神经生长因子对吲哚美辛诱导人胚胎视网膜色素上皮细胞凋亡的保护作用

目的 探讨神经生长因子(nerve growth factor, NGF)对体外培养的人胚胎视网膜色素上皮(human fetal retinal pigment epithelium, HFRPE)细胞凋亡的保护作用。 方法 用传代培养的HFRPE细胞，建立吲哚美辛(indome thacin, IN)诱导的细胞凋亡模型，并用吖啶橙(acridine orange, AO)荧光染色计数和透射电镜(transmission electron microsocpy,TEM)观察NGF对HFRPE细胞凋亡的保护作用。 结果 用AO荧光染色及TEM均观察到经200 ～600 μmol/L IN处理24 h后的HFRPE细胞出现典型的凋亡形态学改变。200 μmol/L IN+500 μg/L NGF组与对照组200 μg/(mol·L) IN相比凋亡细胞差异有显著性的意义(q=3.9204 ，P=0.0320)；400 μmol/L IN+500 μg/L NGF组与对照组400 μmol/L IN相比凋亡细胞差异有非常显著性的意义(q=9.709 15，P=0.000 1)。 结论 NGF 能拮抗IN诱导的HFRPE细胞凋亡。 （中华眼底病杂志，2003，19：38-41）     

神经生长因子对N-甲基-D-门冬氨酸诱导人胚胎RPE细胞凋亡的保护作用

目的 探讨神经生长因子(NGF)对体外培养的人胚胎视网膜色素上皮(hFRPE)细胞凋亡的保护作用。方法 将传代培养的hFRPE细胞,用200μmol/L,300μmol/L N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)建立诱导的hFRPE细胞凋亡模型,并用吖啶橙(AO)荧光染色计数和透射电镜(TEM)观察NGF对凋亡细胞的保护作用。 结果 用AO荧光染色及TEM均观察到经200 μmol/L,300μmol/L NMDA处理72 h后的hFRPE细胞出现典型的凋亡形态学改变。200μmol/L.NMDA作用72 h后hFRPE细胞凋亡指数为(32.587 9±1.488 0)％和200 μmol/L NMDA+300 μmg/L NGF作用72 h后的hFRPE细胞凋亡指数(20.768 7±1.302 4)％相比,差异有显著性(q=2.941 4,P=0.005 0);300 μmol/L NMDA作用72 h后hFRPE细胞凋亡指数为(42.506 4±3.014 8)％,与300 μmol/L NMDA+300 μg/L NGF作用72 h后的hFRPE细胞凋亡指数(25.687 2±1.8974)％相比,差异有非常显著性的意义(q=4.117 8,P=0.000 0)。 结论 NCF能拈抗NMDA诱导的hFRPE细胞凋亡。     

视网膜色素上皮细胞凋亡机理的探讨

了解诱导视网膜色素上皮细胞在体外发生凋亡的以推测该细胞凋亡在体内发生的可能机理。方法培养的人ＲＰＥ细胞分别给予低氧，肿瘤坏死因子，蛋白激酶抑制剂及抗Ｆａｓ抗体处理２４－７２ｈ，同时也观察了纤维母细胞生长因子对体外凋亡诱导因子所致ＲＰＥ细胞凋亡的保护作用。     

视网膜色素上皮细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡是由遗传基因调控的细胞主动死亡形式,具有不同于细胞坏死的典型特征,越来越多的证据表明,视网膜色素上皮（RPE）细胞凋亡参与了许多眼底疾病的发生发展。阐述了RPE细胞凋亡的形态学特点,生物化学特征、遗传基因调控以及活性氧自由基在其凋亡过程中所起的作用。     

