银杏酸的分离与银杏叶制剂中银杏酸的含量测定

目的:建立银杏酸的色谱分离和高效液相色谱定量测定方法。方法:采用氯仿提取,S iO2/Ag 柱色谱和制备液相色谱法从银杏外果皮中分离得到3种银杏酸单体,应用光谱技术鉴定了其结构,并建立了银杏叶制剂中的银杏酸含量检测的高效液相色谱方法。结果:通过结构确证,分离得到的3种单体银杏酸-Ⅰ(C13:0)、银杏酸-Ⅱ(C15:1)、银杏酸-Ⅲ(C17:1)结构与相关文献报道一致,在总银杏酸中所占比例高。结论:本法确立了银杏酸的分离纯化方法和银杏叶及其制剂中银杏酸含量的高效液相色谱测定方法,用3种单体作为对照品来定量分析能更准确测定银杏酸含量。     

银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸的LC-MS/MS含量测定研究

该实验建立了同时测定银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸含量的LC-MS/MS方法。采用Agilent Zorbax Eclipse plus C₁₈色谱柱(3.0 mm×50 mm,1.8 μm);流动相甲醇-0.2%甲酸水(95 : 5),等度洗脱;流速0.5 mL·min^-1;质谱条件:采用ESI^-多反应监测(MRM)模式扫描。结果显示,5种银杏酸在0.2~36.0 μg·L^-1线性关系均良好(r≥0.999 5);银杏酸C13 : 0(白果新酸),C15 : 1,C17 : 2,C15 : 0,C17 : 1的最低定量限(LOQ)分别为0.18,0.18,0.21,0.10,0.20 μg·L^-1;平均回收率在73.28%~87.56%;3批样品中所含总银杏酸的质量分数为0.023~0.028 μg·g^-1,均远低于药品注册标准规定的限度(含总银杏酸以白果新酸计,不得过百万分之二)。该方法简便、快捷,灵敏度高,可用于银杏二萜内酯葡胺注射液原料中5种微量银杏酸的快速测定。     

康脉灵胶囊质量标准研究

目的:建立康脉灵胶囊(银杏叶提取物,天麻,川芎)的质量标准.方法:采用HPLC法对制剂中主要成分银杏黄醇苷进行定量分析.色谱柱:Watersμ bondapak C18(3.9 mm×300 mm,5μm),流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50);测波长为360 nm.对处方中其他成分天麻、川芎、银杏萜内酯以及银杏酸进行薄层色谱检测.结果:槲皮素、山奈素、鼠李素分别在0.150μg～1.50μg,0.142μg～1.42μg和0.096μg～0.μg范围内呈线性.平均回收率均为98.9%RSD分别为0.98%,1.15%和1.57%(n=5).薄层图谱斑点清晰,阴性对照无干扰,银杏酸限量低于5 g·kg-1.结论方法准确可靠,专属性强,结果稳定,重现性好,可有效控制制剂质量.     

银杏叶中银杏酚酸类成分含量测定方法研究

 目的 建立银杏叶药材中白果新酸(C13∶0)、白果酸(C15∶1)、十七烷二烯银杏酸(C17∶2)、氢化白果酸(C15∶0)和十七烷一烯银杏酸(C17∶1)等5种银杏酚酸类成分的含量测定方法。方法 采用HPLC法。色谱柱为Phenomenex Luna C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸(90∶10)为流动相,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为310 nm,柱温为30 ℃。结果 白果新酸(C13∶0)、白果酸(C15∶1)和十七烷一烯银杏酸(C17∶1)质量浓度分别在1.47~29.40、6.05~121.00、8.00~160.00 μg·mL^-1内呈良好线性关系,相关系数分别为0.999 9、0.999 9和0.999 9,平均回收率分别为98.6%(RSD=2.57%,n=9)、100.1%(RSD=2.36%,n=9)、97.4%(RSD=2.99%,n=9),建立了十七烷二烯银杏酸(C17∶2)、氢化白果酸(C15∶0)相对定量分析方法。结论 该方法简便、准确、重现性好,可用于银杏叶的质量控制。不同产地、不同采收期的银杏叶药材中5种银杏酚酸类指标成分含量差异较大。     

不同产地银杏叶中总银杏酸的含量比较

目的:比较不同产地银杏叶中总银杏酸的含量.方法:采用HPLC测定银杏叶中总银杏酸的含量.色谱条件为依利特Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-1％冰醋酸水溶液(90∶ 10),流速1.0 mL· min-1,检测波长310 nm,柱温35℃,进样量20 μL,外标法计算含量.结果:各产地银杏叶中总银杏酸含量差异较大,山东郯城总银杏酸含量最高(2.38％),江苏邳州最低(1.28％).结论:不同产地银杏叶中总银杏酸含量差异明显,应选择使用.     

