清热活血方药对CIA大鼠Wnt信号通路成骨细胞相关因子的影响

目的:分析清热活血方(QRHX)对类风湿关节炎大鼠Wnt信号通路相关因子表达的影响,探讨清热活血方药对CIA大鼠骨破坏的保护机制。方法:SD大鼠40只按随机数字表法分为正常组、模型组、清热活血方药组、依那西普组。通过滑膜病理切片观察各组大鼠关节滑膜病理改变,采用RT-PCR方法对各组大鼠滑膜DKK-1、β-catenin基因mRNA表达水平进行对比分析,通过ELISA检测各组大鼠血清DKK-1、β-catenin、TCF、LRP5的蛋白含量。结果:滑膜病理显示清热活血方药组大鼠滑膜中的炎症水平较模型组明显减轻,清热活血方药组大鼠滑膜中DKK-1mRNA表达水平和血清中DKK-1含量较模型组明显减少,β-catenin mRNA表达水平及血清β-catenin、TCF、LRP5含量与模型组比较显著升高。结论:清热活血方药能降低滑膜炎症水平,抑制Wnt信号通路中DKK-1细胞因子的表达,促进β-catenin、TCF、LRP5的表达,可能通过作用于Wnt/β-catenin通路在CIA大鼠骨破坏过程中发挥骨保护作用。     

金雀异黄素对胶原诱导性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞MAPK信号通路的影响

目的 研究金雀异黄素(genistein,Gen)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)动物模型胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis, CIA)大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)MAPK信号 传导通路的影响。     

痹清饮对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的干预作用

目的:探讨痹清饮对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖分化的影响。方法:分离培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞,不同浓度痹清饮作用后,与白芍总苷对照,MTT法测定细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞周期。结果:痹清饮能显著抑制成纤维滑膜细胞增殖分化,并且抑制作用呈明显的量效关系。结论:痹清饮可抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖,促进凋亡。     

黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的调控作用

目的观察黄芪甲苷对Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞和人软骨细胞共培养体系基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、Ⅱ型胶原羧基端肽(CTX-Ⅱ)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)的调控作用,初步阐释黄芪甲苷治疗骨关节炎的分子作用机制。方法通过β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,激活其Wnt/β-catenin信号通路。Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞与正常人软骨细胞置于Transwell小室中共培养。倒置显微镜观察Wnt/β-catenin信号通路活化的人滑膜细胞对人软骨细胞形态学变化的影响。黄芪甲苷混悬液干预共培养体系,采用Western bolt方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;采用ELISA方法检测黄芪甲苷对滑膜细胞、软骨细胞培养上清液MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达的影响。结果β-catenin慢病毒载体转染正常人滑膜细胞后成功激活Wnt信号通路并与软骨细胞共培养。随培养时间的延长,软骨细胞生长逐渐受到抑制,软骨细胞胞体边缘与板壁接触处发白,折光度增加,细胞贴壁强度降低。黄芪甲苷干预后,Western blot检测发现滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达明显下调(P0.01);ELISA法检测发现滑膜与软骨细胞上清液中MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP表达与正常对照相比明显升高(P0.01)。结论滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的激活可以使软骨细胞生长受到抑制。黄芪甲苷可以降低滑膜细胞β-catenin表达,且与干预时间长短相关。黄芪甲苷可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调MMP-7、CTX-Ⅱ、COMP的表达。黄芪甲苷可能通过抑制OA滑膜Wnt/β-catenin信号通路,改善滑膜炎症、调控滑膜-软骨共同体系微环境、达到抑制软骨降解,促进软骨细胞功能恢复而治疗骨关节炎。     

中药复方调控Wnt/β-catenin信号通路防治骨质疏松症研究进展

骨质疏松症,是一种骨强度与骨密度降低以及骨脆性增加的全身代谢性骨病。成人的骨质由成骨细胞的骨形成和破骨细胞的骨吸收共同维持,当骨吸收超过骨形成时,则易形成骨质疏松症。Wnt/β-catenin信号通路与成骨细胞增殖、分化和骨形成有关,在调节骨质方面至关重要。近年来,Wnt/β-catenin信号通路调节骨质疏松症的作用机理逐步明确,基于Wnt/β-catenin信号通路的中药复方也取得较好疗效。研究发现,中药复方通过调控Wnt/β-catenin信号通路发挥防治骨质疏松症的作用。因此,从Wnt/β-catenin信号通路入手,探讨中药复方防治骨质疏松症的作用机制,为临床防治骨质疏松提供新思路。     

祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的调控作用

目的观察祛痰化瘀利湿方对人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法将GSK-3β选择性小分子抑制剂作用于正常人滑膜细胞,以激活Wnt/β-catenin信号通路。提取并检测胞核蛋白β-catenin的表达,从而确定最佳激活时间点。将对数生长期的滑膜细胞分为正常组、SB-216763激活组、祛痰化瘀利湿方组,分别采取相应的干预措施。Western blot方法检测滑膜细胞胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测滑膜细胞培养上清液中Cyclin D1和MMP-7的表达。结果成功激活正常人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,SB-216763干预后激活组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达较正常组显著升高(P0.05);经中药含药血清干预后,祛痰化瘀利湿方组胞核蛋白β-catenin及其下游基因Cyclin D1和MMP-7表达与激活组相比显著下调(P0.01)。结论印证了GSK-3β作为选择性小分子抑制剂能够激活人滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路;通路激活后,其下游基因Cyclin D1和MMP-7的表达显著升高;祛痰化瘀利湿方能够明显下调β-catenin、Cyclin D1、MMP-7的表达;提示从单一信号通路方面可阐释祛痰化瘀利湿方治疗骨性关节炎的分子作用机制。     

老鹳草素通过Wnt/β-catenin信号通路影响小鼠骨髓基质干细胞的增殖和成骨分化

目的:观察Wnt/β-catenin信号通路在老鹳草素诱导小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化中的作用机制。方法:分离、培养小鼠BMSCs,分为对照组(DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素低剂量组(10-9mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素中剂量组(10-8mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量组(10-7mol·L-1老鹳草素+DMEM/F12完全培养基)、老鹳草素高剂量+DKK1(Wnt/β-catenin信号通路特异性阻断剂)组和DKK1组。成骨诱导第7天时,采用CCK-8法检测细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)试剂盒测定ALP活性及OCN含量。成骨诱导48 h时,采用Real time-PCR和Western-blot检测各组Wnt/β-catenin信号通路的关键信号分子Wnt3a、β-catenin、GSK-3β、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达。结果:成骨诱导第7天时,老鹳草素各剂量组明显促进BMSCs的增殖,呈剂量依赖性(均P<0.05);同时ALP活性及OCN含量较对照组显著升高,呈剂量依赖性(均P<0.05)。成骨诱导48 h时,老鹳草素各剂量组Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达较对照组显著上调,GSK-3βmRNA和蛋白表达较对照组显著下调,呈剂量依赖性(均P<0.05)。加入DKK1后,细胞增殖受到显著抑制,ALP活性及OCN含量显著降低(均P<0.05);同时Wnt3a、β-catenin、Axin2、Runx2 mRNA和蛋白表达显著下调,GSK-3βmRNA和蛋白表达显著上调(均P<0.05)。结论:老鹳草素能够明显促进BMSCs的增殖及向成骨方向分化,其机制与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

黄芪甲苷对类风湿关节炎肺间质病变大鼠的治疗作用和机制

目的 研究黄芪甲苷对类风湿关节炎肺间质病变(RA-ILD)大鼠的治疗作用并探讨可能机制。方法 Wistar大鼠48只随机分为对照组、模型组、黄芪甲苷高中低剂量组、雷公藤甲苷组;造模后给予相应药物。检测各组大鼠关节炎指数、肿胀程度,观察滑膜及肺组织病理特征,采用实时定量PCR、蛋白杂交印迹分析、免疫共沉淀等技术观察Notch和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达及结合情况。结果 黄芪甲苷(AS-IV)可以改善RA-ILD大鼠滑膜及肺组织的病理变化,可促进E-Cadherin、抑制Snail、ZEB-1 mRNA表达,其作用与剂量呈依赖性;AS-IV还可以显著抑制Notch通路关键蛋白NICD的表达及phos-β-catenin的表达水平;且AS-IV明显抑制了肺组织中β-catenin及NICD分别与Snail及ZEB-1的启动子区结合能力,而提高了β-catenin及NICD与E-Cadherin的启动子区的结合。结论 黄芪甲苷可能通过抑制Notch和Wnt/β-catenin信号通路减轻RA-ILD大鼠肺间质病变。     

