重症肌无力血清中碳酸酐酶Ⅲ其抗体的检测

目的：检测重症肌无力（MG）患者血清中碳酸酐酶Ⅲ（CAⅢ）及其抗体水平，探讨MG骨骼肌减少的CAⅢ是否参与MG的免疫发病。方法：用Western blot检测18例MG患者、16例其他神经肌肉疾病（ONMD）患者和15名健康人血清中CAⅢ水平；用Western blot与酶联免疫吸附测定（ELISA）检测上述血清中抗CAⅢ的抗体水平。结果：Western blot显示，正常人、MG和ONMD患者血清中都存在CAⅢ，但该蛋白的谱带密度在3组人的血清中差异无统计学意义（P〉0．05）；Western blot与ELISA表明，上述血清中不存在抗CAⅢ的抗体。结论：正常人、MG和ONMD患者血清中均存在CAⅢ蛋白，但不存在抗该蛋白的抗体，说明MG骨骼肌减少的CAⅢ蛋白可能没有直接参与MG的免疫发病。     

重症肌无力骨骼肌减少的25000蛋白分子鉴定

目的:解析重症肌无力(MG)骨骼肌特异减少的相对分子质量约25000的蛋白分子结构。方法:用双向电泳分离纯化骨骼肌25000蛋白,电喷射离子化质谱和Edman降解法分别测定其精确分子质量和N端部分氨基酸序列,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定其肽指纹图谱,在上述基础上,用ImmunoWesternblot分析骨骼肌蛋白与25000蛋白抗体及碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)抗体的结合。结果:质谱和N端部分氨基酸序列的测定表明,电泳显示的表观相对分子质量为25000的蛋白其精确分子质量为29632.05,该蛋白的N端氨基酸可能是酰基化的;肽指纹图谱解析和蛋白资料库查询结果,结合对25000蛋白生化和生物学特征的了解,发现25000蛋白与CAⅢ的分子是非常相似的。结论:MG骨骼肌特异减少的相对分子质量约25000的蛋白分子很可能是已知的蛋白质CAⅢ,该活性物质与MG发病的关系值得进一步研究。     

重症肌无力患者骨骼肌中碳酸酐酶Ⅲ蛋白减少的原因

目的 分析重症肌无力患者(MG)骨骼肌中碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)蛋白和CAⅢ mRNA的表达,并与健康对照组进行比较,探讨MG骨骼肌CAⅢ蛋白缺乏的原因.方法 用Western blot分析17例MG患者与19名健康人骨骼肌CAⅢ蛋白的水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析CAⅢ mRNA的表达.结果 Western blot显示,MG患者骨骼肌CAⅢ蛋白谱带密度低于健康人骨骼肌;经半定量分析,健康人骨骼肌CAⅢ蛋白水平的相对值为1.70±0.29,MG骨骼肌为0.76±0.08,两者差异有统计学意义(P=0.006).RT-PCR半定量结果为:健康人骨骼肌CAⅢ mRNA表达的相对值为0.29±0.04,MG骨骼肌为0.15±0.02,两组间差异亦有统计学意义(P=0.005).分析同一标本CAⅢ蛋白与CAⅢ mRNA表达,约77%的MG患者骨骼肌中两者呈一致性减少.结论 MG骨骼肌CAⅢ蛋白降低的主要原因是其本身CAⅢ mRNA的表达降低所致,骨骼肌CAⅢ mRNA的表达降低与MG发病的关系还需进一步阐明.     

