淫羊藿苷伍用三七总皂苷对Aβ-淀粉肽25-35侧脑室注射所致大鼠行为异常及脑组织AchE活性的影响

目的研究淫羊藿苷(icariin,ICA)伍用三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对Aβ-淀粉肽2535(beta-amyloid peptide_25-35,β-AP_25-35)大鼠侧脑室注射空间学习和记忆障碍的影响。方法取经跳台法和八臂迷宫法筛选的正常大鼠采用侧脑室注射β-AP_25-35,制成阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)大鼠模型,应用跳台法和八臂电迷宫法判断给药前后大鼠的空间学习和记忆能力;采用化学比色法测定脑组织中乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)活性。结果与溶剂组大鼠相比,模型大鼠八臂电迷宫错误次数明显增加(P<0.05),跳台学习和记忆错误次数明显增加(P<0.01)。大鼠造模前后连续igICA+PNS5+40,10+80mg/kg21d后,模型大鼠上述行为学指标得到明显改善(P<0.05),脑组织AchE活性降低(P<0.05)。结论ICA伍用PNS(5+40,10+80mg/kg)对β-AP_25-35侧脑室注射所致大鼠空间学习和记忆障碍有显著的预防和治疗作用,该作用与降低脑组织中AchE活性呈相关性。     

淫羊藿苷对乙酰胆碱酯酶的抑制作用

乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)抑制剂是目前治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的主要药物。本文应用酶抑制动力学方法研究了淫羊藿苷对AChE的抑制作用,并利用分子荧光光谱法和分子对接分别研究了淫羊藿苷与AChE之间的结合反应和结合位点。研究发现,淫羊藿苷对AChE的活性具有一定的抑制作用,测得的IC50为3.50×10 8mol.L 1(他克林的IC50测得值为0.75×10 8mol.L 1)。淫羊藿苷对AChE的抑制作用表现为混合型可逆抑制,抑制常数KI和KIS分别为2.67×10 8和4.43×10 8mol.L 1。淫羊藿苷主要通过氢键作用和分子间作用力结合于AChE的外周阴离子位点。     

淫羊藿苷对侧脑室注射链脲佐菌素所致大鼠学习记忆损伤的保护作用

目的观察淫羊藿苷(Ica)对侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)所致大鼠痴呆模型的保护作用。方法雄性SD大鼠分为假手术组、STZ模型组、Ica给药组。除假手术组外,所有大鼠双侧侧脑室注射STZ(3 mg·kg-1)模拟散发性老年性痴呆,假手术组只注射等体积的溶剂,制模前后分别给予Ica(40 mg·kg-1·d-1)灌胃3周。给药结束后采用Morris水迷宫观察大鼠行为学改变,血糖仪检测空腹血糖,收集海马组织观察乙酰胆碱酯酶(Ach E)和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达情况。结果侧脑室注射STZ后Morris水迷宫结果显示大鼠找到水下平台的逃避潜伏期显著延长(P<0.05),记忆功能受损,海马组织Ach E和TGF-β1蛋白水平增高(P<0.05),而双侧侧脑室注射STZ并不影响大鼠空腹血糖值(P>0.05);给予Ica后大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),海马组织Ach E和TGF-β1蛋白高表达状态缓解(P<0.05)。结论 Ica对侧脑室注射STZ引起认知功能损伤具有保护作用,其机制可能与改善海马组织Ach E和TGF-β1蛋白的高表达相关。     

人参总皂苷联合淫羊藿苷对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马神经细胞凋亡的影响研究

目的：研究人参总皂苷联合淫羊藿苷对血管性痴呆大鼠学习记忆、氧自由基及海马CA1区神经细胞凋亡的影响。方法：采用反复夹闭双侧颈总动脉再灌注同时腹腔注射硝普钠方法建立血管性痴呆大鼠模型,连续给药21d后,用八臂电迷宫法判断给药前后大鼠的学习和记忆能力,再进行脑组织SOD、MDA的测定和海马CA1区神经细胞凋亡检测。结果：与假手术组大鼠相比,模型大鼠电迷宫学习和记忆错误次数明显增加（P〈0.05）,大鼠造模前后连续灌胃给药21 d后,大鼠上述行为学指标得到明显改善（P〈0.05）,脑组织SOD活性提高（P〈0.05）和MDA含量降低（P〈0.01）,海马CA1区神经细胞凋亡数减少（P〈0.05）。结论：人参总皂苷联用淫羊藿苷对血管性痴呆大鼠学习记忆障碍有显著的预防和治疗作用,可能与通过改善血管性痴呆大鼠大脑自由基代谢和海马CA1区神经细胞损伤有关,从而起到保护大脑的作用。     

HPLC法测定复元胶囊三七皂苷R1及淫羊藿苷的含量

目的采用HPLC法检测复元胶囊中主要成分三七皂苷R1和淫羊藿苷的含量。方法取3个不同批次复元胶囊各5粒,经溶解、醇提、萃取、过滤等处理后采用HPLC检测其含量,以地高辛为内标,获得药品和内标曲线下面积之比,按照标准曲线计算出三七皂苷R1及淫羊藿苷的含量。结果计算出每粒复元胶囊中三七皂苷R1的含量为12.18 mg/g,淫羊藿苷的含量为54.65 mg/g。结论本实验HPLC方法可行,能准确检测复元胶囊中三七皂苷R1及淫羊藿苷的含量。     

