三氧化二砷联合热疗对人食管癌细胞株EC-1增值和细胞周期的影响

摘要：目的 探讨三氧化二砷(AS203) 联合热疗对人食管癌细胞株EC-1增殖的抑制作用及机制。方法 经AS203注射液联合热疗处理EC-1细胞后采用MTT法测定细胞的增殖抑制效应; 应用流式细胞术检测细胞周期变化,TUNEL法观察细胞凋亡。结果:与AS203单药或单用热疗相比, AS203与热疗联合应用后可显著抑制EC-1细胞增殖和诱导细胞凋亡, 并使细胞S期和G0/G1期比例明显降低, G2 /M 期明显升高。结论:AS203联合热疗具有协同抗食管癌作用,其机制可能与联合应用后增强诱导食管癌细胞凋亡、细胞周期特异性治疗与细胞周期调控剂联合增效有关。     

纳米颗粒对人食管癌EC-9706、EC-109细胞增殖和凋亡的影响

目的研究氧化铜(CuO)、氧化锌(ZnO)、二氧化钛(TiO_2)纳米颗粒在体外对人食管鳞状癌细胞系EC-9706和EC-109增殖的影响及其部分作用机制。方法使用透射电镜(TEM)、动态光散射(DLS)鉴定纳米颗粒物的理化性质,然后将不同浓度的TiO_2、CuO、ZnO(5~80 mg·L~(-1))与体外培养的EC-9706和EC-109细胞孵育,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)法检测细胞周期及凋亡率,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,蛋白免疫印迹法检测细胞中Bcl-2和caspase-3蛋白表达情况。结果实验所用的纳米CuO、ZnO、TiO_2颗粒为球形,粒径分别为12、20.6、12 nm。在水中与细胞培养液中聚集成较大颗粒并带负电。随着纳米颗粒浓度的增加,纳米CuO和ZnO颗粒可剂量依赖性抑制食管鳞癌细胞的增殖,G_0/G_1期细胞的比率上调,G_2/M期的比率下降,并促进凋亡率增加,侵袭力下降;纳米颗粒处理48 h后,与对照组相比,活化caspase-3表达量明显升高,Bcl-2表达量明显下降(P<0.05)。纳米TiO_2颗粒对食管鳞癌细胞的增殖、凋亡和侵袭能力无明显的影响。结论与纳米TiO_2相比,一定浓度的CuO和ZnO纳米颗粒可有效抑制食管鳞癌细胞的生长,阻滞细胞周期于G_0/G_1期,并诱导其凋亡,这可能是其抑制食管癌细胞功能的作用机制之一。     

靶向ESCCAL_1基因的siRNA纳米复合物的制备及体外对食管癌EC-9706细胞的抑制作用

目的制备装载靶向ESCCAL_1基因的siRNA纳米复合物,并考察其体外对食管癌EC-9706细胞增殖的抑制作用及对ESCCAL_1表达的影响。方法采用溶胶-凝胶法制备MSNP,通过表面修饰阳离子聚合物聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)使其带有正电荷,能够与带负电的ESCCAL_1siRNA相结合;纳米粒度仪、透射电镜测定纳米复合物的粒径和电位;凝胶电泳测定其对siRNA的包封率;MTT法检测纳米复合物体外对EC-9706细胞增殖的抑制作用;荧光显微镜观察纳米复合物中siRNA被EC-9706细胞摄取的情况;RT-PCR法检测其对EC-9706细胞中ESCCAL_1 LncRNA表达的影响。结果纳米粒度仪、透射电镜测得所合成的MSNP表面介孔直径约3~5 nm,分散性较好,尺寸较均一;能明显抑制EC-9706细胞的增殖(P<0.05),72h抑制率为(54.93±2.6)%;其装载的siRNA能被EC-9706细胞有效摄取;能有效沉默EC-9706细胞中ESCCAL_1,沉默效率为69.5%。结论采用该方法可制备包封率较高的肿瘤靶向纳米复合物,其介导的siRNA能有效抑制食管癌EC-9706细胞的体外增殖和沉默EC-9706细胞中ESCCAL_1表达。     

番茄红素异构体对人卵巢癌HO-8910细胞增殖和凋亡的影响效果初探

目的研究番茄红素异构体对体外培养的人卵巢癌HO-8910细胞增殖和凋亡的影响。方法观察含不同比例的顺、反式异构体番茄红素对人卵巢癌HO-8910细胞的增殖抑制作用;采用PI流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果番茄红素异构体对人卵巢癌HO-8910细胞有一定程度的抑制增殖和诱导凋亡的作用,且呈浓度依赖性。结论对人卵巢癌HO-8910细胞,含较高比例顺式番茄红素的Ⅱ号药组抑制增殖与诱导凋亡的作用比全反式番茄红素的I号药组具更强的生物活性。     

