雷公藤甲素对人肝癌细胞株HepG2体内外作用的研究

目的:探讨雷公藤甲素在体内外对人肝癌细胞HepG2的作用及可能的分子机制。方法:应用不同浓度的雷公藤甲素作用于体外培养的HepG2细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法和Western blot法分别检测热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)mRNA和蛋白表达变化;caspase-3活性检测试剂盒分析其凋亡机制,建立人肝癌细胞HepG2裸鼠皮下种植瘤模型,实验组和对照组分别用雷公藤甲素(0.4mg/kg,每天1次)和相同体积的生理盐水,用药3周后观察肿瘤生长情况。结果:雷公藤甲素可显著抑制体外培养HepG2细胞增殖和诱导细胞发生凋亡(P<0.05),并呈现明显的量-效与时-效关系。应用雷公藤甲素后HepG2细胞中的HSP70的mRNA和蛋白表达明显的降低,呈现浓度依耐性,同时细胞质内caspase-3的活性随着剂量的增加而增加。此外,雷公藤甲素实验组种植瘤体积明显小于对照组(P<0.05)。结论:雷公藤甲素能通过诱导凋亡在体内外发挥对人肝癌细胞HepG2抗肿瘤作用,其机制可能与抑制HSP70蛋白和增加caspase-3的活性有关。     

siRNA抑制肝癌细胞株HepG2 Survivin基因表达的研究

目的 研究siRNA对肝癌细胞株HepC2中Survivin基因表达的抑制作用。方法 设计、合成一对Survivin编码基因的反向重复序列，中间间隔9个核苷酸序列，通过定向克隆至载体Psilencer2．1，构建siRNA真核表达载体，经稳定转染HepG2细胞后应用RT-PCR及流式细胞术检测肝癌细胞中Survivin基因mRNA及蛋白质表达的抑制情况。结果 测序证实siRNA真核表达载体构建成功。通过RT-PCR及流式细胞术检测，siRNA在mRNA及蛋白质水平抑制Survivin基因表达分别达73％和75％。结论 构建的：Psilencer( )-Survivin重组质粒能有效抑制Survivin基因在肝癌细胞株HepG2中的表达。为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。     

索拉菲尼对人肝癌细胞株HepG2抑制作用的研究

目的:探讨分子靶向药物索拉菲尼(Sorafenib)在体外对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用.方法:采用MTT法检测Sorafenib对HepG2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率.结果:Sorafenib能明显抑制HepG2细胞增殖,呈时间-剂量依赖效应;6μmol/L的Sorafenib理HepG2细胞72d,时,HepG2 细胞周期中的S期比例明显升高,G0-G1期、G2-M期比例明显下降,凋亡率明显上升(P<0.05,P<0.01).结论:Sorafenib对体外人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制作用,主要表现为抑制其增殖和促进其凋亡.     

斑蝥酸钠抑制人肝癌HepG2细胞增殖及其机制的研究

目的:探讨斑蝥酸钠对肝癌HepG2细胞增殖的作用及其机制.方法:肝癌HepG2细胞在不同浓度斑蝥酸钠干预后分别采用MTT法、流式细胞术、免疫细胞化学法、比色法等检测细胞增殖抑制率、细胞周期变化、Survivin蛋白表达和Caspase-3活性.结果:斑蝥素能明显抑制肝癌HepG2细胞增殖.药物干预后,细胞出现G2/M期阻滞,Survivin蛋白表达抑制,Caspase-3活性增强.结论:斑蝥酸钠可能通过其G2/M期特异性阻滞,下调Survivin表达和激Caspase-3来抑制HepG2细胞增殖.     

哌立福新抑制肝癌HepG2细胞增殖的机制研究

目的探讨哌立福新对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法以不同浓度(0、7.5、15和30μmol/L)的哌立福新处理肝癌HepG2细胞后,MTT法和集落形成实验检测细胞的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕愈合实验检测细胞的迁移能力,葡萄糖和ATP检测试剂盒检测HepG2细胞内葡萄糖和ATP含量变化,Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、Akt和mTOR蛋白的表达。结果哌立福新能够呈浓度-时间依赖性抑制肝癌HepG2细胞增殖。随着哌立福新浓度的增加,HepG2细胞的侵袭和迁移能力逐渐减弱,细胞内葡萄糖和ATP含量逐渐减少,PCNA、MMP-9、GLUT1、Akt和m TOR蛋白的表达逐渐降低,与对照组(0μmol/L)相比,差异均有统计学意义(P0.05)。结论哌立福新能够抑制肝癌HepG2细胞的增殖,其作用机制可能与抑制Akt/mTOR途径减弱糖代谢过程有关。     

