%;大黄素呈浓度和时间依赖性抑制平滑肌细胞增殖。然而,血管平滑肌细胞作用24h后,上清液中的大黄素浓度并无显著降低;细胞色素p450氧化酶诱导剂或者抑制剂没有改变大黄素的细胞毒性作用或者细胞内活性氧水平。大黄素的主要代谢酶(细胞色素p450氧化酶)基因表达水平没有显著的上调。结论大黄素能够抑制血管平滑肌细胞的迁移和增殖,并且不被平滑肌细胞代谢,可能作为药物涂层支架的药物。     

β_1肾上腺素受体激动对血管平滑肌细胞迁移的影响

目的观察β_1肾上腺素受体(β_1-AR)激动对血管平滑肌细胞(VSMC)迁移的影响。方法选择原代培养的Wistar大鼠胸主动脉VSMC并分7组:5%FBS组(对照组)、去甲肾上腺素(NE)刺激组(A组)、NE+β_1-AR阻断剂组(B组)、异丙肾上腺素(ISO)刺激组(C组)、ISO+β_1-AR阻断剂组(D组)、NE+蛋白激酶A阻断剂组(E组),NE+蛋白激酶抑制剂组(F组)。各组不同条件持续培养24 h后,以细胞划片法观察各组VSMC迁移距离的变化。另选VSMC加入10~(-4)～10~(-7)mol/L浓度NE刺激,观察其对细胞迁移效率的影响。结果与对照组比较,A组、C组VSMC迁移距离明显缩短,差异有统计学意义(P<0.01)。B组、D组迁移距离与对照组比较,差异无统计学意义。随着NE浓度增加,VSMC迁移距离逐渐缩短,NE对于VSMC迁移的抑制效应呈剂量依赖性。F组VSMC相对迁移距离与A组比较,差异无统计学意义。结论β_1-AR激动可抑制VSMC迁移,此过程不依赖蛋白激酶A的激活。     

凝血酶对大鼠血管平滑肌细胞血小板源生长因子受体基因表达的影响

为了研究凝血酶对血管平滑肌细胞血小板源生长因子受体基因表达的影响 ,探讨凝血酶刺激血管平滑肌细胞增殖的机制 ,通过培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,用斑点杂交检测凝血酶对血管平滑肌细胞血小板源生长因子受体mRNA的表达。结果发现培养的血管平滑肌细胞在基础状态下可表达血小板源生长因子α受体和 β受体mRNA ,凝血酶在作用于血管平滑肌细胞 2～ 12h抑制了血管平滑肌细胞血小板源生长因子α受体 β受体mRNA的表达 ,2 4～ 48h后血管平滑肌细胞血小板源生长因子α受体 β受体mRNA的表达恢复到基础状态。提示凝血酶对血管平滑肌细胞具有较强的促增殖作用 ;凝血酶显著降低了血管平滑肌细胞血小板源生长因子α受体 β受体mRNA的表达     

大鼠胸主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定

目的探讨以简便、高效的方法获取血管平滑肌细胞,为相关研究提供实验材料。方法采用组织贴块法进行原代培养,胰酶消化法传代,并应用相差显微镜和平滑肌肌动蛋白对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果90%的组织块接种存活,培养5代的平滑肌细胞纯度达98%以上。镜下可见培养细胞呈典型的“峰-谷状”样生长,免疫组化染色显示胞浆内平滑肌肌动蛋白阳性表达。结论本法简便、可靠,短期内可获大量高纯度、功能良好的血管平滑肌细胞,可作为研究心血管疾病良好的体外模型。     

齐墩果酸对过氧化氢诱导血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的研究齐墩果酸(OA)对H_2O_2诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响。方法采用贴块法培养大鼠主动脉VSMCs,随机分为对照组、H_2O_2组、H_2O_2+OA组、阻断剂组。采用Hoechst 33342染色和Annexin V/FITC染色检测各组细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞中磷酸化Akt蛋白表达变化。结果与对照组比较,H_2O_2组细胞凋亡率明显升高,p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.05);与H_2O_2组比较,H_2O_2+OA组细胞凋亡率明显降低,p-Akt蛋白表达明显升高(P<0.05);与H_2O_2+OA组比较,阻断剂组细胞凋亡率明显升高,p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.05)。荧光显微镜显示,对照组细胞核呈蓝色,H_2O_2组细胞核呈致密浓染,H_2O_2+OA组细胞核呈蓝染,有少量细胞核致密浓染,阻断剂组细胞核呈致密浓染。结论 OA能减轻H_2O_2导致的VSMCs凋亡,其机制可能与激活细胞内磷脂酰肌醇-3激酶/Akt信号通路引起下游促生存基因的表达有关。     

