姜黄素对鼻咽癌细胞株CNE-2Z-H5增殖的影响

目的:研究姜黄素对人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5生长、增殖的作用。方法:应用姜黄素体外干预培养人低分化鼻咽癌细胞系亚克隆株CNE-2Z-H5,以绘制生长曲线、MTT及平板克隆形成实验观察姜黄素对CNE-2Z-H5细胞生长、增殖的作用。结果:细胞生长曲线、MTT及平板克隆形成实验均表明姜黄素对CNE-2Z-H5细胞生长、增殖具有抑制作用,并呈剂量效应关系。同时,超过一定浓度的姜黄素对CNE-2Z-H5细胞还具有细胞毒作用,可以体外杀伤CNE-2Z-H5细胞。结论:姜黄素可以有效抑制CNE-2Z-H5细胞的生长和增殖,具有明显的量效关系,可能对鼻咽癌的治疗具有一定价值。     

姜黄素对鼻咽癌细胞RECK基因甲基化以及MMP-9表达与活性的影响

目的探讨姜黄素对鼻咽癌细胞回复引导半胱氨酸丰富蛋白含kazal基元（ RECK）基因甲基化以及基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响。方法体外培养鼻咽癌细胞系CNE-1,用1、10、30μmol/L姜黄素处理后,采用Western blot和实时定量PCR分别检测RECK、MMP-9蛋白和mRNA表达;高效液相色谱-电喷雾质谱检测RECK甲基化;MTT法检测CNE-1细胞的增殖。同时采用明胶酶谱实验观察姜黄素处理前后MMP-9酶活性变化。结果 CNE-1细胞未刺激时RECK表达水平较低,而经1--30μmol/L姜黄素处理后,能显著增强RECK蛋白和mRNA的表达。高效液相色谱-电喷雾质谱结果显示,30μmol/L姜黄素处理后,RECK启动子、全基因组以及细胞核内甲基化水平分别降低为（69.04±10.62）%、（61.13±7.08）%、2.80±1.32。同时,姜黄素能显著降低CNE-1细胞中MMP-9蛋白和mRNA表达以及MMP-9的酶活性。结论姜黄素可能通过能上调RECK基因表达,降低细胞内甲基化水平,从而抑制MMP-9的表达与活性而发挥对CNE-1细胞生长抑制作用。     

姜黄素对HaCaT细胞增殖、凋亡及KLF6/p21蛋白表达的影响

目的通过观察姜黄素和VEGF对HaCaT细胞增殖、凋亡及KLF6/p21蛋白表达的影响,探讨姜黄素治疗银屑病的可能机制。方法不同浓度的姜黄素(0、5、10、15、20、30、40μmol/L)作用于HaCaT细胞,CCK8法检测其对细胞增殖的影响;20μmol/L姜黄素及25ng/mL VEGF分别及联合作用于HaCaT细胞,CCK8法检测20μmol/L姜黄素对25ng/mL VEGF干预下HaCaT细胞的增殖作用,免疫蛋白印迹法检测KLF6/p21蛋白表达的改变,流式细胞仪检测其对HaCaT细胞凋亡的影响。结果 (1)姜黄素在0～40μmol/L浓度范围内呈浓度依赖性抑制HaCaT细胞增殖,20μmol/L姜黄素明显抑制HaCaT细胞增殖(P0.01),在0～40μmol/L范围内姜黄素浓度与HaCaT细胞增殖呈线性相关(r=-0.92,P0.01);与空白对照组相比,25ng/mL VEGF对HaCaT细胞有明显的促增殖作用(P0.05)。与25ng/mL VEGF组相比20μmol/L姜黄素明显抑制25ng/mL VEGF对HaCaT细胞的促增殖作用(P0.01)。(2)25ng/mL VEGF提高HaCaT细胞KLF6、p21蛋白的表达;20μmol/L姜黄素抑制HaCaT细胞KLF6、p21蛋白的表达;20μmol/L姜黄素能降低25ng/mL VEGF对HaCaT细胞KLF6、p21蛋白表达的增强作用。(3)与空白对照组(凋亡率2.2%)相比,20μmol/L姜黄素可促进HaCaT细胞凋亡(凋亡率54.1%);与25ng/mL VEGF(凋亡率1.4%)比较,20μmol/L姜黄素能明显抑制25ng/mL VEGF细胞的促增殖作用,促进细胞凋亡(凋亡率46.9%)。结论姜黄素能抑制VEGF对HaCaT细胞的促增殖作用,促进HaCaT细胞凋亡,其机制可能与可降低HaCaT细胞KLF6/p21蛋白的表达有关。     