苍耳亭抗大鼠肺癌机制研究

【目的】观察祛风解表苍耳子中苍耳亭对肺癌大鼠的抑瘤作用及机制。【方法】将40只大鼠右腋下接种Lewis肺癌细胞构建肺癌荷瘤模型,随机分为模型组,苍耳亭低、中、高剂量组,每组10只。给药14 d后,比较各组大鼠瘤体质量和体积;苏木素-伊红（HE）染色观察肺癌组织病理学变化,末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记（TUNEL）法测定肺癌细胞凋亡情况,高效液相色谱法（HPLC）检测肺癌组织中三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）、一磷酸腺苷（AMP）含量,JC-1法检测肺癌组织线粒体膜电位（MMP）水平,蛋白质免疫印迹法检测肺癌组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)结合蛋白1(p-4E-BP1)的蛋白表达。【结果】与模型组比较,苍耳亭低、中、高剂量组瘤体质量和体积均显著减小（P<0.05）,肺癌细胞凋亡指数均增加（P<0.05）,ATP含量均显著降低（P<0.05）,ADP/ATP、AMP/ATP比值均显著升高（P<0.05）,MMP水平均明显降低（P<0.05）,肺癌组织中mTOR、p-4E-BP1...     

胆管上皮细胞株抑制共培养的肝癌HepG2细胞株增殖

目的通过体外共培养肝内胆管上皮细胞株(mIBEC)与肝癌细胞株HepG2,探讨mIBEC对HepG2细胞株的可能作用。方法体外共培养HepG2与mIBEC,采用CellTiter 96○R AQueous One Solution Cell Proliferation Assay分别测定并比较HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后增殖的情况;实时定量PCR法分别测定HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后其Ki67及caspase3 mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法分别测定HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后其caspase3蛋白表达水平。结果与mIBEC共培养后24～72 h,HepG2细胞增殖水平低于其单独培养时的水平(P<0.01),且伴有Ki67 mRNA表达的下调(P<0.05);与mIBEC共培养后,HepG2细胞caspase3 mRNA及蛋白表达水平较其单独培养时均上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 mIBEC可抑制共培养的HepG2细胞增殖;caspase3激活表达上调可能是mIBEC抑制共培养的HepG2细胞增殖的机制之一。     

胆管上皮细胞株抑制共培养的肝癌HepG2细胞株增殖

[摘要]目的 通过体外共培养肝内胆管上皮细胞株(mIBEC)与肝癌细胞株HepG2,探讨mIBEC对HepG2细胞株的可能作用。方法 体外共培养HepG2与mIBEC,采用CellTiter 96R○ AQueous One Solution Cell Proliferation Assay 分别测定并比较HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后增殖的情况;实时定量PCR法分别测定HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后其Ki67及caspase3 mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法分别测定HepG2细胞单独培养时以及与mIBEC共培养后其caspase3蛋白表达水平。结果 与mIBEC共培养后24~72 h,HepG2细胞增殖水平低于其单独培养时的水平(P<0.01),且伴有Ki67 mRNA表达的下调(P<0.05);与mIBEC共培养后,HepG2细胞caspase3 mRNA及蛋白表达水平较其单独培养时均上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 mIBEC可抑制共培养的HepG2细胞增殖; caspase3激活表达上调可能是mIBEC抑制共培养的HepG2细胞增殖的机制之一。     

双氢青蒿素体外抑制人肝癌细胞株HepG2生长作用的实验研究

目的研究双氢青蒿素（DHA）对体外培养的人肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用及诱导凋亡作用。方法常规体外培养人肝癌细胞株HepG2,将不同浓度DHA在不同时间内作用于人肝癌细胞株HepG2,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果不同浓度DHA均可抑制体外培养的人肝癌细胞株HepG2细胞生长,并可诱导其发生凋亡,且呈一定的剂量-效应、时间-效应关系。结论 DHA对体外培养的人肝癌细胞株HepG2有明显的生长抑制作用及诱导凋亡作用。     

姜黄素抑制肝癌细胞HepG2增殖及干细胞标志物表达

目的:探讨姜黄素能否抑制肝癌细胞HepG2的增殖及干细胞标志物的表达。方法:不同剂量梯度的姜黄素(0、20、40和60μmol/L)作用肝癌细胞系HepG2 48 h后,MTT实验和克隆形成实验检测HepG2的增殖情况,划痕实验检测其迁移情况,成球实验检测姜黄素对HepG2干细胞的抑制情况,Real-time PCR检测姜黄素处理HepG2干细胞标志物CD133的表达情况,Western blot检测干细胞转录因子OCT4的表达情况。结果:姜黄素可抑制肝癌细胞HepG2的增殖[60μmol/L剂量时抑制率达(68.12±3.09)%],并抑制其克隆形成和迁移能力;姜黄素还可抑制HepG2的成球能力;同时可导致HepG2干细胞标志物CD133的表达降低[60μmol/L剂量时下降率达(48.36±2.04)%],并导致干细胞相关转录因子OCT4的表达降低。结论:姜黄素通过抑制肿瘤干细胞从而降低肝癌复发和转移,有望成为肝癌治疗的辅助性药物。     

