抗坏血酸快速测定法

本文采用酚试剂作为氧化剂测定抗坏血酸,显色后即可比色,呈色稳定,具有快速灵敏的优点,并初步应用于测定生物样品中抗坏血酸含量,得到满意结果。现介绍如下:     

介绍一种测定溶血的高灵敏度方法

建立灵敏度高、试剂安全测定血浆游离血红蛋白(FHb)的方法。用于各项溶血试验。其方法为设计改良Trinder反应的2,4-二氯酚(2,4-DCP)方法,并进行各项性能验证。结果显示:本法灵敏度是酚法的2.39倍,批内批间重复性好。呈色稳定,FHb参考值为1～36.7mg/L,以液体枸橼酸钠抗凝剂,保存红细胞最优。FHb2,4-二氯酚法无毒、无癌原性,适用临床及生物医学工程学的各项溶血试验。     

重庆市售蔬菜还原型抗坏血酸含量的测定

为了便于人们合理选择和利用蔬菜,并为医疗和营养工作者提供本地参考资料,我们于1987年采用2,6—二氯酚靛酚滴定法对重庆市四季市售蔬菜中还原型抗坏血酸含量进行了测定。     

四种石蜡包埋组织DNA提取方法的比较

背景:由于在甲醛固定石蜡包埋组织的制作及保存过程中对DNA造成的损害,影响了后续的聚合酶链反应等研究。选择一种简便有效且经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法成为研究者们关注和亟待解决的问题。目的:比较甲醛固定石蜡包埋组织中4种提取DNA的方法对DNA质量的影响,探讨一种操作简便、污染少、经济实用的石蜡包埋组织中提取DNA的方法。方法:取手术切除的普通甲醛固定石蜡包埋的非小细胞肺癌组织标本20例,分别以二甲苯脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法、试剂盒法和改良TES水浴脱蜡-试剂盒抽提DNA法提取其DNA,然后进行电泳分析、紫外分光光度计测定A260/A280比值及PCR扩增。结果与结论:改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法和改良TES水浴脱蜡-试剂盒抽提DNA法可获得较大的DNA片段,且两种方法与试剂盒法所提取DNA的A260/A280值相比较,均有显著性意义(P0.05),4种方法的提取效率差异无显著性意义(P0.1),以改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法所得DNA为模板,扩增的目的条带亮度与阳性对照相当。结果证实改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法简便有效,所用试剂价格低廉,是一种经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法。     

一种过氧化物酶法sdLDL-C测定试剂的性能评价

目的 评价一种过氧化物酶法sdLDL-C测定试剂的分析性能.方法 参考CLSI EP文件要求对此过氧化物酶法sdLDL-C测定试剂的正确度、精密度、线性、回收实验以及参考区间进行评价,并与DENKA SEIKEN sdLDL-C测定试剂进行方法学比对.结果 sdLDL-C测定试剂的正确度、精密度、线性和回收率均达到性能评价标准,其中批内精密度为低浓度3.80％、高浓度2.25％;批间精密度为低浓度3.01％、高浓度2.89％.实测线性范围为0.071～2.533 mmol/L.平均回收率为93.51％.150例表观健康受试者的参考范围为0.14～0.58 mmol/L.与DENKA SEIKEN sdLDL-C测定试剂的检测值拟合方程为Y=0.9666X-0.0031,决定系数R2=0.9991.结论 sdLDL-C测定试剂的正确度、精密度、线性、回收率均达到性能评价标准,在临床应用中与DENKA SEIKEN试剂相关性良好,具有临床适用性.     

放射免疫分析中值得注意的几个问题

放射免疫分析是一项极其精确的超微量分析技术。在基础医学、临床医学、生物学等领域已被广泛应用。但结果的正确性受诸多因素影响,为了使测定结果正确必须注意以下几个问题。一、温度的影响: (一)试剂盒保存温度:放免试剂盒一般均将制品冻干后快件寄给用户的,收到试剂盒后宜放4℃冰箱贮存。试剂溶解后,有的需分装在测定管中,置低温,每次测定时逐套取出使用,例如TGA、TMA阳性参考血清溶解后在4℃中其抗体效价会下降;T_4脱碘成T_3,致使T_4标准浓度下降,T_3脱碘成T_2,致使T_3标准浓度下降。如标准品贮存温度不当,可导致活性下降试剂在配制过程中都加入一定量防腐剂,目的是防止细菌生长。无论标准品、标记抗原、抗体都含有一定的蛋白量,细菌生长后分解蛋白质产酸产气,使试剂的pH值发生变化,影响结果。溶解后的试剂不宜置低温中反复冻融,特别是抗体其活性会随反复冻融而下降或失活。     