淫羊藿苷对淀粉样β蛋白片段25-35所致大鼠学习记忆障碍的改善作用

目的观察淫羊藿苷对淀粉样β蛋白片段25-35(Aβ25-35)所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法Wistar雄性大鼠,右侧海马内注射Aβ25-3510μg制备AD模型,次日起淫羊藿苷30,60和120mg.kg-1灌胃给药,连续14d,d15～19Morris水迷宫检测大鼠空间辨别学习记忆能力;d20检测海马组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)及一氧化氮合酶(NOS)的活性,免疫组化法检测海马内乙酰胆碱酯酶(AChE)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达。结果与模型对照组比较,淫羊藿苷给药14d明显改善大鼠学习记忆能力;海马组织中SOD和GSH-PX活性升高,NOS活性降低;海马内AChE及ChAT的表达增加。结论淫羊藿苷可以改善Aβ25-35海马内注射所致AD模型大鼠的学习记忆能力,其作用可能与其增加AChE和ChAT表达,增强SOD和GSH-PX等自由基清除酶活性,降低NOS活性,减少NO释放等多种机制,促进胆碱能递质系统功能的恢复有关。     

淫羊藿总苷对缺血-再灌注损伤大鼠心肌的保护作用

目的探讨淫羊藿总苷对缺血 再灌注损伤大鼠心肌的保护作用及其机制。方法通过结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD)后再灌注     

相溶解度法研究羟丙基-β-环糊精对淫羊藿苷的增溶作用

目的：利用相溶解度曲线法研究不同质量浓度的羟丙基-β-环糊精对淫羊藿苷溶解度的影响。方法配制一系列质量浓度的HP-β-CD溶液,加入过量的淫羊藿苷,绘制不同温度下的相溶解度图。结果相溶解度曲线为线性关系,包合模型为AL型,淫羊藿苷与HP-β-CD以1∶1的比例包合。在25,35和45℃时,其表观结合常数分别为52．01,64．66和41．42 L · mmol-1。结论 H P-β-CD对淫羊藿苷有一定的增溶作用。     

淫羊藿苷对Aβ_(25-35)诱导的阿尔采末病大鼠海马突触素和突触后密度蛋白95表达的影响

目的探讨淫羊藿苷(Ica)对阿尔采末病(AD)大鼠海马突触素(SYN)和突触后密度蛋白95(PSD-95)表达的影响。方法雄性SD大鼠43只,随机分为对照组(n=13)、模型组(n=15)及Ica120 mg·kg-1组(n=15),每日灌胃给药1周后,右侧海马内注射Aβ25-3510μg制备AD模型,制模后继续给药3周。HE染色法光镜观察大鼠海马形态学变化,透射电子显微镜观察大鼠海马神经元超微结构,Western blot法检测大鼠海马SYN和PSD-95蛋白的表达。结果 HE染色显示模型组大鼠海马神经元排列稀疏,并有大量变性神经元,给予Ica治疗后,神经元排列较整齐,变性神经元数量减少;电镜观察发现模型组大鼠海马CA3区神经元数目减少,结构模糊,胞膜不完整,线粒体肿胀呈空泡样变,染色质成块状聚集,突触数目减少,Ica治疗后大鼠海马CA3区神经元数目较多,结构较清晰,线粒体肿胀减轻,染色质较均匀,突触数目增多;Western blot结果显示模型组大鼠海马SYN及PSD-95的表达较对照组明显降低(P<0.05),而Ica组大鼠海马SYN和PSD-95的表达显著增加(P<0.05)。结论 Ica可能通过增加突触标记蛋白SYN和PSD-95的表达改善Aβ25-35诱导的AD大鼠空间学习记忆能力。     

HPLC法测定更年乐片中朝藿定C、淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ和大花双参苷A

目的建立多波长HPLC梯度洗脱法同时测定更年乐片中朝藿定C、淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ和大花双参苷A的方法。方法依利特C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈–0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长:270 nm(朝藿定C和淫羊藿苷)、210 nm(川续断皂苷Ⅵ)、230 nm(大花双参苷A);体积流量为1.2 m L/min;柱温为室温;进样量20μL。结果朝藿定C、淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ和大花双参苷A分别在7.14~142.80μg/m L(r=0.999 8)、5.64~112.80μg/m L(r=0.999 6)、6.35~127.00μg/m L(r=0.999 5)、7.90~158.00μg/m L(r=0.999 3)与其峰面积呈良好的线性关系;朝藿定C、淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ和大花双参苷A的平均回收率分别为99.24%、96.93%、97.81%、98.32%,RSD值分别为1.28%、0.94%、1.24%、1.50%。结论该方法是一种快速、灵敏、准确的分析方法,可作为更年乐片的质量控制方法。     