UPLC-MS/MS测定银杏叶提取物中5种微量银杏酸

目的:建立UPLC-MS/MS同时测定银杏叶提取物中5种微量银杏酸的方法。方法:以UPLC BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)为色谱柱,甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相,流速0.4 m L·min-1,柱温30℃;质谱仪以多反应离子监测(MRM)方式进行相关离子检测。结果:测定的氢化白果酸、白果新酸、白果酸、十七烷一烯银杏酸以及十七烷二烯银杏酸在5.0 min内分离良好,在测定的质量浓度范围内(0.20~200.00μg·L-1)线性关系良好(r0.992 3);加样回收率(n=6)RSD均5%(98.86%~103.30%)。不同厂家银杏叶提取物中的银杏酸含量差异较大(7.58~23.08μg·g-1),最高含量高达百万分之二十以上,仅有8家提取物低于百万分之十,市面不同厂家生产的银杏叶提取物普遍银杏酸含量偏高。在所测定的各批次样品中白果酸、十七烷一烯银杏酸以及中白果新酸平均含量较高,十七烷二烯银杏酸和氢化白果酸平均含量较低。根据8家合格银杏叶提取物厂家的测定结果,建议所测定的5种银杏酸即:氢化白果酸、白果新酸、白果酸、十七烷一烯银杏酸以及十七烷二烯银杏酸的质控范围分别控制在2.94~3.59,0.97~1.18,2.35~2.88,2.94~3.59,0.59~0.73μg·g-1。结论:该方法可用于银杏酸类成分的快速定量分析。     

复方银杏叶制剂中总银杏酸含量测定方法的优化

目的:优化复方银杏叶制剂中银杏酸(GA)的测定方法。方法:以白果新酸对照品结合总银杏酸对照品定位,采用HPLC测定复方银杏叶制剂中5种银杏酸成分总含量,并比较石油醚提取/甲醇溶解、甲醇提取/氯仿萃取和甲醇提取/正己烷萃取法对制剂中银杏酸含量测定结果的影响;进一步以甲醇浓度、溶剂体积、提取时间为影响因素,以总银杏酸含量测定值为评价指标,通过Box-behnken响应面法分析与优化测定方法。结果:甲醇提取/正己烷萃取法对复方银杏叶制剂中总银杏酸的提取精制效果最好。响应面法分析显示,提取溶剂及溶剂体积对总银杏酸含量值具有显著性影响(P 0. 01),最佳提取条件:提取溶剂为85%甲醇,溶剂体积为100 m L,提取时间为1. 8 h,在此条件下方法的平均回收率达97. 7%,精密度RSD为1. 42%。结论:HPLC简便可行,测定结果准确,可用于测定银杏叶提取物及复方制剂中银杏酸的含量测定。     

HPLC测定不同产地茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸

目的 建立一种测定茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸的方法,并比较不同产地茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸量的差异.方法 应用HPLC法测定猪苓酸C、去氢土莫酸的量,色谱柱为Ailtima-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水-磷酸(70 : 29.85 : 0.15);体积流量为1 mL/min;检测波长为244 nm;进样量为20 μL;柱温为30℃.结果 测得8个产地茯苓中猪苓酸C、去氢土莫酸的量分别为0.188 6～0.575 6、0.113 7～0.216 7 mg/g,其中以浙江产茯苓药材中猪苓酸C、去氢土莫酸量最高,四川次之,其他几个产地的量相对较低;猪苓酸C定量测定的线性范围为0.179 2～2.240 0 μg(r2=0.999 9).平均加样回收率为98.88%,RSD为1.77%;去氢土莫酸测定的线性范围为0.137 2～1.715 0(r2=1),平均加样回收率为97.76%,RSD为0.62%.结论 所建立的色谱方法可以简便、准确测定茯苓中猪苓酸C、去氢土莫酸的量,重现性好;各产地茯苓中的猪苓酸C、去氢土莫酸的量差别较大,有必要建立猪苓酸C、去氢土莫酸的定量控制方法.     