利用四唑盐染料WST反映巨噬细胞受脂多糖刺激活化后的氧化应激和代谢变化

目的通过四唑盐染料显色方法分析巨噬细胞受脂多糖刺激后的氧化应激和代谢变化,分析这种方法在炎症研究中的应用价值。方法通过活细胞计数方法和CCK-8检测试剂分别检测RAW264.7巨噬细胞的活力;用CCK-8和WST-1显色方法研究超氧阴离子的释放;用DCFH-DA荧光染色和流式细胞术检测细胞内活性氧的生成;用乳酸检测试剂盒和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD+(H)检测试剂盒分别检测上清中乳酸和细胞内NADH的含量。结果经脂多糖刺激的RAW264.7细胞的活细胞计数结果和CCK-8显色结果存在反差;相同数目的正常培养细胞和脂多糖刺激细胞的CCK-8显色比较,后者读数显著升高,超氧化物歧化酶能够下调CCK-8显色读数,WST-1显色结果与CCK-8一致,脂多糖刺激细胞中的活性氧含量显著增加;脂多糖导致RAW264.7细胞上清中的乳酸含量和细胞内的NADH含量显著增加。结论应用WST染料测定经脂多糖刺激的RAW264.7细胞活力时,测定结果会受到细胞中还原性物质——超氧阴离子和NADH含量变化的干扰。通过WST-1或WST-8显色实验,可验证脂多糖能够刺激RAW264.7巨噬细胞发生氧化应激和能量代谢变化。这一显色实验在炎症研究和药物筛选中可能有重要应用价值。     

山西汉族可溶性HLA-Ⅰ类抗原检测

目的:定量检测正常人血清中可溶性人白细胞抗原-Ⅰ(sHLA-Ⅰ),以探讨山西汉族人群的正常参考值.方法:ELISA法检测血清sHLA-Ⅰ类抗原水平.将不同浓度的标准品和待检血清分别加入包被有特异性sHLA-Ⅰ抗体的酶标板,与生物素化的sHLA-Ⅰ、辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素共同孵育,弃上清并用洗涤液洗涤,加底物应用液四甲基联苯胺(TMB)显色,以酶标仪450nm测定吸光度值,根据不同浓度标准品显色后测得的吸光度值绘制标准曲线,测定60例健康山西人的sHLA-Ⅰ含量.结果:ELISA法能够准确检测sHLA-Ⅰ含量,60例健康山西人的sHLA-Ⅰ含量为(382.62±106.68)ng·ml-1.结论:山西汉族人群sHLA-Ⅰ正常值为(382.62±106.68)ng·ml-1.     

细菌内毒素定量检测的影响因素分析及对策

细菌内毒素检查法(简称鲎试验)是利用鲎血变形细胞制成的鲎试剂与微量内毒素产生凝集反应的现象,作为判断样品中细菌内毒素含量是否符合规定的一种方法。其基本原理是利用微量内毒素激活、活化鲎试剂中的C因子和B因子,使凝固酶原转化为凝固酶,成为凝胶样的凝固蛋白,具有简便、迅速、特异性高及灵敏度高等优点。中国药典1995年板已收载,并对鲎试剂、内毒素标准、试验程序、判断标准等作了规定。 我科引进的EDS-99细菌内毒素检测系统可进行动态比浊法和显色基质法检测内毒素,分别利用细菌内毒素与鲎试剂形成凝胶过程中的浊度变化以及反应过程中产生的凝固酶使特     

一种改良的变性聚丙烯酰胺凝胶中DNA银染显色方法

目的 对变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)中DNA银染及显色方法进行改良,以得到简便、快速、经济、有效的DNA银染显色方法.方法 改良的方法省略了预处理、固定、用试剂终止显色过程等步骤,并无需中间用水冲洗、漂洗.结果 改良方法使PAGE中DNA银染显色全程时间缩短至15～20 min,且效果较好.结论 改良后的方法简捷有效,值得应用.     

