生物素-抗生物素抗原斑点试验在检测疟疾抗原上的应用

应用生物素-抗生物素系统(Biotin-Avidin System,BAS)的生物放大作用,建立了生物素-抗生物素抗原斑点试验(ABC-AST),并采用多株抗疟原虫红内期单克隆抗体(McAb),以增加试验的敏感性,明显提高了染色斑点的阳性强度。用多株抗疟原虫 McAb获得的抗原斑点的颜色明显深于单株 McAb,而与多克隆抗体染色效果相似。 本试验应用多株 McAb为反应剂的 ABC-AST检测92例镜检查见原虫的间日疟病人血清,阳性率为94.57％,AST 为86.96％;对42例镜检原虫密度小于0.01％的疟疾病人血清AST 法仅能查出76.19％,而ABC-AST法能查出92.86％,明显地提高了检出率。健康人血清的 ABC-AST和 AST假阳性率分别为4.35％和6.09％(P>0.05)。     

血吸虫病单克隆抗体Dot-ELISA试剂盒检测效果的观察

<正> 本文应用McAb Dot-ELISA试剂盒检测日本血吸虫病,获得满意结果。 材料和方法 一、受检血清:本市疫区粪卵阳性病人的血清和健康人血清(不排除其他寄生虫病)。 二、McAb Dot-ELISA试剂盒:由中国预防医学科学院寄生虫病研究所免疫室提供,批号9001。同时按严自助等(1990)介绍方法进行操作和结果判定。     

抗独特型抗体的制备和鉴定及其在检测恶性疟红内期抗原方面的实验研究

疟疾免疫诊断是疟疾综合防治措施之一。以单克隆抗体(McAb)提取纯净抗原或取代多价抗血清,建立特异的抗原-抗体反应系统,是改善疟疾血清学方法敏感性、特异性并达到标准化的主要途径。为此,我们利用抗恶性疟原虫(Plasodium falciparum)McAb作为诊断试     

用斑点酶联免疫吸附试验筛选抗恶性疟原虫单克隆抗体及检测恶性疟抗原

以往筛选抗恶性疟原虫(Pf)单克隆抗体(McAb)常用间接免疫荧光(IFA)或ELISA,以培养的原虫为检测抗原。所得McAb检测培养的Pf抗原效果较好,但检测病人血中Pf抗原时阳性率较低。抗原分析显示这些McAbs多是针对滋养体、裂殖体或裂殖子抗原。为了得到能用于诊断的抗环状体期McAb,我们直接以病人血中Pf为检测抗原,用斑点酶联免疫吸附试验(DotELISA)进行筛选,结果如下。     

一种简便的针对同种型或独特型决定簇抗球蛋白反应的检测方法

目前临床应用McAb作为免疫抑制或治疗肿瘤疾病已越来越广泛。对于这些病人,检测是否有影响继续使用McAb进行治疗的抗球蛋白应答是重要的。如病人只是产生针对治疗用McAb的独特型的抗球蛋白反应,改用另一种独特型决定簇不同的抗体有可能使治疗继续下去。如仅是针对同种型或同种异型起反应,那么替换一种不同亚类或     

酶标记抗人IgM McAb及其初步鉴定应用

采用辣根过氧化物酶(HRP),以改良过碘酸钠法标记了国内三个单位制备的6种抗人IgM单克隆抗体(McAb),并对其进行了初步鉴定和应用,结果显示这些HRP标记抗体的效价高低不一。分析表明McAb与多克隆抗体一样,其标记前的效价高低是决定HRP标记后效价高低的关键因素。选择高效价的HRP-抗人IgM McAb用于ELISA间接夹心法中检测病人血清特异性IgM抗体,其特异性和敏感性与采用HRP-羊抗人μ链免疫血清检测结果基本相同。     

肾综合征出血热(HFRS)病毒McAb在临床早期诊断中应用的研究

本研究用间接荧光抗体试验检测77例临床诊断为HFRS病人外周血白细胞中病毒抗原。阳性率为50.7％,在早期病例中(第2—5病日)阳性率为64.3％(27/42),并发现病日越早、病情越重,阳性率越高。在间接免疫荧光中应用了抗HFRS病毒MCAb 4B_9、4E_7、3H_4株。抗原阳性者与3种McAb表现为5种反应类型,不同McAb对抗原的检出率也不相同。将McAb组合可提高阳性检出率。在抗原阳性早期患者中,急性期血清特异性IgM抗体阳性率为96.3％。将HFRS抗原检测和急性期IgM测定联合应用,可提高HFRS早期诊断的阳性率和准确性。     

利用HRP-抗人μ链McAb组化法检测EHF-IgM抗体用于早期诊断的研究

本文用自制抗人μ链McAb标记辣根过氧化物酶(HRP),采用组化法检测EHF病人急性期血清IgM抗体共103例,阳性为101例,阳性率为98％,其它病人及正常血清40例均为阴性。同时与间接免疫荧光法(IAF)比较,获得一致结果。此法用于EHF病人早期诊断,具有染色标本可长期保存,便于复查。方法简便,敏感性高,特异性强,不需荧光显微镜,在普通元学显微镜下即可检出等优点,易于在一般基层医院等单位推广应用。     