骨骼肌碳酸酐酶Ⅲ具有磷酸酶活性

目的：探讨骨骼肌碳酸酐酶Ⅲ／（CAⅢ）是否本身具有磷酸酶活性。方法：用双向电泳结合Western blot方法将分离的大鼠骨骼肌蛋白转移至硝酸纤维膜，利用镜像原理，识别与CAⅢ抗体发生免疫反应的抗原在双向电泳图谱中的确切位置。在此基础上，以同样的方法与原理，对在固相膜上的磷酸酶活性进行原位染色，观察CAⅢ是否磷酸酶活性染色呈阳性。此外，通过磷酸酶抑制剂实验及酶催化反应动力学实验，论证CAⅢ的磷酸酶活性染色特异性及CAⅢ具有磷酸酶的功能。结果：CAⅢ抗体反应显示，利用镜像原理能从复杂的双向电泳图谱中容易识别CAⅢ蛋白；磷酸酶活性染色表明，鉴定的CAⅢ具有磷酸酶活性。磷酸酶特异抑制剂实验表明，CAHI的磷酸酶活性染色具有特异性；酶催化反应动力学研究证实，CAⅢ蛋白具有确凿的磷酸酶功能。结论：骨骼肌的CAⅢ本身具有磷酸酶活性，说明CAⅢ参与了细胞的磷酸化——去磷酸化过程，提示重症肌无力（MG）患者骨骼肌收缩无力和易疲劳可能涉及了MG的非免疫机制。另外，本研究创建的双向电泳结合Westem blot方法可被借鉴用于“功能蛋白质组学”的研究。     

重症肌无力P9—ZFD基因片段表达蛋白的研究

目的:探讨P9-ZFD基因片段在人骨骼肌中表达的蛋白质。方法:以MG骨骼肌RNA为模板,扩增编码P9-ZFD片段的cDNA,构建pFT24a-P9-ZFD表达载体,经BL21(DE3)诱导表达P9-ZFD蛋白和组氨酸亲和层析法进行纯化,并制备P9-ZFD抗体。Western blot鉴定MG和对照组骨骼肌中与P9-ZFD抗体产生特异性免疫反应的蛋白组分。结果:骨骼肌中与P9-ZFD抗体产生特异性免疫反应的蛋白质相对分子质量约40000,在伴胸腺增生或胸腺瘤MG骨骼肌中的表达水平明显高于对照组(P<0.001)。结论:骨骼肌中40 000的蛋白是P9-ZFD基因片段的编码产物,该蛋白在伴胸腺增生或胸腺瘤MG骨骼肌中的表达水平明显上调,可能具有重要的病理生理意义。     

重症肌无力P9-ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位

目的:表达、纯化重症肌无力相关P9基因TRAF型锌指结构(P9 TRAF-type zinc finger domain,简称P9-ZFD)编码的蛋白质,制备P9-ZFD多克隆抗体,研究P9-ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)克隆编码P9-ZFD的cDNA序列,构建pET24a-P9-ZFD表达载体,在E.coli BL21(DE3)中胞内诱导表达P9-ZFD蛋白,组氨酸亲和色谱法纯化P9-ZFD蛋白并免疫Balb/c小鼠制备其多克隆抗体.ELISA和Western blot鉴定抗体效价及其免疫特异性.免疫组织化学及免疫电镜观察P9-ZFD蛋白在骨骼肌中的表达部位及其亚细胞分布.结果:表达、纯化的P9-ZFD蛋白相对分子质量约30 kD,纯度达95%以上.制备的P9-ZFD抗体具有特异的免疫反应性.免疫组织化学和免疫电镜结果显示,P9-ZFD蛋白的免疫染色部位集中沿MG骨骼肌细胞膜分布.结论:重症肌无力相关的P9-ZFD蛋白在MG骨骼肌细胞膜处表达,是一种骨骼肌细胞膜蛋白组分.     