Bax过表达诱导培养的人视网膜色素 上皮细胞凋亡观察

目的研究外源性促凋亡基因bax过表达对培养人的视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium ,RPE）细胞凋亡的影响。 方法通过脂质体Lipofectin介导法用含人全长bax 基因片段的真核表达载体P^MDNA3-hbax质粒转化体外培养的RPE细胞,用流式细胞仪检测细胞周期的变化,提取实验组细胞DNA进行DNA梯度电泳。结果Zn^2+可诱导P^MDNA3-hbax转化组RPE细胞出现明显的凋亡峰 ,凋亡峰位于单倍体和二倍体之间,凋亡率为36%,DNA电泳可见DNA梯状条带,P^MDNA3空载体组及未转染组RPE细胞未见亚二倍峰和DNA梯状条带出现。结论外源性促凋亡基因bax过表达可诱导RPE细胞凋亡。(中华眼底病杂志,2001,17:132-134)     

可见光照对培养的人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响

目的 研究可见光照对培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞凋亡的影响。 方法 以白色荧光灯为光源，用500 lx、(2000±500) lx及(3400±200) lx不同光照强度,按不同的光照时间(无光照、6、12、24 h)照射培养的人RPE细胞。利用终末脱氧核糖核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labelling, TUNEL)、荧光素标记的连接素V/碘化丙锭(Annexin V-fluorescein isothiocyanate/Propidium iodium，Annexin V-FITC/PI)双染色流式细胞测定、相差倒置显微镜等手段观察RPE细胞凋亡(分为光照后6、12、24、36 h组)。 结果 可观察到RPE细胞出现两种死亡形式，凋亡与坏死。(1)低于一定阈值(500 lx)的光照对细胞损伤较轻，细胞凋亡及坏死随光照强度的增加而增加。(2)在较短的光照时间(6 h和12 h)内，细胞死亡的增加以凋亡为主；随着光照时间的延长，细胞坏死逐渐明显。(3)随着光照后培养时间的延长，细胞凋亡明显增加(P＜0.05)。光照后6、12、24 h的损伤改变以凋亡为主，但随时间的延长，凋亡继发性坏死的增加显著。光照后36 h，细胞的坏死数显著增高(P＜0.01)。 结论 可见光超过一定照度(500 lx)可导致培养的人RPE细胞凋亡及坏死的显著增加，其损伤程度为光照强度及时间依赖性。较低光照强度及较短光照时间主要诱导细胞凋亡，反之则导致细胞坏死。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 227-230)     

视网膜色素上皮细胞凋亡的研究现状

细胞凋亡是一种由基因控制的程序化的细胞死亡过程，不同的基因参与凋控该过程。目前的研究表明，视网膜色素上皮细胞参与多种玻璃体视网膜病变的发生与发展。阐述了视网膜色素上皮细胞凋亡的概况、相关基因以及在玻璃体视网膜病变过程中所起到的作用，探索通过视网膜色素上皮细胞凋亡预防和治疗这些疾病的新途径。     

视网膜色素上皮细胞凋亡相关疾病的治疗现状及展望

细胞凋亡是生理或病条件下的一种由遗传基因控制的基础主动死亡形式,对维持机体的正常发育以及内环境的稳定起重要作用。细胞凋亡平衡的破坏可导致多种疾病的发生发展。现介绍基因治疗、细胞因子或生长因子、视网膜移植对视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial,RPE)细胞凋亡所致疾病的治疗现状及前景。     