一种改良的变性聚丙烯酰胺凝胶中DNA银染显色方法

目的对变性聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）中DNA银染及显色方法进行改良，以得到简便、快速、经济、有效的DNA银染显色方法。方法改良的方法省略丫预处理、固定、用试剂终止显色过程等步骤，并无需中间用水冲洗、漂洗。结果改良方法使PAGE中DNA银染显色全程时间缩短至15～20min，且效果较好。结论改良后的方法简捷有效，值得应用。     

癌胚抗原光激化学发光免疫分析法的建立

目的:利用光激化学发光免疫分析技术(Al-phaLISA)建立人血清癌胚抗原(CEA)的快速检测试剂。方法:1株CEA单克隆抗体(mAb)包被受体微球,另1株(mAb)用生物素标记,与链霉亲和素的供体微球共同组成检测试剂,优化反应体系并对试剂的各项性能指标进行评价。结果:自制CEA试剂分析灵敏度为0.11 ng/mL,线性测量范围为0.11～500 ng/mL,分析内和分析间的精密度分别为3.3%～6.8%、5.5%～8.1%,与AFP、CA12-5、CA19-9和人血清白蛋白均无交叉反应,100份临床血清样本用本试剂与罗氏化学发光试剂检测,其相关系数为0.976。结论:自制CEA Al-phaLISA试剂的各项性能指标均能达到临床检测要求,有望替代国外同类试剂应用于临床血清样本CEA浓度的测定。     

HPLC法测定清肺抑火片中大黄素、大黄酚含量

目的建立高效液相色谱法测定清肺抑火片中大黄素、大黄酚含量.方法采用大连依利特YWZ-C18柱;流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15),流速1.2 ml/min,检测波长:440nm.结果大黄素在0.03～0.15μg、大黄酚在0.07～0.35μg的范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系.平均回收率分别为:大黄素97.77%,RSD=2.10%;大黄酚97.77%,RSD=1.18%.结论本法快速、简便、准确.     

临床生物化学实验室用水管理探讨

目的 探讨临床生物化学实验室用水按微生物监测分级使用的重要性.方法 水质微生物培养在一级标准和二级标准两种条件下,以二氧化碳浓缩试剂为测定试剂比较不同微生物培养结果时对校准工作曲线的影响;比较使用浓缩试剂和非浓缩试剂对测定二氧化碳的影响.用注射用水和实验室水机所制纯水分别复溶甘油三酯干粉试剂后,观察试剂颜色变化和试剂空白吸光度,比较不同实验室试剂用水等级对干粉试剂的影响.结果 微生物培养结果为一级标准的纯水,可以用于试剂溶剂和仪器清洗,微生物培养结果为二级标准的纯水,不能作为试剂溶剂,只能用于设备清洗.注射用水可用于复溶甘油三酯干粉试剂,本实验纯水机制备的纯水不适用于复溶甘油三酯干粉试剂.结论 建议医学实验室每天监控纯水机电阻率,每月对纯水机水箱进行微生物培养,不同等级纯水用于不同实验室操作.医学实验室用水定期检测(微生物含量、pH值范围等)对于实验室风险评估、保证实验室质量非常必要.     

CLIA及RIA测定血清Digoxin浓度的比较

本文在于比较化学发光免疫法 (Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍ ｍｕｎｏａｓｓａｙ ,ＣＬＩＡ)和放射免疫分析法 (Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ,ＲＩＡ)两种方法同时测定血清Ｄｉｇｏｘｉｎ血药浓度的相关性 ,两法比较 ,测定结果相似 ,差异无显著意义 (ｐ >0 0 5 )。现报告如下。材料和方法一、样品采集 :在住院病人连续服药 1周后并于末次Ｄｉｇｏｘｉｎ服用后至少 6ｈ抽取的静脉血 ,分离血清 ,- 2 0℃保存待测。二、仪器试剂 :ＡＣＳ 180ＳＥ自动分析仪及试剂 (美国Ｃｈｉ ｒｏｎ公司 ) ;ＳＮ - 6 97Ｂ全自动双探头γ计数…     

雌激素受体/一氧化氮/环磷酸鸟苷通路介导雌马酚逆转环孢素抑制骨髓间充质干细胞增殖及向成骨细胞的分化(英文)