重症肌无力P9-ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位

目的：表达、纯化重症肌无力相关P9基因TRAF型锌指结构(P9 TRAF-type zinc finer domain，简称P9-ZFD)编码的蛋白质，制备P9-ZFD多克隆抗体，研究P9-ZFD蛋白的骨骼肌亚细胞定位。方法：应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)克隆编码P9-ZFD的cDNA序列，构建pET24a-P9-ZFD表达载体，在E．coli B121(DE3)中胞内诱导表达P9-ZFD蛋白，组氨酸亲和色谱法纯化P9-ZFD蛋白并免疫Balb／c小鼠制备其多克隆抗体。ELISA和Western blot鉴定抗体效价及其免疫特异性。免疫组织化学及免疫电镜观察P9-ZFD蛋白在骨骼肌中的表达部位及其亚细胞分布。结果：表达、纯化的P9-ZFD蛋白相对分子质量约30kD，纯度达95％以上。制备的P9-ZFD抗体具有特异的免疫反应性。免疫组织化学和免疫电镜结果显示，P9-ZFD蛋白的免疫染色部位集中沿MG骨骼肌细胞膜分布。结论：重症肌无力相关的P9-ZFD蛋白在MG骨骼肌细胞膜处表达，是一种骨骼肌细胞膜蛋白组分。     

骨骼肌25000蛋白分布于Ⅰ型肌纤维

目的:探讨骨骼肌25 000蛋白分布与肌纤维类型的关系。方法:分别对正常人及重症肌无力患者骨骼肌相邻的连续冰冻切片进行ATPase染色及25 000蛋白的免疫组化染色,阐明25 000蛋白在骨骼肌的分布及与骨骼肌纤维类型的关系。用免疫印迹方法观察以Ⅰ型纤维为主的比目鱼肌和以Ⅱ型纤维为主的肱三头肌中25 000蛋白表达的差异。结果:相邻冰冻切片ATPase染包和25 000蛋白免疫组化的结果表明,无论是正常人还是MG患者的骨骼肌,25 000蛋白均存在于胞质内,并主要分布在Ⅰ型纤维;在相同免疫染色条件下,该蛋白在MG骨骼肌的染色强度明显低于正常人。免疫印迹显示,在相同的骨骼肌总蛋白量中,比目鱼肌的25 000蛋白表达水平明显高于肱三头肌,进一步证实了25 000蛋白主要分布在Ⅰ型纤维。结论:25 000蛋白主要在骨骼肌Ⅰ型纤维中表达,MG患者骨骼肌的易疲劳和收缩无力可能与该蛋白在Ⅰ型纤维中低表达有关。     

构建兔抗人凝血因子XIII A亚单位多克隆抗体及特异性鉴定

背景：关于凝血因子XIII(FXIII)抑制物作用于FXIII的具体结合表位,目前尚无报道。 目的：用免疫动物方法制备针对FXIII A亚单位多克隆抗体,并对其特异性和活性进行鉴定。 方法：用人工合成的FXIII A亚单位多肽免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;应用Dot blot鉴定抗体特异性,并用抗体中和/尿素溶解实验检测多克隆抗体活性;Western blot方法检测2例获得性FXIII缺乏症患者的血浆FXIII水平,再应用Dot blot分析这2例患者血浆FXIII抑制物作用的抗原表位。 结果与结论：Dot blot证实兔血清中已产生抗FXIII抗体,此抗体不仅可特异性与人FXIII及转氨酶活性位点多肽结合,且在体外可抑制人FXIII的活性;用此抗体可检测出获得性FXIII缺乏症患者的血浆FXIII缺乏,分析出转氨酶活性位点是病例2血浆FXIII抑制物的作用位点。证实动物免疫法可成功制备兔抗人FXIII A亚单位转氨酶活性位点的多克隆抗体,此抗体可用于人FXIII的检测和抗原表位分析。     