黄芪多糖对过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的观察黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)氧化损伤的保护作用。方法培养的人RPE细胞系ARPE-19分为正常对照组、过氧化氢损伤组和不同浓度(1000 mg·L-1、500mg·L-1)APS干预组,正常对照组不作任何处理,过氧化氢损伤组加入200μmol·L-1过氧化氢,APS干预组加入不同浓度(1000 mg·L-1、500 mg·L-1)APS后加入200μmol·L-1过氧化氢。用倒置荧光显微镜观察各组细胞形态变化;MTT检测各组细胞活性;DAPI染色观察各组细胞核形态学变化;实时细胞电子分析系统(real-time cell electronic sensing system,RT-CES)实时记录细胞生长状态;应用caspase-3活性检测试剂盒测定各组细胞中caspase-3的活性。结果过氧化氢损伤组细胞皱缩,悬浮细胞增多,APS干预后细胞状态改善。MTT检测结果显示:1000 mg·L-1、500 mg·L-1APS孵育24 h后细胞存活率分别为(99.86±3.64)%和(101.03±3.52)%,与正常对照组(100%)相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05),过氧化氢损伤组细胞存活率为(56.49±2.30)%,与正常对照组相比显著降低(P<0.01),1000 mg·L-1、500 mg·L-1APS干预后,细胞存活率升高到(88.14±2.97)%和(80.75±3.13)%,与过氧化氢损伤组相比差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。DAPI染色显示正常细胞核均匀淡染,过氧化氢损伤组出现强荧光点和致密的细胞核,APS处理后凋亡程度减轻。RT-CES显示,APS处理可以减少过氧化氢造成的细胞损伤。Caspase-3检测发现过氧化氢造成细胞caspase-3水平升高,APS处理后caspase-3水平下降。结论 APS可以抑制过氧化氢诱导的人RPE细胞系ARPE-19的凋亡,这为APS的临床应用提供了一定的实验基础。     

人酸性成纤维细胞生长因子对过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞坏死的保护作用

目的 研究人酸性成纤维细胞生长因子(human acidic fibroblast growth factor,haFGF)对人视网膜色素上皮(humanretinal pigment epithelium,hRPE)细胞的保护作用.方法 用0.2 mmol·L-1过氧化氢培养hRPE细胞36 h制作hRPE细胞坏死模型为模型组,用1 mg·L-1haFGF预培养hRPE细胞12 h、24 h、48 h,并设置空白对照组,用台盼蓝染色在倒置显微镜下观察细胞坏死情况,用MTT法检测haFGF预作用hRPE细胞不同时间细胞的死亡率,并用8 g·L-1琼脂糖凝胶电泳检测haFGF不同时间对hRPE细胞完整性的影响.结果 模型组细胞死亡率为(36.97±2.81)%,空白对照组细胞死亡率为(1.05±0.04)%,haFGF预作用细胞12 h、24 h、48 h细胞死亡率分别为(32.50±4.06)%、(19.77±3.68)%、(26.45±3.19)%.其中,模型组与空白对照组细胞死亡率相比、haFGF预作用24 h与模型组相比差异均有显著统计学意义(均为P<0.01),而haFGF预作用12 h、48 h细胞死亡率与模型组相比差异均无统计学意义(均为P>0.05).台盼蓝染色结果显示haFGF预作用细胞24 h,hRPE蓝染细胞核数明显减少,而预作用12 h染色细胞核数减少不显著,预作用48 h蓝染细胞核数显著增加.琼脂糖凝胶电泳显示:模型组细胞DNA呈现"涂布"状,说明细胞坏死明显,haFGF预作用细胞24 h"涂布"状基体消失,提示hRPE细胞DNA完整性尚好,而预作用12 h和48 h DNA"涂布"状仍明显存在.结论 1 mg·L-1的haFGF可以显著拮抗过氧化氢对hRPE细胞的损伤,预作用24 h时haFGF对hRPE细胞的保护作用最佳.     

缺氧诱导体外培养人视网膜色素上皮细胞凋亡

目的:了解缺氧条件下体外培养人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的凋亡情况。方法:将培养的人RPE细胞置于含10mL/LO2、50mL/LCO2和940mL/LN2的培养箱内建立缺氧模型。于缺氧后1,3,6,12,24h,利用扫描电镜、透射电镜、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucle-otidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)技术和流式细胞仪测定RPE细胞凋亡水平。结果:常氧状态下RPE细胞生长良好,几乎没有凋亡(TUNEL法测凋亡指数为1.2)。缺氧条件下,RPE细胞发生了不同程度的凋亡,缺氧后3h凋亡水平达峰值(凋亡指数为34.43)。结论:缺氧可导致体外培养的人RPE细胞凋亡,提示RPE凋亡可能参与了某些缺血缺氧性眼病的发生。     