白头翁皂苷调控RA模型大鼠FLS SFRP2表达

目的: 研究中药白头翁主要活性成分白头翁皂苷(pulchinenoside,PULC)对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)模型大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)SFRP2表达的调控. 方法: 采用大鼠关节炎评分法和足爪肿胀评分法评价PULC对RA模型大鼠的治疗作用,MTT法检测PULC灌胃治疗后对FLS增殖抑制作用.RT-PCR,Western blotting检测PULC灌胃治疗对FLS SFRP2基因表达的调控作用,对Wnt通路关键基因β-catenin,Wnt通路下游效应基因C-myc的调控作用. 结果: RA模型大鼠FLS中SFRP2基因表达明显下调,经PULC灌胃治疗后,RA模型大鼠FLS中SFRP2表达上调,β-catenin和C-myc基因表达明显下调. 结论: PULC通过对Wnt通路的调控抑制RA模型大鼠滑膜异常增殖.     

闹羊花毒素Ⅲ通过调控Wnt1/Dvl1/β-catenin通路影响成纤维样滑膜细胞增殖凋亡的实验研究

目的?探讨闹羊花毒素Ⅲ对类风湿关节炎（RA）的治疗作用及其机制。方法?采用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导RA成纤维样滑膜细胞（RA-FLS细胞）作为RA的细胞模型。以雷公藤多苷作为阳性对照药物，过表达蓬乱蛋白1（Dvl1）后加入闹羊花毒素Ⅲ研究其作用机制。细胞增殖毒性检测法（CCK-8法）检测细胞活力，蛋白质免疫印迹（Western Blot）检测B淋巴细胞瘤-2蛋白（Bcl2）、Bcl2相关X蛋白（Bax）、无翅型MMTV整合位点家族成员1（Wnt1）、Dvl1、β-连环蛋白（β-catenin）的表达量，实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测Wnt1、Dvl1、β-catenin mRNA水平，酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清中IL-6、IL-8、IL-10、IL-4、CC趋化因子配体2（CCL2）、CC趋化因子配体5（CCL5）的含量。结果?RA细胞模型构建成功，随着闹羊花毒素Ⅲ浓度的增加，RA-FLS细胞增殖减缓（P<0.05），凋亡增加（P<0.01）；闹羊花毒素Ⅲ与雷公藤多苷降低了RA-FLS细胞中IL-6、IL-8、CCL2、CCL5并且增加了IL-10、IL-4的含量（P<0.05）；降低了Wnt1、β-catenin、Dvl1蛋白与mRNA的表达量（P<0.01）。闹羊花毒素Ⅲ可以逆转由过表达Dvl1所造成的RA-FLS细胞增殖的增加（P<0.05）、促炎因子（IL-6、IL-8）与趋化因子（CCL2、CCL5）的增加（P<0.05），并逆转Wnt通路中Wnt1，Dvl1，β-catenin蛋白与mRNA表达的增加（P<0.01）。结论?闹羊花毒素Ⅲ通过调控Wnt1/Dvl1/β-catenin通路影响TNF-α诱导的RA-FLS细胞增殖凋亡及炎症因子等的变化，可能通过这种机制治疗RA。     

中药基于Wnt/β-catenin信号通路治疗膝骨性关节炎的研究进展

膝骨性关节炎（knee osteoarthritis,KOA）是一种以关节软骨被破坏及软骨下骨重塑为主要病理改变的退行性骨关节疾病,主要表现为膝关节的疼痛与功能受限,严重影响患者的生活质量,对患者及社会产生巨大的医疗负担。至今其发病机制尚不完全清楚。Wnt信号转导的活化与KOA发病机制密切相关,而当前对Wnt信号通路的研究侧重于Wnt/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路及其激活或抑制蛋白的表达。近年来,利用中药通过调控Wnt/β-catenin信号通路治疗KOA的机制被大量研究。综述近年来中药单体及中药复方调控Wnt/β-catenin信号通路治疗KOA的成果,进一步为临床运用中药治疗KOA提供相关基础研究。     