姜黄素对人结肠癌Lovo细胞VEGF表达的影响

目的 研究姜黄素体外对人结肠癌Lovo细胞血管内皮生长因子VEGF表达的影响。方法不同浓度（0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）姜黄素处理2013年8月—2014年2月中南大学提供的人结肠癌细胞株Lovo24 h后,用Real-time PCR检测姜黄素对人结肠癌细胞株血管内皮生长因子VEGF m RNA表达的变化,用Western blot法检测姜黄素对人结肠癌细胞株VEGF蛋白表达的变化。结果人结肠癌Lovo细胞经过姜黄素处理24 h后,5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L姜黄素组VEGF m RNA及蛋白的表达均明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论姜黄素能下调人结肠癌Lovo细胞VEGF的表达,并呈剂量依赖,这可能是姜黄素抑制结肠癌Lovo细胞增殖及侵袭性的机制之一。     

姜黄素对VEGF作用下的HaCat细胞的影响及KLF6/P21表达的调控研究

目的 通过观察姜黄素和VEGF对HaCat细胞增殖、凋亡及KLF6/P21蛋白表达的影响,探讨姜黄素治疗银屑病的可能机制,为姜黄素在银屑病治疗中进一步开发应用提供理论和实验基础。方法1.不同浓度的姜黄素(0,5,10,15,20,30,40μmol/L)作用于HaCat细胞,CCK8法检测其对细胞增殖的影响;20μmol/L姜黄素及25ng/ml VEGF分别及联合作用于HaCaT细胞,CCK8法检测20μmol/L姜黄素对25ng/L VEGF干预下HaCaT细胞的增殖作用。2.20μmol/L姜黄素及25ng/ml VEGF分别及联合作用于HaCat细胞,免疫蛋白印迹法检测KLF6/P21蛋白表达的改变。3.20μmol/L姜黄素及25ng/ml VEGF分别及联合作用于HaCat细胞,流式细胞仪检测其对HaCat细胞凋亡的影响。结果 1.姜黄素在0μmol/L-40μmol/L浓度范围内呈浓度依赖性抑制HaCat细胞增殖,20umol/L姜黄素明显抑制HaCat细胞增殖(P<0.01),在0μmol/L-40μmol/L范围内姜黄素浓度与HaCat细胞增殖呈线性相关(r=-0.92,P＜0.01);与空白对照组相比,25ng/mL VEGF对HaCat细胞有明显的促增殖作用(P<0.05)。与25ng/L VEGF组相比20μmol/L姜黄素明显抑制25ng/L VEGF对HaCat细胞的促增殖作用(P<0.01)。2.25ng/mL VEGF提高HaCat细胞KLF6/P21蛋白的表达;20μmol/L姜黄素抑制HaCat细胞KLF6/P21蛋白的表达;20μmol/L姜黄素能降低25ng/mL VEGF对HaCat细胞KLF6/P21蛋白表达的增强作用。3.与空白对照组相比,20μmol/L姜黄素可促进HaCat细胞凋亡;与25ng/mL VEGF比较,20μmol/L姜黄素能明显抑制25ng/mL VEGF细胞的促增殖作用,促进细胞凋亡。结论 姜黄素可以抑制VEGF对HaCat细胞的促增殖作用,促进HaCat细胞凋亡,其机制可能与姜黄素可降低HaCat细胞KLF6/P21蛋白的表达有关。     