去神经对大鼠骨骼肌碳酸酐酶Ⅲ表达和磷酸酶活性的影响

目的 观察去神经对骨骼肌碳酸酐酶Ⅲ(carbonic anhydrase Ⅲ,CAⅢ)表达及其磷酸酶(phosphatase)活性的影响,探讨神经冲动受阻是否为重症肌无力(myasthenia gravis,MG)骨骼肌CAⅢ减少的原因.方法 定向切断支配大鼠趾长伸肌(extensor digitorum longus,EDL)和比目鱼肌(soleus,Sol)的神经纤维,术后第7、14、28和56天用Western blot分析EDL和Sol的CAⅢ水平,用固相膜上原位酶活性染色方法评估CAⅢ的磷酸酶活性.结果 (1)正常侧(即去神经对侧)Sol的CAⅢ水平远高于EDL,并且两者都表现出随时间增加(动物年龄增长)而增加的趋势.去神经后,EDL的CAⅢ水平随时间的延长而逐渐增加;Sol的CAⅢ水平则以14 d为分界先增加后降低.(2)正常侧Sol的CAⅢ的磷酸酶活性[随时间增加(动物年龄增长)呈逐渐增加的趋势]均高于EDL(变化不明显).去神经后,Sol的CAⅢ磷酸酶活性(第14、28、56天分别为14.39±1.93、11.48±1.46、9.04±1.46)明显低于正常侧(22.75±1.80、25.26±3.15、25.82±2.97,t=0.002、0.005、0.002,均P＜0.05),EDL的CAⅢ磷酸酶活性与正常侧相比亦是降低,但差异无统计学意义.(3)正常侧EDL和Sol的CAⅢ蛋白表达水平和CAⅢ的磷酸酶活性相一致;去神经后CAⅢ蛋白表达水平和CAⅢ的磷酸酶活性发生了背离,即CAⅢ蛋白表达水平增加,但其磷酸酶活性却降低.结论 去神经所致的神经冲动传递障碍与MG自身抗体所致的神经冲动传递障碍对骨骼肌CAⅢ表达水平的影响不同,MG骨骼肌CAⅢ表达水平减少并非是其自身抗体所致的神经冲动传递障碍造成.

Abstract：

Objective To observe the effects of nerve impulses on the expression of carbonic anhydrase Ⅲ ( CAⅢ ) and its phosphatase activity, and to explore whether or not the cause of CAⅢ expressive decreased in skeletal muscles of myasthenia gravis( MG) is resulted from the obstruction of nerve impulse.Methods The motor nerves of extensor digitorum longus (EDL, mainly composed by fast fibers) and soleus (Sol, mainly composed by slow fibers) were cut off by operation of denervation.Levels and phosphatase activities of CAⅢ were analyzed at 7, 14, 28, and 56 d after denervation by Western blot and specific enzyme staining on the membrane following SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, respectively.Results (1) Levels of CAⅢ in Sol of normal side (eg denervated contralateral) were much higher than that in EDL of normal side, and the levels in both Sol and EDL had an enhanced tendency with time (age) increase, especially for Sol.After denervation, the levels of CAⅢ in EDL were gradual increased, however, the level in Sol was 14 d after denervation as the boundary of ascension and then decline.( 2) The phosphatase activities of CAⅢ in Sol of normal sides were much higher than that in EDL of normal sides, and there were an enhanced tendency with time (age) increase in Sol, but no significant changes were found in EDL The enzyme activities in denervated Sol were lower(in the 14, 28, and 56 days after denervation: 14.39 ±1.93, 11.48 ±1.46, 9.04 ±1.46) much than their contralaterals(22.75 ± 1.80, 25.26 ±3.15, 25.82 ± 2.97; t = 0.002, 0.005, 0.002, all P ＜ 0.05), the enzyme activities in denervated EDL were also lower than their contralaterals, however, no significant differences were found.(3)It was consistent for CAⅢ levels and phosphatase activities in both Sol and EDL of normal sides.After denervation, however, the deviation of the CAⅢ levels and phosphatase activities happened, the levels of CAⅢ were increased, but the phosphatase activities were decreased.Conclusions The effect of nerve impulse transferring obstructed by denervation on CAⅢ expression of skeletal muscles is different from that by MG auto-antibody.The decrease of CAⅢ protein in the MG muscles may be not resulted from the nerve impulse transferring obstructed by MG auto-antibody.     