淫羊藿次苷Ⅱ通过诱导自噬改善链脲佐菌素所致的大鼠学习记忆减退

目的探索淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)对链脲佐菌素(STZ)所致大鼠学习记忆减退的作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,ICSⅡ低、高剂量组(均n=10)。模型组和ICSⅡ组大鼠在第1日和第3日双侧侧脑室注射STZ 5μL(1.5 mg·kg~(-1))模拟散发性老年性痴呆,假手术组注入等体积柠檬酸缓冲液。第二次手术后开始给药,ICSⅡ低、高剂量组每日灌胃ICSⅡ3、10 mg·kg~(-1),假手术组和模型组给予等体积双蒸水,连续给药21 d。给药后第16日开始进行为期6 d的Morris水迷宫实验检测大鼠行为学功能。水迷宫实验结束后,通过Western blot实验技术检测大鼠海马组织中自噬基因Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅰ和LC3Ⅱ的蛋白表达以及β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)的含量。结果水迷宫实验中模型组较假手术组大鼠的平均逃避潜伏期明显延长,穿越目标象限次数显著减少(P<0.05);海马组织中Aβ1-42的含量显著增加(P<0.05),Beclin 1表达明显减少(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-I比值降低(P<0.05)。与模型组相比,ICSⅡ高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),穿越原平台象限次数增加(P<0.05);Aβ1-42的蛋白含量明显降低(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及Beclin 1蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论自噬途径参与了STZ诱导的大鼠学习记忆减退;ICSⅡ具有抗侧脑室注射STZ诱导的认知功能损伤作用,其机制可能与诱导细胞自噬有关。     

大鼠胆汁中人参皂苷和淫羊藿黄酮苷的HPLC-UV/ELSD法测定

建立了HPLC-紫外检测器串联蒸发光散射检测器同时测定大鼠尾静脉注射肌萎灵冻干粉后胆汁中的人参皂苷Rgl、Re,淫羊藿苷和朝藿定A、B、C.采用C18色谱柱,乙腈-水为流动相,梯度洗脱,检测波长220 nm;蒸发光散射检测器检测:漂移管温度80℃,气体压力25 psi.人参皂苷Rgl、Re,淫羊藿苷和朝藿定A、B、C分别在11.64～698.1、8.59～515.4、2.70～323.4、1.53～183.6、1.04～499.2和1.37～878.4μg/ml浓度范围内线性关系良好,提取回收率为89.53～99.54%,日内和日间RSD均小于9.28%,相对误差-9.85%～5.10%.     

淫羊藿苷抑制TGF-β1/Smad2信号通路改善压力超负荷所致的大鼠心肌纤维化

目的 观察淫羊藿苷(icariin,Ica)对大鼠压力超负荷所诱导的心肌纤维化的干预作用,并研究其作用机制是否与Ica影响左心的转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2的表达有关.方法 SD大鼠(n=5)随机分为假手术组、心肌纤维化模型组、Ica低、高剂量干预模型组.用腹主动脉缩窄术致压力超负荷心肌纤维化模型,Ica低、高剂量组造模后次日给予Ica 40、80 mg·kg-1(ig,qd),持续50 d.期间观察大鼠的一般情况,d 51检测左心指数;用Masson染色法观察心肌间质纤维化情况,用PCR和免疫组化法分别检测心肌TGF-β1、Smad2的mRNA和蛋白表达变化.结果 压力超负荷组大鼠左室心肌纤维化程度明显,并伴左心指数增高,左室TGF-β1、Smad2 mRNA和蛋白表达均明显上升.而Ica能明显改善上述病理改变,降低TGF-β1、Smad2 mRNA和蛋白的表达.结论 Ica具有抗压力超负荷所致大鼠心肌纤维化的作用,其机制至少部分与其抑制TGF-β1/Smad2信号通路有关.     

基于Nrf2信号通路的三七总皂苷对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用机制研究

目的探讨三七总皂苷对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及分子机制。方法利用Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤模型,MTT法检测PC12细胞活力,试剂盒测定LDH漏出量、ROS水平、MDA含量、Caspase-3活力以及抗氧化酶SOD、CAT和GHS-Px活力,TUNEL染色检测细胞凋亡,JC-1染色观察线粒体膜电位,Western blot检测相关蛋白HO-1、Lamin-B、细胞核内Nrf2及总Nrf2的蛋白表达。结果三七总皂苷能够明显抑制Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞活力下降(P<0.01)和LDH漏出(P<0.01),减少ROS和MDA的产生(P<0.01),增加SOD、CAT和GSH-Px活力(P<0.01),稳定线粒体膜电位,抑制caspase-3的活化(P<0.01)。而且,三七总皂苷还能够上调PC12细胞细胞核Nrf2、总Nrf2和细胞质中HO-1的蛋白表达。HO-1抑制剂Sn PP能够抑制三七总皂苷的神经保护作用。结论三七总皂苷可能通过上调Nrf2/HO-1信号通路,从而抑制Aβ25-35诱导PC12细胞氧化应激和凋亡。