姜黄素对人鼻咽癌细胞CNE-2Z细胞骨架的影响

目的:观察姜黄素对鼻咽癌细胞CNE-2Z细胞骨架的影响,探讨姜黄素对鼻咽癌细胞直接杀伤作用的可能机制。方法:用考马斯蓝染色和图像分析方法检测不同浓度姜黄素作用24 h后CNE-2Z细胞骨架的染色变化;用免疫组织化学方法观察表皮生长因子受体(EGFR)、增殖细胞核抗原(PCNA)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、Tubulin-β在各组细胞中的表达情况;运用RT-PCR方法检测不同浓度姜黄素作用后的CNE-2Z细胞中EGER的表达水平。结果:CNE-2Z细胞在10μmol/L姜黄素处理后细胞体积有所增大,随后姜黄素浓度升高细胞骨架染色逐渐降低(P<0.01);不同浓度的姜黄素可抑制CNE-2Z细胞中EGFR、PCNA、PI3K和Tubulin-β的表达,并使EGFR mRNA在CNE-2Z细胞中的表达下调。结论:姜黄素可能通过下调EGFR影响细胞骨架,从而起到直接杀伤鼻咽癌细胞CNE-2Z的作用。     

姜黄素与顺铂联合对人肺腺癌A549细胞增殖抑制作用的体外研究

目的研究姜黄素和顺铂联合应用对人肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法采用MTT法观察姜黄素和顺铂对人肺腺癌A549细胞的抑制作用。结果姜黄素及顺铂能抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,并呈浓度及时间依赖性,两者作用人肺腺癌A549细胞48h的半数抑制浓度（IC50）分别为18．4μmol／L、0．966μg／ml。姜黄素10μmol／L、15μmol／L、20μmol／L与顺铂1μg／ml、2μg／ml联合24h、48h、72h的抑制率显著高于单用顺铂、姜黄素组（P〈0．05）,两者呈现出相加的抗瘤效果。结论姜黄素在体外对人肺腺癌A549细胞的增殖有明显的抑制作用,能提高顺铂对人肺腺癌A549细胞的敏感性。     

氯喹对鼻咽癌细胞凋亡的影响

目的:探讨氯喹(CQ)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度(0、2、4、8、16、32μmol/L)CQ对鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖抑制效应;集落克隆实验法检测不同浓度CQ对集落克隆形成的影响;溴化丙啶单染检测CQ诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡;Western blot检测CQ(10μmol/L)处理鼻咽癌细胞CNE-2Z不同时间(0、6、16、24 h)内质网应激反应标志物葡萄糖调节蛋白(GRP-78)的表达。结果:不同浓度CQ均对鼻咽癌细胞CNE-2Z具有明显的增殖抑制作用,16μmol/L CQ作用于鼻咽癌细胞CNE-2Z 24、48、72 h细胞存活率分别为85.94%、75.34%和56.45%。同时,CQ具有抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的集落克隆形成的作用。并且,CQ呈剂量依赖性诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z的凋亡。另外,CQ诱导鼻咽癌细胞上调GRP-78的表达。结论:CQ能抑制鼻咽癌细胞增殖,并通过引起过度的内质网应激反应机制诱导其凋亡。     

双氯芬酸抑制肝癌细胞增殖和促进环氧合酶-2 mRNA作用的表达

目的 观察环氧合酶抑制剂双氯芬酸钠对体外培养的肝癌细胞HepG2、Hep3B和正常肝细胞系QSG-7701增殖的作用以及药物对环氧合酶-2（COX-2）mRNA表达的影响,探讨COX-2与肝癌细胞增殖的关系。方法 采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞计数法测定药物作用24、48、72h后细胞增殖活性,半定量逆转录聚合酶链反应检测各种细胞系COX-2 mRNA的表达水平以及药物作用对基因表达的影响。结果双氯芬酸在10～200μmol/L浓度依赖性地抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖,50μmol／L作用48h后抑制率分别为40．47％和54．49％,半数抑制浓度分别为70．54和48．39μmol／L。双氯芬酸对正常肝细胞株QSG-7701的抑制作用较弱,作用48h的半数抑制浓度为189．91μmol／L。HepG2、Hep3B细胞均表达COX-2 mRNA,QSG-7701细胞几乎不表达COX-2 mRNA。双氯芬酸和化疗药5-氟尿嘧啶均可增强HepG2和Hep3B细胞COX-2 mRNA的表达。结论 双氯芬酸特异性地抑制表达COX-2的肝癌细胞HepG2和Hep3B的增殖,并且诱导COX-2 mRNA表达上调,提示COX-2在肝癌细胞增殖中具有重要意义。     

