紫杉醇诱导HeLa细胞凋亡的研究

目的：探讨紫杉醇抑制ＨｅＬａ细胞生长的机制。方法；经荧光染色，电镜观察细胞形态，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ及流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：紫杉醇作用２４ｈ经荧光染色细胞呈不均一亮蓝色，作用４８ｈ细胞被染色红色，电镜观察可见细胞变小，染色质浓缩并产生凋亡小体，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ未见明显的梯形条带，流式细胞仪检测紫杉醇作用２４ｈ细胞凋亡。结论；紫杉醇可诱导细胞凋亡，也可直接杀伤ＨｅＬａ细胞，而且以后者为主     

HL—60细胞凋亡小体体外负载树突状细胞的实验研究

目的：证实树突状细胞(Dendrmc cells,DCs)可通过吞噬凋亡小体获取抗原物质,探讨其在肿瘤免疫治疗中的意义。方法：利用吸附单克隆抗体-磁珠分离系统(MACS),从人脐血中分离出CD34^ 细胞,体外以重组hGM—CSF hSCF hTNF—α hFL诱导培养DCs,光镜观察诱生细胞的形态,流式细胞术(FACS)检测其表型。电镜观察和流式细胞仪检测三氧化二砷(As2O3)诱导凋亡的HL-60细胞,将凋亡的HL-60细胞与培养早期的DCs共育4～8h,电镜观察DCs吞噬凋亡小体的现象。结果：CD34^ 细胞经诱生后生成了大量具有典型形态和表型的成熟DCs;电镜下见凋亡的HL-60细胞内凋亡小体形成,流式细胞仪检测DNA含量,见亚二倍体峰形成。凋亡细胞与DCs共育后,电镜下见DCs吞噬凋亡小体的现象。结论：DCs可通过吞噬凋亡小体摄取抗原物质。     

HL-60细胞凋亡小体体外负载树突状细胞的实验研究

目的 :证实树突状细胞 (Dendritic cells,DCs)可通过吞噬凋亡小体获取抗原物质 ,探讨其在肿瘤免疫治疗中的意义。方法 :利用吸附单克隆抗体 -磁珠分离系统 (MACS) ,从人脐血中分离出 CD34+ 细胞 ,体外以重组 h GM- CSF+ h SCF+ h TNF-α+ h FL诱导培养 DCs,光镜观察诱生细胞的形态 ,流式细胞术 (FACS)检测其表型。电镜观察和流式细胞仪检测三氧化二砷 (As2 O3 )诱导凋亡的 HL - 6 0细胞 ,将凋亡的 HL- 6 0细胞与培养早期的 DCs共育 4～ 8h,电镜观察 DCs吞噬凋亡小体的现象。结果 :CD34+细胞经诱生后生成了大量具有典型形态和表型的成熟 DCs;电镜下见凋亡的 HL- 6 0细胞内凋亡小体形成 ,流式细胞仪检测 DNA含量 ,见亚二倍体峰形成。凋亡细胞与 DCs共育后 ,电镜下见 DCs吞噬凋亡小体的现象。结论 :DCs可通过吞噬凋亡小体摄取抗原物质。     

鸡有核红细胞凋亡的电镜观察

利用透射电镜观察了正常成年鸡脾内红细胞的凋亡现象。结果显示，鸡脾内凋亡红细胞核染色质先呈现网眼样变化，后浓缩、边聚。凋亡红细胞整个被巨噬细胞吞噬，在其中分解变小成为凋亡小体。凋亡小体电子密度有的升高，有的降低，最后均被巨噬细胞消化清除。结果表明，有核的红细胞发生细胞凋亡，并借助于巨噬细胞的膜系统完成凋亡过程。     

鸡有核红细胞凋亡的电镜观察

利用透射电镜观察了正常成年鸡脾内红细胞的凋亡现象。结果显示，鸡脾内凋亡红细胞核染色质先呈现网眼样变化，后浓缩、边聚。凋亡红细胞整个被巨噬细胞吞噬，在其中分解变小成为凋亡小体。凋亡小体电子密度有的升高，有的降低，最后均被巨噬细胞消化清除。结果表明，有核的红细胞发生细胞凋亡，并借助于巨噬细胞的膜系统完成凋亡过程。     

小鼠胸腺基质细胞的类型和分布

本文用特殊染色方法和酸性复红法对小鼠胸腺内各种基质细胞进行了鉴别,从染色特性及细胞形态,可区分出各型上皮网状细胞、保姆细胞、巨噬细胞、肥大细胞的?光镜下观察了小鼠胸腺内各种基质细胞的分布,并证实小鼠胸腺髓质内含有胸腺小体。本文就电镜所见髓质两种上皮细胞类型并结合PAS反应,对髓质内亮细胞的特性进行了讨论。     