14株抗乙型肝炎表面抗原单克隆抗体与变异表面抗原的反应模式及应用

目的制备抗乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)的单克隆抗体,检测单克隆抗体与15种变异HBsAg的反应模式。用筛选出的单抗建立快速检测变异HBsAg的ELISA实验方法,并做初步评价。方法用中国乙型肝炎病毒感染者血清中分离的HBsAg免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗-HBs单克隆抗体。检测不同单克隆抗体与野生及变异HBsAg的反应性。筛选出两种可以较好识别变异HBsAg的单克隆抗体McAb2和McAb3,建立两种抗体ELISA检测HBsAg的方法。结果制备了14株抗-HBs单抗。经过初筛,有4种可以较好识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg。优化了McAb2和McAb3检测HBsAg的条件,检测HBsAg的灵敏度较好,检测变异HBsAg的能力优于2种现行国产HBsAg检测试剂盒。结论用本实验制备的单抗可以很好地识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg。     

恶性疟原虫单克隆抗体保护性机制的实验研究

疟疾疫苗的研究,目前主要集中在能诱发保护性反应的疟疾抗原上。获取纯的保护性抗原,结合遗传工程是发展疟疾疫苗的方向。已有两种方法可望得到保护性抗原。其一,应用长期暴露于疟疾感染并具有保护性的免疫血清,来分析,提取相应的抗原;其二,应用杂交瘤技术生产的保护性单克隆抗体(McAb),来分离、纯化特定的抗原。鉴于疟疾抗原成份的复杂性,疟疾感染时不仅能诱发保护性抗体反应,而且还能诱导病理性抗体的产生,但是,McAb具高度的特异性,并可持续不断地人工生产,经保护性McAb提取的保护性抗原,     

抗HBeAg单克隆抗体的制备、特性及其在临床诊断中的应用

诊断、监测和尽可能根治乙型肝炎要有快速、敏感、特异的检测方法。乙型肝炎最重要的感染标志是人血清中含有HBsAg、抗-HBc抗体、HBeAg和HBV DNA。单克隆抗体(McAb)能够识别确切的抗原决定簇。用McAb于这些试验比常规的多克隆抗体更敏感、特异。     

分泌肾综合征出血病热毒单克隆抗独特型抗体的杂交瘤细胞系的建立

将HFRS病人Ab1免疲BALB／c小鼠，取脾细胞与Sp2／0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞融合，制备了HFRSV的McAb2。初期融合试验中用ELISA间接法检测阳性克隆,阳性率为3．2～7．4％。其中5株杂交瘤经克隆化后阳性率达到100％。特异性鉴定表明，5种McAb2只与HFRS病人Ab1结合，不与正常人Ig结合。McAb2所识别的独特型是人Ab1与部分小鼠抗HFRSV的McAb上的交叉反应独特型。本文还应用McAb2作为探针，对抗HFRSV的单克隆抗体的独特型进行了分析.     

用基因工程表达的HBcAg制备抗-HBcAg单克隆抗体及其初步应用

用基因工程表达的NBcAg免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,以ELISA抑制法检测抗体,获得28株分泌抗-HBc McAb的杂交瘤细胞系。对其中7株进行了克隆化,培养上清抗体滴度1:320～1:2560,免疫小鼠腹水和血清滴度1:10万～1:80万。Ig类型测定2株IgG1、2株IgG2a、1株IgG3、2株IgM。杂交瘤细胞系在体外连续传代培养6个月及液氮冻存的细胞系经复苏后仍能稳定地分泌McAb。得到的McAb只与HBcAg反应且能被HBcAg特异阻断,证明其特异性高。用ELISA间接法测定了McAb的相对亲和力,从50％最大结合的浓度分析结果,7株McAb的相对亲和力为2E6>2F5>2B11>2C10>1A7>1B7>1H7,浓度范围为0.6～10μg/ml。2E6和2C10 2株McAb与HRP结合,用ELISA双抗休夹心法筛选出2F5、2B111和H7 3株McAb适合作为包被抗体。2F5与2E6-HRP配对,建立了快速McAb-ELIS抑制法测定患者血清中抗-HBc。用本法测定了222份临床患者血清标本,结果与“华美”试剂盒测定结果基本一致。     

分泌抗急性非淋巴细胞白血病M_2型单克隆抗体细胞系的建立及其特异性

应用细胞杂交瘤技术建立了3株分泌抗急性非淋巴细胞白血病(急非淋)M_2型单克隆 抗体McAb 1D1,1C_2和1D_6细胞系,连续传代11个月稳定地分泌单克隆抗体。3株均分泌IgG_1抗体。用间接免疫荧光的方法检测,3株分泌的McAb与急非淋M_2型病人白血病细胞呈阳性反应;与急非淋M_1、M_3、M_4、M_5型病人白血病细胞呈阴性反应;与慢性粒细胞白血病慢粒急变、急性淋巴细胞白血病及正常人白细胞呈阴性,McAb具有较好的特异性。     