背景:长期服用环孢素可抑制成骨细胞分化,导致骨质疏松,而植物雌激素雌马酚可促进成骨细胞增殖与分化。目的:探讨雌马酚对环孢素处理的小鼠骨髓间充质干细胞增殖及向成骨细胞分化的影响,分析其可能存在的信号通路。方法:贴壁法分离培养小鼠骨髓间充质干细胞,分为5组,分别给予雌马酚、环孢素、雌马酚+环孢素、雌马酚+环孢素+ICI182780、雌马酚+环孢素+L-NAME。倒置显微镜下观察骨髓间充质干细胞的形态学变化及矿化能力,通过检测[3H]-甲基胸腺嘧啶掺入率反映细胞增殖情况,通过测定细胞内碱性磷酸酶活性与钙沉积量反映细胞向成骨细胞分化能力,测定培养液中一氧化氮产量与细胞内环磷酸鸟苷含量。结果与结论:合用雌马酚与环孢素可完全逆转单用环孢素引起[3H]-甲基胸腺嘧啶掺入率、细胞内碱性磷酸酶活性、钙沉积量的减少(P0.05或0.01),并伴随一氧化氮产量与细胞内环磷酸鸟苷含量的恢复(P0.01),同时倒置显微镜下可观察到干预12d时较高的细胞生长密度和矿化结节形成,以上作用可被雌激素受体拮抗剂ICI182780、一氧化氮合酶抑制剂L-NAME取消。提示雌马酚可通过雌激素受体/一氧化氮/环磷酸鸟苷信号通路逆转环孢素抑制骨髓间充质干细胞的增殖及向成骨细胞的分化。     

BECKMAN DXI800化学发光检测系统固定吸试剂针前后雌二醇测定结果的比较分析

目的比较BECKMAN DXI800化学发光检测系统固定吸试剂针前后雌二醇(E_2)测定结果 ,并对所得结果进行统计分析,以便找出更优的E_2检测方法。方法选择63份年龄不同的患者血清标本和1份广西区临床检验中心统一发放的质控品,设计一系列实验组合,并且按照实验室操作标准用BECKMAN DXI800化学发光检测系统进行检测不同实验组E_2的浓度;然后对仪器进行设置固定一根吸试剂针,再次检测相同实验组E_2的浓度。比较固定吸试剂针前后E_2检测结果的差异,并进行统计分析。结果固定吸试剂针前与固定吸试剂针后患者血清E_2的检测结果配对秩和检验,差异无统计学意义(P>0.05)。固定吸试剂针前检测质控品E_2结果的偏倚度与固定吸试剂针后检测质控品E_2结果的偏倚度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。固定吸试剂针后检测质控品E_2结果的变异系数比固定吸试剂针前检测质控品E_2检测结果的变异系数低。结论 BECKMAN DXI800化学发光检测系统固定吸试剂针前后E_2检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。固定吸试剂针后E_2测定结果较固定吸试剂针前E_2测定结果变异系数更小、标准差更小,精密度更高,重复性更好。     

循环酶法测定同型半胱氨酸试剂盒评价

目的 选取北京九强、上海执诚、宁波瑞源生产的循环酶法同型半胱氨酸（Hcy）试剂盒,对其方法性能及临床实验室应用的要求进行评价.方法 据NCCLS颁布的的EP5-A、EP6-A和EP7-A评价方案对三个循环酶法Hcy测定试剂盒进行回收实验、干扰实验、线性及精密度评价.结果 九强、执诚、瑞源的循环酶法Hcy测定试剂盒高、低浓度的批内CV分别为3.2、2.4、1.2;3.7、3.8、1.8;总CV（％）分别为4.4、3.4、3.1;4.3、5.6、3.3.回收率97％ ～ 105％.相关系数分别为r=0.996、r=0.993、r=0.995.胆红素在500mg/L、抗坏血酸在500 mg/L、甘油三酯在8.88mmol/L内对九强和瑞源的试剂无明显干扰,相对偏差小于4％.胆红素在500 mg/L、抗坏血酸在500mg/L内对执诚的试剂无明显干扰,相对偏差小于4％;甘油三酯对该试剂有明显干扰,甘油三酯在8.88mmol/L时相对偏差为12.2％.结论 三种循环酶法Hcy测定试剂盒的抗干扰、线性范围及精密度等性能可满足临床检验的需要.     

免疫化学比浊法测定血清免疫球蛋白IgG、IgA和IgM

本文报导了用激光比浊计测定免疫球蛋白(Ig)的免疫化学比浊法。其原理是血清中的Ig与特异性抗体在溶液中形成不溶性抗原抗体复合物,浊度与Ig含量成正比,与已知的标准液相比较而求出血清中Ig的含量。试剂:分子量6,000—7,500的聚乙二醇     

血浆脂质过氧化物荧光测定

本文对血浆脂质过氧化物荧光测定法进行了初步探讨,制作了标准曲线及血浆用量曲线,测定了批内变异系数,选择了最适测定条件。结果批内变异系数5.56～5.71％,血浆用量在140μl之内与相对荧光强度呈很好线性关系,测定时选用100μl为宜。为了得到最大荧光强度,反应混合物与TBA试剂在95℃温育70分钟为适宜。最佳测定时间是取血即刻分离血浆,并进行测定或将血浆放于-30℃冰箱一周,再行测定,荧光强度不受影响。