黏着斑激酶对血小板源性生长因子刺激的血管平滑肌细胞迁移和黏附的调控

目的探讨黏着斑激酶(FAK)信号分子在雷帕霉素抑制血小板源性生长因子(PDGF)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)迁移、黏附中的调控作用。方法将培养的大鼠VSMC分为对照组、PDGF组、雷帕霉素+PDGF组(雷帕霉素组)和FAK反义寡核苷酸+PDGF组(FAK组)。用PDGF诱导VSMC的迁移和黏附,计数贴壁细胞;采用Boyden检测细胞迁移;采用RT-PCR、Western blot、免疫沉淀方法分别检测FAK基因、蛋白及蛋白磷酸化表达量。将FAK反义寡核苷酸经脂质体转染VSMC,观察FAK mRNA及蛋白磷酸化、细胞迁移和黏附的变化。结果与对照组比较,PDGF组明显诱导细胞迁移和黏附,上调FAK mRNA的表达,提高FAK蛋白和磷酸化FAK表达,差异有统计学意义(P0.05),与PDGF组比较,FAK组和雷帕霉素组细胞迁移、黏附能力减弱,FAK mRNA、FAK蛋白和磷酸化FAK表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 PDGF诱导细胞迁移和黏附可能是FAK介导的,雷帕霉素可能是通过抑制FAK蛋白和磷酸化FAK来抑制VSMC的迁移和黏附。     

白藜芦醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　观察白藜芦醇 (resveratrol,Res)对体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)的增殖、DNA合成及细胞凋亡的影响 ,并探讨其机制。方法　体外培养大鼠主动脉VSMC ,分为不同浓度的Res组及对照组。观察细胞生长曲线 ;四甲基偶氮唑盐 (MTT)微量酶反应法检测细胞活性 ;3H 胸腺嘧啶脱氧核苷 (3H TdR)掺入法观察其对DNA合成的影响 ;HE染色 ,DNA梯带检测及流式细胞术检测细胞凋亡。结果　与对照组比较 ,本研究各浓度Res组VSMC计数均有不同程度的减少 ,3H TdR掺入率明显降低 ,细胞增殖受抑制 ,VSMC凋亡增加 ,并呈浓度依赖性。结论　Res对体外培养的大鼠主动脉VSMC增殖有明显的抑制作用 ,可能是通过抑制细胞DNA合成 ,诱导细胞凋亡等途径发挥作用     

血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞弗林蛋白酶表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)弗林蛋白酶表达的影响,初步探讨在高血压中,AngⅡ导致纤维化病变形成的作用机制。方法选择体外培养大鼠VSMCs,按实验方案给予不同浓度AngⅡ作用24 h后,采用实时定量PCR和Western blot法,检测各组细胞弗林蛋白酶mRNA及蛋白的表达量;用荧光分析法检测各组弗林蛋白酶的活性。本实验共分为5组;对照组、AngⅡ10~(-7)mol/L组、AngⅡ10~(-6)mol/L组、AngⅡ10~(-5)mol/L组、AngⅡ10~(-4)mol/L组。结果与对照组比较,不同浓度AngⅡ组弗林蛋白酶mRNA表达量及活性均明显升高,AngⅡ10~(-5)mol/L组和AngⅡ10~(-4)mol/L组升高更明显,AngⅡ10~(-4)mol/L组达到最大值(P<0.05,P<0.01)。结论 AngⅡ能够促进大鼠VSMCs中弗林蛋白酶的表达,AngⅡ可能通过促进弗林蛋白酶的表达,使活性转化生长因子β产生增加从而促进纤维化病变的形成。     

肝细胞生长因子受体在血管平滑肌细胞增殖凋亡中的表达

目的研究球囊扩张术后血管平滑肌细胞(VSMCs)中肝细胞生长因子(HGF)及其受体(c-Met)mRNA表达的变化,明确HGF受体与VSMCs增殖凋亡分子机制的相关性。方法用逆转录聚合酶链式反应检测36只兔腹主动脉球囊损伤前后不同时间点VSMCs中c-Met的mRNA表达水平;体外实验将选择性c-Met蛋白抑制剂NK-4作用于免VSMCs,运用MTF分别于0、24、48及72h检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察NK-4对细胞凋亡的影响,进一步采用Western blot检测药物作用前后细胞周期蛋白(Cyclin D1)、凋亡蛋白(Bcl-2)的表达。结果球囊损伤后VSMCs c-Met mRNA的表达水平明显高于正常VSMCs(P＜0．01),平均为对照组2．42倍;对照组S及G_2/M期DNA百分含量与处理组比值分别为1．31,1．62(P＜0．01),NK-4呈时间、剂量依赖性方式抑制VSMCs增殖,促进其凋亡。72h时对照组与NK-4(1．0mg/L)处理组Cyclin D1、Bcl-2表达水平比值分别为2．37和3．81(P＜0．01),故两者表达水平随NK-4作用时间延长而下降。结论c-Met在球囊扩张术后血管平滑肌细胞中高表达可能在VSMCs过度增殖、凋亡受阻中起重要作用。选择性c-Met蛋白抑制剂NK-4可能通过Cyclin D1,Bcl-2影响VSMCs的增殖与凋亡,提示c-Met抑制剂可作为预防血管成形术后再狭窄新的候选药物。     