姜黄素对氧化型低密度脂蛋白诱导的大鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达、细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨姜黄素对大鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达、增殖和凋亡的影响。方法分离SD大鼠血管平滑肌细胞进行培养传代,采用不同浓度的姜黄素作用于氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导的大鼠平滑肌细胞,根据作用药物浓度进行分组,对照组（不加任何药物）,Ox-LDL 100μg/mL组,Ox-LDL 100μg/mL＋姜黄素20μmol/L组,Ox-LDL 100μg/mL＋姜黄素40μmol/L组,Ox-LDL 100μg/mL＋姜黄素80μmol/L组。分析姜黄素对大鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达、对细胞的增殖的影响。按照加入药物浓度进行分组,对照组（不加任何药物）,姜黄素50μmol/L组,姜黄素100μmol/L组,姜黄素120μmol/L组,分析姜黄素对细胞凋亡的影响。结果 Ox-LDL 100μg/mL组MCP-1分泌[（812.6±78.7）ng/L]及MCP-1 mRNA表达水平[（1.18±0.11）]较对照组[（91.3±6.1）ng/L,（0.16±0.04）]显著升高,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。姜黄素对OxLDL诱导的大鼠血管平滑肌细胞MCP-1分泌及MCP-1 mRNA表达、细胞增殖具有显著的抑制作用,对细胞凋亡有诱导作用,并且随着姜黄素浓度的增加,作用越明显（P〈0.01）。结论姜黄素能够抑制Ox-LDL诱导的大鼠细胞平滑肌细胞MCP-1表达以及细胞增殖,诱导大鼠细胞平滑肌细胞凋亡。     

姜黄素对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对人鼻咽癌(NPC)CNE-2细胞增殖及凋亡的影响.方法 不同浓度(0、10、20、40、60 μmol/L)姜黄素处理NPC细胞株CNE-2,利用噻唑蓝(MTT)实验检测CNE-2细胞增殖活性,利用流式细胞仪检测CNE-2细胞周期及凋亡率,利用Hoechest33258荧光染色法观察细胞凋亡情况.结果 姜黄素可明显抑制CNE-2细胞增殖作用,且随姜黄素浓度增加,CNE-2细胞抑制率呈上升趋势(P＜0.05),姜黄素作用CNE-2细胞24、48、72 h的半抑制浓度(IC50)分别为(23.54±0.36)、(18.31±0.42)、(8.56±0.37)μmol/L,即姜黄素可明显抑制CNE-2细胞增殖作用,且呈现明显浓度、时间依赖性;流式细胞检测结果显示,0、10、20、40、60 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞,凋亡率随着姜黄素浓度增加而上升;荧光染色结果可见,CNE-2细胞未给予姜黄素处理,细胞呈圆形或者椭圆形,细胞核大小均匀一致,染色质分布均匀的淡蓝色荧光;10 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24h后,细胞胞体缩小,细胞核染色质凝聚,呈颗粒状亮蓝色荧光;20 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24 h后,细胞出现胞体缩小,细胞核浓缩、染色质不均匀,出现凋亡小体,甚至出现核碎裂;40和60 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24 h后,细胞凋亡小体数量增多,出现大量核碎裂.结论 姜黄素对NPC细胞株CNE-2细胞增殖具有明显抑制作用,且促进CNE-2细胞凋亡.     

姜黄素与5氟尿嘧啶联合应用抗鼻咽癌的实验研究

目的：探讨姜黄素与5氟尿嘧啶（5-FU）联合应用对鼻咽癌CNE-2Z细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用,并研究其机制。方法姜黄素、5-FU单独应用及两者联合应用作用于鼻咽癌CNE-2Z细胞72 h,MTT法检测细胞生长状况,流式细胞仪检测鼻咽癌细胞的凋亡率, Western blot 检测Bcl-2、Bax、caspase-3以及 NF-κB 蛋白表达水平变化。 Real-time PCR 检测 caspase 家族中 caspase-3、caspase-7、caspase-9 mRNA表达水平的变化。结果凋亡率检测结果显示：两药联合应用后,肿瘤细胞的凋亡率明显高于单用药组（ P＜0.01）。姜黄素组、5-FU组和药物合用组CNE-2Z细胞的Bcl-2蛋白、细胞核内及细胞浆内NF-κB蛋白的表达水平下降,Bax蛋白、Cleaved caspase-3蛋白的表达水平增高。联合用药组caspase-3、caspase-7和caspase-9 mRNA表达水平高于单用药组。结论姜黄素和5-FU 抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的作用是通过诱导细胞凋亡来实现的。药物联合应用抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的作用可能是通过抑制Bcl-2基因的表达,增强Bax基因的表达,并通过抑制NF-κB活性来诱导凋亡而实现的。     