淫羊藿对成骨细胞及破骨细胞影响的研究进展

综述淫羊藿对成骨细胞及破骨细胞影响的研究进展。淫羊藿通过增加成骨相关因子的表达,增加Ca2+浓度,激活BMP/Smad、Wnt/β-catenin信号通路促进成骨细胞增殖、分化,提高成骨细胞骨形成的功能,并从能量代谢、骨架结构、MAPK信号通路、雌激素水平等方面抑制破骨细胞增殖和吸收。     

大黄素对TNF⁃α诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的探讨大黄素对TNF?α诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响。方法将人类风湿关节炎成纤维样滑膜HFLS?RA细胞随机分为对照组(未处理)、诱导组(TNF?α处理)、25μmol/L大黄素组(TNF?α和大黄素处理)、50μmol/L大黄素组(TNF?α和大黄素处理)和100μmol/L大黄素组(TNF?α和大黄素处理)。采用MTT法和克隆形成实验检测细胞的存活率和克隆形成率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT?PCR检测凋亡相关基因Bcl?2和Bax mRNA的表达,ELISA检测细胞上清液中IL?6和IL?1β水平,Western blot检测细胞中NF?κB信号通路相关蛋白p?IκBα和p?NF?κB p65的表达。结果TNF?α能够使HFLS?RA细胞的存活率、克隆形成率、Bcl?2 mRNA的表达和p?IκBα、p?NF?κB p65蛋白的表达以及细胞上清液中IL?6和IL?1β水平升高(P<0.05),而细胞凋亡率和Bax mRNA表达降低(P<0.05);25、50、100μmol/L大黄素能够呈浓度依赖性抑制TNF?α引起的上述变化(P<0.05)。结论大黄素可能通过抑制NF?κB信号通路的活化抑制类风湿关节炎滑膜细胞增殖和炎症反应。     

从NF-κB/Bcl-2信号通路调控成纤维样滑膜细胞凋亡角度探讨中医药抑制类风湿关节炎滑膜炎症机制的研究进展

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种以关节滑膜炎症为主要特征的自身免疫性疾病,成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)的抗凋亡是导致该病病情发展的主要因素。如何促进FLS凋亡并抑制炎症反应是目前RA治疗和研究的重点。核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)/B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)信号通路在RA发病过程中发挥了关键作用,其与FLS炎症倾向、抗凋亡等密切相关。研究并探讨NF-κB/Bcl-2信号通路调控FLS凋亡的机制及作用,介绍中医药靶向该通路促进FLS凋亡进而抑制RA滑膜炎症的研究现状,旨在为中医药治疗RA的研究提供一定基础。     

“Wnt/β-catenin-伏毒-微型癥积-肾纤维化”相关性假说

肾纤维化是各种慢性肾脏疾病进展过程中产生的共同病理变化。许多研究表明Wnt/β-catenin信号通路与肾纤维化的发生发展密切相关,可将Wnt/β-catenin信号通路作为抗肾纤维化的靶点。Wnt/β-catenin与中医的伏毒学说极为相似,肾纤维病理观也与中医肾微型癥积形成貌同,它们之间可能存在关联。文章从Wnt/β-catenin信号通路与肾纤维化的关系、肾纤维化Wnt/β-catenin信号通路与伏毒关系、肾纤维化伏毒致微型癥积形成、肾纤维化及中西医病理形成过程及关系及中医药从"湿、瘀、毒"的伏毒干预Wnt/β-catenin信号通路延缓肾纤维化进展等方面进行论述"Wnt/β-catenin-伏毒-微型癥积-肾纤维化"相关性。     