人参二醇型皂苷抑制肝癌细胞转移体内外实验研究

目的:探讨人参二醇型皂苷(PDS)体内体外对肝癌细胞转移的影响.方法:采用CCK-8法测定PDS对人肝癌Bel-7402细胞增殖的影响.利用人工基质胶模拟细胞外基质观察其对Bel-7402细胞黏附作用的影响,利用Transwell小室分析其对Bel-7402细胞迁移和侵袭的影响,通过小管形成实验观察其对人脐静脉内皮细胞...     

茉莉酸甲酯抑制人肝癌细胞HepG2增殖作用的实验研究

目的 初步探讨MeJA是否具有抑制肝癌细胞HepG2增殖的作用.方法 体外培养HepG2细胞;MTT法进行茉莉酸甲酯有效作用浓度筛选,确定MeJA作用浓度(1/2IC20);HE染色观察各组细胞形态变化;透射电镜观察细胞超微结构.结果 不同浓度MeJA作用不同时间对HepG2细胞增殖的抑制作用呈时-效和量-效依赖关系;MeJA工作浓度(1/2IC20)为4.3μmol/L,作为后续实验中MeJA的工作浓度;HE染色见各处理组出现不同程度贴壁细胞数量减少,悬浮细胞增多;透射电镜发现部分细胞出现细胞连接消失,微绒毛消失,胞质密度增加,可见大量凋亡小体形成.结论 MeJA具有抑制肝癌细胞增殖,诱导凋亡的作用.     

逆转录病毒介导ARLTS1基因表达抑制肝癌细胞HepG2的增殖

目的 构建高表达ARLTS1基因的逆转录病毒栽体(PLEGFP-IRES-ARLTS1),探讨外源性ARLTS1基因对人肝癌细胞HepG2增殖的影响.方法 RT-PCR扩增ARLTS1 cDNA,克隆至重组逆转录病毒载体PLEGFP-IRES.重组质粒转染病毒包装细胞PT67,产生病毒后感染HepG2细胞,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达,Western Blot检测细胞内ARLTS1蛋白表达,并对感染后细胞的增殖状况进行分析.结果 酶切及基因测序证实重组质粒PLEGFP-IRES-ARLTS1构建成功;荧光显微镜观察到70%左右靶细胞内有绿色荧光蛋白表达;Westem Blot证实,ARLTS1蛋白在HepG2-ARLTS1内表达显著升高;MTT实验显示,HepG-2-ARLTS1细胞组体外增殖率较各对照组明显降低(P<0.05).结论 获得了稳定表达外源性ARLTS1蛋白的HepG2细胞株,外源性ARLTS1抑制HepG2细胞增殖,为后续研究ARLTS1抗肿瘤机制奠定了基础.     

抑制肝癌HepG2细胞N-Ras基因表达对放射敏感性的影响

目的:探讨RNA干扰(RNAi)N-Ras基因增强人肝癌HepG2细胞的放射敏感性。方法:通过构建干扰N-Ras基因siRNA,采用免疫组织化学、荧光定量RT-PCR、Western blot、MTT法等观察干扰前后的肝癌HepG2细胞RNA水平、蛋白水平、生长情况等变化。用细胞克隆计数实验检测放射敏感性变化。结果:肝癌HepG2细胞株干扰后mRNA、蛋白、免疫组织化学、生长情况均显著改变,HepG2细胞RNAi前后增敏比SER=1.10。结论:RNAi肝癌HepG2细胞N-Ras基因可以达到放射增敏的目的。     

miR-143通过靶向FASN抑制肝癌HepG2细胞脂质形成

目的研究miR-143对肝癌Hep G2细胞脂质形成的影响及其分子机制。方法应用qRT-PCR方法检测miR-143在临床肝癌和癌旁组织以及肝癌细胞系和正常肝细胞系中的表达。通过油红O染色实验检测miR-143对肝癌细胞脂质形成的影响。Western blotting检测miR-143对肝癌细胞中脂肪酸合成酶(FASN)表达的影响。通过报告基因实验检测miR-143及其抑制子对报告基因载体FASN-CDS活性的影响。结果 qRTPCR结果表明在临床肝癌组织和Hep G2细胞中miR-143的表达显著低于癌旁组织和Chang liver肝细胞系(P<0.01)。油红O染色实验结果显示,miR-143能显著降低肝癌细胞中脂质的形成。qRT-PCR和Western blotting结果证实,miR-143可以显著下降FASN的mRNA和蛋白表达水平。报告基因检测结果表明,在Hep G2细胞中miR-143可以显著降低FASN-CDS报告基因的活性(P<0.01);相反,miR-143抑制子可以显著升高FASN-CDS的活性(P<0.01)。在Hep G2细胞中miR-143抑制子可以上调FASN的表达并促进脂质形成。结论 miR-143可以通过抑制FASN的表达阻碍肝癌细胞脂质形成。     