H2O2对ECV304细胞Grx mRNA表达的影响

目的通过体外实验，研究H2O2对人脐静脉内皮细胞（ECV304）谷氧还蛋白（Grx）mRNA表达水平的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（ECV304）；MTT实验观察H2O2对ECV304细胞增殖的影响；在时间相关性研究中，将细胞分为6组，第1组为正常对照组，第2、3、4、5、6组分别给予终浓度100μmol／L H2O2作用5min、10min、30min、60min、120min；在剂量相关性研究中，将细胞分为6组，第1组为正常对照组，第2、3、4、5、6组分别给予终浓度100μmol／L、200μmol／L、300μmol／L、400μmol／L、500μmol／L H2O2作用30min，采用Trizol一步法提取细胞总RNA，并用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）研究各组细胞Grx mRNA表达水平的差异。结景MTT结果表明，100μmol／L H2O2对细胞增殖无影响，200—500μmol／L H2O2均在不同程度上抑制细胞增殖（P〈0．05）。RT-PCR结果显示，在时间相关性研究中，终浓度100μmol／L H2O2作用10min、30min、60min均能使ECV304细胞中Grx mRNA表达水平增高，30min达到最大值，差异显著（P〈0．05）；剂量相关性研究表明，终浓度100μmol／L H2O2．400μmol／L H2O2作用30min均能使Grx mRNA表达水平增高，差异显著（P〈0．05），其中终浓度300μmol／L H2O2可使Grx mRNA的表达量最高（P〈0．01）。结论H2O2影响人脐静脉内皮细胞Grx mRNA的表达水平。     

衣霉素联合顺铂对人鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨糖基化抑制剂衣霉素联合顺铂对人鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其相关的分子机制。方法 MTT法检测药物对细胞增殖抑制的影响;集落克隆形成法检测药物对细胞集落克隆形成的影响;碘化丙啶单染流式细胞仪检测药物作用前后细胞凋亡率的变化;caspase-3活性检测试剂盒检测药物作用后24 h caspase-3的活性变化;Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达及葡萄糖调节蛋白78的表达。结果不同浓度衣霉素和/或顺铂对人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞具有显著的增殖抑制作用,3μmol/L衣霉素处理人鼻咽癌细胞的24、36、48 h后细胞的存活率分别为72.13%、51.97%、37.56%和85.61%、56.95%、43.66%,3μmol/L衣霉素与6μmol/L顺铂对人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2 24、36、48 h的存活率低于单用衣霉素、顺铂组,分别为67.97%、47.76%、34.68%和56.89%、37.05%、29.30%。0.3μmol/L衣霉素可增强0.6μmol/L顺铂抑制人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2的集落克隆形成的作用。3μmol/L衣霉素诱导CNE-1、CNE-2细胞48 h的凋亡率分别为8.89%、8.67%。3μmol/L衣霉素与6μmol/L顺铂联合刺激人鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2 48 h的凋亡率分别为37.02%、32.25%,分别高于顺铂本身诱导的凋亡率7.25%、6.36%。促进凋亡蛋白Bax的表达联合用药组高于单独用药组,抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达联合用药组低于单独用药组。衣霉素上调GRP-78的表达以及增强联合用药组caspase-3的活性。结论衣霉素增强顺铂对人鼻咽癌细胞的增殖抑制作用,衣霉素增强顺铂诱导人鼻咽癌细胞的凋亡作用,其机制可能是通过引起过度的内质网应激反应以及增加caspase-3的活性。     