中药及其有效成分影响类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和凋亡的研究进展

成纤维样滑膜细胞是类风湿关节炎滑膜组织中最主要的细胞,在类风湿关节炎发病中起关键作用,是进行类风湿关节炎病理机制及治疗药物的相关药理研究的主要载体之一。近年来,针对中药及其有效成分对成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡的影响开展了大量研究,部分研究并对抑制增殖和诱导凋亡的相关作用机制进行了探讨。通过综述近年研究的成果,以期为类风湿关节炎的基础研究、新药开发及临床治疗提供思路和借鉴。     

miRNA调控Wnt/β-catenin通路与糖尿病骨质疏松的中西医研究进展

糖尿病骨质疏松的发病机制复杂,其分子机制仍有待明确。miRNA对Wnt/β-catenin信号通路具有强大的调控作用,且基于Wnt/β-catenin信号通路探讨骨质疏松的发病机制以及中医药通过该信号通路防治骨质疏松的研究日益增多。通过回顾国内外近年来有关miRNA对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用、Wnt/β-catenin通路与糖尿病骨质疏松的关系以及中医药通过Wnt/β-catenin信号通路防治糖尿病骨质疏松等方面的研究,初步揭示miRNA调控Wnt/β-catenin信号通路介导糖尿病骨质疏松的作用机制及中医药对此通路的干预作用,为今后研究中医药防治糖尿病骨质疏松的作用机制提供新的思路和方法。     

黄芩苷减轻HFLS-RA合成细胞外基质的分子机制研究

目的 研究黄芩苷对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)miR-21、TGF-β1、Smad7及FN的影响,为阐释黄芩苷抗RA滑膜纤维化的分子机制提供依据。方法 采用CCK8法检测黄芩苷对HFLS-RA细胞活性的影响;采用RT-qPCR法测定黄芩苷对HFLS-RA细胞miR-21的影响;采用Western blot技术测定黄芩苷对HFLS-RA细胞TGF-β1、Smad7及FN蛋白表达的影响。结果 CCK8检测结果显示,随着黄芩苷浓度增大和作用时间的延长,黄芩苷对HFLS-RA细胞的生长抑制作用增强,24h、48h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为(243.8±12.43)、(236.5±10.56)μg/ml;黄芩苷100、50及25μg/ml浓度可有效抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞miR-21、TGF-β1及FN表达(P0.05),而促进Smad7表达(P0.05)。结论 黄芩苷通过下调RA滑膜成纤维细胞的miR-21表达、促进Smad7蛋白表达,进而抑制TGF-β1的表达,从而减轻RA滑膜成纤维细胞过度分泌合成细胞外基质。     

补肾活血方对Wnt/β-catenin信号通路介导的人滑膜细胞与正常软骨细胞共培养体系的调控作用

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎发病中的作用,观察补肾活血方对异常的滑膜-软骨微环境的调控作用,初步阐释补肾活血方治疗骨关节炎的分子作用机制。方法:构建β-catenin过表达慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,Transwell小室共培养人滑膜细胞与正常人软骨细胞模拟滑膜软骨关节体系内环境;各时间点不同浓度药物干预共培养体系,Western bolt方法检测补肾活血方对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;ELISA方法检测补肾活血方对共培养体系中滑膜细胞、软骨细胞培养上清液基质金属蛋白酶-7(MMP-7),人Ⅱ型胶原交联羧基端肽(CTX-Ⅱ),软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达的影响。结果:Western blot检测发现β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞后滑膜细胞胞浆及胞核中β-catenin表达明显上调(P0.01),补肾活血方能够明显下调共培养滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达(P0.01);同时,ELISA法检测发现补肾活血方能够明显下调滑膜细胞与软骨细胞培养上清液中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的表达(P0.01)。结论:β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞可成功激活Wnt/β-catenin信号通路,Wnt/β-catenin信号通路激活后共培养体系中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的水平明显上升;补肾活血方可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调共培养体系中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的表达,减轻异常滑膜细胞对软骨细胞的损害,减缓软骨基质的降解,有利于骨关节炎的缓解和恢复。     

通痹灵总碱对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响

目的：探讨通痹灵总旃对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响。方法：分离培养类风关患者滑膜成纤维样细胞，IL—ID刺激，不同浓度通痹灵总碱作用后，MTT法测定细胞增殖率。结果：通痹灵总碱能显著抑制滑膜成纤维样细胞增殖，并且抑制作用呈明显的量效关系。结论：通痹灵总碱可抑制类风关滑膜成纤维样细胞增殖。