胰岛素对自发型高血压大鼠血管平滑肌细胞生长的影响

血管平滑肌细胞 (VSMC)异常增生和肥大 ,是高血压血管病理改变的标志。由此引起的血管壁增厚 ,管腔狭窄 ,既可能是机体对动脉血压升高的一种代偿 ,也可能和高血压的发生、发展有重要的因果关系。流行病学调查的资料显示高胰岛素血症为引起原发性高血压的独立高危因素。但是 ,胰岛素与 VSMC增殖间的确切关系 ,目前尚不清楚。本研究对比胰素对自发性高血压大鼠 (SHR)和同一株系的正常血压的WKY大鼠 VSMC生长影响 ,旨在探讨胰岛素在调节高血压血管平滑肌细胞生长中的作用。1　材料和方法1.2　实验动物　 SHR和 WKY大白鼠 (购自上海第…     

激肽释放酶-激肽系统在血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖和迁移在动脉粥样硬化以及血管内支架成形术后再狭窄的发生和发展中起着重要作用.近年来的研究显示,激肽释放酶-激肽系统(kallikrein-kinin system,KKS)在细胞因子和转导通路方面与VSMC增殖和迁移密切相关.因此,探讨KKS在VSMC增殖和迁移过程中的作用,对于临床防治动脉粥样硬化、血管内支架成形术后再狭窄具有十分重要的意义.     

粉防已碱对血管平滑肌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的 :研究粉防已碱 (Tetrandrine,Tet)对内皮素诱导的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖及相关基因表达的影响。方法 :采用细胞计数及3H TDR掺入实验检测VSMC增殖状态 ;应用Northern杂交检测Tet对VSMC诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)基因和ET诱导的c jun基因表达的影响。结果 :Tet可明显抑制VSMC的增殖 (P <0 0 5 ) ,抑制ET对VSMC的促丝裂作用 (P <0 0 5 ) ;抑制原癌基因c jun的表达 ,促进iNOS转录。结论 :Tet可能通过调节iNOS和细胞增殖相关基因的表达而抑制VSMC的增殖。     

东菱克栓酶对球囊损伤后大鼠主动脉血管细胞增殖的影响

本文在大鼠胸主动脉球囊内皮剥脱术后血管平滑肌细胞增殖模型上,用东菱克栓酶治疗,可有效地降低血浆纤维蛋白原的浓度,抑制损伤血管壁的细胞计数增加和内膜增殖,降低血管壁组织(3)~H-胸腺嘧啶的参入增加程度.实验结果提示东菱克栓酶对于防治球囊成形术后血管再狭窄的发生可能具有潜在临床应用前景.     

辛伐他汀抑制血管平滑肌细胞增殖及对PTEN、p27蛋白表达的影响

目的：观察辛伐他汀（simvastatin）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的抑制作用及其对细胞周期和周期蛋白依赖性激酶抑制物p21、p27，细胞G1－S期转换重要调节基因PTEN、c-myc蛋白表达的影响，并进一步观察simvastatin是否通过抑制脂质代谢的中间产物－甲羟戊酸的合成而上调PTEN、p27蛋白的表达及PTEN和p27是否存在上下游关系。方法：[^3H]－胸腺嘧啶核苷酸（[^3H]-TdR）掺入测定VSMC DNA合成，流式细胞仪检测细胞周期情况，Western印迹杂交法检测p21、p27及PTEN、c-myc蛋白表达，人工合成PTEN反义寡核苷酸，并以正义寡核苷酸为对照，以脂质体介导转染细胞，以Western印迹杂交流检测转染效率并观测其对PTEN、p27蛋白表达的影响。结果：simvastatin以剂量依赖关系抑制血清诱导的VSMC[^3H]-胸腺嘧啶核苷酸掺入，使G0／G1期细胞比例明显增多，S期细胞比例显减少，并上调p27及信号通路中常位于p27上游的PTEN的蛋白表达，但不影响p21、c-myc蛋白表达，PTEN反义寡核苷酸下调PTEN蛋白的表达后并不影响p27蛋白表达，200μmol/L甲羟戊酸能显抑simvastatin诱导的PTEN、p27蛋白表达升高。结论：simvastatin能抑制VSMC增殖，使细胞周期停滞于G0／G1期，这一过程可能通过不同的信号途径分别上调PTEN、p27这两个调控G1－S周期转换的基因而实现，而非通过PTEN－p27这一经典通路，simvastatin对PTEN、p27的调节与其抑制甲羟戊酸的合成有关。     