抗鼻疽菌单克隆抗体的应用研究——Ⅰ.免疫荧光间接法对鼻疽菌的诊断

本文应用抗鼻疽菌单克隆抗体(McAb)代替免疫动多价血清(PolyAb)作荧光抗体间接染色法(IFA)检测鼻疽菌。对McAb的敏感性特异性进行了测定,对一些疽鼻病料进行了检测,征明McAb对鼻疽菌的诊断敏感性高,特异性强,具有实际应用价值,可取代PolyAb,作为对鼻疽菌检测的一种新试剂。     

无/低血清条件下杂交瘤细胞系生长和McAb产生的研究

将3G1/3F8细胞培养于血清浓度为20％、10％、17.5％、5％、2％、1％、0％的RPMI-1640中测定细胞生长曲线和McAb产生曲线。观察血清浓度对细胞生长和McAb产生的影响。用6种无血清培养基对3G1/3F8细胞做适应性培养,活细胞数为对照组的9.5％～55％;McAb产量为81.8％～106.8％。经驯化培养3G1/3F8细胞能够在血清含量1％、5％的培养液生长传代,冻存复苏,活细胞数达到对照组的71.2％～98.2％;McAb产量为104％和108％。对不同血清浓度下接种密度对细胞生长和McAb产量的作用做了实验观察。     

巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其初步应用

用CMV AD-169株感染自制人胚肺纤维母细胞,制备抗原,免疫BALB/c小鼠,取其牌细胞与Sp2/0-Ag14细胞融合,建立了一株稳定分泌抗HCMV特异性McAb的3B_6杂交瘤细胞株。3B_6McAb经鉴定属于IgG_3亚类。用间接免疫荧光法和间接酶免疫法证实为抗CMV特异性抗体。用微量细胞培养中和试验证实3B_6McAb在加有豚鼠血清后可阻止HCMV感染后细胞病变的出现。3B_6 McAb经间接免疫荧光法检测中,晚期孕妇羊水细胞中HCMV抗原,在68例标本中有一例为阳性,阳性率为1.47％。该法方便,快速可为在胎儿时期诊断先天性HCMV感染提供依据。     

用酶标Ig交叉反应性单抗作间接ELISA检测肾综合征出血热(HFRS)病毒抗体

<正> 自Tkachenko等和Gavrilovskaya等应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了HFRS病毒抗体以来,ELISA在HFRS的诊断与血清流行病学调查上的应用得到不断的发展。1986年,柴瑞珍等建立了ELISA抗IgM固相法检测人血清中的IgM抗体,但若用于不同种属血清的检测则需选用不同的固相包被抗体。本文在制备了Ig交叉反应性单抗(McAb)的基础上,制备了可用于人、猪、兔血清IgG检测的酶标McAb,建立了检测人、猪、兔血清中HFRS病毒抗体的ELISA间接法。     

人胱抑素C单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备人胱抑素C(Cystatin C,Cys C)的单克隆抗体(McAb),并建立检测人血清Cys C的颗粒增强透射免疫浊度分析法(PETLA).方法:构建人Cys C的原核表达载体pET32a( )/Cys C,纯化Cys C重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,杂交瘤技术制备Cys C的McAb;以自制的McAb包被乳胶颗粒,建立PETIA法测定血清Cys C,并对其分析性能进行初步方法学评价.结果:建立分泌抗Cys C单克隆抗体的杂交瘤细胞株3株,其分泌的McAb为IgG1,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合;将杂交瘤细胞注射于小鼠腹腔,腹水中Cys C McAb效价为1∶4×106;用自制的McAb建立定量测定Cys C的PETIA,方法学评价试验结果证实我们建立的PETIA法,与进口试剂有很好的可比性,具有较满意的方法学性能.结论:成功制备了抗Cys C单克隆抗体,该抗体可用于建立定量检测Cys C的PETIA法.     

TORCH-IgM捕获法ELISA试剂盒的研制和应用

目的 为了发展TORCH近期感染的IgM酶免疫诊断技术。方法 以抗人IgM McAb包板，加待检血清、TORCH抗原，接着加酶标记的抗TORCH—McAb，最后加3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TNB)显色。用这种自制的捕获法ELISA(C—ELISA)试剂盒和HOPE公司的间接法ELISA(I—ELISA)试剂盒平行检测1196份孕妇血清TORCH-IgM。结果C—ELISA试剂盒检出阳性血清67份，并经其他试验证实为阳性。其中4份用I—ELISA试剂盒检测为阴性。由乳胶凝集试验诊断为类风湿因子(RF)阳性的2份血清，经I—ELISA试剂盒检测为阳性，但经C—ELISA试剂盒检测为阴性。结论 在检测孕妇TORCH—IgM方面，C—ELISA比I-ELISA有更强的敏感性和更高的特异性。C—ELISA试剂盒是诊断TORCH近期感染的良好工具。