Neurocan基因蛋白表达及其抗体制备与检测的实验研究

目的 制备Neurocan蛋白,用此蛋白免疫动物制备抗血清,并对抗血清进行检测,最终使待参与DNA疫苗构成的Neurocan蛋白所产生的抗体能与脑内创伤Ⅸ的相应抑制性蛋白抗原结合,从而减轻抑制因子对神经生长的抑制作用,促进神经再生. 方法 合成]Weuroc011,基因,构建原核表达质粒PET30a-Neurocan,转化大肠杆菌BL21.异丙基-β-D.硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的 蛋白,并经SDS-PAGE、Western blot鉴定.Neurocan蛋白免疫兔制备免疫血清.ELISA法检测抗血清效价,以兔免疫前血清为阴性对照;Western blot检测抗血清特异性,以免疫血清为一抗,山羊抗兔-AP为二抗,NBT/BCIP显色. 结果 合成的Neurocan基因经酶切鉴定、PCR鉴定及测序鉴定,显示序列正确.原核表达Neurocan蛋白经过SDS-PAGE鉴定,条带大小约为55 000,与计算出来的大小一致;经Western blot鉴定.目的 蛋白能与his抗体特异性结合,说明是Neurocan,基因的表达产物.抗血清经ELISA法检测.抗血清效价达到1:100万;经Western blot检测.目的 条带明显. 结论 Neurocan蛋白原核表达成功;通过Neurocan蛋白免疫兔可得到特异性抗体,此抗体能与Neurocan蛋白特异性结合,为DNA疫苗的进一步研制奠定了基础.     

运动神经元生存蛋白多克隆抗体的制备及该蛋白在脊髓性肌萎缩症患者骨骼肌中的表达

目的制备运动神经元生存（SMN）蛋白多克隆抗体，探讨SMN蛋白在细胞内的定位及在脊髓性肌萎缩症（SMA）患者骨骼肌中的表达情况。方法构建pET-28a（＋）／SMN原核表达质粒，诱导表达SMN-His融合蛋白，免疫新西兰大白兔制备SMN多克隆抗体。构建pcDNA3．1／myc-HisB-SMN真核表达质粒并转染中国仓鼠卵母（CHO）细胞。收集骨折患者以及I、Ⅱ、Ⅲ型SMA患者的骨骼肌组织各3份。分别采用免疫印迹及免疫荧光染色技术进行CHO细胞及骨骼肌组织的SMN蛋白表达研究。结果成功制备了兔抗人全长SMN多克隆抗体，经鉴定其特异性及敏感性均较高。免疫荧光染色显示SMN蛋白在细胞质及细胞核中呈斑片状或颗粒状分布，以核周较为明显。免疫印迹结果显示骨折患者骨骼肌组织SMN与内参照磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）条带密度比值（SMN／GAPDH）平均为0．619，Ⅲ、Ⅱ型SMA患者SMN／GAPDH比值较低，均值分别为0．347和0．340，而Ⅰ型SMA患者骨骼肌中SMN／GAPDH比值显著降低，均值仅为0．079。结论高质量的兔抗人全长SMN多克隆抗体的制备为SMA的蛋白功能及发病机制研究奠定了基础，SMA患者骨骼肌中SMN蛋白表达量可能与疾病的严重程度相关。     

增生型胸腺组织重症肌无力相关蛋白的鉴定研究

目的 筛选出增生型胸腺组织重症肌无力（myasthenia gravis．MG）相关蛋白．并对其作出鉴定。方法 分剐利用异体MG患者血清、正常人血清和自身免疫病患者血清为第一抗体。与电泳转移到硝酸纤维素膜上的蛋白点孵育。做Western Blotting试验;然后在利用双向电泳技术获得的参考凝胶上挖取MG组特异显色点所对应的蛋白质点。经胰蛋白酶胶内酶切,对所得多肽混合物进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）分析,得到肽质量指纹图谱（peptide mass fingerprinting,PMF）数据。登陆http：／／prospector．ucsf．edu／ucs fhtm14．0／msfit．htm网站,用MS Fit程序在NCBInr．10．13．2004数据库检索,鉴定蛋白质。结果Western Blotting试验共获得5个MG特异显色点。编号为2、4、6、7、9;经质谱分析得到5个蛋白质PMF图谱,数据库检索这些蛋白分别为：2号蛋白点isopeptidase T、4号蛋白点importin beta subunit和6号蛋白点SOUL protein。7号和9号蛋白点未能得到确认,需要更换检索备件或进行蛋白质测序才能进一步认定。结论运用蛋白质组学和Western Blotting研究方法,共获得5个MG相关蛋白,得到鉴定的三个蛋白分剐为2号蛋白点isopeptidase T、4号蛋白点importin beta subunit和6号蛋白点SOUL protein。     