虾青素对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：：探讨虾青素(astaxanthin,AST)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2 O2)诱导人视网膜色素上皮细胞( retinal pigment epithelial cells,RPE)氧化损伤的保护作用。方法：人RPE细胞系传代培养,MTT检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,透射电镜观察超微结构变化。结果：MTT结果显示用10-8 mol/L和10-4 mol/L AST处理后, RPE 细胞活性分别提高到53.66％±3.25％和70.43％±2.38％,与氧化损伤组(38.76％±3.74％)比较,差异具有统计学意义(P<0.05);流式细胞计数结果显示,预先给予10-8 mol/L和10-4 mol/L的AST作用后, RPE细胞凋亡率分别下降到30.23％±1.91％和12.58％±2.12％,与氧化损伤组(42.50％±1.94％)比较,差异具有统计学意义( P<0.05)。电镜观察结果显示,伴随AST作用浓度的增加,细胞形态亦逐渐得到改善。结论：AST可以抑制H2 O2诱导的人RPE细胞的凋亡,从而为寻求有效的防治视网膜损伤的药物提供可靠的实验依据。     

吲哚美辛诱导体外培养的视网膜色素上皮细胞凋亡

目的　探讨用吲哚美辛 ( indomethacin,IN)诱导体外培养的人胚胎视网膜色素上皮 ( retinal pigm entepithelium ,RPE)细胞的凋亡。方法　加入终浓度分别为 10 0、 2 0 0、40 0、 6 0 0μmol· L- 1 的 IN,作用 2 4h;6 0 0μm ol· L- 1 IN作用 6、 12、 2 4h后用透射电镜定性观察凋亡细胞 ,并用吖啶橙荧光染色进行定量和定性分析。结果　经 2 0 0、40 0、6 0 0 μm ol·L- 1 IN作用 2 4h后 RPE细胞凋亡指数分别为 ( 2 7.0 0 0 0± 1.3375 ) % ,( 5 1.0 0 0 0±1.370 3) % ,( 6 8.0 0 0 0± 1.6 86 5 ) %与对照组 ( 2 .0 0 0 0± 0 .42 16 ) %相比 ,差异有显著性( t=4.6 2 4,9.0 6 2 ,12 .2 0 6 ,P=0 .0 0 0 ,0 .0 0 0 ,0 .0 0 0 ) ,随着 IN浓度的增加 ,RPE细胞凋亡数逐渐增多 ;6 0 0μm ol· L- 1 IN作用 12、2 4h后 RPE细胞凋亡指数分别为 ( 44 .0 0 0 0±0 .843 3) % ,( 6 4.0 0 0 0± 1.2 6 49) %与对照组 ( 2 .0 0 0 0± 0 .42 16 ) %相比 ,差异有显著性( t=8.6 17,13.2 74,P=0 .0 0 0 ,0 .0 0 0 )。结论　 IN能诱导体外培养的人胚胎 RPE细胞的凋亡 ,并且 RPE细胞的凋亡呈现出随浓度增加和时间延长凋亡细胞数明显增多。     

过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞衰老及其机制探讨

目的研究过氧化氢诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化损伤中的细胞衰老现象并探讨其机制。方法培养的人RPE细胞随机分为正常对照组和过氧化氢处理组,过氧化氢处理组根据用600μmol·L-1过氧化氢处理的不同时段分为1h、6h、12h、24h及72h组。流式细胞术分析各组细胞周期,计算G0/G1期细胞所占比率;流式细胞术检测各组细胞线粒体膜电位的变化;免疫组织化学法检测各组细胞Caspase-9的变化。结果与正常对照组相比,过氧化氢作用6h组G0/G1期细胞所占比率增高(P<0.05),且随作用时间的延长而增加,72h组最高(P<0.01),达到(89.12±0.21)%;过氧化氢损伤导致RPE细胞膜电位降低,且随时间延长逐渐降低,72h组最低(62.48±0.59);Caspase-9蛋白在过氧化氢作用1h时表达开始增高,且随时间延长逐渐增加,在24h时达到高峰(36·2±0.4),72h时略有回落(26.4±0.8),但仍较正常组(3.2±0.2)高。结论过氧化氢作用下,人RPE细胞生长停滞于G/G期,呈现衰老现象。线粒体膜电位的降低和线粒体凋亡途径上游因子Caspase-9的活化可能是细胞衰老的机制之一。     