HPLC法测定23-羟基白桦酸注射液中23-羟基白桦酸的含量

目的　建立 2 3-羟基白桦酸注射液中 2 3-羟基白桦酸的 HPL C分析方法。方法　采用 HPL C法。色谱柱 :YWG C1 8(2 5 0 mm× 4 .6 mm,10 μm) ;流动相 :乙腈 -水 -冰醋酸 (6 0 0∶ 4 0 0∶ 1) ;体积流量 :1.0 m L/ min;检测波长 :2 0 5 nm;柱温 :2 5℃ ;检测灵敏度 :0 .0 0 5 AU FS。采用外标法测定 2 3-羟基白桦酸的量。结果　 2 3-羟基白桦酸在 10～10 0 μg与峰面积具有良好线性关系 ,平均回收率为 99.5 4 % ,RSD为 1.98% (n=5 )。结论　该方法快速、简便、准确可靠 ,可用于 2 3-羟基白桦酸的定量。     

不同树龄银杏叶在不同季节中总银杏酸的动态变化规律

目的:探索栽培种植的不同树龄银杏叶在不同生长季节中总银杏酸的含量变化规律.方法:采用HPLC测定银杏叶中总银杏酸的含量.色谱条件为Alltima C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-1%冰醋酸水溶液(90:10),流速1.0 mL·min~(-1),检测波长310 nm,柱温35℃,进样量20μL,外标法计算含量.结果:银杏叶中总银杏酸含量范围为0.48%～2.51%.不同采收期银杏叶中总银杏酸含量呈先上升后逐渐下降趋势,5月底6月初含量最高;不同树龄银杏叶中总银杏酸含量树龄大的较低,树龄小的较高.结论:这一变化规律为确定银杏叶的采收期提供了科学依据.     

银杏酸单体的抗菌活性研究

目的:从银杏外种皮中得到银杏酸混合物及三种单体,研究银杏酸的抗菌活性及其侧链与活性的关系.方法:采用二倍稀释法测定了银杏酸混合物、各单体及水杨酸的最低抑菌浓度.结果:银杏酸混合物对痤疮丙酸杆菌等G 菌具有良好的抑制作用.水杨酸无侧链,无抗菌活性.银杏酸侧链为C13:0时抑菌效果最强.结论:银杏酸的侧链是其产生抗菌活性的主要效应部位,侧链长短是银杏酸抗菌作用强弱的关键.     

银杏外种皮中银杏酚酸的超临界CO2萃取

本文对超临界CO2萃取法从银杏外种皮中萃取银杏酚酸的工艺可行性进行了研究。主要探讨了萃取压力、温度、时间等条件对银杏酚酸收率的影响，确定了超临界CO2萃取银杏酚酸的最佳条件，用HPLC法对银杏酚酸进行分析。结果表明萃取压力为30MPa，温度45℃，萃取时间6h，CO2流量为2L／min为最佳条件。超临界CO2萃取法萃取银杏外种皮中的银杏酚酸比传统方法优越，表现在得率、纯度高，无溶剂残留，操作简便。     

银杏酸抑菌效果的初步研究

对银杏外种皮石油醚提取物和银杏酸的抑菌活性进行了初步研究,发现银杏酸和外种皮粗提物对金葡菌、蜡样芽孢杆菌、枯草杆菌均有抑制作用,对耐青霉素金葡菌也有一定的抑制作用,银杏酸与青霉素联用,具有加强作用。     

银杏酸的分离制备及HPLC分析

目的：利用银杏外种皮分离制备银杏酸，并测定银杏酸含量。方法：采用石油醚超声萃取和硅胶柱层析法从银杏外种皮中分离制备银杏酸；用高效液相色谱法测定银杏酸含量。色谱柱为HiQsilC18柱，流动相为甲醇3％HAc溶液(90：10，V／V)，流速1ml／min，检测波长为310nm，柱温40℃。结果：银杏酸在l.144—5．720μg范围内线性关系良好(r=0．9978)，平均回收率97．50％，RSD为1．70％。结论：可从银杏外种皮中分离制备银杏酸；银杏酸含量测定方法准确、可靠，可用于样品中银杏酸含量的分析。     