光学及荧光显微镜在细胞凋亡检测中的应用

为观察细胞培养中细胞凋亡的形态及数量，取４℃环境下不同时间培养的小鼠胸腺细胞，用光镜或吖啶橙（ＡＯ），溴化乙淀（ＥＢ）染色后荧光镜观察，光镜下可见凋亡小体，荧光镜下早期凋亡细胞发绿色或暗绿色荧光，伴有核结构的变化，而晚期凋亡细胞发橙红色荧光并有凋亡小体的形成。结果表明：光镜下需出现典型形态变化时凋亡才能确认，ＡＯ和ＥＢ双重荧光染色后荧光镜检在细胞凋亡检测中即可定性，又可定量。     

实验性糖尿病诱导大鼠胸腺细胞凋亡的电镜观察

目的：探讨糖尿病诱导大鼠胸腺细胞凋亡的形态学变化,从而了解其引起胸腺萎缩的可能机制。方法：采用四氧嘧啶诱导复制的大鼠实验性糖尿病动物模型,在电镜下观察了糖尿病大鼠胸腺细胞凋亡的形态学变化。结果：在糖尿病大鼠胸腺皮质中发现了大量凋亡的胸腺细胞,主要表现为细胞皱缩变小,表面形成许多皱突,似发泡状,细胞质浓缩,电子密度增强,线粒体肿胀,嵴减少与紊乱,空泡化细胞核染色质固缩边聚,核变成花瓣状,黑环状与黑洞状,核与细胞发生裂解形成凋亡小体,被巨噬细胞和上皮细胞吞噬清除。此外,在凋亡细胞与小体的周围还聚着许多浆细胞,结论：实验性糖尿病可诱导大鼠脑腺细胞发生大量凋亡,这可能是导致胸腺细胞大量减少及胸腺萎缩的主要机制之一。     

小脑黑色素性髓母细胞瘤超微结构观察

本文报道3例黑色素性髓母细胞瘤的临床、光镜及电镜观察。结果发现:光镜下,主要由小型的肿瘤细胞及灶性的黑色素细胞构成;电镜下,小型肿瘤细胞绝大部分为未分化的细胞。黑色素细胞浆内含有许多黑色素小体,胞体周围部分或全部被基底膜样物质包绕。作者推测黑色素细胞可能系神经嵴起源,而小型瘤细胞可能系神经上皮起源。     

大鼠黄体萎缩时期细胞超微结构的研究

本实验以ＰＭＳＧ和ｈＣＧ处理后黄体萎缩时期大鼠为实验材料研究黄体萎缩与细胞凋亡关系。经电镜细胞超微结构分析发现黄体组织萎缩时大量黄体细胞发生调亡，其染色质浓缩，边集，被膜包裹形成表面光滑有的凋亡小体，而这一过程中细胞器却基本完整，这些凋亡小体的所吞噬。以上均上显示出细胞凋亡所具有的形态学特征，从而有力地证明了细胞凋亡参与了黄体组织萎缩，为深入了解黄体退化机制提供了依据。     

Antineoplastic mechanism of Octreotide actionin human hepatoma

Objectives To investigate whether apoptosis can be induced by Octreotide in human hepatoma cells in vitro and elucidate the antineoplastic mechanism of Octreotide in hepat oma. Methods A cultured human hepatoma cell line, BEL-7402, was exposed to Octreotide and ap optosis was evaluated by cytochemical staining (Hochesst 33 258), transmiss ion electron microscopy, agarose gel electrophoresis and flow cytometry (FCM).Results After exposure to 0.2 μg/ml Octreotide, apoptosis with nuclear chromatin cond ensation as well as fragmentation, cell shrinkage and the formation of apoptotic bodies was observed using cytochemical staining and transmission electron micros copy. A DNA ladder in agarose gel electrophoresis was also displayed. FCM show ed that the apoptotic cell number rose with an increase in the concentration of Octreotide (0-2 μg/ml). There was a positive correlation between Octreotide concentration and apoptotic rate in BEL-7402 cells (r=0.809, P<0.05) .Conclusion Apoptosis in human hepatoma cells can be induced by Octreotide, which may be rel ated to the mechanism of antineoplastic action ofOctreotide in hepatoma.     