全反式维甲酸对培养的大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对培养的大鼠动脉平滑肌细胞(VSMCs)的影响。方法 血管平滑肌细胞采用组织贴块法培养。ATRA(2.5×10-6mol/L)分别作用于经PDGF—BB(10 ng/ml)和20％FCS刺激后的VSM—Cs,作用24h后分别行3H—TdR,3H—Leucine掺入实验测定。结果 ATRA明显抑制由PDGF—BB(10ng/ml)和20％FCS促进的VSMCs的DNA和蛋白质合成。结论ATRA具有抑制VSMCs增殖的作用。     

青蒿素对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :观察青蒿素 (artemisinin ,Art)对体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 (VSMC)的增殖、DNA合成及细胞周期的影响 ,探讨作用机制。方法 :体外培养大鼠主动脉VSMC ,分为不同浓度的Art组及对照组。观察细胞生长曲线 ;四甲基偶氮唑盐微量酶反应 (MTT)法检测细胞活性 ;3H 胸腺嘧啶脱氧核苷(3H- TdR)掺入法观察其对DNA合成的影响 ;通过HE染色、DNA梯带检测和流式细胞术观察细胞的凋亡并测定细胞周期。结果 :与对照组相比 ,各浓度Art组VSMC计数不同程度减少 ,3H- TdR掺入率降低 ,细胞增殖受抑制 ,VSMC凋亡增加 ,并呈浓度依赖性 ;Art诱导细胞凋亡 ;使细胞周期阻滞于G0 / G1 期。结论 :Art对体外培养VSMC的增殖有抑制作用 ,可能通过抑制细胞DNA合成 ,诱导细胞凋亡及干扰细胞周期等途径发挥作用     

NADPH氧化酶对培养的小鼠血管平滑肌细胞Toll样受体4介导的炎症表型的影响

目的 探讨NADPH氧化酶对培养的小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)介导的炎症表型中的作用.方法 分别采用NADPH氧化酶激动剂血小板衍生生长因子-BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)和抑制剂夹竹桃麻素(apocynin)处理培养的C57BL/6J和TLR4-/-小鼠胸主动脉VSMC.分别采用荧光探针二氯荧光素双醋酸盐染色法检测VSMC内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,酶联免疫吸附法检测VSMC白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-o,TNF-α)表达,四甲基偶氮唑蓝染色法和Boyden小室检测VSMC的增殖和迁移.结果 PDGF-BB处理可显著增高C57BL/6J和TLR4-/-VSMC内ROS含量,而夹竹桃麻素可抑制ROS生成.PDGF-BB处理可使C57BL/6J VSMC IL-6[(52.69±3.49)ng/ml对(35.04±2.74) ng/ml,P=0.001]、IL-1β[(79.68±2.33) ng/ml对(62.38±0.54)ng/ml,P=0.000]和TNF-α[(218.35±5.42)ng/ml对(124.74±4.59) ng/ml,P=0.000]表达显著上调,增殖(1.69±0.53对1.04±0.40,P=0.000)和迁移(42.ll±4.05对1.69±0.53,P=0.000)能力均显著增强,而夹竹桃麻素预处理则可显著抑制VSMC IL-6[(42.11±4.05) ng/ml对(52.69±3.49) ng/ml,P=0.010]、IL-1β[(67.57± 1.36)ng/ml对(79.68±2.33) ng/ml,P=0.000]和TNF-α[(156.18±6.98) ng/ml对(218.35±5.42) ng/ml,P=0.000]表达以及增殖(1.23±0.42对1.69± 0.53,P=0.000)和迁移(42.11±4.05对52.69±3.49,P=0.000).TLR4-/-VSMC经PDGF-BB和夹竹桃麻素处理后,IL-6、IL-1β和TNF-α表达以及增殖和迁移能力均无显著变化.结论 NADPH氧化酶衍生的ROS参与了TLR4介导的VSMC炎症表型以及增殖和迁移,可能是其影响动脉粥样硬化发生和发展的重要机制.