穿心莲内酯对人食管癌Ec9706细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨穿心莲内酯(AD)对人食管癌Ec9706细胞增殖、克隆形成、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法:分别以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和平板克隆形成法评价AD对Ec9706细胞增殖和克隆形成的抑制作用;通过流式细胞术、细胞原位凋亡检测(TUNEL)和Annexin·V／PI法观察AD诱导细胞凋亡。结果:AD显著抑制Ec9706细胞的增殖,IC_(50)值为28．6μg·mL~(-1),也显著抑制Ec9706细胞的克隆形成,IC_(50)值为1．7μg·mL~(-1)。AD 30和60μg·mL~(-1)组G_0/G_1期的细胞比例较对照组显著增加[(65．6±1．9)%,(60．5±1．1)% vs．(50．6±0．9)%,P＜0．01],凋亡细胞比例也显著大干对照组[(17．9±2．6)%,(39．4±1．7)％vs．(0．5±0．2)%,P＜0．01]。结论:AD抑制人食管癌Ec9706细胞的增殖和克隆的形成,阻滞细胞周期于G_0/G_1期并诱导细胞凋亡。     

姜黄素对人胃癌MGC823细胞凋亡的影响

目的：探讨姜黄素对人胃癌MGC823细胞体外增殖及凋亡的影响。方法：选用人胃癌MGC823细胞进行体外培养,采用MTT法测定不同浓度的姜黄素对MGC823细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪监测凋亡;荧光显微镜技术和电镜技术,观察姜黄素对细胞诱发凋亡及细胞周期的变化。结果：姜黄素可明显抑制细胞的生长,其抑制率与药物浓度成剂量依赖关系。流式细胞分析仪结果表明,姜黄素能使MGC823细胞在加药后48h出现凋亡峰。电镜观察可见姜黄素能使细胞发生凋亡,出现核边集及染色质浓缩成块状。结论：姜黄素可抑制Ec-9706细胞的生长,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

杨梅素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及凋亡通路的研究

目的研究杨梅素体外对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及凋亡通路的影响。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞,MTT和SRB法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡,计算机分析细胞周期;Western Blot法检测caspase-3、caspase-9和survivin含量。结果杨梅素对HeLa细胞的体外增殖具有抑制作用,并具有浓度和时间依耐性;杨梅素体外诱导HeLa细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在S期;杨梅素促进caspase-3和caspase-9蛋白表达,抑制survivin蛋白表达。结论杨梅素可抑制HeLa细胞的增殖,诱导其凋亡,其凋亡途径同时涉及细胞内途径和细胞外途径。     

氧氟沙星-绕丹宁衍生物诱导人肝癌细胞凋亡作用

目的研究氧氟沙星-绕丹宁衍生物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用。方法用不同浓度的6-(3-苄基-4-氧代-2-硫代-噻唑烷-5-叉甲基)-9-氟-3-甲基-10-(4-甲基哌嗪-1-基)-2,3-二氢-7-氧代-7-氢-吡啶并[1,2,3-de][1,4]苯并噁嗪(R3)与人肝癌SMMC-7721细胞、食管鳞癌EC-9706细胞、结肠癌CaCO-2细胞和L-02肝转化细胞体外培养。MTT法检测R3对各种细胞的增殖抑制作用;DAPI荧光染色法和TUNEL法检测细胞凋亡变化;PI染色流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot法测定p53和caspase-3蛋白表达量的变化。结果 R3在2~20μmol·L~(-1)的浓度范围内能明显抑制SMMC-7721细胞、EC-9706细胞和CaCO-2细胞的增殖,作用于细胞24 h的IC_(50)值分别为3.893、4.181和3.408μmol·L~(-1);R3作用于L-02细胞24 h的IC_(50)值为33.959μmol·L~(-1);氧氟沙星盐酸盐作用于SMMC-7721细胞24 h的IC_(50)值为240.137μmol·L~(-1);舒尼替尼作用于SMMC-7721细胞24 h的IC_(50)值为8.075μmol·L~(-1);R3处理SMMC-7721细胞后,细胞周期被阻滞在G1-S期检测点,且细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。R3明显增加SMMC-7721细胞p53和caspase-3蛋白表达量,其中caspase-3活性裂解片段增加明显。结论氧氟沙星-绕丹宁衍生物对肿瘤细胞具有较好的选择性抑制作用,能够明显诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡。     