小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响

目的观察小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用.方法体外培养人肝癌Bel-7402细胞,台盼兰活细胞计数及集落形成抑制实验观察不同浓度小檗碱对Bel-7402细胞的增殖抑制作用,Hochest33258染色观察凋亡形态学变化,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率.结果小檗碱可显著抑制Bel-7402细胞生长,使集落形成能力明显下降,均呈时间、剂量依赖性.小檗碱处理后72 h,Hochest33258染色可观察到细胞核边集、固缩,有明显凋亡小体形成,流式细胞仪检测出现明显Sub-G1峰.结论小檗碱可以抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡,小檗碱可能具有治疗人肝细胞癌的潜在应用价值.     

高温对体外培养大鼠海马锥体细胞凋亡的影响

目的：探讨高温下新生大鼠海马锥体神经元凋亡形态学及生物化学变化。方法：建立体外海马神经细胞培养模型，以37，40，42℃3种温度作为环境刺激因素，应用流式细胞仪，荧光染色，琼脂糖凝胶电泳和原位细胞凋亡检测试剂盒对其观察。结果：随作用温度升高细胞凋亡率及凋亡小体数增加，电泳呈现DNA Ladder表面，荧光显微镜观察能够看到凋亡体及其出芽现象，结论：高温能够诱导体外培养的大鼠海马锥体细胞发生凋亡，且不同温度诱导其凋亡的程度时程表现亦不同。     

VP-16诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡的研究

为研究ＶＰ－１６对雄激素非依赖性前列腺癌细胞ＰＣ－３凋亡的诱导作用,应用ＨＥ染色观察细胞的形态学改变,以ＤＮＡ凝胶电泳和流式细胞术（ＦＣＭ）分析细胞凋亡和细胞周期分布,同时应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法研究ＶＰ－１６对ＰＣ－３细胞ＤＮＡ合成的影响。结果表明,（１）凋亡的ＰＣ－３细胞呈明显的形态学改变;（２）ＤＮＡ断裂呈梯形变化;（３）ＰＣ－３细胞凋亡率随ＶＰ－１６作用浓度增加和时间延长逐渐增高;（４）ＶＰ－１６能够明显抑制ＰＣ－３细胞ＤＮＡ的合成。提示ＶＰ－１６可诱导前列腺肿瘤细胞凋亡。     

顺铂诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的观察

在体外采用光镜、电镜及ＤＮＡ断片检测方法对顺铂作用于人食管癌Ｅｃａ１０９细胞后的形态学及生化改变进行了观察。药物作用后细胞皱缩变小，呈圆形，细胞核固缩、破裂或消失，胞浆红染，有的细胞似出芽状，可见到凋亡小体及凋亡小体被吞噬的现象。顺铂低浓度时凋亡现象不明显，５ｍｇ／Ｌ以上时作用明显。药物作用２４ｈ时经ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳，可见到呈梯状的条带。结果提示：顺铂可引起Ｅｃａ１０９细胞凋亡，ＤＮＡ降解是细胞凋亡过程中的重要变化之一。     

Growth inhibition and apoptosis induction in human hepatoma cells by tanshinone II A.

In order to study the effect of tanshinone II A on growth and apoptosis in human hepatoma cell line BEL-7402 in vitro, the human hepatoma cell line BEL-7402 was treated with tanshinone II A at various concentrations for 72 h. Growth suppression was evaluated by MTT assay; apoptosis-related alterations in morphology and biochemistry were ascertained under cytochemical staining (Hoechst 33258), transmission electron microscopy (TEM), and DNA agarose gel electrophoresis. Apoptotic rate was quantified by flow cytometry (FCM). The results showed that Tanshinone II A could inhibit the growth of hepatoma cells in a dose-dependent manner, with IC50 value being 6.28 micrograms/ml. After treatment with 1-10 micrograms/ml tanshinone II A for 72 h, BEL-7402 cells apoptosis with nuclear chromatin condensation and fragmentation as well as cell shrinkage and the formation of apoptotic bodies were observed. DNA ladder could be demonstrated on DNA electrophoresis. FCM analysis showed hypodiploid peaks on histogram, and the apoptotic rates at 5 micrograms/ml concentration for 12 h, 24 h, 36 h, 48 h and 72 h were (2.32 +/- 0.16)%, (3.01 +/- 0.35)%, (3.87 +/- 0.43)%, (6.73 +/- 0.58)% and (20.85 +/- 1.74)% respectively, which were all significantly higher than those in the control group (1.07 +/- 0.13)%. It is concluded that Tanshinone II A could induce human hepatoma cell line BEL-7402 apoptosis, which may be related to the mechanism of growth inhibition.     