兔抗大鼠LRRN3多克隆抗体的制备及其表达

背景：神经系统富亮氨酸重复超家族成员LRRN3是一类富含LRR重复序列的蛋白,可能与神经系统发育、分化和信息传递等功能密切相关,研究其功能对于神经系统发育调控以及损伤修复的机制有着重要意义. 目的：制备大鼠LRRN3多克隆抗体,并初步研究其蛋白表达谱. 设计,时间和设置：相关细胞学和分子生物学实验在中南大学湘雅医学院组织学与胚胎学系和神经生物学系完成,实验时间为2007年到2009年. 材料：免疫用抗原为前期在原核工程菌E.coli BL21（DE3）中表达的大鼠LRRN3 C端结构域重组蛋白;免疫动物为雄性新西兰兔2只. 方法：以前期制备的大鼠LRRN3 C端结构域重组蛋白为抗原免疫雄性新西兰兔,制备兔抗大鼠LRRN3多克隆抗体,并运用ELISA和Western Blot对抗体进行鉴定.收获并纯化抗体, 应用免疫组织化学技术和Western Blot等实验初步检测LRRN3蛋白在成年大鼠体内的蛋白表达. Main outcome measures: 运用ELISA鉴定抗 LRRN3血清效价;Western blot鉴定抗 LRRN3 多克隆抗体的特异性;免疫组化技术和Western blot检测LRRN3蛋白在大鼠体内的表达. 结果：获得较高纯度的兔抗大鼠LRRN3多克隆抗体,抗血清效价达1：1000;Western Blot检测SD大鼠大脑组织总蛋白,可见在分子量约79kD 处有一清晰的条带,与全长 LRRN3 理论大小一致;运用该抗体检测大鼠体内LRRN3的蛋白表达谱,结果表明该蛋白主要在中枢神经系统表达,阳性部位为大脑皮质多级神经元、海马齿状回和CA1区多级神经元以及小脑蒲肯野细胞,神经胶质细胞中无明显阳性反应. 结论：制备了兔抗大鼠LRRN3多克隆抗体,并对大鼠LRRN3蛋白的表达进行了初步检测. 关键词：多克隆抗体,制备,蛋白表达,LRRN3     

应用免疫印迹法诊断肢带型肌营养不良2A型

目的 应用免疫印迹法(Western blot)诊断肢带型肌营养不良2A型(LGMD2A)患者并与LGMD2B型相鉴别.方法 收集我院诊治的4例LGMD2型患者的临床、病理及生化检验资料.取肌肉活体组织行组织化学和免疫组织化学染色,用Western blot分析dysferlin蛋白及calpain-3蛋白的表达.结果 LGMD2A与2B型患者的临床症状相似;免疫组织化学染色显示所有患者均出现不同程度的dysferlin缺失.但Western blot揭示:LGMD2A型患者calpain-3蛋白完全缺失,dysferlin蛋白部分缺失;而2B型患者则相反.结论 用Western blot检测calpain-3蛋白可在dysfedin蛋白表达缺失的LGMD患者中鉴别出2A型患者,该方法对临床辅助诊断LGMD2A有很好的价值.     