高糖联合低氧对体外培养的人视网膜色素上皮细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的探讨高糖及高糖联合低氧对体外培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial，RPE）细胞低氧诱导因子1α（hypoxia—inducible factor-1α，HIF-1α）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的影响。方法通过使用化学低氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞低氧环境，研究RPE细胞分别在5．56mmol／L葡萄糖（对照组）、5．56mmol／L葡萄糖＋150μmol／L CoCl2（低氧组）、25mmol／L葡萄糖（高糖组）以及25mmol／L葡萄糖＋150μmol／L CoCl2（联合组）的培养条件下，通过反转录PCR检测HIF-1α及VEGF mRNA的表达，Western blot分析检测HIF-1α及VEGF蛋白水平。结果与对照组比较，高糖组RPE细胞HIF-1α mRNA表达无显著性差异，而高糖组可检测出微量的HIF-1α蛋白，对照组未能检测出HIF-1α蛋白；且高糖组VEGF mRNA表达和蛋白合成均增加（均P〈0．05）。与低氧组比较，联合组RPE细胞HIF-1α mRNA表达无显著性差异，但HIF-1α蛋白水平明显高于低氧组（P〈0．05）；同时VEGF mRNA表达和蛋白合成也均明显增加（均P〈0．05）。结论高糖对体外培养的人RPE细胞HIF-1α的影响是促进蛋白的合成，且对HIF-1α蛋白有一定的稳定作用，在联合低氧条件下高糖促进合成的HIF-1α蛋白更加稳定，同时也促进VEGF的表达增加。     

姜黄素对体外培养的人食管癌Ec-109细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究姜黄素对体外培养的人食管癌(esophageal carcinoma 109,Ec-109)细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用噻唑兰(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同浓度姜黄素对人食管癌Ec-109细胞增殖的影响;流式细胞术检测Ec-109细胞的凋亡情况;免疫细胞化学方法检测Fas、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达的情况.结果 姜黄素可显著抑制Ec-109细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(inhibitory concentraltion 50,IC50)为22.09μmol/L(姜黄素浓度为80μmol/L作用60h).不同浓度姜黄素均可诱导Ec-109细胞凋亡.姜黄素可显著下调Ec-109细胞PCNA蛋白表达,显著上调Fas蛋白表达.结论 姜黄素可抑制体外培养的人食管癌Ec-109细胞的增殖,诱导其凋亡.     

姜黄素对大鼠肾系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的 观察姜黄素对大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。并探讨其可能的影响机制。方法 体外培养大鼠肾系膜细胞．同步后用血清刺激，并用不同浓度的姜黄素、姜黄素联合mTOR特异阻断剂雷帕霉素、姜黄素和磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶BCP13K／Akt）特异抑制剂LY294002进行干预处理。采用RT-PCR检测CTGF和纤维连接蛋白（Fn）mRNA表达；Western blot检测CTGF蛋白和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）表达。结果 ①血清刺激系膜细胞6h，姜黄素浓度依赖性抑制CTGF和Fn mRNA的表达；姜黄素联合雷帕霉素对CTGF和Fn mRNA表达的抑制作用较单用同浓度姜黄素明显；LY294002预处理后。姜黄素对CTGF和Fn mRNA表达的抑制作用较未预处理组减弱。②25／μmol／L姜黄素作用细胞30、120min。p-Akt蛋白表达较同时间点血清对照组明显减弱；且LY294002预处理后姜黄素对p-Akt表达的抑制作用较未预处理组亦明显减弱。③血清刺激系膜细胞24h。姜黄素对CTGF蛋白的表达亦起抑制作用；姜黄素联合雷帕霉素对CTGF蛋白表达抑制更明显；LY294002预处理后。姜黄素对CTGF蛋白表达的抑制效果较未预处理组减弱。结论 姜黄素可抑制血清刺激的肾小球系膜细胞CTGF的表达．其机制可能与P13K／Akt信号途径和mTOR信号途径有关。     