抑制ERK通路增强苦参碱诱导的肝癌HepG2细胞凋亡

目的探讨苦参碱诱导肝癌细胞凋亡的作用和分子机制。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2,不同质量浓度(0、0.8、1.6和2.4mg·mL-1)苦参碱处理HepG2细胞48h,流式细胞术和显微镜观察细胞凋亡的变化;western blot检测0和1.6mg·mL-1苦参碱处理HepG2细胞48h后p-ERK蛋白的表达;以DMSO处理细胞作为对照,1.6mg·mL-1苦参碱加或不加U0126处理HepG2细胞48h,流式细胞术和显微镜观察细胞凋亡的变化。结果苦参碱诱导细胞出现典型的凋亡形态学变化,其中1.6和2.4 mg·mL-1苦参碱组细胞凋亡率显著高于对照组即0mg·mL-1苦参碱组(29.7%和43.3%比6.7%,P<0.01),而0.8mg·mL-1苦参碱组细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(11.1%比6.7%,P=0.16),故后续实验选择1.6 mg·mL-1苦参碱处理细胞;1.6 mg·mL-1苦参碱组较对照组显著抑制p-ERK蛋白的表达;1.6 mg·mL-1苦参碱联合U0126处理组细胞凋亡率显著高于苦参碱单用药组(63.3%比30.4%,P<0.05)。结论苦参碱能诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能与负向调控ERK信号通路有关。     

褐藻糖胶抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制

目的:探讨褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的相关机制。方法:采用MTT法测定不同浓度褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用,计算细胞生长抑制率;将0、10、100、500 μg/ml的褐藻糖胶作用于HepG2细胞,48 h后光镜观察细胞形态改变,用Hoechst染色法和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;Western blot检测cyclinD1和拓扑异构酶IIα(topoisomerase IIα,TopoIIα)表达的改变。结果:褐藻糖胶具有抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用,呈剂量依赖性。不同浓度褐藻糖胶作用HepG2细胞后,500 μg/ml组较其他浓度组光镜下和Hoechst 33258染色均呈现较明显细胞形态改变,100 μg/ml和500 μg/ml组均检测出DNA梯形条带。褐藻糖胶也能降低细胞增殖生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα的蛋白表达。结论:褐藻糖胶抑制人肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与褐藻糖胶抑制细胞增殖的生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα表达有关。     

盐酸氮芥抑制人肝癌HepG2细胞生长的机制探讨

目的探讨盐酸氮芥抑制人肝癌HepG2细胞生长的可能机制。方法以盐酸氮芥处理人肝癌HepG2细胞,运用DNA片断化分析、流式细胞术检测肝癌HepG2细胞的凋亡和细胞周期的改变。结果DNA片断化分析显示没有出现典型“梯形”条带,流式细胞术显示各浓度组细胞凋亡率之间差异无显著性（P〉0．05）,但有明显的细胞周期阻滞（S期和G2期）。结论盐酸氮芥对人肝癌HepG2细胞的生长抑制主要通过细胞周期的阻滞发挥作用。     

miR26a靶向EZH2抑制肝癌HepG2细胞的增殖活性

目的 探讨mi R26a靶向EZH2抑制肝癌Hep G2细胞的增殖活性的影响并探讨其可能的分子机制。方法 设计合成mi R26a mimic,将细胞分为转染试剂对照组(mock)、阴性对照组(control)和mi R26a mimic组,采用Real-time PCR检测转染后细胞中mi R26a的表达水平,MTT检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,双荧光素酶报告基因系统检测mi R26a与EZH2的靶向关系,Western blot检测各组细胞中EZH2蛋白的表达。结果 MTT分析及流式细胞术的检测证实过表达mi R26a能够抑制肝癌细胞的增殖效应,促进肝癌细胞的凋亡,双荧光素酶报告基因系统以及Western blot的结果均证实mi R26a能够显著下调EZH2在蛋白水平的表达。结论 mi R26a能够显著抑制肝癌Hep G2细胞的增殖活性,并且与EZH2之间存在良好的靶向关系。