重症肌无力患者骨骼肌25 000蛋白含量分析

目的探讨重症肌无力(MG)患者骨骼肌25 000蛋白质的减少是否具有特异性.方法用Guba-Straub solution (myosin 提取液) 提取21例正常(骨折对照者)肌肉,18例MG患者肌肉及20例其他神经肌病患者肌肉的蛋白,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分析蛋白成分,以伴刀豆凝集素/辣根过氧化物酶(ConA/HRP)联合反应检测糖蛋白.结果 SDS-PAGE电泳图谱显示,相对分子质量约25 000的蛋白质谱带浓度在MG肌肉中明显低于正常对照肌肉和其他神经肌病肌肉.正常肌肉该蛋白谱带密度为3.4±1.5,MG肌肉为1.6±0.7,其他神经肌病肌肉为3.7±1.5;正常与其他神经肌病肌肉中25 000蛋白质水平几乎没有差异(P=0.899),但两者该蛋白质水平与MG肌肉差异非常明显(P<0.001).电泳分析亦表明25 000蛋白质与乙酰胆碱受体分子无关.糖蛋白检测揭示相对分子质量25 000蛋白质为糖蛋白.结论 (1) MG肌肉中25 000蛋白质水平特异性地低于正常肌肉和其他神经肌病肌肉,提示该蛋白可能与MG发病或发展有关;(2)25 000蛋白质是一种糖蛋白,但不是乙酰胆碱受体蛋白.     

大鼠去肌腱对骨骼肌碳酸酐酶3蛋白表达和磷酸酶活性的影响

目的 探讨大鼠骨骼肌去肌腱对碳酸酐酶3(CA3)蛋白表达和磷酸酶活性的影响.方法 切断大鼠同侧趾长伸肌或比目鱼肌远心端的肌腱,取术后7、14、28和56 d的两侧(去肌腱组和对照组)趾长伸肌和比目鱼肌肌肉组织,对相邻组织切片分别进行ATPase染色和CA3免疫组化染色,Western blot法分析CA3蛋白表达水平,...     

信号蛋白质14-3-3ζ的高效融合表达和鉴定

目的　利用分子克隆技术在原核细胞中研究 1 4-3 -3ζ蛋白的表达。方法　 1 4-3 -3ζ c DNA经测序后 ,亚克隆至 p BK-CMV表达载体 ,转化大肠杆菌 BL2 1菌株 ,筛选阳性克隆 ,经异丙基硫代 -β-D-半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。结果　经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)和蛋白印迹 (Western blot)分析 ,表达的融合蛋白相对分子质量为 3 2 0 0 0左右 ,能与 1 4-3 -3ζ蛋白特异性多克隆抗体发生免疫结合反应。结论　人 1 4-3 -3ζ蛋白在原核细胞中有大量表达 ,且具有良好的免疫反应性     

碳酸酐酶Ⅲ的生物学特性及与临床疾病的关系

碳酸酐酶(carbonicanhydrase,CA)是一种含锌的金属蛋白酶家族,至少有11种CA同工酶、3种与CA相关的蛋白质和1种受体型蛋白酪氨酸磷酸酶。其中CAⅢ在细胞内的分布、分子的理化特性、生理功能都有不同于其他CA的特点,其功能主要是清除骨骼肌中的CO2,参与细胞内磷酸化、信号转导及调节能量代谢,但在临床中特别是在神经科疾病中的应用还没有足够的认识。     

难治性颞叶癫痫颞叶脑组织中uPAR蛋白的表达及临床意义

目的研究难治性颞叶癫痫患者脑组织中的uPAR的表达,探讨其在难治性癫痫发病中的意义。方法从第四军医大学唐都医院神经外科建立的难治性癫痫患者脑组织库中随机抽取30例难治性颞叶癫痫患者术后脑组织,用免疫组织化学、免疫印迹(Western blot)检测uPAR的蛋白表达产物,并与15例对照组进行比较。结果uPAR蛋白在难治性颞叶癫痫患者颞叶脑组织中的表达量与对照组相同部位比较明显增高。结论难治性颞叶癫痫患者颞叶脑组织中uPAR蛋白产物表达增高可能与难治性颞叶癫痫发病过程中病理生理学改变有重要关联,可能为难治性颞叶癫痫的治疗提供新的靶点。