氯喹对鼻咽癌细胞凋亡的影响

目的:探讨氯喹(CQ)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度(0、2、4、8、16、32mol/L)CQ对鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖抑制效应;集落克隆实验法检测不同浓度CQ对集落克隆形成的影响;溴化丙啶单染检测CQ诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡;Western blot检测CQ(10mol/L)处理鼻咽癌细胞CNE-2Z不同时间(0、6、16、24 h)内质网应激反应标志物葡萄糖调节蛋白(GRP-78)的表达。结果:不同浓度CQ均对鼻咽癌细胞CNE-2Z具有明显的增殖抑制作用,16mol/L CQ作用于鼻咽癌细胞CNE-2Z 24、48、72 h细胞存活率分别为85.94%、75.34%和56.45%。同时,CQ具有抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的集落克隆形成的作用。并且,CQ呈剂量依赖性诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z的凋亡。另外,CQ诱导鼻咽癌细胞上调GRP-78的表达。结论:CQ能抑制鼻咽癌细胞增殖,并通过引起过度的内质网应激反应机制诱导其凋亡。     

淫羊藿苷激活抑制鼻咽癌CNE-2细胞存活、侵袭、迁移的体内外研究

【目的】探讨淫羊藿苷对鼻咽癌CNE-2细胞存活和侵袭迁移特性的影响。【方法】(1)体外研究:用不同浓度淫羊藿苷处理鼻咽癌CNE-2细胞,采用细胞计数试剂盒8(CCK8)测定细胞增殖能力以选择合适的剂量进行后续实验。采用Transwell实验观察细胞侵袭能力;划痕实验观察细胞迁移能力;蛋白免疫印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)、上皮钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达情况及信号通路蛋白Ca~(2+)/钙调蛋白依赖性的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化情况。并进一步观察单独或联合JNK抑制剂SP600125对JNK活化程度的影响,采用蛋白免疫印迹法检测细胞JNK磷酸化水平。(2)体内研究:建立鼻咽癌CNE-2荷瘤裸鼠模型,测定裸鼠移植瘤质量、细胞凋亡和移植瘤组织VEGF表达情况、MVD值。【结果】选择低细胞毒性10、20、50μmol/L剂量的淫羊藿苷进行后续实验。与空白对照组(淫羊藿苷0μmol/L)比较,淫羊藿苷10、20、50μmol/L组CNE-2细胞侵袭细胞数、划痕愈合率降低,细胞VEGF、N-cadherin、Vimentin表达水平明显降低(P 0.05),E-cadherin表达水平与CaMKⅡ、JNK的磷酸化水平升高(P 0.05),均呈剂量依赖性。淫羊藿苷(10μmol/L)可减弱JNK抑制剂SP600125对JNK磷酸化的抑制作用。与模型组比较,淫羊藿苷组鼻咽癌裸鼠存活率升高,移植瘤质量减小,移植瘤组织细胞凋亡率升高,VEGF表达水平、MVD值明显下降(P 0.05)。【结论】淫羊藿苷可促进CaMKⅡ/JNK通路激活来抑制鼻咽癌CNE-2细胞的存活、侵袭和迁移能力。     

血管内皮生长因子干扰RNA对人鼻咽癌CNE一2Z细胞VEGF表达调控的实验研究

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）的特异性小片段干扰RNA（siRNA）对低分化人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF表达的抑制作用，为鼻咽癌的治疗提供新的途径。方法：体外培养人鼻咽癌细胞CNE-2Z，并分成正常氧状态培养组（20％）和低氧（1％）培养组。采用脂质体（LF2000）将VEGF siRNA转染两组细胞，并采用RT—PCR、ELISA检测鼻咽癌细胞在正常氧状态和低氧状态下VEGF mRNA和蛋白质表达的差异。结果：与未转染组和转染空载体组相比，在正常氧和低氧状态下，VEGFsiRNA均能明显抑制VEGFmRNA的表达（P〈0．01）；正常氧状态下VEGFsiRNA的抑制效率比低氧状态高。正常氧状态下：未转染组、转染空载体组、转染VEGFsiRNA组CNE-2Z细胞培养上清液中VEGF165的含量分别为：423．92、419．68和328．86pg／mL；低氧状态下VEGF165的含量分别为：813．62、799．89和500．96pg／mL，转染VEGF siRNA组VEGF的表达下调。结论：VEGF siRNA能有效地、特异地抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF mRNA和蛋白质的表达，因而有望成为治疗鼻咽癌的一种有效方法。