丙戊酸对人脑胶质母细胞瘤细胞株抑制增殖及诱导凋亡作用研究

目的研究丙戊酸(2-propylpentanoic acid,VPA)体外对人脑胶质母细胞瘤细胞株增殖抑制、诱导细胞周期阻滞及促进凋亡的作用,为临床治疗提供理论依据。方法 MTT比色法检测VPA对胶质母细胞瘤细胞株的杀伤作用;流式细胞术检测其对细胞周期及凋亡的影响作用;Western blot法检测乙酰化组蛋白H3(acetyl-Histone H3)、乙酰化组蛋白H4(acetyl-histone H4)表达量变化情况。结果 VPA对胶质瘤母细胞瘤细胞株SF295、U87具有抑制增殖作用,诱导细胞周期阻滞于G2/M期,乙酰化组蛋白H3、H4表达量呈时间依赖性增加。大剂量可以诱导出现凋亡。结论 VPA能够在体外抑制胶质瘤细胞生长,诱导细胞周期阻滞及促进细胞凋亡,其机制可能与促进组蛋白乙酰化有关。     

番茄红素对人前列腺癌细胞（DU145）生长抑制的离体和整体水平研究

目的：研究番茄红素对人前列腺癌细胞DU145的影响。方法：体外培养的人前列腺癌细胞DU145经番茄红素作用后用苔盼蓝色进行活细胞计数,绘制生长曲线并计算抑制率;应用流式细胞仪分析番茄红素对DU145细胞周期和凋亡的影响。制作裸鼠人前列腺癌模型,观察番茄红素在整体动物上的作用。结果：番茄红素可以明显抑制DU145细胞的生长,且呈剂量－效应和时间－效应关系。10、20、40μmol/L处理细胞7d后,细胞增长的抑制率分别为10．76％、92．90％99．11％（P＜0．01）。裸鼠人前列腺癌模型上的研究显示,6％番茄红素油树脂可显著抑制腺瘤的生长、300mg/kg剂量组腺癌抑制率可达到75．76％（P＜0．05）。用经番茄红素处理过的细胞致瘤力消失。流式细胞仪分析显示番茄红素影响该细胞周期并引起细胞凋亡,凋亡率高达42．42％。结论：番茄红素可以在离体细胞和整体动物水平明显抑制雄激素非依赖型人前列腺癌DU145,其抑制机制可能是通过影响人前列腺癌细胞的生长周期和诱导其凋亡而实现。     

藤梨根提取物通过 IL-6/STAT3信号通路调控食管癌细胞生物学行为的研究

目的探讨藤梨根提取物通过白细胞介素 -6/信号传导因子及转录激活因子 3(IL-6/STAT3)信号通路调控食管癌 EC9706细胞生物学行为的研究。方法本实验研究自 2018年 10月到 2019年 6月,分别用 1、5、10、100、500、1 000 mg/L的藤梨根提取物处理食管癌 EC-9706细胞,选取 100 mg/L作为最佳逆转实验浓度;用 IL-6/STAT3信号通路激活剂处理食管癌 EC-9706细胞。甲基噻唑基四唑( MTT)检测细胞的毒性;流式细胞术检测细胞的凋亡率; Transwell法检测细胞的迁移和侵袭;划痕实验检测细胞的运动能力;蛋白免疫印迹法( Western blotting)检测细胞周期蛋白 1(Cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶抑制因子(P21)、 B淋巴细胞瘤 -2相关蛋白(Bax)、 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)、基质金属蛋白酶 -9(MMP-9)、信号传导及转录活化因子 3(STAT3)、磷酸化的信号传导与转录激活因、子-3(p-STAT3)蛋白的表达。结果藤梨根提取物明显促进了食管癌 EC-9706细胞凋亡( 37.35±2.37)并抑制了细胞增殖( 21.33±3.91)、迁移( 106.31±3.20)和侵袭( 67.29±2.99)(P<0.05);下调 CyclinD1(0.25±0.01)、 Bcl-2(0.26±0.03),、MMP-2(0.27±0.03)、 MMP-9(0.25±0.01)、 STAT3(0.34±0.03)、 p-STAT3(0.20±0.01)     