羟基磷灰石纳米粒子抑制结肠癌SW-480细胞生长的体外实验

目的:本研究旨在明确羟基磷灰石纳米粒子(HAP)在体外能否诱导人结肠癌SW-480细胞凋亡并从凋亡角度探讨其抑癌机制。方法:用HAP以不同浓度作用于人结肠癌SW-480细胞,以诱导其凋亡。用MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞术(FCM)等方法来检测凋亡,观察其形态学和生化方面的变化。结果:HAP以剂量和时间依赖的方式抑制人结肠癌SW-480细胞的生长。25 mg/L,50mg/L HAP作用72 h细胞的生长抑制率分别是49.71%和61.03%。12.5-100 mg/L的HAP处理48 h后,结肠癌细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形式等凋亡特征的形态学改变。流式细胞仪均能检测到凋亡峰,12.5,25,50,100 mg/L HAP作用48 h,凋亡率分别是3.57%,21.45%,37.10%和49.45%。结论:HAP在体外能抑制人结肠癌SW-480细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

褪黑素对电离辐射诱导离体小鼠淋巴细胞凋亡的影响

目的：探讨褪黑素（melatonin,MLT）对电离辐射诱导的离体小鼠淋巴细胞凋亡的影响及其机制。 方法：采用流式细胞术（FCM）和荧光分光光度法分别检测小鼠胸腺和脾淋巴细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率。 结果：电离辐射可诱导离体小鼠胸腺、脾淋巴细胞凋亡,在0.5~6.0 Gy范围内凋亡呈剂量依赖性增加。照射前预先加入2 mmol•L^-1MLT,细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率与单纯照射组比较均显著降低,胸腺、脾淋巴细胞凋亡小体百分率分别降低为单纯照射组的86.25%和89.22%,DNA裂解率分别降低为单纯照射组的87.23%和89.16%。 结论：MLT在体外可减轻电离辐射诱导的小鼠淋巴细胞凋亡,对淋巴细胞损伤有防护作用。     

六种染色后光镜观察法检测肝癌细胞凋亡

目的:探讨简便易行的在光镜下通过形态学观察检测细胞凋亡的方法,并对其进行比较。方法:首先用6%的乙醇作用6h诱导人肝细胞癌细胞系HCC-9204细胞凋亡,然后进行未固定细胞的台盼蓝染色、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染色,细胞固定后的Hoechst33258荧光染色、May-Grunwald-Giemsa(MGG)染色和常规HE染色等形态学观察,并进行末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测。结果:用低浓度乙醇诱导细胞凋亡后,大部分肝癌细胞为台盼蓝拒染,TUNEL阳性着色。除了台盼蓝染色法以外,AO/EB、Hoechst33258、MGG和HE等染色法,以及TUNEL检测法均能够不同程度地显示典型的细胞变圆,细胞核深染,染色质边集、呈环状、团块或新月体状,以及细胞浆浓缩和“出泡”现象等细胞凋亡的形态学特征。AO/EB双染色法还能够显示呈致密浓染的黄绿色染色或出现黄绿色碎片的早期凋亡细胞,呈致密浓染的鲜红色染色或出现鲜红色碎片的晚期凋亡细胞,以及呈鲜红色膨大状的坏死细胞。结论:上述六种染色方法均可作为检测细胞凋亡的手段。除了台盼蓝染色以外,其余5种染色方法均可用于观察凋亡细胞的形态学变化。其中,从AO/EB双染色法还可以区分早期凋亡。晚期凋亡和坏死细胞。TUNEL法不仅能够通过检测凋亡细胞的DNA片段化来判别细胞凋亡,还可以从形态学上观察凋亡细胞。     

10-羟基喜树碱诱导人肝癌细胞SMMC-772l凋亡及其机制的初步研究

目的研究10-羟基喜树碱(10-HCPT)诱导人肝癌细胞凋亡的作用。方法用10-HCPT以不同终浓度、不同作用时间诱导SMMC-721人肝癌细胞。分别以倒置相差显微镜、电镜、荧光显微镜观察其形态学改变,提取细胞内小分子DNA进行琼脂糖凝胶电泳,并对这些细胞的P53蛋白进行免疫组织化学染色。结果当10-HCP终浓度>2.0μmol·L-1时,部分细胞可见典型的凋亡特征核固缩、凋亡小体、梯状电泳带。随着10-HCPT浓度或作用时间增加,凋亡率逐渐升高。各组细胞P53蛋白免疫组化染色均为阴性。结论10-HCPT可诱导SMMCC-7721细胞凋亡,其作用效果呈剂量、时间依赖性。