银杏酸凝胶剂的制备及抑菌试验研究

目的制备银杏酸凝胶剂,并对该制剂的体外抑菌活性进行初步研究.方法以银杏酸为主药,卡波普为基质制备凝胶剂,采用HPLC法测定制剂中银杏酸含量,并采用液体两倍稀释法测定银杏酸凝胶剂对金黄色葡萄球菌和丙酸杆菌的体外最小抑菌浓度(MIC).结果银杏酸凝胶剂对金黄色葡萄球菌和丙酸杆菌均显示不同程度的抑菌活性,其MIC分别为31.756mg·mL-1和0.992mg·mL-1.结论该制剂制备工艺可行,性质稳定,对金黄色葡萄球菌和丙酸杆菌有较好的抑制作用.     

松杉灵芝的化学成分研究(Ⅱ)

目的研究松杉灵芝子实体的化学成分。方法采用硅胶、凝胶色谱法进行分离纯化,波谱法进行结构鉴定。结果从乙醇提取物的醋酸乙酯部分分离得到8个三萜类化合物。结构鉴定为:灵芝醇A(ganoderiol A,Ⅰ)、灵芝酮三醇(ganodermanontriol,Ⅱ)、灵芝三醇(ganodermatriol,Ⅲ)、灵芝酸C(ganodericacid C,Ⅳ)、灵芝酸A(gan-odericacid A,Ⅴ)、赤芝酮A(lucidone A,Ⅵ),赤芝酸C(lucidenicacid C,Ⅶ)、赤芝酸LM1(lucidenic acid LM1,Ⅷ)。结论化合物Ⅰ～Ⅷ均为首次从松杉灵芝中分离得到。     

Hempseed oil induces reactive oxygen species- and C/EBP homologous protein-mediated apoptosis in MH7A human rheumatoid arthritis fibroblast-like synovial cells

Ethnopharmacological relevance

The medicinal efficacy of hempseed (Cannabis sativa L.), which is rich in polyunsaturated fatty acids, in atopic dermatitis, inflammation, and rheumatoid arthritis (RA) has been suggested for centuries. Hempseed has been used as a treatment for these diseases in Korean and Chinese folk medicine. The aim of the study is to investigate the effects of hempseed oil (HO) on MH7A human RA fibroblast-like synovial cells.

Materials and methods

MH7A cells were used to study the anti-rheumatoid effects of hempseed (Cannabis sativa L., cv. Cheungsam/Cannabaceae) oil by investigating cell viability, apoptosis, lipid accumulation, oxidative stress, and endoplasmic reticulum (ER) stress-induced apoptosis.

Results

HO treatment reduced the survival rate of MH7A cells and promoted apoptotic cell death in a time- and dose-dependent manner. Both lipid accumulation and the level of intracellular reactive oxygen species (ROS) increased in HO-treated MH7A cells. Co-treatment with the antioxidant Tiron effectively abrogated the cytotoxic effects of HO; the ROS level was reduced, cell viability was recovered, and apoptotic cell death was significantly diminished. Moreover, HO-treated cells exhibited increased expression of the major ER stress markers, glucose-regulated protein 78 and C/EBP homologous protein (CHOP). The siRNA-mediated knockdown of CHOP prevented HO-induced apoptosis.

Conclusions

Our results suggest that HO treatment induced lipid accumulation, ROS production, CHOP expression, and apoptosis in MH7A cells, and that CHOP functions as an anti-rheumatoid factor downstream of HO in MH7A cells.     

银杏叶提取精制工艺研究

目的：建立银杏叶提取物的精制工艺。方法：以总黄酮醇苷和萜类内酯量为考察指标,采用L。（3-4）正交试验,探索乙醇提取最佳工艺。结果：采用5倍量90％（v／v）浓度的乙醇回流2h,提取4次;提取液浓缩至相对密度1．10（65～75℃）后,静置8h,去除相应杂质（叶绿素、树脂）;使用DA201大孔吸附树脂,750．4（v／v）乙醇作为洗脱剂对粗提物进行纯化;再用0．2％活性炭80℃保温30min,除去银杏酸。结论i该工艺稳定、可行,适宜进行工业化生产。