茵陈素对肺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 :探讨茵陈素对肺癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法 :应用光镜、四氮甲唑蓝 (MTT)方法和流式细胞术分析茵陈素对肺癌细胞形态学、生长和细胞周期的变化。结果 :茵陈素能抑制肺癌细胞的增殖 ,呈剂量依赖性 ,以160μg/ml抑制作用最明显 ,抑制率达52 4 %。80μg/ml时 ,S期和G2/M期细胞比例开始下降 ,细胞被阻滞于G0/G1 期 ,不能进入S期及G2/M期 ,增殖指数明显下降。结论 :茵陈素在体外对肺癌细胞具有抑制作用 ,通过抑制DNA合成 ,将细胞阻滞于G0/G1 期来抑制细胞增殖。     

蟾毒灵对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响

摘要目的：研究蟾毒灵对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨其在膀胱癌中的抗肿瘤机制。方法：采用MTT法测定蟾毒灵对人膀胱癌T24细胞增殖的影响;流式细胞术（FCM）检测蟾毒灵对癌细胞凋亡和细胞周期的影响;RT—PCR法检测癌细胞周期蛋白D1（CyclinDl）基因表达情况。结果：蟾毒灵可抑制人膀胱癌T24细胞的增殖,并呈现出时间和浓度依赖性;蟾毒灵能诱导T24细胞凋亡;20nmol／L浓度的蟾毒灵预处理膀胱癌T24细胞后,与对照组（36．42％）进行比较,可分别在12h（69．76%）和24h（88．14%）显著诱导细胞G0／G1期阻滞（P〈0．05）,且可降低膀胱癌T24细胞的CyclinDlmRNA表达水平。结论：蟾毒灵能显著抑制人膀胱癌T24细胞增殖,诱导T24细胞G0／G1周期阻滞,下调人膀胱癌T24细胞CyclinDl基因表达。     

Ethanol Elicits Inhibitory Effect on the Growth and Proliferation of Tongue Carcinoma Cells by Inducing Cell Cycle Arrest

Cellular effects of ethanol in YD-15 tongue carcinoma cells were assessed by MTT assay, caspase activity assay, Western blotting and flow cytometry. Ethanol inhibited the growth and proliferation of YD-15 cells in a dose- and time-dependent manner in an MTT assay. The effects of ethanol on cell cycle control at low percent range of ethanol concentration (0 to 1.5%), the condition not inducing YD-15 cell death, was investigated after exposing cells to alcohol for a certain period of time. Western blotting on the expression of cell cycle inhibitors showed that p21 and p27 was up-regulated as ethanol concentration increases from 0 to 1.5% whilst the cell cycle regulators, cdk1, cdk2, and cdk4 as well as Cyclin A, Cyclin B1 and Cyclin E1, were gradually down-regulated. Flow cytometric analysis of cell cycle distribution revealed that YD-15 cells exposed to 1.5% ethanol for 24 h was mainly arrested at G2/M phase. However, ethanol induced apoptosis in YD-15 cells exposed to 2.5% or higher percent of ethanol. The cleaved PARP, a marker of caspase-3 mediated apoptosis, and the activation of caspase-3 and -7 were detected by caspase activity assay or Western blotting. Our results suggest that ethanol elicits inhibitory effect on the growth and proliferation of YD-15 tongue carcinoma cells by mediating cell cycle arrest at G2/M at low concentration range and ultimately induces apoptosis under the condition of high concentration.     

青蒿琥酯抑制人头颈部鳞状细胞癌增殖及诱导凋亡的机制

摘要： 目的 探讨天然小分子化合物青蒿琥酯 （Akt） 通过诱导人头颈部鳞癌细胞凋亡而抑制肿瘤生长的分子机制。方法 培养人头颈部鳞癌细胞系 UM-SCC-10A, 利用四甲基偶氮唑蓝 （MTT） 法检测 Akt 半数抑制浓度 （IC50 ）;在荧光显微镜下观察不同浓度 （0、 2.5、 5、 10、 20、 40 μmol/L） Akt 对细胞形态的影响; 流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况; 免疫印迹 （Western blot） 分析 Akt 诱导凋亡相关蛋白和细胞周期调节因子表达水平的变化。结果 Akt 对 UM- SCC-10A 细胞的生长有明显抑制作用, 且生长抑制率随药物浓度增加而增加; 当 Akt 处理细胞 48 h 时, IC50 为 15.01 μmol/L。荧光显微镜下, 使用细胞核染料 Hoechst33258 观察到细胞核内出现凋亡小体; 流式细胞仪分析显示 Akt 诱导细胞周期阻滞在 G1 期, 细胞出现大量凋亡; Western blot 结果显示 P53、 P21 蛋白表达量上调、 细胞周期蛋白 D （Cy⁃ cline D） 下调; 线粒体途径诱导的 Bcl-2 相关 X 蛋白 （Bax）、 细胞色素 C （cytochrome C） 及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 （caspase-3） 表达上调, B 细胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2）、 procaspase-3 表达下调, 线粒体膜电位降低。结论 Akt 经由线粒体途径诱导 UM-SCC-10A 细胞凋亡, 阻滞细胞周期于 G1期, 进而抑制肿瘤细胞增殖。     