肝细胞生长因子对人视网膜色素上皮细胞表型的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞形态及细胞表面抗原的影响.方法 体外培养人RPE细胞,分别采用0.4%小牛血清和重组人HGF因子刺激人RPE细胞,应用相差显微镜观察细胞形态变化;免疫组织化学方法 检测细胞表面抗原细胞角蛋白、波形蛋白、成纤维细胞特异性蛋白-1(Fsp-1)的表达变化;采集经HGF(20 ng/mL)刺激后0、12、24、48 h的RPE细胞应用RT-PCR方法 观察Fsp-1mRNA的表达变化.结果 体外培养的人RPE细胞,在含0.4%小牛血清培养液中呈多角形,贴壁生长融合后呈铺路石样;细胞角蛋白的表达阳性率为89.7%,波形蛋白阳性率为100%,Fsp-1阳性率为45.3%.HGF(20 ng/mL)刺激24 h后,细胞呈长梭形,具有成纤维细胞形态特征;细胞角蛋白阳性率为50.1%(χ2=38.1,P＜0.01),Fsp-1阳性率为91.2%(χ2=48.62,P＜0.01),而波形蛋白表达无明显变化.HGF作用后,Fsp-1mRNA表达升高(F=13.761,P=0.002). 结论 HGF促进人RPE细胞向成纤维细胞的表型转化,提示HGF在RPE细胞上皮-间质转化过程中起重要作用.     

糖基化终产物促人视网膜色素上皮细胞表达VEGFmRNA

目的　探讨糖基化终产物 (advancedglycationendproducts,AGEs)对人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞表达血管内皮生长因子mRNA(vascularen dothelialgrowthfactormRNA ,VEGFmRNA)的影响。方法　不同浓度的AGEs(10mg·L-1、5 0mg·L-1、10 0mg·L-1、2 0 0mg·L-1、4 0 0mg·L-1、6 0 0mg·L-1)作用人RPE细胞18h ;10 0mg·L-1的AGEs作用人RPE细胞不同时间 (2h、4h、8h、18h、2 4h、4 8h) ,取不同组别细胞作原位杂交 ,用图像分析仪分析染色结果。结果　随AGEs浓度的增加 ,人RPE细胞表达VEGFmRNA逐渐增强 ;随AGEs作用时间的延长 ,人RPE细胞表达VEGFmR NA逐渐增强。结论　AGEs能促使人RPE细胞表达VEGFmRNA ,并呈剂量和时间依赖性。     

高糖对人视网膜色素上皮细胞VEGF及PEDF表达的影响

目的 探讨高糖对人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮源性生长因子(PEDF)的干预作用.方法 采用HRPE细胞株,将细胞分为正常对照组(NG,5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,15、20、30 mmol/L葡萄糖)、高渗组(HM,24.4 mmol/L甘露醇+5.6 mmol/L葡萄糖).应用逆转录PCR(RT-PCR)技术检测VEGF及PEDF mRNA的表达.用ELISA技术检测细胞上清液中VEGF蛋白的表达.结果 高糖作用下VEGFmRNA和蛋白表达显著增高,PEDFmRNA的表达受到显著抑制.结论 高糖可从转录水平及蛋白水平诱导HRPE细胞VEGF的表达,并抑制PEDF的表达.     

生长因子与视网膜色素上皮细胞

目前 研究认为视网膜色素上皮(RPE)细胞是构成增生性视网膜疾病中增生膜的主要细胞成分。RPE细胞的增生和移行，使得增生组织长人玻璃体内，最终导致牵拉性视网膜脱离和失明。新近研究的某些生长因子在RPE细胞的增生和移行中发挥了重要作用。介绍几种主要的生长因子对RPE细胞的作用，为RPE细胞的实验研究和临床研究提供理论基础。