Eg5基因在神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡中的作用

目的 探讨Eg5基因对神经母细胞瘤（NB）细胞增殖和凋亡的影响。方法 取2株NB细胞株SHSY-5Y和NBL-S,分别转染针对Eg5基因的小干扰RNA （siRNA）,分为细胞对照组（用等体积的水代替siRNA,只含有脂质体,未转染细胞）、siRNA对照组（转染siRNA对照）和siRNA干扰组（转染Eg5 siRNA）,每组6孔,每孔1×10⁶个细胞。使用实时定量聚合酶链式反应（real-time PCR）检测Eg5 mRNA表达水平的变化;使用5-乙炔基-2''-脱氧尿苷（EdU）掺入实验和克隆形成实验检测下调Eg5表达对NB细胞增殖的影响;使用流式细胞术检测下调Eg5表达对NB细胞凋亡和细胞周期的影响。结果 荧光定量PCR检测结果显示,siRNA干扰组Eg5 mRNA表达水平与细胞对照组和siRNA对照组相比显著减少,差异有统计学意义（P < 0.05）;EdU掺入实验和克隆形成结果表明,siRNA干扰组细胞中DNA的合成量和细胞克隆数量低于细胞对照和siRNA对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）;流式细胞术检测结果显示,细胞对照组和siRNA对照组细胞的凋亡比率低于siRNA干扰组细胞的凋亡比率,差异有统计学意义（P < 0.05）;细胞周期的检测结果显示,细胞对照组和siRNA对照组细胞中G0/G1期所占比率< 50%,而siRNA干扰组细胞中G0/G1期所占比率>70%,差异有统计学意义（P < 0.05）。结论 在NB细胞中使用siRNA下调Eg5表达,能够抑制NB细胞增殖,促进细胞凋亡。     

金丝桃苷体外抗胃癌作用及其机制研究

目的：研究金丝桃苷（Hyperoside）对胃癌BGC-823细胞的生长、周期及凋亡的作用,并通过检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase 3、caspase 8、caspase 9）的活性探讨金丝桃苷诱导胃癌凋亡的可能机制。方法：采用MTT法检测金丝桃苷对胃癌BGC-823细胞的增殖影响;流式细胞技术检测金丝桃苷对胃癌BGC-823细胞周期和凋亡的影响;比色法测定金丝桃苷对胃癌BGC-823细胞凋亡过程中caspase 3、caspase 8和caspase 9活性影响。结果：金丝桃苷处理BGC-823细胞24h和48h后,细胞生长明显抑制,作用24h和48h时其IC50分别为32.14和22.67μg/mL;金丝桃苷处理组与对照组相比,胃癌BGC-823细胞G0/G1期比例明显增加,凋亡细胞比例明显增加;caspase 3、caspase 8和caspase9活性随药物浓度增加而逐渐升高。结论：金丝桃苷能够通过阻断细胞周期、诱导细胞凋亡有效抗胃癌,其诱导肿瘤细胞凋亡机制可能与激活caspase 3、caspase 8和caspase 9活性密切相关。     

罗格列酮对体外培养小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1生长与分化的影响研究

目的:研究罗格列酮对体外培养小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1生长与分化的影响。方法:以小鼠MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型,分别加入1、2、5、10μmo·lL-1罗格列酮干预,MTT法测定细胞活性并计算生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫组化法分析细胞中促凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达;测定细胞中分化指标碱性磷酸酶(ALP)的活性。设立只加入培养基处理的空白对照组。结果:与空白对照组比较,罗格列酮各浓度组生长抑制率、细胞凋亡率升高(P均<0.05),Bax表达增强、Bcl-2表达减弱、ALP活性下降(P均<0.05),且呈浓度依赖性。结论:罗格列酮可抑制MC3T3-E1细胞生长及分化,并诱导其凋亡;而Bax/Bcl-2可能参与凋亡的发生,并可能起关键调控作用。